肌酸激酶同工酶——MB评估
免疫抑制法检测肌酸激酶同工酶MB临床应用评价
ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２１．０２．０２·临床检验技术研究·免疫抑制法检测肌酸激酶同工酶ＭＢ临床应用评价 陈闻达１，李懿?１，朱晶１，邵文琦１，王蓓丽１，２，郭玮１，２（１．复旦大学附属中山医院检验科，上海２０００３２；２．复旦大学附属中山医院厦门医院检验科，福建厦门３６１０１５）摘要：目的 对选定的肌酸激酶同工酶ＭＢ（ＣＫ ＭＢ）检测试剂盒进行性能验证及对异常ＣＫ ＭＢ结果的临床标本进行回顾性分析。
方法 对ＣＫ ＭＢ检测试剂盒的正确度、精密度、线性范围、最大稀释比以及参考区间进行验证；随机选取５０例表观健康体检者作为健康人对照组，５０例临床确诊心血管疾病患者作为心血管疾病组并用于临床应用的验证；收集２８例临床检测报告为“ＣＫ结果倒置”的患者血清标本，对试剂盒纠正“ＣＫ结果倒置”结果的能力进行评估。
结果 选定的ＣＫ ＭＢ检测试剂盒各项检测性能符合要求，在临床应用上能较好地纠正由巨ＣＫ Ⅱ（线粒体型ＣＫ）引起的“ＣＫ倒置”结果，从而能更好地为临床提供参考。
结论 该试剂盒各项检测性能良好，其添加的线粒体型ＣＫ抑制抗体能较好地纠正巨ＣＫ Ⅱ（线粒体型ＣＫ）引起的“ＣＫ结果倒置”结果，但其他类型的“ＣＫ结果倒置”结果，仍需通过同工酶电泳等方法进行确认。
关键词：肌酸激酶同工酶ＭＢ；免疫抑制法；线粒体ＣＫ；性能验证中图分类号：Ｒ４４６ 文献标志码：ＡＣｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅａｓｓａｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅＭＢＣＨＥＮＷｅｎｄａ１，ＬＩＹｉｈａｏ１，ＺＨＵＪｉｎｇ１，ＳＨＡＯＷｅｎｑｉ１，ＷＡＮＧＢｅｉｌｉ１，２，ＧＵＯＷｅｉ１，２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｏｎｇｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００３２；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＸｉａｍｅｎＢｒａｎｃｈ，ＺｈｏｎｇｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｄａｎＵ ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｍｅｎ３６１０１５，Ｆｕｊｉａｎ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆａｇｉｖｅｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔｆｏｒｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅｉｓｏｅｎｚｙｍｅＭＢ（ＣＫ ＭＢ）ａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣＫ ＭＢｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅ，ｍａｘｉｍｕｍｄｉ ｌｕｔｉｏｎｒａｔｉｏａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌｏｆｔｈｅＣＫ ＭＢｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔｗｅｒｅｖｅｒｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｗａｓｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄ５０ｈｅａｌｔｈｙｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓａｓｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄ５０ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｔｅｓｔｒｅｐｏｒｔｓｏｆ“ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆＣＫｒｅｓｕｌｔｓ”ｆｒｏｍ２８ｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｋｉｔｔｏｃｏｒｒｅｃｔ“ｉｎ ｖｅｒｓｉｏｎｏｆＣＫｒｅｓｕｌｔｓ”ｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅｔｅｓｔｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｇｉｖｅｎＣＫ ＭＢｔｅｓｔｋｉｔｍｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｏｆｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉ ｃａｔｉｏｎａｎｄｍａｙｃｏｒｒｅｃｔｔｈｅ“ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆＣＫｒｅｓｕｌｔｓ”ｃａｕｓｅｄｂｙｇｉａｎｔＣＫ Ⅱ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＣＫ），ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｂｅｔｔｅｒｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｇｉｖｅｎｋｉｔｓｈｏｕｌｄｂｅｆｉｎｅ．ＴｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｎｔｉｂｏｄｙｔｏｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＣＫｉｎｔｈｅｋｉｔｃｏｕｌｄｃｏｒｒｅｃｔｔｈｅ“ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆＣＫｒｅｓｕｌｔｓ”ｃａｕｓｅｄｂｙｇｉａｎｔＣＫ Ⅱ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＣＫ），ｂｕｔｔｈｅｏｔｈｅｒｔｙｐｅｓｏｆ“ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆＣＫｒｅｓｕｌｔｓ”ｓｔｉｌｌｎｅｅｄｔｏｂｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｉｓｏｚｙｍｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｒｏｔｈｅｒｍｅｔｈｏｄｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅＭＢ；ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｍｅｔｈｏｄ；ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅ；ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 流行病学调查指出，在未来一段时间内，心血管疾病仍将是城乡居民最主要死亡原因之一［１］。
肌酸激酶MB型同功酶质量测定SOP_MMB临床意义_检验科生化项目SOP
文件编号：
版本号：
页码：第页共页
1检测原理
MMB方法是基于“三明治”原理的一步式酶免疫分析法。样本是利用带有具体针对CKB亚基的单克隆抗体涂层的二氧化铬粒子以及轭合物试剂（标有β-吡喃半乳糖苷的具体针对CKMB同功酶的单克隆抗体）孵育的标本与包被CKB亚基特异的单克隆抗体的二氧化铬颗粒及结合物（被CKMB同功酶特异的单克隆抗体标记的β半乳糖苷酶）一起孵育。在孵育过程中会形成一个由颗粒/CKMB/结合物组成的三明治式的结构，没有结合的结合物可通过磁性分离和清洗来清除，结合了三明治的β-吡喃半乳糖苷与一个发色底物氯酚红-β-d-吡喃半乳糖苷（CPRG）结合，CPRG水解释放色基（CPR）。患者样本中所呈现的CKMB的浓度直接与由于在577nm处测量的CPR的形成而导致的颜色变化的比率成比例。
CrO2-Ab+ F(ab′)2-β-吡喃半乳糖苷（转移到比色杯）
CPRG（在577nm处不吸收）CrO2-Ab- CKMB- F(ab′)2-β-galCPR（在577nm处吸收）
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
室温保存，及时送检和检测。样本在室温下可存储12小时，在4℃下可存储3天，在–20℃下冷冻保存1个月。
5.2校准条件
肌酸激酶同功酶质量测定
文件编号：
版本号：
页码：第页共页
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
CKMB——精选推荐
CKMB肌酸激酶同⼯酶MB（CKMB）的检测⼀、项⽬名称、检验⽅法名称1. 项⽬名称：肌酸激酶同⼯酶MB（CKMB）的检测2. 检验⽅法名称：化学发光法⼆、⽅法学原理：肌酸激酶同⼯酶MB测定采⽤双位点夹⼼化学发光免疫分析法，其采⽤的技术原理如下：第⼀步：将样本与包被着CK-MB单克隆抗体的超顺磁性磁微粒（磁珠）以及CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵育，样本中的CK-MB和包被在磁珠上的CK-MB单克隆抗体结合，同时CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB另⼀位点结合。
