抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建

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利用重组慢病毒载体建立稳定表达绿色荧光蛋白细胞系

ｌｎｉｉｌｖｃｏ．Ｍｅｈｄ：ＶｅｔｒｐａｍｉＨＲ－ＣＭＶ— ＰｃｎａｎｎＰｇｎｓａｔｒｅｅｅａｋｇｏｓｒｃＣＭＶ— ｅｔｒｅｔｒｖａｔｏｓｃｏｌｓｄｐ＇ｐＧＦｏｔｉｉｇＧＦｅｅａａｇｔｎ，ｐｃａｅｃｎｔｕｔｐｇＡＲ８２ａｄａｎｅｏｅｐａｍｉＣＭＶ～ＶＧｗｅｅＣ —ｒｎｆｃｅｎｏ２３ａｋｇｎｅｌｌｅｕｉｇＣａＰｐｅｉｉｔｎｍｅｈ．ｎｎｅｖｌｐｌｓｄｐＶＳｒＯｔａｓｅｔｄｉｔ９Ｔｐｃａｉｇｃｌｉｓｎ — ｒｃｐｔｉｔ — ｎａｏｏ．Ｔｈｉｕｅａｖｓｅｔｍｈｕｅｎｔｎｒｓｄｔｒｎｆｃ９Ｔｅｌｇｉ．ＴｈｎｔｅＧＦｔｏｇｙｅｐｅｓｎｄｅｖｒｓｓｈｒｅｔｄｆｏｔｅｓｐｒａａｔｗｅｅｕｅｏｔａｓｅｔ２３ｃｌａａｎｓｅｈＰｓｒｎｌｘｒｓｉｇｍｏｏｌｎｓｓｌｃｅｔｌｎｉｇａｄｔｅａｓｇｄｎｃｏｅｗａｅｅｔｄｗｉａｃｏｅｒｎｎｈｎｐｓａｅ．Ａｆｅｐｓａｅ，ｔｅｃｌｒｅｔｆｒＦｈｔｒ１ａｓｇｓｈｅｌｗｅｅｓｎｏＡＣＳｔｏｖｎｅｔｅ２ｓＯｃｎｉｃｈｓａｉｔｆｔｅＧＦｘｒｓｉｎＢｓｄｓｔｂｌｙｏｈＰｅｐｅｓ．ｅｉｅ．ａＧＦＰｔｒｅｅｉｏａｇｔｄＲＮＡｎｅｆｒｎｅｅｐｒｍｅｔｗａｏｄｃｅＯａｓｒｈｔｔｉｃｌｉｔｒｅｅｃｘｅｉｎｓｃｎｕｔｄｔｓｕｅｔａｈｓｅｌｌｅｃｕｄｂｓｄｉｅｅｅｐｅｓｏｅｕａｉｎｅｐｒｎｓｅｕｔ：ＡＰｓａｌｘｒｓｉｇｃｌｌｅＧ４ｗａｓａｌｈｄ，ｉｉｏｌｅｕｅｎｇｎｘｒｓｉｎｒｇｌｔｘｅｉｎｏｍｅｔ．ＲｓｌｓＧＦｔｂｙｅｐｅｓｎｅｌｉｓｅｔｂｉｅｎｓｎｔｉｃｌｌｅｍｏｅｔａ９ｈｓｅｌｉｒｈｎ９ｎｏｈｅｌｅｐｅｓｄＧＦＰ，ｗｈｃｓｓａｌｆｅｔｌａｔ１ａｓｇｓａｄｃｕｄｂｆｉｉｎｌｆｔｅｃｌｘｒｓｅｓｉｈｗａｔｂｅａｔｒａｅｓｐｓａｅｎｏｌｅｅｆｃｅｔｙ２

