金荞麦抗癌成分大孔树脂纯化工艺的研究_李华磊
金荞麦的化学成分与药理作用研究进展
二 羟 基 苯 甲 酰 胺 （ ，－ｉｙ ｒｘ ｅ ｚｍｉｅ 、 儿 茶 酸 甲 酯 ３ ４ｄｈ ｄｏ ｙ ｂｎａ ｄ ） 原
（ ｒ ｔｃ ｔｃ ｕｃａ ｉ ｍｅｈ ｌ ｓｅ） ｐｏ ｏ ａｅ ｈ ｉ ｃ ｔｙ ｔｒ 。Ｗ ａ ｇＫ ［ 等 从金 荞 麦 含 ｄ ｅ ｎ Ｊ６ ］
ａ ｔｔ） 正 丁 醇 一 Ｄ 一 喃 型 果 糖 苷 （ － ｕ ｙ Ｄ — ｕ ｔ ｐ — ｌ ａｅ 、 ｍｉ ｆ 吡 ｎ ｂ ｔｂｆ ｆ ｃ ｙ ｒ ｏ
体外细胞直接杀伤法实验证明其提取物金荞麦对个旧肺腺癌细胞glc宫颈鳞癌细胞hela胃腺癌细胞sgc7901鼻咽鳞癌细胞kb等人癌细胞有明显的杀伤作用着药物质量浓度的增高杀伤效应抑制作用都明显增金荞麦对多种人癌细胞具有显著杀伤抑制其干细胞生长增殖及抑制dna合成的作用能明显抑制癌细胞内的核酸代谢其抑制作用与同质量浓度的阳性对照氟尿嘧啶近似19puikwongchan研究表明20金荞麦提取物在15的质量浓度范围内对肝hepg2白细胞k562肺h460结肠hct116及骨骼u2os来源的癌细胞可显著抑制其生长其中肝癌细胞最为敏感hela子宫颈及ovcar3卵巢细胞的生长有轻微的抑制作用只有当提取物质量浓度超过60才对前列腺癌细胞du145与脑癌细胞t98g的生长产生抑制作用金荞麦提取物能刺激乳癌细胞mcf7的生长
春花 中的文 多灵 、 春 质碱 和 脱水 长 春碱 Ｅ］ 长 Ｊ ．色 谱 ，
２ ０ ２ （ ）： ５ － ５ ． ０ ７， ５ ４ ５ ０ ５ ２
水 丙 酮 提 取 物 中 分 离 得 到 ｄｂ ｓ ｅＡ 和 ｌ ａｈ ｓ ｅＡ。 ｉｏｉ ｄ ａ ｔｏｉ ｐ ｄ 金 荞 麦 中 还 含 有 木 犀 草 素 （ｕｅｌ ） 、 皮 素 （ ｕｒ １ｔｏｉ 槲 ｎ ｑ ｅ— ｃ ｒ ）芸 香 苷 （ｕｉ） ｉｉ 、 ｔｎ ｒｔ ［ ｎ 。吴 和 珍 等 Ⅲ 从 金 养 麦 中 首 次 得 到 红 车 轴 草 黄 酮 （ ｒｔＩ 、 犀 草 素 ７ ４－ 甲 醚 （ｕｅｌ － ， ｐａｏ） 木 ，＇ 二 １ｔ ｉ ７ ４ ｏｎ
大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷工艺
4.3 微滤)大孔吸附树脂法可以有效地除去杂质,选择性地保留有效成分,是中药精制的新方法。
致谢 南京中医药大学98级海洋药学专业陈爱萍和孔学锋同学做部分实验工作。
参考文献:[1] 中华人民共和国药典[S].(一部).2000:161-162.[2] 阴 健.中药现代研究与临床应用[M ].北京:中国古籍出版社,1994:424-432.[3] 马振山.大孔吸附树脂在药学领域中的研究应用[J].中成药,1997,19(12):40-41.[4] 边守正,孔宏峰,刘莉莉,等.用大孔吸附树脂提取甜菊总甙[J].中草药,1986,17(6):12-13.[5] 邓少伟,马双成.用大孔吸附树脂分离川芎总提取物[J].中草药,1999,30(1):23-24.[6] 郭立玮,金万勤,彭国平.21世纪的植物药深加工现代化技术)膜分离[J].南京中医药大学学报,2000,16(2):1-3.[7] 金万勤,郭立玮,文红梅等.微滤法澄清枳实水煎液的工艺研究[J].南京中医药大学学报,2000,16(6):347-348.[8] 王曙,贾运涛,孙毅毅.复方制剂水煎液中总黄酮含量测定方法[J].华西药学杂志,1996,11(2):95-96.大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷工艺蔡 雄, 刘中秋, 王培训, 刘 良(广州中医药大学,广东广州510405)关键词:大孔树脂;人参总皂苷;纯化摘要:目的:研究大孔树脂富集、纯化人参总皂苷的工艺条件及参数。
方法:以人参总皂苷的洗脱率和精制度为考察指标,考察大孔树脂富集、纯化人参总皂苷的吸附性能和洗脱参数。
结果:人参提取液45ml(5.88mg/ml)上大孔树脂柱(R15mm @H90mm,干重2.52g),用蒸馏水100mL 、50%乙醇100ml 依次洗脱,人参总皂苷富集于50%乙醇洗脱液部分,且除杂质能力强。
结论:通过大孔树脂富集与纯化后人参总皂苷洗脱率在90%以上,50%乙醇洗脱液干燥后总固物中人参总皂苷纯度可达60.1%。
大孔树脂吸附与反相色谱纯化恩拉霉素
