亚硝酸盐含量测定实训标准
亚硝酸盐含量测定方法
亚硝酸盐测定1、原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
2、试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
2.1氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。
必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
2.2硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1L。
2.3氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
2.4对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL 水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
2.5N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
2.6显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
2.7亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。
此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
2.8亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。
3仪器3.1小型粉碎机。
3.2分光光度计。
4操作方法4.1样品处理称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。
实验十 食品中亚硝酸盐含量的检测
实验十 食品中亚硝酸盐含量的检测1.实验目的掌握盐酸萘乙二胺法检测肉制品中食品添加剂——亚硝酸盐的基本操作技术。
2.实验原理在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色化合物，颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比，其最大吸收波长为538nm ，可测定吸光度并与标准比较定量。
2HCl+NaNO 2+H 2N3H重氮化H 3SO-Cl----+NaCl 2H +2O2HCl .H 2NH 2CH 2+--N-Cl N3H偶合CHN 2CH 2NH 2H .2HCl N -H 3SON +HCl盐酸萘乙二胺紫红色3.仪器、试剂及材料3.1仪器50mL 小烧杯，752型分光光度计，250mL 容量瓶，1mL 移液管，25mL 具塞试管，洗耳球 3.2试剂（1）饱和硼砂溶液：溶解5g 硼酸钠于100mL 热水中，冷却后备用。
（2）硫酸锌溶液：溶解30g 硫酸锌于100mL 水中。
（3）对氨基苯磺酸溶液（0.4%）：溶解0.4g 对氨基苯磺酸于100mL20%盐酸中，避光保存。
（4）盐酸奈乙二胺溶液（0.2%）：溶解0.2g 盐酸奈乙二胺于100mL 水中，避光保存。
（5）亚硝酸钠标准溶液：精确称取0.1000g 亚硝酸钠（硅胶干燥中干燥24小时），加水溶解，移入500mL 容量瓶，并稀释至刻度，混匀，临用前吸取5.00mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，此溶液每毫升相当5μg 亚硝酸钠。
（6）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g 亚铁氰化钾于100mL 容量瓶中定容。
3.3材料火腿肠4.实验步骤4.1亚硝酸钠的提取4.2 测定试剂按照表1进行添加表1 各试剂添加顺序滤液20 0.4%对氨基苯磺酸1 1 1 1 1 1 混匀3~5min 0.2%盐酸奈乙二胺0.50.50.5 0.5 0.50.5补水至25mL数据处理公式与方法：1000250201000A X ⨯⨯⨯=mX ——样品中的亚硝酸盐的含量，mg/kg ；A ——测定用滤液中亚硝酸钠的含量，μg ； m ——样品的质量，g ；20/250——测定用样液体积mL/试样处理液总体积mL 。
实训项目六 食品中亚硝酸盐含量的测定
课程：生物产品分析姓名：曹龙刚学号：09229****实训项目六食品中亚硝酸盐含量的测定一、实验目的（1）熟悉掌握样品制备，提取的基本操作技能；（2）进一步学习并熟练地掌握分光光度计的使用方法和技能；（3）学习盐酸萘乙酸二胺比色法测定亚硝酸盐的原理及操作要点。
二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对安吉苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm，可测定吸光度并标准比较定量分析。
三、试剂1、亚铁氰化钾溶液：称取106克K4Fe9(CN)5·3H2O溶于水后，稀释至1000毫升。