免疫基因CD1d和绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体的构建

基因组内，能直接高效率感染细胞，转染效果稳定，
［３］刘为军，王昆华，欧阳一鸣，等．表达小鼠Ｂ７ — １基因的重组逆转录病毒载体构建及真核表达【Ｊ】．中国现代普通外科进展，２００７，１０（１）：
［５］ＱａｓｉｍＷ，ＶｉｎｋＣＡ，ＴｈｒａｓｈｅｒＡＪ．Ｈｙｂｒｉｄｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ
Ｔｈｅｒ，２０１０，１８（７）：１２６３ — １２６７．
（１１）：７８４１－７８４８．
因的转录后沉默的研究。为了方便观察，慢病毒包膜结构成分以新型报告基因— — 绿色荧光蛋白基因（ｃｏｐＧＦＰ）为标志基因。ｃｏｐＧＦＰ是来源于海藻的
胞。感染７２ｈ并传至３代后荧光显微镜下仍可见绿
色荧光。表明经传代后仍能表达目的基因。因此，我
们构建的ＣＤｌｄ基因慢病毒载体，能够为临床研究ＣＤｌｄ基因的相关功能提供稳定的转染载体，为探
讨恶性肿瘤的免疫基因治疗奠定实验基础。
抗肿瘤、抗病毒、抗病菌作用Ｈ］。
本研究选用复制缺陷型ＨＩＶ一１作为载体，制备
了携带ＣＤｌｄ基因的重组慢病毒颗粒。慢病毒载体的自身特点很突出，具有可转染非分裂细胞、转染效率高、目的基因可自行整合至靶细胞基因组长期表达稳定遗传、免疫反应小、相对安全性高等优点＿５一

Has-miR-129慢病毒表达载体的构建

合弹用药２１００年５月第３卷第９期
ＣｉｆＣｉｉｌａｉａＤｇＵｈｎＪｏｌｃｔｎｒｓｎａＲｏｌａ
ＹＱ
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・
４１・
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论著
・
ＨｓｍＲ１９慢病毒表达载体的构建ａ．ｉ．２
ｂｔｂｙｅｐｅｓｄｉｕａｙｔｃｃｌｓｅｓａｌｘｒｓｅｎｅｋｒｏｉｅｌ．ＣｏｎｌｉｃｕｓｏｎＴｈａ — ｉ１９ｌｎｔｖｒｌｅｐｅｓｏｅｔｒｗａｏｔｃｅｕｃｓｆｌｅＨｓｍＲ一２ｅｉｉａｘｒｓｉｎｖｃｏｓｃｎｓｒｔｄｓｃｅｓｕ — ｕ
【ｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｏｓｕｔｈａ— ｉ一２ｎｉｒｘｒｓｉｅｔｎｂｅｖｅｒｎｆｃｏｆｅｅ— Ａｓｒｃ】ｊｃｉｏｃｎｔｃｔｅＨｓｍＲ１９ｌｔｉｌｐｅｓｎｖｃｏａｄｓｒｅｔａｓｔｎｅｉｖｒｅｖａｅｏｒｏｈｔｅｉｆｎｉ
验基础。
建了携带有ＨｓｍＲ１９慢病毒表达载体，能高效感染肾癌细胞，ＨｓｍＲ１９靶点验证及其功能研究奠定了实ａ— ｉ．２并为ａ— ｉ一２
【关键词】慢病毒；ａ—ｉ．９绿色荧光蛋白ＨｓＲ１；ｍ２【中图分类号】Ｒ３３【７文献标识码】Ａ【文章编号】１７ — ２６２１）９０４一２６４３９（０００ — ０１Ｏ
ｌｒｓｅｔｌｎｈｒｓｅｔｆｃｅｃ．ｓｌｆｏｅｃｎｅｌａｄｔｅｔｎｆｃｉｎｅｆｉｎｙＲｅｕｔＬｎｉｉｌｖｃｏｓｗｅｅｉｆｃｅ８．ｅａａｃｒｃｌｌｅｎｕｃｓａｏｉｓｅｔｒｅｔｒｒｎｅｔｄ７６ＯｒｎｌｃｎｅｅｌｉｓａｄｖａｎＳ一Ｎ１ＰＭ６ｒｎｌｃｎｅｅｌｌｅ．ｈｒｎｆｃｉｎｅｃｅｃｆｗｅｌｌｅｓｍｏｅｔａ０％ａｄｌｎｉｉｌｅｔｒｏｎ２ｅａａｃｒｃｌｉｓＴｅｔｓｔｆｉｎｙｏｏｃｌｉｓｗａｒｈｎ９ｎａｅｏｉｔｎｎｅｔｒｃｏｓｃｕｄｖａｖ

慢病毒载体构建及包装流程

慢病毒载体构建及包装流程
（一）实验流程（1和2为并列步骤）
1.慢病毒过表达质粒载体的构建
设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。

将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

2.慢病毒干扰质粒载体的构建
合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体
3. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化
制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养24和48h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

