亚硝酸盐的测定
亚硝酸盐测定
亚硝酸盐的检测方法
检测亚硝酸盐的方法有很多种，其中 包括对氨基苯磺酸-α -萘胺比色法， 磺胺-盐酸萘乙二胺比色法等，比较 常用的的是磺胺-盐酸萘乙二胺比色 法。
亚硝酸盐的检测
磺胺—盐酸萘乙二胺比色法
• 盐（或海水）中的亚硝酸盐（以 NO2 表示），其中的氮（N）与 磺胺发生重氮化反应，然后再与 盐酸萘乙二胺偶合，生成红色的 偶胺染料，在543nm波长下用分 光光度计进行测定。
亚硝酸盐氮含量与吸光度A的标准曲线
亚硝酸盐氮含量与吸光度A关系曲线 0.045 0.04 0.035 0.03 0.025 0.02 0.015 0.01 0.005 0 -0.005 0
y = 0.0397x - 0.0002
吸光度A
0.2
0.4 0.6 0.8 亚硝酸盐氮含量（微克）
1
1.2
2.样品的检测 称取5g样品于小烧杯中，加适量水溶 解（水量不宜过多，如有杂质应过 滤），然后转移到50mL比色管中， 加水稀释至刻度，剩余步骤同标准曲 线的测定。 然后将测得的吸光度从标准曲线图上查 出相应的亚硝酸盐氮的微克数，计算 出样品中亚硝酸盐氮的含量。（用电 脑绘图可计算出标准曲线，从标准曲 线可计算出亚硝酸盐氮的微克数）。
（4）亚硝酸盐标准溶液
• 制备：称取4.927g（称准至0.001g） 于110oC烘至恒重的亚硝酸钠，溶于水 中，转移入1000mL容量瓶中，加2mL 氯仿，用水稀释至刻度，摇匀，此溶液 1mL含1.00mg亚硝酸盐氮（3.2845m g亚硝酸根NO2-），可保存1-2个月。 用时稀释1000倍，即得1mL含1.00ug 亚硝酸盐氮稀标准溶液。用时现配。
例如：测得某样品吸光度为0.011，由 曲线方程y=0.0397x-0.0002可知， 当y=0.011时， 亚硝酸盐氮含量为x=0.28微克，则样 品中亚硝酸盐氮含量为 0.28÷5.0=0.06mg/kg， 换算成亚硝酸盐含量则为 0.06×3.2845=0.20mg/kg
亚硝酸盐的测定
亚硝酸盐的测定什么是亚硝酸盐？亚硝酸盐是一种无机化合物，化学式为NO2-，其中氮原子带有+3的形式。
亚硝酸盐广泛存在于自然界中，如土壤、水体和空气中。
亚硝酸盐在环境中具有重要的生物地球化学作用，同时也是一种重要的污染物。
亚硝酸盐的测定方法亚硝酸盐的测定是通过测量样品中亚硝酸盐的浓度来完成的。
目前常用的亚硝酸盐测定方法有以下几种：1. 酸性硫酸亚铁法这是一种常用的经典方法，适用于土壤、水体和食品样品中亚硝酸盐的测定。
该方法是基于亚硝酸盐与硫酸亚铁在酸性介质下反应生成亚铁离子，并伴随着物质的颜色变化进行测定。
测定过程中，首先将样品与稀硫酸混合，然后加入硫酸亚铁试剂，待反应进行一定时间后，通过比色法测定样品中亚硝酸盐的含量。
2. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种快速、灵敏和准确测定亚硝酸盐的方法。
这种方法是通过测量样品中亚硝酸盐在特定波长下吸收光的强度来确定其浓度。
常用的波长为220-275nm，测定结果通过比较样品和标准曲线上的吸光度值得出。
3. 电化学法电化学法是一种基于电化学原理的亚硝酸盐测定方法。
常用的电化学方法有极谱法和循环伏安法。
极谱法是利用短路电流峰高度与亚硝酸盐浓度成正比的原理进行测定。
循环伏安法通过扫描电势范围内，测定亚硝酸盐对电流的响应，再通过相关的计算方法得出亚硝酸盐的浓度。
亚硝酸盐测定在环境和食品安全领域的应用亚硝酸盐的测定在环境和食品安全领域具有重要的应用价值。
在环境领域，亚硝酸盐的测定可以用于水体和土壤的污染监测，帮助评估环境的质量和污染程度。
在食品安全领域，亚硝酸盐的测定可以用于检验食品中亚硝酸盐的残留量，特别是肉类和蔬菜制品中的亚硝酸盐，以保障人们的饮食安全。
总结亚硝酸盐的测定是一项重要的实验技术，通过测量样品中亚硝酸盐的浓度，可以评估环境的质量和食品的安全性。
我们介绍了几种常用的亚硝酸盐测定方法，包括酸性硫酸亚铁法、紫外可见光谱法和电化学法。
这些方法各有优缺点，选择适合的方法取决于样品的特性和实验室的设备。
亚硝酸盐检测方法
亚硝酸盐检测方法
亚硝酸盐检测方法有许多种，下面列举常用的几种方法：
1. Griess法：采用Griess试剂的显色反应来检测亚硝酸盐。
该试剂是由硫酸银、亚硝酸钠和N-(1-Naphthyl) ethylenediamine dihydrochloride三种物质组成的。