吴家鑫 等/大孔树脂吸附与反相色谱纯化恩拉霉素Chinese Journal of Biotechnology/cjbcn November 25, 2014, 30(11): 1701−1708 DOI: 10.13345/j.cjb.140075 ©2014 Chin J Biotech, All rights reservedReceived : February 12, 2014; Accepted : April 25, 2014Supported by : National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2011AA10A214). Corresponding author : Yongdong Huang. Tel: +86-10-82544987; E-mail: ydhuang@Peng Qi. Tel: +86-10-56518199; E-mail: cahic_ivd@ 国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2011AA10A214) 资助。
生物工程学报大孔树脂吸附与反相色谱纯化恩拉霉素吴家鑫1,2,3,4，黄永东5，齐鹏1,2,3,4，何继红1,2,3,4，李萍5，张国栋1,2,3,4，赵梅仙1,2,3,41 中牧实业股份有限公司，北京 1000952 农业部兽用生物制品与化学药品重点实验室，北京 1000953 北京市兽用多肽疫苗设计与制备工程技术研究中心，北京 1000954 中国牧工商 (集团) 总公司，北京 1000955 中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室，北京 100190吴家鑫, 黄永东, 齐鹏, 等. 大孔树脂吸附与反相色谱纯化恩拉霉素. 生物工程学报, 2014, 30(11): 1701–1708. Wu JX, Huang YD, Qi P, et al. Purification of enramycin by macroporous resin adsorption and reversed phase chromatography purification. Chin J Biotech, 2014, 30(11): 1701–1708.摘 要: 恩拉霉素作为多肽类抗生素，是一种新型、安全的饲料添加剂。
大孔吸附树脂同步提取湖北麦冬总多糖和总皂苷
大孔吸附树脂同步提取湖北麦冬总多糖和总皂苷作者：刘霞张琼光向阳詹亚华陈科力【摘要】目的研究湖北麦冬中总多糖和总皂苷的提取、分离方法。
方法应用大孔吸附树脂提取湖北麦冬中的总多糖和总皂苷。
结果分别得到含量为66. 52%的总多糖及含量为81. 15%的总皂苷。
结论运用大孔吸附树脂可以同步提取湖北麦冬中的总多糖和总皂苷，有利于湖北麦冬中总多糖和总皂苷的综合利用。
【关键词】湖北麦冬总多糖总皂苷综合利用湖北麦冬 Liriope spicata (Thunb.) Lour. var. prolifera Y. T. Ma 是中药山麦冬的主要来源之一，是湖北省的道地药材，具有养阴生津、润肺清心的功效，用于肺燥干咳、虚劳咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、肠燥便秘等症[1]。
湖北麦冬含多糖及皂苷类成分[2]，两者都是湖北麦冬的活性成分，其多糖有降血糖、延缓衰老、抗疲劳辅助抑制肿瘤、抗辐射等作用[3]；所含皂苷类成分在免疫系统、心血管系统等方面具有良好的活性[4]。
对于湖北麦冬中的总多糖及总皂苷，目前多为单独提取和纯化，常造成了另一大类有效成分的浪费，不利丁•湖北麦冬的综合利用。
本文运用大孔吸附树脂法同步提取湖北麦冬中的总皂苷和总多糖，有利于湖北麦冬中总多糖和总皂苷的综合利用。
1材料与仪器Agilent 8453紫外-可见分光光度仪，R205星海旋转蒸发器（无锡市星海王生化设备有限公司），DZF-2002真空干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）。
湖北麦冬购自湖北省襄樊市欧庙镇，经湖北中医学院鉴定教研室陈科力教授鉴定为湖北麦冬 Liriope spicata (Thunb.) Lour. var. prolifera Y. T. Ma。
麦冬皂苷D对照品由中药固体制造技术国家工程研究中心提供，批号：1214-080228，纯度彡98%。