(二) 实验材料
2.1慢病毒载体、包装细胞和菌株
该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pLVX-IRES-ZsGreen1/pLVX-shRNA2。

其中质粒上的ZsGreen1表达框能表达绿色荧光蛋白（GFP）。

载体信息
1) 慢病毒克隆载体图谱如下：
2）包装质粒信息如下：
PMD2G 载体图谱和序列信息
PSPAX2载体图谱和序列信息：
细胞株293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。

贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。

菌株大肠杆菌菌株DH5α。

用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。

(三)流程图。

绿色荧光蛋白原核表达载体的构建

绿色荧光蛋白原核表达载体的构建赵轶君;董浩;潘红艳;徐芳;赵佳;步怀宇;李红民【摘要】The green fluorescent protein(GFP)exhibits bright green fluorescence when exposed to light in the blue to ultraviolet range and has no toxicity on host cells .In cell and molecular biology,the GFP is extensively used as a reporter or detection.In this paper,the GFP encoding sequence was proliferated by PCR under the direction of the primers designed according to the sequence obtained from NCBI website .Then the PCR product was inserted downstream the malE(maltose-binding protein)encoding gene between the EcoRⅠ and Hind Ⅲ sites after restric-tion endonuclease digestion,by which the gfp was fused with malE into one open reading frame.The recombinant prokaryotic expression vector of GFP was employed to transform the competent cells of E.coli TB1.The transforma-tion mixture was cultured at 37 ℃ for 12 -16 h on the LB plates with 50 mg/mL AMP and 10 μmol /L IPTG,and then cultured at 25 -30 ℃ for 4 -6 h on the same plate.The expression of GFP in TB1 was analysed by UV detec-tion prior to SDS-PAGE.The GFP encoding gene infused dowmstream the malE gene can be expressed with green fluorescent excited by 365 nm UV under which the recombinant TB1 clone can be screened conveniently .Further a-nalysis of SDS-PAGE showed that the GFP encoding gene was over expressed in E.coli host TB1.This result showed that the prokaryotic expression vector of GFP was successfully constructed and the malE fusion GFP could be ex-pressed in high-level,which stronglysupported the construction of the prokaryotic fusion expression vector with GFP as reporter and detection marker .% 为开发以绿色荧光蛋白（GFP）为基因的原核表达载体，根据 NCBI 基因序列设计引物，通过 PCR 扩增获得GFP 编码基因，经限制性核酸内切酶消化后将 GFP 定向克隆至原核表达载体pMAL－c2X 中 malE 基因下游的EcoRⅠ与Hind Ⅲ位点之间，与 malE 基因融合为一个表达框。

人类microRNA—1246慢病毒抑制载体的构建以及鉴定

人类microRNA—1246慢病毒抑制载体的构建以及鉴定目的构建microRNA-1246慢病毒抑制载。

方法针对microRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段，应用基因重组技术将目的基因片段克隆到GV280慢病毒载体中，通过酶切、PCR、DNA测序验证重组克隆的成功构建，将GV280-mir-1246down、Helper1.0、Helper2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒，浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度，用病毒液感染siha细胞，通过检测绿色荧光蛋白（GFP）验证GV280-mir-1246down在siha细胞的表达情况，用嘌呤霉素筛选GV280-mir-1246down稳转细胞株。

用细胞计数的方法检测细胞的生长率。

结果①对菌落进行PCR鉴定筛选出构建正确的慢病毒载体，DNA测序证实插入的基因序列正确；②GV280-mir-1246down、Helper1.0、Helper2.0共转染293T细胞产生重组慢病毒；③目的mir-246down被慢病毒成功导入siha细胞中，同时达到稳定表达，转到率几乎达100%，荧光显微镜下能直接观察到GFP；④细胞计数结果显示在siha细胞中microRNA-1246的下调细胞的生长速度减弱。

结论成功构建microRNA-1246慢病毒抑制载体，建立siha细胞mir-1246-down的稳转株，microRNA-1246在siha细胞中下调的siha细胞的增殖能力下降.这为研究microRNA-1246在宫颈鳞癌siha细胞的作用及其机制提供了可靠的基础。