用Griess试剂与样品反应，出现深红到紫色的颜色，根据颜色的强度可以测定亚硝酸盐的含量。
2. 纸条法：纸条法是一种简便、常用的测定亚硝酸盐的方法。
将亚硝酸盐检测试纸放入样品中，根据试纸的变色程度来判断亚硝酸盐的含量。
3. 紫外-可见光谱法：利用亚硝酸盐吸收可见光和紫外光的特性，通过对样品的吸光度进行测定，来计算出亚硝酸盐的含量。
4. 钴硝酸法：将含有亚硝酸盐的样品与钴硝酸反应，生成钴亚硝酸盐，根据样品颜色的变化来测定亚硝酸盐的含量。
5. 电化学法：利用电极与亚硝酸盐之间的电化学反应来测定亚硝酸盐的含量。
常用的电化学方法包括极谱法、电化学滴定法和循环伏安法等。
国标食品中亚硝酸盐的测定
国标食品中亚硝酸盐的测定
国标食品中亚硝酸盐的测定主要包括以下步骤：
1.取适量待测食品样品。
2.将样品加入烧杯中，加入适量蒸馏水，用搅拌棒搅拌均匀。
3.过滤，将过滤液收集到一瓶中。
4.在一支试管中加入适量过滤液和一定体积的硫酸，混合均匀后静置数分钟，使硝酸盐完全转化为亚硝酸盐。
5.加入苯酚试液，再次混合均匀，然后立即测定吸光度。
6.根据吸光度值，查找国家标准中相应的浓度比对值，计算出亚硝酸盐含量。
注意事项：
1.实验前要制备好所有试剂和标准液，并按照操作规程使用。
2.严格控制样品和试剂的污染，以避免误差。
3.实验室内要保持干净整洁，防止外界污染影响实验结果。
检测亚硝酸盐的方法
检测亚硝酸盐的方法
首先，最常见的方法是使用硫酸铁铵法。
这种方法是通过将样
品中的亚硝酸盐与硫酸铁铵反应生成含有亚硝酸盐的深红色络合物
来进行检测。
这种方法操作简单，结果明显，可以直观地判断样品
中亚硝酸盐的含量。
但是，这种方法需要使用硫酸铁铵试剂，而且
对于含有其他还原物质的样品可能会产生干扰，因此在实际应用中
需要注意。
其次，还可以利用高效液相色谱法来检测亚硝酸盐。
这种方法
是通过将样品中的亚硝酸盐与荧光素反应生成荧光化合物，然后利
用高效液相色谱仪进行检测。
这种方法灵敏度高，可以准确测定样
品中亚硝酸盐的含量，而且不受其他成分的干扰。
但是，这种方法
需要使用昂贵的高效液相色谱仪设备，操作比较复杂，需要专业人
员进行操作。
另外，也可以采用电化学法来检测亚硝酸盐。
这种方法是利用
电化学传感器对样品中的亚硝酸盐进行电化学反应，然后通过测定
电流或电压的变化来确定亚硝酸盐的含量。
这种方法具有灵敏度高、操作简便、结果快速的特点，适用于现场快速检测。
但是，这种方
法需要使用电化学传感器设备，且对样品的预处理要求较高。
综上所述，检测亚硝酸盐的方法有多种多样，每种方法都有其
适用的场合和特点。
在实际应用中，需要根据样品的特点和检测的
要求选择合适的方法进行检测。
同时，为了保证检测结果的准确性，还需要严格按照相应的操作规程进行操作，并进行必要的质控措施。
希望本文介绍的方法能够对大家有所帮助。
亚硝酸盐的测定方法
亚硝酸盐的测定方法1.食盐中亚硝酸盐的快速检测及食盐与亚硝酸盐的快速鉴别：用袋内附带小勺取食盐1平勺，加入到检测管中，加入蒸馏水或纯净水至1ml刻度处，盖上盖，将固体部分摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为食盐中亚硝酸盐的含量mg/ kg，（国标规定食盐（精盐）中亚硝酸盐的限量卫生标准应≤2 mg/kg）。
当样品出现血红色且有沉淀产生或很快退色变成黄色时，可判定亚硝酸盐含量相当高，或样品本身就是亚硝酸盐。
2.液体样品检测：直接取澄清液体样品1ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐（以NaNO2计）的含量mg/L。
如果亚硝酸盐的含量是以氮（N）为计算单位（如饮用水或水源水等），读取色阶上的数值后除以5即可。
如果亚硝酸盐的含量是以亚硝酸根（NO2-）为计算单位（如矿泉水、瓶装饮用纯净水等），读取色阶上的数值后除以3.28即可。
3.乳浊样品检测：牛乳及豆桨可直接取1ml加入到检测管中，，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值乘以2即为样品中亚硝酸盐的近似含量mg/L。
4.固体或半固体样品检测：取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml 比色管中，加蒸馏水或去离子水（纯净水）至刻度，充分震摇后放置，取上清液（或过滤或离心得到的上清液）1.0ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L（以NaNO2计）。
