DEAE 纤维素使用说明
deae纤维素柱层析多糖原理
DEAE纤维素柱层析是一种常用的离子交换色谱技术，用于多糖的分离和纯化。
其原理基于离子交换体对溶液中带电离子的吸附和解吸作用。
具体原理如下：
1. DEAE纤维素柱：DEAE纤维素是一种带有正电荷的离子交换介质，具有许多二级胺基团。
这种柱材与带负电荷的多糖分子发生静电相互作用。
2. 样品加载：将混合溶液中含有多糖的样品加载到DEAE纤维素柱上。
多糖与柱子表面的二级胺基团之间发生静电作用，带负电荷的多糖被柱子捕获。
3. 洗脱梯度：通过改变洗脱缓冲液的离子强度或pH值，使得多糖以不同的速率从柱子上洗脱。
一般采用梯度洗脱，即逐渐增加洗脱缓冲液中的盐浓度或调节pH值，以逐步将多糖从柱子上解吸下来。
4. 分离和纯化：根据多糖在DEAE纤维素柱上的亲和性差异，它们在洗脱梯度中以不同的速率逐渐分离。
带有较低亲和性的多糖会被较早洗脱，而带有较高亲和性的多糖则会在较高盐浓度或pH值条件下才从柱子上洗脱。
通过DEAE纤维素柱层析，可以实现多糖的粗分离和初步纯化。
这种方法可用于生物医药、食品工业等领域中对多糖的分离、纯化和研究。
DEAE 纤维素使用说明
DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3.3 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
DEAE-52预处理
2.1 DEAE-52纤维素离子交换柱填料处理[8]2.1.1 预溶胀取DEAE-52纤维素5 g于小烧杯中，加入25 mL蒸馏水，溶胀48小时，待纤维素沉到烧杯底部且纤维素面高度不变时，倾去上层水，将下层的纤维素倒入量筒中测量其溶胀后的体积，5 g的DEAE-52溶胀后的体积约为8 mL，根据该比例确定DEAE-52所需称取的量。
2.1.2 膨胀活化称取50 gDEAE-52纤维素，置于500 mL烧杯中，加入300 mL蒸馏水浸泡至其体积不再改变。
将蒸馏水浸泡后的纤维素用双层滤纸抽滤，把水抽干后加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。
用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
将近中性纤维素加入到0.5 mol/L HCl溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。
用双层滤纸抽滤掉HCl，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
再次将纤维素加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时，用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
用蒸馏水浸泡中性的纤维素，不断搅拌，静置，待纤维素下沉后倾去上层清水，反复多次。
2.2 装柱用起始缓冲液反复冲洗已经准备好的层析柱，取一小块脱脂棉润湿后放入层析柱的底部，柱底部连接胶皮管，装上螺旋夹，关闭夹子后将柱子固定在铁架台上，像其中倒入蒸馏水排出棉花与管道中的气泡。
把蒸馏水浸泡的纤维素搅拌均匀呈糊状，像层析柱中倒入一部分纤维素，要缓慢倒入避免产生气泡，拧开下端的螺旋夹，调整流速，待到液面降至距纤维素面2 cm处关闭螺旋夹，继续倒入纤维素，同时用玻璃棒搅拌纤维素防止两次加入产生纤维素分层，重复上述步骤，将所有纤维素都填入层析柱中，最后剪一圆形滤纸片，大小与层析柱内径一致，将其放入层析柱纤维素表面上，防止上样时打乱纤维素。
查看装好的柱子上表面是否平整，柱内不能有气泡、不能分层，待一切正常加入蒸馏水平衡，流速调低，使流出溶液的pH值与加入溶液的pH值一致。
DEAE--52纤维素的处理
DEAE--52纤维素的处理关于DEAE52纤维素的处理只有简单的几步，如下:1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中，一段时间大约3小时左右，我偏爱这个时间，去除杂质，最好抽干一下；2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干；3.将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干。
即可用了对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可以使用。
再生处理可先用高浓度NaCl (1－2 mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE－52阴离子交换纤维所吸附的成份。
然后，再用0.5 mol/L的HCl和NaOH处理，处理方法与预处理完全相同。
DEAE－纤维素的处理及装柱（1）处理本实验采用的是DEAE－纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为：先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
（2）装柱将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱。
层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。
（3）平衡在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。
其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，层析柱达到了平衡。
DEAE-纤维素DE-52使用说明
DEAE-纤维素DE-52使用说明DEAE-纤维素(52)使用说明书一简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