D-无水葡萄糖对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110833-200503。
D-101大孔吸附树脂（天津农药股份有限公司），水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
大孔吸附树脂分离纯化牛蒡叶绿原酸的工艺研究
大孔吸附树脂分离纯化牛蒡叶绿原酸的工艺研究
牛蒡叶绿原酸（Arctiin）是一种具有广泛应用前景的天然药物成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性。
对牛蒡叶绿原酸的提取和分离纯化工艺研究具有重要的科学意义和应用价值。
通过文献调研确定了大孔吸附树脂作为分离纯化牛蒡叶绿原酸的最佳工艺。
大孔吸附树脂具有较大的孔径，可以有效地吸附分离高分子化合物，可以更好地满足牛蒡叶绿原酸的分离纯化需要。
确定了大孔吸附树脂的最佳操作条件。
通过单因素实验和正交实验确定了吸附树脂用量、进样浓度、流速和洗脱液浓度等操作参数的最佳值。
确定了最佳操作条件后，通过改变操作参数的组合来调整牛蒡叶绿原酸的吸附和洗脱效果，从而实现牛蒡叶绿原酸的高效分离纯化。
利用高效液相色谱（HPLC）对分离纯化后的牛蒡叶绿原酸进行了质量分析。
结果表明，经过大孔吸附树脂的分离纯化，牛蒡叶绿原酸的纯度和产率都有显著提高。
对纯化后的牛蒡叶绿原酸进行了药理活性测试，发现其具有良好的抗氧化和抗炎活性，进一步验证了分离纯化工艺的有效性。
本研究通过大孔吸附树脂对牛蒡叶绿原酸进行了分离纯化工艺研究，优化了分离纯化工艺，提高了产品的纯度和产率。
这对于进一步开发和应用牛蒡叶绿原酸具有重要的科学意义和应用价值。
大孔树脂分离技术在中药分离及成分分析中的应用
大孔树脂分离技术在中药分离及成分分析中的应用发表时间：2017-03-21T09:27:09.400Z 来源：《健康世界》2017年第2期作者：杨明伟李学彬[导读] 本文对大孔吸附树脂在中草药分离分析中的应用及其在中药制剂质量控制与分析中的应用进行评述，为大孔吸附树脂在药学领域中的应用提供参考。
牡丹江市食品药品检验检测中心黑龙江牡丹江 157011 摘要：综述了大孔吸附树脂分离技术在中药分离及成分分析中的应用，以及在中药制剂质量控制与分析中的应用进行评述，为大孔吸附树脂在药学领域中的应用提供参考。
关键词：大孔树脂；药物分析；中药大孔吸附树脂（Marcoporous?adsorption?resin）是不含交换基团、具有大孔结构的高分子吸附剂，是20世纪60年代末发展起来的分离新技术之一，近年来，其在药学领域（尤其是天然药物）中的应用普遍受到重视。
本文对大孔吸附树脂在中草药分离分析中的应用及其在中药制剂质量控制与分析中的应用进行评述，为大孔吸附树脂在药学领域中的应用提供参考。
1.大孔吸附树脂的性质、分离原理、提取程序及优势大孔吸附树脂是通过物理吸附从溶液中有选择地吸附有机物质，从而达到分离提纯的目的。
其理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物选择性好，不受无机盐类及强离子、低分子化合物存在的影响，在水和有机溶剂中可吸附溶剂而膨胀。
大孔吸附树脂是吸附性和筛选性原理相结合的分离材料。
大孔吸附树脂的吸附实质是一种物体高度分散或表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象，这种吸附性能是由于范德华引力或生成氢键的结果。
由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用。
通过这种吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。
图2 大孔树脂的优势2.吸附及解吸的影响因素图3 吸附及解吸的影响因素3.药物分析中的检测方法图4 药物分析中的检测方法4.大孔吸附树脂在中药成分提取分析的应用目前，在中药有效成分的提取分析方面应用大孔树脂最多的是黄酮（苷）类、皂苷类和其他苷类，生物碱类。
大孔吸附树脂在生物活性肽分离纯化中的应用
大孔吸附树脂在生物活性肽分离纯化中的应用吕红1，卢建中2，张璐1，颜梅1（1 江西中医学院，南昌，330006，2江中药业股份有限公司，南昌，330096）摘要：随着生物活性肽的的开发和利用，对生物活性肽的分离纯化也越来越引起人们的重视，大孔吸附树脂在生物活性肽分离纯化中的应用报道较少，但其条件温和，设备简单、操作方便的特性，值得在生物活性肽的分离纯化中得到推广和应用，本文就近年来的一些大孔吸附树脂在生物活性肽中的应用进行概述。