如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数（如从10ml比色管中取出1.0mL转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取1.0mL加入到检测管中测定，测试结果乘上100（倍稀释）即为样品中亚硝酸盐的含量。
亚硝酸盐含量检测
荧光法
原理
荧光法利用亚硝酸盐与荧光胺反应生成 具有荧光的复合物，通过测定荧光强度
来计算亚硝酸盐的含量。
优点
灵敏度高，选择性好，适用于痕量样 品的检测。
步骤
样品处理、荧光反应、荧光强度测定 等。
缺点
操作相对复杂，需要使用荧光分光光 度计等设备。
离子色谱法
原理
离子色谱法利用不同离子在电场中的迁移速度不同，通过 分离柱将亚硝酸根离子与其他离子分离，再通过电导检测 器测定亚硝酸根离子的含量。
02
亚硝酸盐含量检测方法
分光光度法
原理
步骤
优点
缺点
分光光度法基于亚硝酸盐与对 氨基苯磺酸发生重氮化反应， 生成的重氮化合物与盐酸萘乙 二胺形成紫红色染料，通过测 定吸光度来计算亚硝酸盐的含 量。
样品处理、显色反应、吸光度 测定等。
操作简便、快速，适用于大量 样品的快速筛选。
可能受到其他物质的干扰，导 致结果偏高。
量。
实验操作注意事项
01
02
03
04
实验器具清洗
确保实验器具干净无污染，避 免对实验结果产生影响。
精确称量
对样品和显色剂进行精确称量 ，以保证实验结果的准确性。
显色时间控制
严格控制显色反应的时间，确 保反应完全。
空白试验
进行空白试验，以消除试剂和 环境对实验结果的影响。
实验安全防护措施
实验人员培训
优点
分离效果好，适用于复杂样品中亚硝酸盐的准确测定。
步骤
样品处理、离子交换分离、电导检测等。
缺点
操作相对复杂，需要使用专门的离子色谱仪。
03
样品处理与前处理
样品采集与保存
亚硝酸盐的测定
亚硝酸钠、硝酸钠混标的HPLC色谱图
加标样品色谱图
G.标准曲线及检出限 配制浓度为 0.4 μ g/mL ，1 μ g/mL ，2 μ g/mL ，4 μ g/mL ，8 μ g/mL，16 μ g/mL的亚硝酸钠标准溶液[15]，分别进样10 μ L进样，每个浓度梯度重复3次。 以峰面 积为纵坐标，以亚硝酸钠的浓度为横坐标制作标准曲 线（见图3）。以 仪器噪音的3倍，即仪器能辨认的最 小物质的信号时的溶液浓度为检出限 [16]， 计算出待测 液中亚硝酸钠的最低检测浓度为0.006 μ g/mL，换算到 实际食品 样品中方法检测限为0.05 mg/kg，远低于食 品添加剂使用标准中亚硝酸钠残 留量30 mg/kg。 将按照方法1.3中3种不同提取方法提取的火腿肠 试样液进行过滤，然后经10 000 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μ m滤膜过滤，按优化的色谱条件方法 测定。
②
①
实验处理：用AA6800 原子吸收风光光度计测定锰的吸光度，通过锰的标准工作曲线方程，从而计 算出亚硝酸盐的含量。
3.2分光光度法
原理：
分光光度法的原理是利用溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸 收效应，且物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有各自的吸收 光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被自动而减弱，光能量减弱的程 度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合比耳定律。所以，利用分光光度计可 以测定亚硝酸钠的含量。
表1 火腿肠中亚硝酸钠提取方法比较
提取 方法 方法 1 方法 2 方法 3
平均含量 /mg·kg-1 9.45 9.64 9.75
RSD /% 1.04 0.99 0.94
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•项目三
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•项目三
具体工作任务分解 ••仪器和试剂的准备 •样样品品制制备备 •标标准准曲曲线线绘绘制制 •样品测定
•数据记录与处理
