血清肌酸激酶MB同工酶测定
血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程
33、血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清肌酸激酶同工酶测定(缩写CK-MB), 组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理标本采集常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
下列标本为不合格标本标本量不足：少于的全血标本，或少于的血清或血浆。
对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
无法确认标本与申请单对应关系的。
其他如标识涂改、标本试管破裂等。
标本保存接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4h，普通冰箱中（2～8℃）稳定8h。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h 不饮酒和12h 以上禁食空腹状态。
注意有无应用影响测试项目的药物。
可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理试剂中抑制CK 同工酶CK-M 的抗体，完全抑制CK-M 的活性而不影响另一种CK 同工酶CK-B 的活性。
CK-B 在两个工具酶的参与下，通过下面三个反应式所表示的反应，最后使NADP 转化成在340nm 波长处有光吸收的NADPH ，在340nm 波长处连续监测NADPH 吸光度的增加速率，推算出CK-B 的活性。
所得结果乘以2即得CK-MB 的活性。
ATP ADP CK +−→−+肌酸磷酸肌酸ADP 6ATP HK +--−→−+磷酸葡萄糖葡萄糖NADPH 6NADP 6PDH 6G +-−−−→−+--磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖4 试剂及其他用品试剂盒名称：利德曼肌酸激酶同功酶（CK-MB ）试剂盒，北京利德曼生化技术有限公司出品。
肌酸激酶MB型同功酶质量测定SOP_MMB临床意义_检验科生化项目SOP
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1检测原理
MMB方法是基于“三明治”原理的一步式酶免疫分析法。样本是利用带有具体针对CKB亚基的单克隆抗体涂层的二氧化铬粒子以及轭合物试剂（标有β-吡喃半乳糖苷的具体针对CKMB同功酶的单克隆抗体）孵育的标本与包被CKB亚基特异的单克隆抗体的二氧化铬颗粒及结合物（被CKMB同功酶特异的单克隆抗体标记的β半乳糖苷酶）一起孵育。在孵育过程中会形成一个由颗粒/CKMB/结合物组成的三明治式的结构，没有结合的结合物可通过磁性分离和清洗来清除，结合了三明治的β-吡喃半乳糖苷与一个发色底物氯酚红-β-d-吡喃半乳糖苷（CPRG）结合，CPRG水解释放色基（CPR）。患者样本中所呈现的CKMB的浓度直接与由于在577nm处测量的CPR的形成而导致的颜色变化的比率成比例。
CrO2-Ab+ F(ab′)2-β-吡喃半乳糖苷（转移到比色杯）
CPRG（在577nm处不吸收）CrO2-Ab- CKMB- F(ab′)2-β-galCPR（在577nm处吸收）
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
室温保存，及时送检和检测。样本在室温下可存储12小时，在4℃下可存储3天，在–20℃下冷冻保存1个月。
5.2校准条件
肌酸激酶同功酶质量测定
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在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
CKMB——精选推荐
CKMB肌酸激酶同⼯酶MB（CKMB）的检测⼀、项⽬名称、检验⽅法名称1. 项⽬名称：肌酸激酶同⼯酶MB（CKMB）的检测2. 检验⽅法名称：化学发光法⼆、⽅法学原理：肌酸激酶同⼯酶MB测定采⽤双位点夹⼼化学发光免疫分析法，其采⽤的技术原理如下：第⼀步：将样本与包被着CK-MB单克隆抗体的超顺磁性磁微粒（磁珠）以及CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵育，样本中的CK-MB和包被在磁珠上的CK-MB单克隆抗体结合，同时CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB另⼀位点结合。
反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。
第⼆步：将化学发光底物（3-(2-螺旋⾦刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-⼆氧环⼄烷，AMPPD）添加到反应管内，发光底物AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解, 脱去⼀个磷酸根基团，⽣成不稳定的中间产物，该中间产物通过分⼦内电⼦转移产⽣间氧苯甲酸甲酯阴离⼦，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离⼦从激发态返回基态时，产⽣化学发光，由光电倍增管对反应所产⽣的光⼦数进⾏测量，所产⽣的光⼦数与样本内CK-MB的浓度成正⽐。
样本内分析物的量由定标曲线来确定。
三、试剂品牌、代号、包装规格、内含物1、试剂品牌：深圳迈瑞2、包装规格：2*503、内含物：Ra试剂：包被着抗CK-MB抗体的超顺磁性微粒，0.2 g/L；Tris缓冲液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；叠氮钠，0.9g/L；Rb试剂：抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物，3 mg/L；MES缓冲液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；叠氮钠，0.9 g/L 4、储存条件及有效期：2~8℃保存，有效期365天。
上机使⽤后，在2~8℃的贮存环境下有效期为28天四、仪器品牌、型号：迈瑞CL1000i五、具体操作步骤（包括主要的仪器测定参数）5.1校准：5.1.1校准品来源：试剂⼚家的标准液。
心肌同工酶(CK-MB)测定操作规程(SOP)
心肌同工酶(CK-MB)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清样品中肌酸激酶同工酶（CKMB）的活性。
二、临床意义（一）概述肌酸激酶是由M型和B型两种亚基组成的二聚体，结合形成三种CK同工酶：CK-BB、CK-MB、CK-MM。
骨骼肌中大多数为CK-MM；胃肠道和脑组织中以CK-BB为主；心肌中以CK-MB为主。
当心肌损害，特别是发生心肌梗塞时，血液中CK-MB水平升高。
胸疼发生后4-6小时CK-MB水平开始升高，12-24小时到达高峰，48小时后回到基质水平。
（二）临床意义CK－MB主要存在于心肌中，约为心肌总CK的１4％,血清CK-MB上升先于总活力的升高，24小时达峰值，36小时内其波动曲线与总活力相平行，至48小时消失。
（三）医学决定水平15U/L: 高于此值，且有持续性临床表现（胸痛、心电图显示特异性改变等），提示为急性心肌梗塞，应及时进行治疗。