三、应用的注意事项：1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2) 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3) 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
DEAE纤维素使用说明
D E A E纤维素使用说明集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白实验
D E A E纤维素柱层析纯化酶蛋白实验集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）(文献来自于丁香通（）)本实验目的是以柱层析的方法进一步纯化蔗糖酶蛋白，利用DEAE 纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。
实验方法离子交换层析法实验方法原理利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。
实验材料试剂、试剂盒仪器、耗材实验步骤1. ?离子交换剂的处理?称取1.5 克DEAE 纤维素( DE-23 ) 干粉, 加入0 . 5 mol/ LNaOH 溶液( 约50ml) , 轻轻搅拌, 浸泡至少0.5 小时( 不超过1 小时) , 用玻璃砂漏斗抽滤, 并用去离子水洗至近中性, 抽干后, 放入小烧杯中, 加50 ml 0.5 mol/ L HCl , 搅匀, 浸泡0.5 小时, 用去离子水洗至近中性, 再用0.5 mol/ L NaOH 重复处理一次, 用去离子水洗至近中性后, 抽干备用(因DEAE 纤维素昂贵, 用后务必回收)。
实际操作时, 通常纤维素是已浸泡过并回收的, 按“ 碱→酸” 的顺序洗即可, 因为酸洗后较容易用水洗至中性。
碱洗时因过滤困难, 可以先浮选除去细颗粒, 抽干后用0.5 mol/ L NaOH-0.5 mol/ L NaCl 溶液处理, 然后水洗至中性。
2. ?装柱与平衡?先将层析柱垂直装好, 在烧杯内用0.02 mol/ L, pH7.3 Tris-HCl 缓冲液洗纤维素几次, 用滴管吸取烧杯底部大颗粒的纤维素装柱, 然后用此缓冲液洗柱至流出液的电导率与缓冲液相同或接近时即可上样。
3. ?上样与洗脱?上样前先准备好梯度洗脱液, 本实验采用20 ml , 0.02 mol/ L,pH7.3 的Tris-HCl 缓冲液和20 ml 含0.2 mol/ L 浓度NaCl 的0.02 mol/ L, pH7.3 的Tris-HCl 缓冲液, 进行线性梯度洗脱。
DEAE-纤维素
/html/201109/3567688.html1.DE23（纤维状DEAE-纤维素）在去除细末后流速加快，适合用于负极生物聚合物DE32（干燥细颗粒DEAE-纤维素）功能如同DE52，但需预处理DE51（预溶胀细颗粒DEAE-纤维素）世上用是最广泛的DEAE纤维素填料，用于带低到高负极电荷生物聚合物，呈现优异的分辨率和良好的流速。
DE53（预溶胀细颗粒DEAE-纤维素）部分季铵化DEAE阴离子交换剂，具有比DE52更高取代和载量，能与DE51和DE52同时使用。
2.等电点7.2算是中性的，对于阴离子交换层析来说，你选用TRIS-HCL就行了，可以用8.5或者9.0的pH体系。
你最好别用7.8，这与你的等电点只差0.6，不一定能吸附得好，最好是差别有1个单位，就是8.2以上的。
蛋白质带的表面比净电荷越多，吸附得越强，要使用氯化钠的浓度越高才能洗脱，你如果选用7.8，那么不单只吸附不好，还比较容易洗脱下来，可能有点难与其它蛋白质分开。
缓冲系统所用的盐也是有离子强度的，所以不能选用浓度太大。
20mM TRIS-HCL 的电导率大概为1.5%，你别用太高了。
样品里的盐也最好去除得比较干净，因为如果盐浓度太高，会使得离子强度高，蛋白质没有被吸附就已经被洗脱了，吸附不上的。
3. 离子交换层析吸附蛋白质是依靠配基与蛋白质结合的，如果填料装填紧密，那么蛋白质会立即与空位的配基结合而被吸附，如果上柱洗脱得不集中，可能是填料装填得不紧密，蛋白质在填料的空隙走空，未能与配基接触。
层析柱能吸附的蛋白质量与蛋白质样品的体积无关，只与蛋白质含量有关，理论上只要蛋白质不超过配基量即可，所以蛋白质样品体积与层析柱体积没有必然关系。
我用柱床体积为20毫升的预装柱吸附过体积为350毫升的蛋白质样品，而淀粉酶不在穿透液中，全部在洗脱液中，原因就是层析柱的配基能全部吸附淀粉酶，无视样品体积。
PEG是线性分子，会在层析柱中残留，引起堵塞。
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DEAE-纤维素
1 简介
DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：
3 应用的注意事项：
3.1 色谱柱装填
（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏
斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合
样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3.3 蛋白的洗脱
这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
阶段洗脱容易放大，重复性好，如果洗脱条件好完全可以得到和线性梯度一样或者更好。
采用什么方法完全根据自己需要。
4 再生清洗
（1）每次用完最好用0.5MNaOH含2M NaCl洗5个床体积，再用水洗5个柱床体积，然后用20%乙醇保存，使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%异丙醇都含1%吐温洗5个柱床体积，最后20%的乙醇流洗5个柱床体积。
（2）有机溶剂和水混合很容易产生气泡，为了避免这样情况，可以把配好的有机溶剂在室温放置过夜，再使用，这样可以避免气泡进柱子而导致柱子不能正常使用。
5 保存
在20%乙醇中，4℃下长期保存。