关键词：大孔吸附树脂，生物活性肽，抗氧化肽，抗菌肽，抗高血压肽大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类有机高分子聚合物吸附剂，具有很好的大孔网状结构和较大的比表面积，可通过物理吸附从水溶液中有选择的吸附有机物[1]。
1 大孔吸附树脂的性能大孔吸附树脂是一类新型非离子型高分子吸附剂，是以苯乙烯和丙酸酯为单体，在0.5%的明胶溶液中，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成的高分子网状孔穴结构，在整个颗粒内部及外部都具有表面活性。
其性质介于天然吸附剂(活性炭、硅胶和硅藻土)和离子交换剂之间，吸附特性与天然吸附剂类似，比离子交换剂更容易再生[2]。
大孔吸附树脂具有以下优点：(1)选择性良好，无机盐的存在有利于吸附；(2)分离和浓缩有机物，得到的化合物灰份低；(3)物理化学稳定性高，不溶于酸、碱及有机溶剂，机械强度好；(4)吸附和解吸较快，吸附容量大；(5)品种规格多，可根据化合物的性质来选择适当结构或极性的吸附剂；(6)吸附树脂呈小球状，直径为0.2-0.8mm，因此流体阻力比活性炭小，流速较快[3]。
2 大孔吸附树脂的原理大孔吸附树脂的吸附实质为一种物体高度分散或表面分子受作用力不均等而产生的表面吸附现象，这种吸附性能是由于范德华引力或生成氢键的结果。
同时由于大孔吸附树脂的多孔结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用。
通过上述这种吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定溶剂洗脱而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。
AB-8大孔树脂纯化五味子木脂素工艺研究
AB-8大孔树脂纯化五味子木脂素工艺研究蒋益萍;薛黎明;辛海量;张巧艳;秦路平【摘要】Objective To study the conditions for isolating and purifying lignans in schisandra chinensis (Turcz) Baill by AB-8 type of macroporous adsorption resin .Methods The content ofSchizandrol ,Deoxyschizandrin ,r-Schisandrin was deter-mined byHPLC .The optimum separation and purification process of lignans from schisandra chinensis (Turcz) Baill with AB-8 macroporous adsorption resin were identified by static and dynamic adsorption ,desorption tests .The sample volume ,concen-tration ,eluting velocity ,and ethanol concentration were investigated .Results The optimum conditions for isolating and purif-ying lignans in schisandra chinensis (Turcz) Baill by AB-8 macroporous adsorption resin were as follows :dosage of sample liq-uid was1BV ,concentration of sample solution was 9 .159-16 .523 mg/ml ,ratio of diameter to height of resin column 1:5 ,ad-soption flow rate was 2 .5BV/h ,eluted by 5 BV 30％ ethanol ,followed by 10BV 95％ ethanol .The transfer rate of lignans was 77 .07％ with 22 .06％ of total lignancontent .Conclusion AB-8 macroporous adsorptive resin can effectively isolate and purify lignans from schisandra chinensis (Turcz) Baill .This low cost process is easy to operate and with high industrial pro-duction value .