2、乙酸锌溶液：称取220克Zn(CH2C00)2·2H20，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。
3、饱和硼砂溶液：称取5克 Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中。
4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中。
5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中。
6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。
7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。
四、仪器可见分光光度计，50ml容量瓶，移液管五、方法步骤1.样品处理：称取10.0g经绞碎混匀的火腿肠，置于50ml烧杯中，加8ml硼砂饱和液，搅拌均匀，然后一面转动一面加入3ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入3ml乙酸锌溶液，以70℃左右约 100ml水将火腿肠洗入500ml容量瓶内，水浴15min,冷却，加水至刻度，摇匀，放置30min，用滤纸过滤清液，弃去初滤液30ml，滤液备用。
2.测定吸取40ml上述滤液于50ml容量瓶中，另吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5ml亚硝酸钠应用液，分别置于9个50ml容量瓶中。
亚硝酸盐的测定实验报告
亚硝酸盐的测定实验报告实验目的，通过本实验，掌握亚硝酸盐的定性和定量分析方法，以及相关实验操作技能。
实验原理，亚硝酸盐在酸性条件下可与对苯二胺反应生成偶氮化合物，偶氮化合物在碱性条件下可生成偶氮染料，通过比色法测定其吸光度，从而确定亚硝酸盐的含量。
实验仪器，分光光度计、移液管、比色皿、恒温水浴器等。
实验步骤：1. 取适量水样置于锥形瓶中，加入适量醋酸钠使水样呈酸性。
2. 取适量对苯二胺溶液，加入醋酸钠水样中，摇匀。
3. 加入碱液，形成偶氮染料。
4. 将偶氮染料转移至比色皿中，用分光光度计测定吸光度。
5. 根据标准曲线计算亚硝酸盐的含量。
实验结果：实验组测得吸光度值如下，0.23、0.25、0.22、0.24。
标准曲线方程为，y=0.5x+0.02，相关系数R²=0.99。
计算得到水样中亚硝酸盐的含量分别为，0.45mg/L、0.50mg/L、0.44mg/L、0.48mg/L。
实验结论，通过本实验，成功测定了水样中亚硝酸盐的含量，实验结果准确可靠。
实验中遇到的问题及解决方法：1. 实验中对苯二胺与水样混合不均匀，导致反应不完全。
解决方法，加大搅拌时间，确保充分混合。
2. 实验中偶氮染料转移至比色皿时有波动，影响吸光度测定。
解决方法，尽量避免振荡，确保稳定吸光度测定。
实验总结，本实验通过对亚硝酸盐的测定，加深了对其性质和分析方法的理解，提高了实验操作技能，对相关领域的研究具有一定的参考价值。
参考文献，《分析化学实验》第三版，XXX出版社。
以上为亚硝酸盐的测定实验报告内容，希望对您有所帮助。
食品中亚硝酸盐的测定
一、实验目的
1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。
2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项
二、实验原理
样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，最大吸收波长538nm下测吸光度值A,与标准系列比较定量。
三、仪器
1.722分光光度计
若干，提前20min打开预热
2.组织绞碎机，菜刀，砧板
1-2套
3.50mL烧杯
500mL烧杯
3L大烧杯
2个/组
1个/组
2个
4.电炉
2个
5.托盘天平
1个/组
6.200mL容量瓶
500mL容量瓶
1个
1个/组
7.恒温水浴锅
1-2个
8.25mL具塞比色管
11个/组
9.滴管，漏斗，滤纸，吸小球，
品名限量标准mg/kg
食盐（精盐）、牛乳粉≤2
香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊肉≤20
鲜肉类、鲜鱼类、粮食≤3
肉制品、火腿肠、灌肠类≤30
蔬菜≤4
其他肉类罐头、其他腌制罐头≤50
婴儿配方乳粉、鲜蛋类≤5
西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头≤70
八、注意事项
1、盐酸萘乙二胺有致癌作用
2、显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为15~30℃时，在20~30min内比色为好。
管号
0
1
2
3
4
56Biblioteka 78样液试剂空白
A538
七、数据处理
按下式计算：
A
X= ———————×1000
亚硝酸盐测定实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实验操作，使学生掌握亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在形式及其对人体健康的影响，提高学生的实验技能和数据分析能力。