反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。
第⼆步：将化学发光底物（3-(2-螺旋⾦刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-⼆氧环⼄烷，AMPPD）添加到反应管内，发光底物AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解, 脱去⼀个磷酸根基团，⽣成不稳定的中间产物，该中间产物通过分⼦内电⼦转移产⽣间氧苯甲酸甲酯阴离⼦，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离⼦从激发态返回基态时，产⽣化学发光，由光电倍增管对反应所产⽣的光⼦数进⾏测量，所产⽣的光⼦数与样本内CK-MB的浓度成正⽐。
样本内分析物的量由定标曲线来确定。
三、试剂品牌、代号、包装规格、内含物1、试剂品牌：深圳迈瑞2、包装规格：2*503、内含物：Ra试剂：包被着抗CK-MB抗体的超顺磁性微粒，0.2 g/L；Tris缓冲液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；叠氮钠，0.9g/L；Rb试剂：抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物，3 mg/L；MES缓冲液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；叠氮钠，0.9 g/L 4、储存条件及有效期：2~8℃保存，有效期365天。
上机使⽤后，在2~8℃的贮存环境下有效期为28天四、仪器品牌、型号：迈瑞CL1000i五、具体操作步骤（包括主要的仪器测定参数）5.1校准：5.1.1校准品来源：试剂⼚家的标准液。
ckmb 生化 免疫 质量法
ckmb 生化免疫质量法CK-MB肌酸激酶同工酶-MB（CK-MB）是一种酶，存在于心肌细胞中。
当心肌细胞受损时，CK-MB 会释放到血液中，因此它是心肌梗死（MI）的敏感标记物。
生化法生化法是测量 CK-MB 活性的方法。
此方法基于 CK-MB 催化磷酸肌酸（CrP）和腺苷二磷酸（ADP）反应生成肌酸（Cr）和三磷酸腺苷（ATP）的事实。
通过测量生成的 ATP 量或消耗的 CrP 量，可以确定 CK-MB 活性。
免疫法免疫法是测量 CK-MB 蛋白质浓度的检测方法。
此方法利用抗体特异性识别 CK-MB 蛋白质，并根据抗原抗体结合反应的强度或化学发光信号来定量蛋白质浓度。
免疫法也可用用于定量 CK-MB 亚型的浓度。
质量法质量法是利用质谱技术检测 CK-MB 蛋白质的一种方法。
质谱法通过将 CK-MB 蛋白质电离并根据其质荷比（m/z）分离离子来识别和定量蛋白质。
质量法提供了高度特异和灵敏的 CK-MB 检测，并且可以与其他生物标志物联用以提高 MI 的诊断准确性。
各方法比较生化法：优点：简单，相对快速，成本低。
缺点：不能区分 CK-MB 亚型，可能受到其他 CK 同工酶的干扰。
免疫法：优点：特异性高，可以区分 CK-MB 亚型。
缺点：相对昂贵，可能有交叉反应。
质量法：优点：高度特异和灵敏，可以与其他生物标志物联用。
缺点：相对复杂，需要昂贵的设备和专业知识。
要求采血：建议在症状发作后 3-6 小时内采血。
标本类型：全血或血浆。
储存和运输：标本应冷藏或冷冻保存并尽快进行分析。
参考范围男性：<5 ng/mL女性：<3.5 ng/mL临床意义CK-MB 水平升高是 MI 的可靠诊断指标。
然而，以下情况也可能导致 CK-MB 升高：骨骼肌损伤肾功能衰竭胸痛某些药物（如他汀类药物）因此，在诊断 MI 时，应结合临床症状、心电图和其他生物标志物（如肌钙蛋白）进行 CK-MB 检测。
肌酸激酶同工酶质量法在正常范围
肌酸激酶同工酶质量法在正常范围肌酸激酶同工酶（Creatine Kinase Isoenzyme，CK-MB）是一种特殊的酶，它在心肌细胞受损时会释放到血液中。
肌酸激酶同工酶质量法是一种常用的检测方法，用于评估心肌细胞损伤程度和诊断心肌梗死。
本文将介绍肌酸激酶同工酶质量法的正常范围以及其在临床上的应用。
肌酸激酶同工酶是由三个亚基组成的酶，包括肌酸激酶B亚基（CK-MB）、肌酸激酶M亚基（CK-MM）和肌酸激酶BB亚基（CK-BB）。
在正常情况下，肌酸激酶同工酶在血液中的比例是CK-MM：CK-MB：CK-BB≈97%：3%：0%。
其中，CK-MM主要存在于骨骼肌，CK-MB主要存在于心肌，CK-BB主要存在于脑组织。
肌酸激酶同工酶质量法是通过测定血液中不同亚基的质量来确定各个亚基的比例。
该方法利用了亚基在电泳过程中的不同迁移速度来进行分离，然后通过酶活性测定来确定各个亚基的含量。
通过测定血液中CK-MB的含量，可以评估心肌细胞的损伤程度和诊断心肌梗死。
在正常情况下，成年人血液中肌酸激酶同工酶的含量是很低的，通常不超过正常范围。
根据临床实践和研究，正常人的CK-MB质量分数通常在0-5 ng/mL之间。