%目的研究AB-8大孔吸附树脂分离纯化五味子木脂素的工艺条件.方法采用高效液相色谱法对五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素进行定量分析,通过考察静态和动态吸附、洗脱效果,筛选AB-8大孔吸附树脂分离纯化五味子木脂素的最佳工艺条件,对加样量、上样液浓度、洗脱速度和乙醇浓度进行考察.结果 AB-8大孔树脂分离五味子木脂素的最佳工艺条件为:上样量1 BV(bed volume),上样液质量浓度9.159～16.523 mg/ml,树脂柱径高比1:5,吸附流速2.5 BV/h,吸附后用5 BV的30％乙醇洗脱,再以10 BV的95％乙醇洗脱,纯化处理后五味子木脂素总含量达到22.06％,转移率高达77.07％.结论 AB-8大孔吸附树脂能有效分离纯化五味子木脂素,该方法具有操作简单、成本低廉等突出优点,有较高的工业生产应用价值.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2017(035)006【总页数】6页(P520-525)【关键词】五味子;木脂素;纯化;AB-8大孔树脂【作者】蒋益萍;薛黎明;辛海量;张巧艳;秦路平【作者单位】第二军医大学药学院生药学教研室,上海 200433;上海市疾病预防控制中心化学品毒性检定所,上海200336;第二军医大学药学院生药学教研室,上海200433;第二军医大学药学院生药学教研室,上海 200433;第二军医大学药学院生药学教研室,上海 200433【正文语种】中文【中图分类】R284五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz )Bail1的干燥成熟果实，习称“北五味子”[1]，具收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效，有抗炎、抗病毒、保肝、抗心肌缺血、抗氧化等广泛的药理作用[2-5]，临床主要用于治疗慢性肝炎。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
中华中医药学刊金荞麦抗癌成分大孔树脂纯化工艺的研究李华磊，赵骏（天津中医药大学中药学院，天津300193）摘要：目的：研究大孔树脂分离纯化金荞麦抗癌成分的工艺。
方法：以原花青素B2吸附率和解析率为指标，对七种树脂进行静态筛选，采用正交试验法，考察最佳上样条件，系统研究洗脱参数。
结果：X－5型树脂对原花青素B2有较好的吸附分离性能，最佳吸附条件：3．5BV浓度为0．12g·mL－1的生药，pH为3．0，流速为2BV·h－1；最佳解吸条件：解吸液为3BV60%乙醇水溶液，流速为2BV·h－1。
结论：该工艺用于金荞麦抗癌成分的纯化是可行的。
关键词：金荞麦；原花青素B2；大孔树脂；分离纯化中图分类号：R362文献标识码：A文章编号：1673－7717（2011）08－1876－03Studies on Purification Technology of Anti－cancer Ingredients ofRhizoma Fagopyri Dibotoryis by Macroporous ResinLI Hua-lei，ZHAO Jun（Tianjin University of TCM，Tianjin300193，China）Abstract：Objective：Study the purification process of anti－cancer ingredients of Rhizoma Fagopyri Dibotoryis．Methods：Adsorption rate and resolution rate of procyanidin B2were used as evaluation to study on seven kind of resin bystatic screening．