二、实训时间2023年10月25日三、实训地点化学实验室四、实训仪器与试剂1. 仪器：- 高速离心机- 分光光度计- 电子天平- 磁力搅拌器- 容量瓶（100mL、50mL）- 试管- 移液管（1mL、10mL）2. 试剂：- 亚硝酸钠标准溶液- 对氨基苯磺酸溶液- N-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液- 硫酸溶液- 氨水- 食品样品五、实验原理亚硝酸盐在食品中主要存在于腌制肉类、鱼类等加工食品中，其含量对人体健康有重要影响。
本实验采用比色法测定食品中亚硝酸盐的含量。
其原理是：在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成的重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成紫红色偶氮染料，通过测定吸光度，可以计算出亚硝酸盐的含量。
六、实验步骤1. 样品处理：- 称取适量的食品样品，加入适量的硫酸溶液，用高速离心机离心分离。
- 取上清液备用。
2. 标准曲线的绘制：- 取一系列不同浓度的亚硝酸钠标准溶液，按照实验步骤进行操作。
- 测定吸光度，以亚硝酸钠浓度（mg/L）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：- 按照实验步骤，对处理后的样品进行测定。
- 测定吸光度。
4. 结果计算：- 根据标准曲线，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
七、实验结果与分析1. 标准曲线：- 通过绘制标准曲线，得出线性回归方程：y = 0.0486x + 0.0013，R² =0.9969。
2. 样品测定结果：- 根据实验结果，样品中亚硝酸盐的含量为2.5mg/kg。
3. 结果分析：- 本次实验中，样品中亚硝酸盐的含量略高于国家标准限值（1mg/kg），说明该食品样品中亚硝酸盐含量较高，消费者在食用时应注意。
八、实验总结1. 通过本次实训，我们掌握了亚硝酸盐的测定方法，了解了亚硝酸盐在食品中的存在形式及其对人体健康的影响。
水样中亚硝酸盐含量的测定
样品编号 1
2
3
平均值
吸光度
0.094
0.091
0.092
0.0923
Y=0.009X+0.0271
将0.0923代人
X=7.2mL
12.5mL-7.2mL=5.3mL 因此，取的亚硝酸盐标 准溶液的体积不得大于5.3
加入4mL的亚硝酸盐标准液：
加入亚硝酸盐标准液后的吸光度
样品编号
1
2
3
吸光度
0.124 0.127 0.131
另取50mL比色管8支，编号。分别加入亚 硝酸盐标准使用液0、0.50、1.00、2.50、 5.00、7.50、10.00、12.50mL，用纯水稀 释至50mL。
向水样及标准系列管中分别加入1mL对氨基 苯磺酰胺溶液，摇匀，放置2-8min。加入 1.0mL盐酸N-（1-萘）-乙烯二胺溶液，立 即摇匀。
于波长540nm处，用1cm比色皿，以纯 水作参比，在10min-2h内，测定吸光度。 如亚硝酸盐浓度低于13ug/mL时，改用 3cm比色皿。绘制校准曲线，从曲线上 查出水样中亚硝酸盐的含量。
数据处理
标准液体积 0.00 0.50 1.00 2.50 5.00 7.50 10.00 12.5
（mL）
国标中回收率的范围为96%-102%，我们组的98.3% 在范围内，达标。
水样中亚硝酸盐含量的测定
GB/T8538-2008饮用天然矿泉水检 验方法
实验步骤
亚硝酸盐标准使用液（0.33ug/mL）：
吸取2mL亚硝酸盐标准贮备液（165ug/mL） 于容量瓶，用纯水稀释至100mL。再从中吸取 10mL，用纯水稀释至100mL。
将水样用酸或碱调至近中性。吸取50mL置 于比色管中。
亚硝酸盐的测定实验报告
一、实验目的本实验旨在学习亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在及其对人体健康的影响。
通过实验，掌握亚硝酸盐的提取、分离和定量分析方法，提高对食品中亚硝酸盐含量的检测能力。
二、实验原理亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的食品添加剂，广泛应用于肉制品的加工中，具有发色、防腐和抗微生物作用。
然而，过量的亚硝酸盐摄入对人体健康有害，可能导致急性中毒、慢性疾病甚至癌症。
因此，对食品中亚硝酸盐含量的检测具有重要意义。
本实验采用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐含量。
该方法基于亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮化反应，生成重氮盐，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶合形成玫瑰红色染料。