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•项目三
•一、仪器和试剂的准 备1.组织捣碎机
2.超声波清洗器 3.恒温干燥箱 4.分光光度计 5.镉柱 a.海绵状镉的制备 b.镉柱的装填 c.镉柱还原率的测定
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•项目三
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•项目三
食品添加剂的定义
食品添加剂是为改善食品品质和色、香、 味，以及为防腐、保鲜盒加工工艺的需 要而加入食品中的人工合成或者天然物 质。
这些物质不以食用为目的，也不一定具 有营养价值，但不包括污染物、残留农 药等。
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•任务一 肉制品亚硝酸盐的测定 运城职业技术学院健康学院
•项目三
•子情境一 肉制品亚硝酸盐的测定
学习目标
知识目标：
1. 了解护色剂的概念、在食品中的作用及其对人体健康潜在的危害。 2. 熟悉硝酸盐、亚硝酸盐的测定方法。 3. 掌握分光光度法测定硝酸盐、亚硝酸盐的原理及操作要点。
技能目标：
1. 硝酸盐、亚硝酸盐测定中会对样品预处理。 2. 能准确测定食品中硝酸盐和亚硝酸的含量。
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•项目三
分光光度法
GB 5009.33-2010 第二法 •测定原理
亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用镉柱还原法测定。
• 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下， •亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，产生重氮盐，此重氮 •盐再与偶合试剂（盐酸萘乙二胺）偶合形成紫红色染料， •染料的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，其最大吸收波 •长为538nm，测定其吸光度后，可与标准比较定量。
〖思考〗 1、加入饱和硼砂的目的？ 亚硝酸盐的提取剂和分散剂 2、沸水浴的作用？ 淀粉糊化
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•项目三
3、提取液净化 上述提取液→加亚铁氰化钾和乙酸锌各5mL→定容→放置 0.5h→撇去脂肪层→过滤（弃去不溶物）→弃去初滤液约 30mL→滤液待测
〖思考〗 亚铁氰化钾和乙酸锌溶液作用？ 蛋白质沉淀剂
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•项目三
亚硝酸盐的测定
10个50ml比色管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
加亚硝酸盐标液 ml 0、0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.5 2.0 2.5
对氨基苯磺酸ml
2 2 22 2 22 2 2
10 样液40ml
2
静置
3～5 min
盐酸萘乙二胺ml 2 2 2 2 2 2 2 2 2
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•项目三
2、样品制备
1、试样预处理
新鲜蔬菜、水果：将整棵蔬菜或水果用去离子水洗净，晾干后，取可 食部分切碎混匀。将切碎试样用四分法取适量，用组织捣碎机制成匀浆备 用。如需加水应记录加水量。
肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或粉、豆奶粉、婴儿配方奶粉等固态乳制品（不包括奶酪）：将试样装 入能容纳2倍试样体积的带盖试样容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使试样 充分混匀直至使试样均一化。
•项目三
一、硝酸盐和亚硝酸盐在食品中的作用
能与肉及肉制品中成色物质作用，使之在食品加工、保藏等 过程中不致分解、破坏，呈现良好色泽的物质称为护色剂。
硝酸钠（钾） 亚硝酸钠（钾）
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•项目三