当心肌细胞受损时，CK-MB的含量会显著增加，超过正常范围。
因此，CK-MB的升高可以提示心肌细胞损伤，可能是心肌梗死的征象。
肌酸激酶同工酶质量法在临床上有着广泛的应用。
首先，它可以用于诊断心肌梗死。
心肌梗死是心肌血液供应不足引起的心肌细胞坏死，是一种严重的心血管疾病。
通过测定血液中CK-MB的含量，可以判断心肌梗死的程度和范围，辅助临床医生进行诊断和治疗决策。
肌酸激酶同工酶质量法还可以用于监测心肌损伤的恢复过程。
在心肌梗死后，心肌细胞会逐渐修复和再生。
通过定期检测血液中CK-MB的含量，可以了解心肌损伤的恢复情况，评估治疗效果，以及预测心血管事件的风险。
肌酸激酶同工酶质量法还可用于鉴别心肌损伤的原因。
血清肌酸激酶MB同工酶测定
血清肌酸激酶MB同工酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。
其反应原理如下：⑴CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体→ CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体→ 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制；⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶CK同工酶⑶磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP己糖激酶(HK)ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH)葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。
在上述反应中，NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性成正比。
通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性。
肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB）的活性。
3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或肝素血浆。
3.3 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。
活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
血标本应尽快送往化验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h.血清必须吸出,转移至有盖的试管中.3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：D-葡萄糖27mmol/L 咪唑缓冲液60mmol/L乙酸镁14mmol/L NADP 2.7mmol/LN-乙酰半胱氨酸27mmol/L AMP 7mmol/L试剂2（R2）：磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶≥20KU/LADP 11mmol/L 糖激酶≥20KU/LCK-M 抗体4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
肌酸激酶同工酶MB质量和活力方法学比较
肌酸激酶同工酶MB质量和活力方法学比较陶青松;黄建军【摘要】目的：评价两种不同的方法检测CKMB质量和活力结果在诊断急性心肌梗死患者中的一致性。
方法：留取91例临床诊断为急性心肌梗死患者的血清标本，分别采用免疫抑制酶法和化学发光法检测CKMB活力和质量，分析活力和质量两种结果在诊断急性心肌梗死患者中的差异性。
结果：CKMB质量和活力分别为（8．77±10．27） ngm/l 和（23．8±23．06） U/L，数据转化后，CKMB 质量为（35．9±12．48）ng/ml，活力为（23．8±23．06） U/L（t ＝6．415，P ＜0．001），CKMB质量和活力均值的差异有统计学意义。
以正常参考值为标准， CKMB 质量阳性为53例，阴性为38例， CKMB活力阳性为29例，阴性为62例，分布有显著性差异（P＜0．001），CKMB质量阳性率显著高于活力的阳性率。
结论：CKMB质量的诊断价值优于活力，临床实践中，推荐使用CKMB质量为诊断参考。