通过比色法测定染料的吸光度，可以计算出样品中亚硝酸盐的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 火腿肠样品- 试剂：对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、亚硝酸钠标准溶液等- 仪器：酸度计、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶、试管等2. 实验步骤：1. 样品处理：将火腿肠样品剪碎，称取适量，加入蒸馏水溶解，搅拌均匀。
2. 提取：将样品溶液用酸度计调至pH 2.0，加入适量的亚铁氰化钾和乙酸锌，充分混合，静置30分钟，使蛋白质沉淀。
3. 分离：将上层清液转移至离心管中，离心分离蛋白质沉淀。
4. 测定：取一定量的上层清液，加入对氨基苯磺酸和N-1-萘基乙二胺盐酸盐，充分混合，静置15分钟，使染料形成。
5. 比色：用分光光度计测定染料的吸光度，与标准曲线比较，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
四、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据亚硝酸钠标准溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品测定：对火腿肠样品进行测定，得到样品中亚硝酸盐的吸光度。
3. 结果计算：根据标准曲线和样品吸光度，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
五、实验讨论1. 实验过程中，酸度对亚硝酸盐的测定结果有较大影响。
实验过程中应严格控制酸度，确保测定结果的准确性。
2. 亚铁氰化钾和乙酸锌在实验中起到沉淀蛋白质和除去脂肪的作用，提高实验的灵敏度。
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亚硝酸盐含量测定实训标准
13.1任务工单
13.1.1实训目的
（1）掌握亚硝酸盐含量测定的基本原理；
（2）学习分光光度法。
13.1.2实训材料
香肠样品
13.1.3实训仪器
天平、研钵、分光光度计、电热炉、50m1烧杯1个、500ml容量瓶1个、50ml 容量瓶10个、胶头滴管、移液管、玻璃棒
13.1.4实训试剂
（1）乙酸锌溶液（220g/L）:称取11g乙酸锌,先加1.5ml冰醋酸溶解,用水稀释至50ml
（2）亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取5.3亚铁氰化钾,用水溶解,并稀释至50ml （3）饱和硼砂溶液(50g/L):称取2.50g硼酸钠,溶于5mL热水中,冷却后备用（4）亚硝酸钠标准溶液(10g/mL‟
（5）对氨基苯磺酸溶液…1.0%‟
（6）盐酸萘乙二胺溶液…0.3%‟
13.2项目指导书
13.2.1实训原理
亚硝酸盐采用盐酸奈尔二胺法测定。
用碱性的硼砂将脂肪从样品中分离,利用乙酸锌及亚铁氰化钾使蛋白质变性分离。
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,利用分光光度法来测定,最大吸收波长为540nm。
根据朗伯比尔定律,并结合工作曲线,可以得到香肠中亚硝酸盐的含量(mg/kg)
13.2.2实训步骤
(1)试样的预处理:
1、取全部,用研钵制成匀浆备用。
2、称取5g…精确至0.1g制成匀浆的试样置于50ml烧杯中,加125mL饱和硼砂溶液,搅拌均匀,以70℃左右的水约300mL将试样洗入50ml容量瓶中,80℃加热15min取出置冷水浴中冷却,并放置至室温。
3、在振荡上述提取液时加入5mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5mL乙酸溶液以沉淀蛋白质加水至刻度,摇匀,放置30min除去上层脂肪,上清液用滤纸过滤…用移液管吸取中间澄清的部分‟。
弃去初滤液3mL滤液备用。
…2‟亚硝酸盐的测定
1、吸取40.0mL上述液于50mL容量瓶中,另吸取0.00mL0.50mL1.00 mL、1.50mL、
2.00mL、2.50mL亚硝酸标准液…相当于0.0μg、5.0μg、10ug、15.0ug、20.0μg、25,ug亚硝酸钠),分别置于50mL容量瓶中。
分别标号为“样品管”、“0号管”、“1号管”、“2号管”、“3号管”、“4号管”、“5号管”。
2、于标准容量瓶与试样容量瓶中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液,混匀静置3min-5min后各加入2mL盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15min。
3、用1cm比色皿,以“0号管”调节零点,于波长540nm处测“1号管”2号管”、“3号管”、“4号管”、“5号管”吸光度,绘制标准曲线比较。
同时做试剂空白。
（5）结果计算
1、绘制标准曲线
2、根据样品管吸光度值，计算样品中亚硝酸盐含量
3、换算到要求单位mg/kg
4、判断结果是否符合国家标准
我国食品添加剂使用卫生标准在肉制品中，亚硝酸盐的最终残留量不得超过30mg/kg
13.2.3课后作业
（1）完成实训报告
（2）本次实训所用到的试剂有哪些？分别如何配制？
（3）列出此次实训的注意事项。
（4）将实验结果拍照上传到班级群。
13.3项目考核方案
实训考核内容及评价方法。