Abstract：Objective To construct and identify a lentiviral vector for microRNA-1246 inhibiton.Methods The gene sequences of microRNA-1246 Antisenseolignuclleotides were chosen，the antisense sequences of microRNA-1246 were designed and linked into linearized GV280 vector. The recombinants were screened and identified by colony PCR and DNA sequencing，The GV280-mir-246down，Helper1.0、Helper2.0 were mixed in suitable proportion and then transfected into the cell of 293T to get recombinant lentiviral vector.The concentrated and purified of virus bulk were detected the drops of it，indeed the virus was used to infect the carcinoma cell of Cervical squamous of siha .The GV280-mir-1246down，s expression in the siha cell tested by testing the GFP.Results ①The corrected of recombination lentiviral vector was screened from the bacterial which was anthenticated by PCR，DNA testing proved that the inserted gene sequence was correct . ②The cells of 293T which was transfected GV280-mir-1246down、Helper1、0 and Helper2.0 produced recombinant lentiviral vector.③The target gene sequences were successfully inserted into siha cell by GV280 lentiviral vector ，the recombinant lentiviruses which carring mir-246down could infect and deliver mir-246down and GFP genes to siha cells. The infection efficiency was almost 100%. Conclusion The lentiviral microRNA inhibitor vector has been successfully constructed，which provides a stable tool for further study of therole of microRNA-1246 on cervical cancer.Key words：Lentiviral vector；MicroRNA；Inhibiton vector；Cervical cancer；Cell proliferationMiRNA是一类由20-23个碱基组成的非编码单链RNA，MiRNA 与靶基因mRNA的非翻译区域的碱基互补配对，MiRNA与靶基因mRNA结合形成沉默复合体使mRNA降解，从而阻碍mRNA的翻译[1]。

慢病毒载体的构建方法

2
Pool 2
2
Store at 4°C
SW55
SW28
Pool 1
Concifugation
3
Pool 1 & Pool 2 Pool 3 Aliquots
六 The difference of Packaging Cells for LVV with other retroviruses
一 HIV-1 life cycle
二 HIV-1基因结构
• • • • • • • •
gag, -----群抗原基因，编码核心蛋白p24 pol -----多聚酶基因，编码多聚酶； env-----包膜蛋白基因，编码包膜蛋白gp120 及gp41； tat ----- 基因反式激活因子对HIV-1基因其正调控作用 rev,----- 病毒蛋白表达调节因子，能增加gag和env基因对结构蛋白的表达 vif,----- 病毒感染因子, 其作用是在一些细胞因子的协下促进HIV-1在细胞内复 Vpr,----- R蛋白能使HIV在巨噬细胞中增殖 vpu,----- U蛋白，能促进HIV从细胞膜上释放 nef,----负因子，具有抑制HIV-1增殖作用
The Development of LV Vectors The 3rd Generation
Self-inactivating (SIN) vectors Further improvement in biosafety Tat was deleted Rev was put into a separate plasmid U3 of the 5’ LTR was replaced by the CMV IE promoter/enhancer The possibility of generating RCL is further reduced

抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建

第６期袁涛，等抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建·５８５·宿主免疫反应，是血液、神经系统疾病以及肝疾病等有效的基因治疗工具［４３。

本研究构建了针对加强绿色荧光蛋白（ｅｎｈａｎｃｅｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｎｃｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＥＧＦＰ）基因的ｓｈＲＮＡ包装慢病毒载体，特异地抑制不同细胞中ＥＧＦＰ的表达。

１材料和方法１．１菌种、细胞、质粒及主要试剂Ｅ．ｃｏｉｌＤＨ５ｃｔ菌株、Ｈｅｌａ细胞为本室保存，限制性内切酶及其他工具酶等购自上海生物工程技术服务有限公司，转染试剂Ｌｉｐｏｆｅｅｔａｍｉｎｅｚ“Ｊｏ购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，慢病毒载体ｐＬＬ３．７由ＭＩＴＰａｒｉｊｓＬｕｋｖａｎ教授赠予，包装质粒（ｐＬＰｌ、ｐＬＰ２、ｐＶＳＶ／Ｇ）、２９３６３＇细胞购于美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，ｏｐｔｉ—ＭＥＭ、ＲＰＭＩ１６４０培养液、ＤＭＥＭ培养基、丙酮酸钠、非必需氨基酸购自美国Ｇｉｂｃｏ公司。