The best conditions of absorption sample were investigated by orthogonal experiment．The system of elu-tion parameters were studied on．Results：X－5resin had good purification performance and suited to purify anti－canceringredients of Rhizoma Fagopyri Dibotoryis．The optimal adsorption conditions were：adsorption volume，3．5BV，concen-tration of extract sample，0．12g·mL－1，pH，3，the adsorption speed，2BV/h；the optimal desorption conditions were：solvent60%ethanol，desorption volume，3BV，the desorption speed，2BV/h；Conclusion：The process can be used for thepurification of anti－cancer ingredients of Rhizoma Fagopyri Dibotoryis．Key words：Rhizoma Fagopyri Dibotoryis；procyanidin B2；macroporous resin；separation and purification收稿日期：2011－02－22作者简介：李华磊（1985－），女，2008级硕士研究生，研究方向：中药专业的科研研究。
通讯作者：赵骏（1962－），女，教授，硕士研究生导师，研究方向：中药有效成分的研究和应用。
金荞麦为蓼科植物［Fagopyrum dibotrys（D．Don）Hara］的干燥根茎［1］，药理研究表明金荞麦抗癌活性成分是一类原花色素缩合性单宁混合物，主要是低聚原花青素包括（－）表儿茶素、原花色素B2、原花色素C1，其中原花色素B2是主要成分［2］。
本实验以原花色素B2为指标，研究大孔树脂纯化富集金荞麦抗癌成分的工艺。
1材料与仪器金荞麦药材购于天津老百姓大药房，产地浙江。
原花青素B2对照品（天津尖峰天然产物研究有限公司，纯度98%）；甲醇（色谱纯，天津市昊鹏色谱科技有限公司），其它实验所用试剂均为分析纯。
S－8、ADS－17、NKA－9、AB－8、X－5、NKA、H103、型大孔树脂（天津市南开合成科技有限公司）。
岛津LC－20高效液相色谱仪。
2方法与结果2．1提取液的制备金荞麦经干燥粉碎成粗粉，加70%乙醇，水浴65ħ回流提取3次，料液比依次为1ʒ10、1ʒ5、1ʒ5，每次提取1h，共3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，用容量瓶加水定容，质量浓度为生药0．15g·mL－1。
2．2大孔树脂的预处理方法S－8、NKA－9、AB－8、X－5、NKA预处理方法：丙酮浸泡24h后，用2BV丙酮，以2BV·h－1流速通过树脂层，并浸泡5h。
乙醇以2BV·h－1流速通过树脂层，洗至流出液加水不显白色浑浊止，并以水以同样流速洗净乙醇。
用2BV的5%盐酸溶液，以4 6BV·h－1的流速通过树脂层，并浸泡2 4h，而后用水以同样流速洗至出水pH中性。
用2BV的2%氢氧化钠溶液，以4 6BV·h－1的流速通过树脂层，并浸泡2 4h，而后用水以同样流速洗至出水pH中性。
H103：10%盐酸溶液浸泡10h后，水洗至中性，放尽水。
树脂体积0．5倍的丙酮浸泡24h，用2BV丙酮，以2BV·h－1流速通过树脂层，并浸泡10h。
丙酮以2 6781中华中医药学刊BV ·h －1流速通过树脂层，洗至流出液加水几乎不呈混浊状，以水洗尽丙酮。
用2BV 的5%盐酸溶液，以4 6BV ·h －1的流速通过树脂层，并浸泡2 4h ，而后用水以同样流速洗至出水pH 中性。
2．3原花青素B2含量测定采用HPLC ，法色谱条件［3］：Diamosil C18色谱柱（4.6mm ˑ250mm ，5μm ）；流动相：甲醇－水－冰乙酸（15ʒ85ʒ1）；柱温：40ħ；流速：1mL ·min －1；检测波长：280nm标准曲线的绘制：精密称取原花青素B2对照品1.30mg ，置10mL 容量瓶中，加甲醇适量，摇匀使溶解，再定容至刻度。