•发色机理
• 乳酸 • pH5.6-
5.8
•亚硝酸菌
•酸性条件
•硝酸盐
•亚硝酸盐
•亚硝酸
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•项目三
结果计算
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•项目三
技术提示
①亚硝酸盐容易氧化为硝酸盐，样品处理时，加热的时间与温度均要控制。 配制标准溶液的固体亚硝酸钠可长期保存在硅胶干燥器中，若有必要，可在 80℃烘去水分后称量。 ②饱和硼砂溶液在实验过程中有两个作用：①作为亚硝酸盐的提取剂；②作 为蛋白质沉淀剂。 ③亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂，使产生的亚铁氰化锌沉 淀与蛋白质产生共同沉淀。蛋白质沉淀剂也可采用硫酸锌溶液（30%）。 ④每次使用比色皿前都应将比色皿用蒸馏水洗干净，再用所盛装的溶液润洗 三次，才能进行比色。比色测定时，应从低浓度向高浓度测定，以免高浓度 给低浓度造成太大影响。 ⑤当亚硝酸盐含量高时，过量的亚硝酸盐可以将偶氮化合物氧化变成黄色， 而使红色消失，这时应将样品处理液稀释后再做，最好是样品的吸光度落在 标准曲线的吸光度之内。 ⑥盐酸萘乙二胺有致癌作用，使用时应注意安全。
2
水
50ml
静置15min，用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零 点，于波长538nm处测吸光度
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•项目三
结果计算
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•项目三
硝酸盐的测定
除去蛋白质、脂肪
镉柱
样品
样品提取液
亚硝酸根离子
氨基苯磺酸重氮化
盐酸萘乙二胺偶合
红色染料
比色测定
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•项目三
•试剂
①亚铁氰化钾溶液（106 g/L。 ②乙酸锌溶液（220 g/L）。 ③饱和硼砂溶液（50 g/L。 ④氨缓冲溶液（pH 9.6～9.7。 ⑤稀氨缓冲液：量取50 mL氨缓冲溶液，加水稀释至500mL，混 ⑥盐酸溶液（0.1 mol/L）：吸取5 mL盐酸，用水稀释至600 mL。 ⑦对氨基苯磺酸溶液（4 g/L。 ⑧盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L。 ⑨亚硝酸钠标准使用液。 ⑩硝酸钠标准使用液。
•常
•亮红
温
色
分
•亚硝基肌红蛋白
•肌红蛋 白
•亚硝基
解
•受 热
•亚硝基血色原
•鲜红 色
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•项目三
• 为什么要测定亚硝酸盐？
安全性——亚硝酸盐急性毒性较强
1、可氧化血红蛋白中的Fe2+成Fe3+而使其转变成高铁 血红蛋白，使血红蛋白失去携氧和释氧功能，造成全 身组织缺氧，严重时可使机体迅速死亡。
发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器 使试样充分混匀。
干酪：取适量的试样研磨成均匀的泥浆状。
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•项目三
2、提取 取匀样5g→50mL烧杯→加入饱和硼砂液12.5mL→搅拌均 匀→用约70℃的水大约300mL将试样洗入500mL容量瓶 →沸水浴加热15min→冷水冷却至室温
2、可与胺类物质生成致癌物亚硝胺。
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•项目三
二、食品中硝酸盐和亚硝酸盐的使用限量
• 《食品添加剂使用标准》GB2760-2011规定
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•项目三
三、硝酸盐和亚硝酸盐的测定方法 检测依据
GB 5009.33-2010
1 离子色谱法 2 分光光度法 3 乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定