质粒及胶回收提取试剂盒为上海博亚（生物技术有限公司）产品，Ｊ５５８Ｌ细胞购自上海午立生物技术公司，其他为国产分析纯试剂。

１．２栽体的构建ｐＬＬ３．７为含Ｕ６启动子的ＲＮＡ干扰专用载体。

按照ｓｉＲＮＡ靶序列设计原则，选取ＥＧＦＰ基因ｍＲＮＡ序列特异的１９个寡核苷酸作为ｓｉＲＮＡ干扰区域。

自行设计一对互补序列，在正义链５７端加Ｔ重建Ｕ６启动子．１位的Ｔ，干扰靶序列后，加上“ＴＹＣＡＡＧＡＧＡ”环，加入逆转互补序列及终止信号“ｒｒＩ哪”。

在３’端再加上ＸｈｏＩ酶切位点。

由上海生工合成，序列为Ｆ：５’．ＴＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣ—ＣＴＡＣＧＧＣＡＡ７Ｉ－Ｉ＇ＣＡＡＧＡＧＡＴｒＧＣＣＧＴＡＧＧＴＧＧＣＡＴＣＧＣ１］邢Ｃ一３７；Ｒ：５’．ＴＣＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣ—ＣＴＡＣＧＧＣＧＧＣＡＡＴＣＴＣＴＩ＂ＧＡＡＴＦＧＣＣＧＴＡＧＧＴＧＧＣＡＴＣＧＣＡ－３’。