得浓度为0．13mg ·mL －1的标准溶液，精密吸取该标准溶液21μL 、210μL 、450μL 、3mL 、4．5mL 分别置5mL 容量瓶，加甲醇定容至刻度。
再量取适量置5mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，200 400nm 波长扫描，结果最大吸收波长为280nm ，所以选用280nm 为检测波长。
设置2ul 自动进样，记录峰面积，以峰面积Y 为纵坐标，原花青素B2浓度（μg ·uL －l ）为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y =1490521x －219，r =0．9999（n =5），原花青素B2在0．000882 0．189μg ·μL －l范围内呈良好的线性关系。
样液含量测定：收集实验中的待测样液，记录收集体积。
经微孔滤膜过滤后，液相色谱仪进样测定原花青素B2浓度，计算样液含量。
2．4大孔树脂静态筛选取已处理好的树脂，见表1，吸干表面水分，称5克置于100mL 锥形瓶中，加入经稀释为生药0．09g ·mL－1的药液50mL ，摇床震荡吸附24h 后，用真空泵分离吸附后药液与树脂，并用水冲洗残留在树脂上的药液，抽干水分，树脂转移至锥形瓶，加入50mL70%的乙醇溶液，震荡解析15h 后，收集解吸液。
按2．3项下的方法测定原花青素B2的含量，计算比吸附量、吸附率和解吸率，结果见表1。
比吸附量=（原液含量－流出液的含量－水洗液的含量）/树脂干重吸附率=（原液含量－流出液的含量－水洗液的含量）/原液含量ˑ100%解吸率=解析含量/（原液含量－流出液的含量－水洗液的含量）ˑ100%表1不同树脂对原花青素B2的吸附及解吸性能树脂极性吸附量（mg /g ）吸附率解吸率H103非极性0．183395．14%68．86%NKA 非极性0．189097．33%77．21%X －5非极性0．192399．03%78．56%AB －8弱极性0．178392．72%80．12%NKA －9极性0．190398．77%41．18%ADS －17中强极性0．183794．66%31．25%S －8强极性0．192399．51%40．27%在表1中，树脂吸附率大小排列顺序S －8＞X －5＞NKA －9＞NKA ＞H103＞ADS －17＞AB －8，解吸率大小排列顺序为AB －8＞X －5＞NKA ＞H103＞NKA －9＞S －8＞ADS －17。
解吸率与吸附量的乘积反应树脂的性能，综合考察，X －5大孔树脂对原花青素B2有较好的吸附和解吸效果，因此采用X －5大孔树脂。
2．5上柱条件的研究采用正交实验考察药液浓度、流速、pH 对原花青素B2吸附的影响［4］，酸性物质在酸性条件下易被吸附，因素水平见表2。
表2因素水平表水平A浓度（生药g ·mL －1）B流速（BV ·h －1）C pH 10．062320．093430．12452．5．1试验方法取已处理好的X －5树脂18mL 装柱（1．5cm ˑ10．5cm ），量取生药0．06g ·mL －1的药液81mL ，0．09g ·mL －1的药液54mL ，0．12g ·mL －1的药液40.5mL ，通过树脂柱，流速、pH 按正交表中的设计操作，收集流出液，继以约100mL 水洗脱，流速为2BV ·h －1，收集水洗液。
测定流出液、水洗液中原花青素B2的含量，以原花青素B2的吸附量为指标优选出最佳的上柱条件。
结果见表3、4。
原花青素B2吸附量=原液含量－流出液的含量－水洗液的含量表3正交实验表试验号A （质量浓度）B （流速）C （pH ）吸附量（mg ）111111．208212221．187313331．178421231．199522311．190623121．205731321．200832131．214933211．201Ⅰ3．5723．6073．6273．599Ⅱ3．5943．5913．5873．592Ⅲ3．6163．5843．5693．592极差R0．0140．0080．0190．002表4方差分析方差来源离均差平方和自由度方差F 值P 值显著性10．000320．000225．8320．05*20．000120．00008．08830．000620．000348．4420．05*40．000020．00001．000总误差0．000020．0000直观分析可知，极差R 值大小显示各因素主次为C ＞A ＞B 方差分析结果表明，药液浓度、药液pH 为对吸附效果有显著性影响，流速对吸附效果无显著性影响。