%Objective:To evaluate the consistency of determining creatine kinase isoenzyme( CKMB) mass and CKMB activity in diagnosis of acute myocardial infarction(AMI)by two different techniques.Methods:The se-rum samples were collected from 91 clinically diagnosed AMI patients, and CKMB mass and CKMB activity were assayed respectively using im -munosuppressed enzyme method and chemiluminescence technique to compare the difference for the mass and activity determined .Rseults:The value of CKMB mass and CKMB activity was (8.77 ±10 .27) ng/ml and (23.8 ±23.06) U/L respectively.After standardization,the mean value of CKMB mass was(35.9 ±12.48)ng/ml,which was statistically differ-ent from the mean value of CKMB activity (23.8 ±23.06) U/L(t =6.415,P<0.001).Based onthe normal reference,positive CKMB mass was found in 53of the 91 cases and negative in 38.Positive CKMB activi-ty was seen in 29 compared to negative in 62, and the difference was sig-nificantlydifferent(P<0.01).Positive CKMB mass was over its positiveactivity.Conclusion: Determination of CKMB mass appears superior to CKMB activity in diagnosis of AMI, which shall be recommendation in clinical reference.【期刊名称】《皖南医学院学报》【年(卷),期】2013(000)004【总页数】3页(P281-282,283)【关键词】CKMB质量;CKMB活力;诊断;心肌梗死【作者】陶青松;黄建军【作者单位】皖南医学院附属弋矶山医院检验科，安徽芜湖 241001;皖南医学院附属弋矶山医院检验科，安徽芜湖 241001【正文语种】中文【中图分类】R541.4近年来，心肌损伤指标肌酸激酶同工酶 MB(CKMB)作为心梗全套项目内容被推广应用，临床检测主要采用化学发光法，敏感性和特异性都有所提高。
肌酸激酶同工酶mb质量和活力方法学比较
肌酸激酶同工酶mb质量和活力方法学比较研究背景肌酸激酶同工酶（Mb）是调节传递分子磷酸肌酸化过程中关键的调控机制，在生物体代谢过程中发挥着重要作用。
肌酸激酶同工酶在高活性状态下室温保存后可以保持数小时的稳定活性。
因此，肌酸激酶同工酶的质量和活性的评估对于研究其功能和在体内发挥作用至关重要。
肌酸激酶同工酶MB的质量和活力方法学比较肌酸激酶同工酶MB质量和活性的方法有不同，根据测定方法的不同。
对它们进行方法学比较十分有必要。
1、常见的质量分析方法肌酸激酶同工酶MB质量一般采用凝胶电泳（SDS-PAGE）、ELISA和Westernblotting 等方法。
凝胶电泳（SDS-PAGE）是一种常用的电泳分析方法，它利用SDS结合Mb蛋白质改变其中的电荷，形成的规则的凝胶电泳图表明了其精细结构特性。
ELISA是一种对酶的特定性抗体反应的分析方法，可以用来测定Mb蛋白质的数量。
Westernblotting是一种特定的蛋白质细胞膜的分析方法，可以用来确定Mb蛋白质比例和种类，从而比较它们之间的分类和功能特征。
2、常见的活性测定方法肌酸激酶同工酶MB活性通常用流式细胞仪、不对称瑞达尼聚合、紫外--可见双光谱分析仪等技术进行测定。
流式细胞仪是一种特用的细胞测定技术，可以检测Mb肽亚基活性表面抗原。
不对称瑞达尼聚合（RDPC）是一种比较灵敏的活性测定方法，可以检测几乎所有的Mb类别的重要活性表面抗原，包括Mb的beta和alpha肽亚基。
此外，紫外--可见双光谱分析仪也可以测定Mb的活性，且检测范围更广。
结论肌酸激酶同工酶MB的质量和活性的测定方法种类繁多，在实验室检测中应根据实际需要选择合适的检测方法，以保证测试的准确性和可靠性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
肌酸激酶同工酶——MB评估上海仁济医院检验科肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）是由M和B亚基构成的杂化型二聚体，主要存在于心肌细胞的外浆层，是心肌酶谱中最有特异性的酶，从80年代起公认为心肌酶学诊断的“金标准”，应用于急性心肌梗塞（AMI）的早期诊断[1，2]1979年Gerhardt[3]等人首次报道用免疫抑制原理测定CK同工酶，免疫抑制法以其快速、灵敏、定量且可进行自动分析等优点适合常规检测，随着方法与试剂不断改进与完善，1986年国外已有试剂盒供应，但价格昂贵；最近国内研制成功免疫抑制法测CK-MB的试剂盒，本文旨在对该试剂盒的特性作一评估。