将以上两合成片段５７一端磷酸化，互补片段退火，与经ＨｐａＩ、ＸｈｏＩ双酶切的ｐＬＬ３．７的７６００ｂｐ片段进行连接反应。

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・
论
著・
抑制绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体的构建
袁涛，邓少丽，夏季，黄恒柳
（三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆科，第重庆４０４）００２
摘要：目的：构建抑制增强型绿色荧光蛋白（ＧＰ表达的慢病毒表达载体。方法：ＥＦ）选取ＥＦＧＰ的１ｎ特异性９ｔ序列，构建针对ＥＦＧＰ的ｓＲＡ，ＸａＩ、ｈｈＮ用ｂＸｏＩ双酶切后定向克隆到慢病毒表达载体ｐＬ．Ｌ３７中。用包装的慢病毒液感染细胞，用荧光显微镜观察ＥＦＧＰ基因在不同细胞的表达情况。结果：干扰序列正确克隆至含Ｕ６启动子的
1材料和方法11菌种细胞质粒及主要试剂ecoildh5ct菌株hela细胞为本室保存限制性内切酶及其他工具酶等购自上海生物工程技术服务有限公司转染试剂lipofeetaminezjo购自美国invitrogen公司慢病毒载体pll37由mitparijslukvan教授赠予包装质粒plplplp2pvsvg29363细胞购于美国invitrogen公司optimemrpmi1640培养液dmem培养基丙酮酸钠非必需氨基酸购自美国gibco公司
慢病毒载体中，病毒感染Ｈｌ及Ｊ５Ｌ细胞后，慢ｅａ５８可有效抑制细胞中ＥＦＧＰ的表达。结论：构建的慢病毒系统有效抑制了ＥＦＧＰ的表达，为后续的基因功能研究提供了有利工具。关键词：慢病毒载体；ＲＡ干扰；绿色荧光蛋白Ｎ
ｏｓｒｅｔｈｕｒｓｅｃｃｏｃｐ．Ｒｅｕｔ：ＴｅＥＧＰＲＮＡｅｕｎｅｗｓｃｒｅｔｌｎｄｂｅｖｄｗｉｔｅｆｏｅｃｎｅｍｉｒｓｏｅｈｌｓｌｈＦｓｉｓｑｅｃａｏｒｃｌｃｏｅｙｉｔｈｅｔｉｓｖｃｏｔｅＵｒｍｏｅ。ａｄｔｅＥＰｅｐｅｓｏｓｏｌｄＪ５Ｌｃｌｅｅｎｏｔｅｌｎｉｒｅｔｒｗｉｔ６ｐｏｔｒｎＧＦｘｒｓｉｎｆＨｅａａ５８ｅｌｗｒｖｕｈｈｈｎｓ
ｗｔａＩ／ｏＩ．Ｊ５ＬａｄＨｅａｃｌｅｅｉｆｃｅｙｌｎｉｉｓｓｎｈＧＦｘｒｓｉｎｗｓｉＸｂＸｈｈ５８ｎｌｅｓｗｒｎｅｔｄｂｅｔｒｅ．ａｄｔｅＥＰｅｐｅｓｏａｌｖｕ
ｓｐｒｓｅｆｅｆｃｅｙｌｎｉｉｓｃｎａｎｎＦｈＡ．ｕｐｅｓｄａｔｒｉｅｔｄｂｔｒｏｔｉｉｇＥＧＰｓＲＮｎｅｖｕＣｎｌｓｎ：Ｔｅｌｎｉｉｓｖｃｏｆｏｃｕｉｏｈｅｔｒｅｔｒｅ－ｖｕ
ｆｃｉｅｙｉｈｉｉｅｅｔｖｌｎｂｔｄＥＧＦＰｅｐｅｓｏｘｒｓｉｎ。ｗｈｃｏｌｅｏｍｅｉｔｕｔｒｒｓａｃｅｎｇｎｕｃｉｎｉｈｃｕｄｂｅｕｓｄｔｄａｅｆｒｈｅｅｒｈｓｏｅｅｆｎｔｏ．ｅＫｅｒｓ：Ｌｅｔｉｕｅｔｒｙｗｏｄｎｉｒｓｖｃｏ；ｖＲＮＡｉＥｎａｃｄｇｅｎｆｕｒｓｅｔｐｔｉ；ｈｎｅｒｅｏｅｃｎｒｅｎｌｏ
Ｍｉｔｒｄｃｌｎｖｒｔ，ｈｎｑｎｌａＭｅｉｉｓｙＣｏｇｉｇｉｙａＵｅｉ
ＡｂｔａｔＯｊｃｉ：ｏｃｎｔｃｌｔｉｌｘｒｓｏｅｔａｉｈｂｔｅｈｎｅｒｅｕｒｓｅｔｓｃ：ｂｅｔｅＴｏｓｕｔｎｉｒｐｅｓｎｖｃｒｈｔｎｉｉｎａｃｄｇｅｎｆｏｅｃｎｒｖｒａｅｖａｅｉｏｔｓｌｐｏｅｓ（ＧＰ．Ｍｅｈｄ：ｈＧＰｓＲＡｗｓｃｎｄｉｔｔｅｐＬ．ｅｔｉｓｖｃｒｉｓｄｒｔｎＥＦ）ｉｔｏｓＴｅＥＦｈＮａｌｅｏｈＬ３７ｌｉｒｅｔｇｔｏｎｎｖｕｏｄｅｅ
中图分类号：Ｑ８７２文献标识码：Ａ文章编号：１０－１９２０）６０８－３０８８９（０８０－５４０
Ｃｎｔｕｔｎｏｎｉｉｌｘｒｓｉｎｖｃｏａｈｂｔｅｈｎｅｒｅｕｒｓｅｔｒｔｉｓｏｓｒｃｉｆａｌｔｒｐｅｓｅｔｒｔｔｎｉｉｎａｃｄｇｅｎｆｏｅｃｎｏｅｏｅｖａｅｏｈｉｓｌｐｎ
维普资讯
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５８・４
第２ｌ卷
第６期
医学研究生学报
ＪｕａｆＭｅｉａｏｔｒｄａｅｏｒｌｏｄｃｌＰｓａｕｔｓｎｇ
Ｖｏ．Ｎｏ６１２ｌ．
２００８年６月
Ｊｎ２０ｕ．０８
０引
言
或者是４５～６碱基长短的发夹结构ＲＡ（ｍｌ０个Ｎｓａｌ
ｈｉｉＮｓ引。ｓＲＡ在细ｈＮ
哺乳动物细胞中进行ＲＡ干扰研究常见的方Ｎ法是将靶向特定基因的ｌ９～２１个核苷酸大小的小分子干扰ＲＡ（ｍａｔｅｎＮｓＮ＇ＮｓｌｉｅｒｇＲＡ，ｉＡ），ｌｎｒｉｆＲ
ＹＵＡＮＴｏａ，ＤＥＮＧｈｏｌ，ＸＩｉＳａ－ｉＡＪ，ＨＵＡＮＧｎ－ｉＨｅｇｌｕ
（ｅａｔｅｔｆＨｐｔｉａｙＳｒｅ，ａｉｇＨｓｉｌｔｅＤｐｒｎｅａｏｌｒｕｇｒＤｐｎｏｔ，ｈｍｏｂｉｙｐａ
４０４，ｈｎ）００２Ｃｉａ