利用蚕豆根尖微核试验研究入侵植物胜红蓟的化感作用潜力
植物染色体毒理实验 蚕豆根尖微核实验
蚕豆根尖微核实验摘要：本实验用洗发水诱导蚕豆根尖发生畸变，通过固定、酸解、，染色、压片、镜检等一系列过程观察蚕豆根尖细胞核及微核，通过微核的数量判断洗发水对人体毒害作用的大小。
由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，因此可用微核实验来评价各种诱变因子对生物遗传物质的影响程度。
关键词：蚕豆根尖微核卡诺固定液吉姆萨染液前言：随着相关研究人员的一系列实验表明：日常用品中的一些物质会对植物细胞尤其是分生组织细胞产生明显影响，它们会破坏细胞中的遗传物质——染色体，导致微核的产生，破坏细胞正常的生命活动。
微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下，着色与主核一致或稍浅，呈圆形或椭圆形。
蚕豆根尖细胞的微核是由于根尖细胞在分裂时受到外界诱变因子作用，形成的不随细胞分裂进入细胞核的染色体片段。
以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物，称为微核实验。
利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测。
目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
1．材料1.1实验材料：蚕豆（根尖细胞的染色体大，DNA含量高，对诱变因子反应敏感）1.2实验药品：1mol/L盐酸、固定液（乙醇、冰醋酸3：1配制）、吉姆萨染液1.3实验用具：显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、盆、纱布、烧杯、水浴锅等2．步骤2.1 浸种催芽将试验所用适量蚕豆放入盛水烧杯盆中，在室温下浸泡1d。
种子吸胀后，用温润纱布松散包裹蚕豆置盆中，保持温度催芽2d，此时根长出将近约1.5cm。
2.2 毒性处理选取根生长良好，根长一致的种子，分成两组，一组放入盛有被测洗发水的盆中，被测液浸没根尖即可。
另一组放入盛有自来水的盆中培养，做对照组。
蚕豆根尖微核技术实验方案
实验方案(蚕豆根尖微核技术)
一、实验题目
蚕豆根尖微核技术检测流仓河污水污染情况
二、实验目的
1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物；
2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤
3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法
4、培养初步的科研能力
三、材料仪器与方法
1.1材料仪器
选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗，采集于流仓河污水，烧杯，剪刀，培养皿，量筒100ml，，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）
1.2方法
1.2.1污水处理
将采集到的污水稀释100倍、10倍、不稀释，用自来水做对照
1.2.2蚕豆根尖的培养处理
将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。
每12小时换水一次。
待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。
然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。
卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。
1.2.3制片
用常规压片法制作临时装片。
1.2.4镜检计数
每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。
TMV溶液诱导蚕豆根尖微核的研究
TMV溶液诱导蚕豆根尖微核的研究摘要：应用蚕豆根尖微核试验初步研究了一定浓度的烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，tmv）溶液对环境污染的效应。
结果表明，tmv溶液浓度与各处理蚕豆根尖微核率的相关性较强（r=0.982），且差异极显著（p=0.0030.01），且蚕豆根尖微核率与处理时间相关性不强（r=0.312）。
研究表明蚕豆根尖细胞微核技术可应用于烟草花叶病毒遗传毒性监测。
关键词：烟草花叶病毒（tmv）；蚕豆根尖；微核率中图分类号：q943 文献标识码：a 文章编号：0439-8114（2013）03-0561-03存在于水体中的植物病毒可能导致植物病毒病流行，给农业生产带来不良影响。
目前很难估计水体中植物病毒对农业生产的潜在威胁程度，但烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，tmv）通过植物根侵染植物已得到证实。
曾嵘等[1]研究发现在烤烟漂浮育苗中，tmv可以通过营养液侵染烟苗发病；刘勇等[2]研究表明水窖水体中的tmv具有侵染力。
已有从水体中分离到烟草花叶病毒的报道[3-9]，水体中存在的tmv有可能对环境造成一定的污染。
环境污染物（如物理、化学、生物污染源）能诱发植物细胞的染色体畸变，染色体断片游离在细胞质中于分裂末期形成微核。
蚕豆根尖细胞微核试验（micronucleus test，mcnt）是以蚕豆根尖细胞微核出现的频率为测试终点的监测方法[10]。
目前对水体植物病毒污染及其环境效应的研究极少，本研究以不同浓度的tmv溶液处理蚕豆根尖，分别统计各处理的蚕豆根尖微核率以及相应的污染指数，旨在初步探讨一定浓度的tmv溶液对环境污染的潜在威胁。
1 材料与方法1.1 材料供试蚕豆为青皮蚕豆（本地种），供试病毒为烟草花叶病毒的普通株系。
1.2 方法1.2.1 供试病毒液的制备将纯化的tmv接种于普通烟株k326（nicotiana tabacum cv. k326），3周后采病叶提纯tmv病毒[11]，经紫外扫描测得其浓度为109.9 μg/ml[12]，并将其稀释，配成浓度分别为2.7、5.4、8.1、10.8和13.5 μg/ml的病毒液各10 ml，4 ℃保存备用。
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测CuAs污染的诱变性