材料和方法一、标本来源分正常组，AMI组和非AMI组，非常人血清来自体检健康人员，计30例，AMI 组53例，系仁济医院心内科病房已确诊为AMI者，非AMI组系心内科及其它科门诊病人，因胸痛、心率失常等初诊疑拟AMI，后经系列观察和酶学检查证实不是AMI患者，共20例。
血标本留取后及时分离血清检测或将检测血清置于-20度冰箱保存至测定。
二、试剂1. 免疫抑制法检测CK-MB试剂盒：上海北加生化试剂有限公司产品（1）R1：含CK-MB抗体的咪唑缓冲液（羊抗人CK-M多克隆抗体抑制剂>2000U/L，100mmol/L的咪唑缓冲液成pH6.7内含葡萄糖20mmol/L，醋酸镁10mmol/L，EDTA 2mmol/L）（2）R2(A)：酶干粉。
（AMP 5mmol/L，磷酸肌酸30mmol/L，五磷酸二腺苷10mmol/L，NADP2mmol/L，V-乙腺半胱氨酸20mmol/L，已糖激酶≥2500U/L，G6PDH≥500U/L，ADP 2mmol/L）。
2. 宝灵曼CK-MB试剂盒：对照用。
三、仪器HITACHI 7150型自动生化分析仪波长=340nm四、方法本试验在日立7150生化自动分析仪器上测定，参数表如下：TESTASSAY CODE SAMPLE VOLUMER1 VOLUMER2 VOLUMEWA VELENGTHCALIB METHOD STD. (1) CONC. –POSZ. STD. (2) CONC. –POSZ. STD. (3) CONC. –POSZ. STD. (4) CONC. –POSZ. STD. (5) CONC. –POSZ. STD. (6) CONC. –POSZ. SD LIMIT DUPLICATE LIMIT SENSITIVITY LIMIT SENSITIVITY LIMIT ABS. LIMIT (INC/DEC) PROZONE LIMIT EXPECTED V ALUE TECH LIMIT INSTRUMENT FACTOR [ CK-MB ][ RATE - A ]:[ 45 ]-[ 50 ] [ 5 ][ 3 ][ 240 ][ 100 ][ NO ] [60 ][ 20 ][ NO ] [ ][ 340 ][ LINEAR ][ 0 ][ 0 ] [ 0.0 ]-[ 1 ][ 65 ]-[ 28 ][ 0 ]-‘[ 0 ][ 0 ]-‘[ 0 ][ 0 ]-‘[ 0 ][ 0 ]-‘[ 0 ][ 0.1 ][ 100 ][ 100 ][ 0 ][ 9000 ][ INCREASE ] [ 0 ][ LOWER ][ 0 ]-[ 25 ][ 100]-[ 1000][ 1.0 ]结果一、线性范围取一高活性CK-MB标本：152.0U/L用生理盐水按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5比例稀释，测得其相应活性分别为38.0、81.0、111.0、131.0、152.0，作图（见图1）。
呈典型的抛物线曲线，符合免疫比浊法反应原理。
图1 试剂盒测定CK-MB线性同样操作方法，将CK-MB为79.0U/L的病人血清标本用生理盐水按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5比例稀释，测得相应活性为18.7、32.5、48.9、65.5、79.0以稀释倍数为X轴，酶活性Y为轴，其线性见图2，可见CK-MB活性在80U/L以下线性良好。
图2 试剂盒测定CK-MB线性二、精密度试验分别取低、中、高活性的血清标本（简称低值、中值、高值）。
按本法操作，批内重复200次，批间是每天测定一次共10天，表1为本试剂盒对五份血清标本所做的重复性试验，批内：n=60，CV=1.66~13.66%，平均6.78%。
批间：n=20，CV=6.59~11.73%，平均9.16%，基本符合质控要求，显示该试剂盒有效较高的精密度。
表1 精密度试验标本n man min X SD CV(%)批低值20 13.0 8.0 10.15 1.39 13.66 中值20 61.4 51.7 55.99 2.81 5.02内高值20 168.0 158.0 163.1 2.7 1.66批低值10 15.0 10.4 12.45 1.46 11.73批高值10 108.8 90.1 98.73 6.51 6.59三、干扰试验1. 甘油三酯（TG）干扰试验：采用高脂标本经测定分析物浓度后加入试验样品中。
选取两标本，一为高甘油三酯标本（TG：14.8mmol/L，CK-MB：30U/L），另一为甘油三酯正常标本（TG：1.09mmol/L，CK-MB：32U/L）。
将高甘油三酯作为干扰物，按不同比例1/5、2/5、3/5、4/5、5/5加入甘油三酯正常的标本中，随后测CK-MB活性分别为30、31、33、31、30。