90U/L: 高于此值多由于非心肌性CK-MB释放，如恶性肿瘤，应采取其他有关诊断方法，予以确诊。
三、检验原理磷酸肌酸 + ADP −−→−-B CK肌酸 + ATP ATP + 葡萄糖−−→−HK葡萄糖-6-磷酸 + ADP葡萄糖-6-磷酸 + NADP −−−−→−PDH G 66-磷酸-葡萄糖 + NADPH + H+用特异的抗CK-M 抗体抑制CK-M 的活性，在340nm 波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A ／min)，测定CK-B 的活性，将CK-B 活性测定值乘以2，即可计算出样品中CK-MB 的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
肌酸激酶同工酶定量测定试剂盒标准操作程序
肌酸激酶同工酶测定标准操作程序1. 摘要肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB ）试剂盒（免疫抑制法）试剂盒适用于在生化分析仪上定量测定人血清肌酸激酶MB 型同工酶（CK －MB ）的活力。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中CK-MB 的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定CK-MB 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB ）试剂盒采用的是免疫抑制法。
5. 原理应用抗CK-M 抗体抑制CK-M ，但不影响MB 和BB 中B 单位活性，然后用CK 试剂（NAC 为激活剂）测试CK 的活力，测得的CK 活力乘以2即为CK-MB 活力，即肌酸激酶（CK ）催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷（ADP ）反应产生三磷酸腺苷（ATP ）与肌酸；偶联己糖激酶（HK ）及葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD ）的催化反应。
HK 催化葡萄糖与ATP 反应，形成葡萄糖－6－磷酸（G6P ），G6PD 催化G6P 氧化，形成6－磷酸葡萄糖内酯（6－PG ）及还原型辅酶Ⅱ（NADPH ）。
NADPH 形成的速率与血清中肌酸激酶（CK ）的活性成正比。
+-+++−−−→−+++−→−++−−−→−+H NADPH O H NADP ADPATP ATPADP DH P G HK PH CK 磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖葡萄糖肌酸磷酸肌酸-6--6--6-628.6,6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：咪唑缓冲液，醋酸镁，葡萄糖，EDTA ，AMP,ADP,NAD,5-磷酸二腺苷，N-乙酰半胱氨酸，己糖激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，抗CK-M 抗体，防腐剂R2: 咪唑缓冲液，磷酸肌酶，防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
CKMB
肌酸激酶同工酶MB（CKMB）的检测一、项目名称、检验方法名称1. 项目名称：肌酸激酶同工酶MB（CKMB）的检测2. 检验方法名称：化学发光法二、方法学原理：肌酸激酶同工酶MB测定采用双位点夹心化学发光免疫分析法，其采用的技术原理如下：第一步：将样本与包被着CK-MB单克隆抗体的超顺磁性磁微粒（磁珠）以及CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵育，样本中的CK-MB和包被在磁珠上的CK-MB单克隆抗体结合，同时CK-MB单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB另一位点结合。
反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。
第二步：将化学发光底物（3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，AMPPD）添加到反应管内，发光底物AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解, 脱去一个磷酸根基团，生成不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，由光电倍增管对反应所产生的光子数进行测量，所产生的光子数与样本内CK-MB的浓度成正比。
样本内分析物的量由定标曲线来确定。
三、试剂品牌、代号、包装规格、内含物1、试剂品牌：深圳迈瑞2、包装规格：2*503、内含物：Ra试剂：包被着抗CK-MB抗体的超顺磁性微粒，0.2 g/L；Tris缓冲液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；叠氮钠，0.9 g/L；Rb试剂：抗CK-MB抗体-碱性磷酸酶标记物，3 mg/L；MES缓冲液，50 mmol/L；ProClin 300，0.5 g/L；叠氮钠，0.9 g/L4、储存条件及有效期：2~8℃保存，有效期365天。
上机使用后，在2~8℃的贮存环境下有效期为28天四、仪器品牌、型号：迈瑞CL1000i五、具体操作步骤（包括主要的仪器测定参数）5.1校准：5.1.1校准品来源：试剂厂家的标准液。
肌酸激酶同工酶质量法在正常范围
肌酸激酶同工酶质量法在正常范围肌酸激酶同工酶（Creatine Kinase Isoenzyme，CK-MB）是一种特殊的酶，它在心肌细胞受损时会释放到血液中。
肌酸激酶同工酶质量法是一种常用的检测方法，用于评估心肌细胞损伤程度和诊断心肌梗死。
本文将介绍肌酸激酶同工酶质量法的正常范围以及其在临床上的应用。
肌酸激酶同工酶是由三个亚基组成的酶，包括肌酸激酶B亚基（CK-MB）、肌酸激酶M亚基（CK-MM）和肌酸激酶BB亚基（CK-BB）。
在正常情况下，肌酸激酶同工酶在血液中的比例是CK-MM：CK-MB：CK-BB≈97%：3%：0%。
其中，CK-MM主要存在于骨骼肌，CK-MB主要存在于心肌，CK-BB主要存在于脑组织。
肌酸激酶同工酶质量法是通过测定血液中不同亚基的质量来确定各个亚基的比例。
该方法利用了亚基在电泳过程中的不同迁移速度来进行分离，然后通过酶活性测定来确定各个亚基的含量。
通过测定血液中CK-MB的含量，可以评估心肌细胞的损伤程度和诊断心肌梗死。
在正常情况下，成年人血液中肌酸激酶同工酶的含量是很低的，通常不超过正常范围。
根据临床实践和研究，正常人的CK-MB质量分数通常在0-5 ng/mL之间。
当心肌细胞受损时，CK-MB的含量会显著增加，超过正常范围。
因此，CK-MB的升高可以提示心肌细胞损伤，可能是心肌梗死的征象。
肌酸激酶同工酶质量法在临床上有着广泛的应用。
首先，它可以用于诊断心肌梗死。
心肌梗死是心肌血液供应不足引起的心肌细胞坏死，是一种严重的心血管疾病。
通过测定血液中CK-MB的含量，可以判断心肌梗死的程度和范围，辅助临床医生进行诊断和治疗决策。
肌酸激酶同工酶质量法还可以用于监测心肌损伤的恢复过程。
在心肌梗死后，心肌细胞会逐渐修复和再生。
通过定期检测血液中CK-MB的含量，可以了解心肌损伤的恢复情况，评估治疗效果，以及预测心血管事件的风险。
肌酸激酶同工酶质量法还可用于鉴别心肌损伤的原因。
血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定