干扰物加入前后的反应曲线图见图3、4。
由于两标本CK-MB 接近，仅考虑TG带来的影响，根据图及测得值显示TG在14.8mmol/L以下对CK-MB 活性无明显影响。
图3 TG加入前反应曲线图图4 TG加入后反应曲线图2. 胆红素（BIL）干扰试验：选取高胆红素标本（BIL：394.72μmol/L，CK-MB：4.1U/L）作为干扰物，按不同比例1/4、1/3、1/2加入胆红素正常（BIL：4.02μmol/L，CK-MB：11.0U/L）的标本中，然后分别测胆红素，CK-MB值（见表2），干扰物加入前后的反应曲线见图5、6。
由于两标本中CK-MB略有差异，随着干扰物高胆红素加入的同时，低活性的CK-MB亦被带入，须计算理论值，根据测定值与理论值比较及图显示BIL，在209.33μmol/L以下对CK-MB活性无明显影响。
表2 胆红素对CK-MB的影响干扰物加入比例1/4 1/3 1/2BIL104.20 136.76 209.33CK-MB(测定值) 9.7 8.4 7.4CK-MB(理论值) 9.28 8.7 7.55图5 BIL 加入前反应曲线图图6 BIL加入后反应曲线图3. 溶血干扰试验将8例CK-MB活性增高的标本，先测定CK-MB活性，然后进行人为溶血，得到溶血样品，再进行测定CK-MB活性及血红蛋白浓度，结果见表3。
进一步试验，将标本1、4溶血前重复测5次，得136.58±2.51、27.74±2.21；溶血后重复测2次，均在X±2SD 范围内，说明当轻度溶血（Hb<200mg/dl）时本试剂盒对CK-MB测定无明显影响；反之严重溶血可致CK-MB活性升高。
表3 试剂测定CK-MB活性溶血前后结果比较1 2 3 4 5 6 7 8 溶血前135.1 201.5 27.3 27.3 65.2 69.5 181.9 201.5 溶血后135.8 202.6 27.4 26.1 64.6 70.4 189.5 214.9 Hb(mg/dl) 100 100 100 200 200 200 300 500四、与德国宝灵曼同类试剂盒的相关性60份临床病人血清标本用本试剂和宝灵曼试剂进行CK-MB平行测定，以宝灵曼试剂测得结果为X轴，本试剂测得结果为Y轴，求得线性方程为Y=0.565X-0.5999，线性相关系数为r=0.983（图7）。
显出高相关性，上述结果表明二种试剂盒对AMI的临床意义均满意。
图7 本试剂（Y）与宝灵曼试剂（X）的相关性五、正常值本试剂盒测定体检健康人员30名，结果CK-MB为4.96±2.95U/L(X±SD)，取95%的范围，单测u= 1.645得4.96±3.37(X±1.645SD)，正常上限定在<10U/L。
讨论肌酸激酶（CK，EC2,7,3,2，），又称肌酸磷酸激酶（CK），是Kuby等于1953年首先从兔骨骼肌中提取的。
CK是不稳定的酶，对光、热及高pH敏感，故测定时必须十分注意测定条件，[4]标本最好用血清，除肝素外采血管中不应加其它抗凝剂，因为它们对CK活性有抑制作用。
由于标本在保存中活性缓缓下降（4度，24小时活性丢失10%；25度，1小时丢失10.），最好采用血后能迅速进行测定。
如标本需储存，由于CK在室温不稳定，所有标本都因尽快与细胞分离保存在4度，保存时间不应超过24小时；若24小时内不测定需放在-20度冰箱中。
本试剂应用美国进口的羊抗人CK-M多克隆抗体，建立并产生了免疫抑制测定CK-MB方法的试剂盒，采用N-乙酰半胱氨酸（NAC）代替谷胱苷肽作为激活物质，其稳定性和溶解性好，而且测定时不会引起蛋白沉淀；并增加DETA作为酶激活剂，避免了使用还原胱甘肽作酶激活剂使CK-MB结果偏低的情况。
其原因为还原谷胱甘肽（GSH）中除常混有氧化谷胱甘肽（GSSG）外，本身在保存过程中会部分地被氧化，而血清中存在的谷胱甘肽还原酶（GR）则会催化氧化谷胱甘肽生成还原谷胱甘肽，并同时竞争性地消耗在催化CK-MB过程中产生的NADPH，反应如下：GSSG+NADPH+H+ 2GSH+NADP+，致使CK-MB结果偏低，可造成假阴性结果，另外，单磷酸腺苷（AMP）和二腺苷-5-磷酸（Ap5A）亦是试剂盒不可缺少的成分，血清中腺苷酸激酶（AK）主要来自RBC、PLT、肝和肌肉组织，可催化ADP产生A TP，参与反应，导致CK值假性升高，因此分离血清时要保证离去PLT、RBC等等。
虽然RBC中不存在CK，溶血不直接影响CK活性；但是RBC中含有丰富的AK，是测定的主要干扰物质，这种干扰可以通过向底物反应混合液中入AK的抑制剂而减少，最有效的便是将AMP和二腺苷-5-磷酸结合起来使用。
因而本试剂对轻度溶血标本（如Hb<200mg/dl），CK-MB活性无明显改变。
本试剂盒测定CK-MB活性显示精确性和线性良好，对轻度溶血，黄疸及脂血不受干扰。
对AMI血清标本和进口宝灵曼试剂盒和相关性良好（r=0.983），表明该试剂符合测定要求。
关于正常值，通过测定30名健康人平均CK-MB为4.96±2.05U/L，将其正常值为<10U/L，比宝灵曼试剂正常值（<25U/L）低。