血清肌酸激酶MB 同工酶DGKC 推荐方法测定1. 实验原理使用多克隆抗体抑制CK 的CK-M 同工酶活性后，按照德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。
CK-MB 由CK-M 和CK-B 亚单位组成。
抗CK-M 抗体完全抑制了CK-MM （肌酸激酶的主要活性部分）和CK-MB 中的CK-M 亚单位的活性。
再检测CK 的活力为余下的CK-B 的活力，相当于一半CK-MB 活力。
所以将结果乘以2，为CK-MB 的活力。
ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATPATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸+ 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H +2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。
3. 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。
活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂 利德曼CK 测定试剂盒（试剂1 6×64ml 试剂2 6×16ml ）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）+ 试剂2（R2）：咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L磷酸肌酸 30mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC ） 20mmol/L乙酸镁 10mmol/LEDTA-Na2 2mmol/LADP 2mmol/LNADP 2mmol/LAMP 5mmol/L CK 己糖激酶(HK) (G6P-DH)二腺苷-5'-磷酸10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH）≥1500U/L已糖激酶（HK）≥2500U/L抑制人CK-MM的人抗体≥2000U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
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血清肌酸激酶MB同工酶测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。
其反应原理如下：
⑴CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体→ CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体→ 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制；
⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶
CK同工酶
⑶磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP
己糖激酶(HK)
ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸
(G6P-DH)
葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+
式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。
在上述反应中，NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性成正比。
通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌
酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性。
肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB）的活性。
3 标本：
3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或肝素血浆。
3.3 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。
活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少
损失10%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
血标本应尽快送往化
验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h.
血清必须吸出,转移至有盖的试管中.
3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪
食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）
4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
D-葡萄糖27mmol/L 咪唑缓冲液
60mmol/L
乙酸镁14mmol/L NADP 2.7mmol/L
N-乙酰半胱氨酸27mmol/L AMP 7mmol/L
试剂2（R2）：
磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶≥
20KU/L
ADP 11mmol/L 糖激酶≥
20KU/L
CK-M 抗体
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，
试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂
2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20天。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，
或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使
用。
4.1.5 注意事项：试剂中含稳定剂。
不可入口！避免接触皮
肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：
4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。
4.2.2校准及校准频次的要求：正常情况下，应每周至少对测定进行一次校准。
当发生下列情况时（如：使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等），应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪。
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
9 参考值范围：0-24U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值0-25 u/L。