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测Cu 、As 污染的诱变性3张 莉 刘登义33 王友保 (安徽师范大学生命科学学院,芜湖241000)【摘要】 应用蚕豆根尖细胞微核技术检测Cu 、As 及其复合污染的诱变性能,计数了蚕豆根尖细胞微核千分率(MCN ‰)和污染指数(PI )并进行了F 检验.结果表明,在一定浓度范围内(Cu <200mg ・L -1,As <15mg ・L -1),随着Cu 、As 浓度的增加,MCN ‰上升;24个试验处理组PI 均在2以上,各处理组MCN ‰有显著差异,和对照组有极显著差异(α<0.01),表明Cu 、As 及其复合处理对蚕豆根尖细胞的分裂活动有明显影响.关键词 蚕豆 Cu As 微核检测 诱变性文章编号 1001-9332(2001)05-0777-03 中图分类号 X171.5 文献标识码 AU tilization of micronucleus test in Vicia f aba root tips cell to detect the mutability of Cu and As pollution.ZHAN G Li ,L IU Dengyi and WAN G Y oubao (College of L if e Science ,A nhui Norm al U niversity ,W uhu 241000).2Chin.J.A ppl.Ecol .,2001,12(5):777～779.The micronucleus test in V icia f aba root tips cell was utilized to detect Cu ,As and their combined pollution.The MCN ‰and PI were determined and the F 2test was used to evaluate the statistical difference in MCN ‰among differ 2ente treatments.The results showed that within a certain concentration of Cu 2+(<200mg ・L -1)and As 3+(<15mg ・L -1),MCN ‰increased as the concentrations increased.The PI of all the 24treatment was over 2,and there existedobvious difference compared with the control (α<0.01).This study shows that Cu ,As and combined pollution had significant effects on cytogenetical toxicity of V icia f aba root tip cell.MCN ‰is lower than normal level in the com 2plex treatment of Cu and As because of antagonism actions.K ey w ords V icia f aba ,Cu ,As ,Micronucleus test ,Mutability. 3教育部留学回国人员基金和安徽师范大学青年基金资助项目(2000QL37). 33通讯联系人. 2000-12-08收稿,2001-04-02接受.1 引 言微核试验(micronucleus test ,MCN )是根据环境污染物能引起DNA 损伤,诱发染色体畸变而形成微核的原理来检测诱变物质对染色体损伤的一种简便易行的方法[1,5,10,12].其中蚕豆根尖细胞微核技术(Vicia 2micronucleus test ,缩写为Vicia 2MCN )已成为我国环境生物检测的常规化方法之一.利用Vicia 2MCN 监测环境污染和检测危险化学品也已得到广泛的运用[2～4,11,13～15],但作为一项世界性的环境生物学检测指标,仍有一些问题有待解决[8].本文研究了Cu 、As 及其复合污染对蚕豆根尖细胞有丝分裂指数(IM )和微核率(MCN F )的影响,以期为Vicia 2MCN 技术走向标准化、规范化提供一些基础理论资料.2 材料与方法211 实验材料蚕豆(V icia f aba )(大片青皮豆),由芜湖市种子公司购得.212 实验设计与方法蚕豆种子用0.5%NaClO 消毒30min ,自来水冲洗干净后,水培48h ,吸胀后,于23℃培养箱中催芽24～48h.待根长长至1～1.5cm 时,用Cu 、As 及其复合物浸泡(实验按正交设计,如表1所示)处理10h 后自来水冲洗,修复24h ,剪取蚕豆根尖,用卡诺氏液固定24h 后,转移至70%酒精中保存.用时将保存的根尖取出,用蒸馏水漂洗后放入0.1mol ・L -1HCl ,60℃水浴中解离25min ,取出根尖,水洗数次,改良碱性品红染色5min ,压片观察,计数微核千分率(MCN ‰)及污染指数(PI ),并进行统计学处理[7,9],每个处理镜检3个根尖(蚕豆根尖细胞微核的识别标准同陈光荣等)[2,3];同时,参照朱广廉等[16]的方法,计数细胞有丝分裂指数和相对有丝分裂指数(Relative mitosis index ,以下简写为RIM %).另设自来水对照,实验设3个重复.PI =处理组微核千分率平均值对照组微核千分率平均值RIM %=处理组细胞有丝分裂指数对照组细胞有丝分裂指数×100%表1 Cu 、As 及其复合处理的实验设计T able 1Experimental design of Cu and As treatments Cu (mg ・L -1)As (mg ・L -1)151530000+10+50+150+305050+050+150+550+1550+30100100+0100+1100+5100+15100+30200200+0200+1200+5200+15200+30400400+0400+1400+5400+15400+303 结果与讨论311 Cu 、As 处理对MCN ‰和RIM %的影响蚕豆根尖各个处理的微核千分率(MCN ‰)和PI 应用生态学报 2001年10月 第12卷 第5期 CHIN ESE JOURNAL OF APPL IED ECOLO GY ,Oct.2001,12(5)∶777～779值见表2.通过对24份处理组及1份对照组的微核千分率进行F检验(表3),表明各处理有着显著性差异,和对照组相比有极显著的差异(F=5.47>F0.01= 2118,α<0.01).此外,在出现微核的细胞中,微核数量多少不同,从1个、2个到多个不等.自来水对照中常为单微核,各处理组单细胞微核数多在1个以上,说明各处理组诱变性能强,毒性大.表2 Cu、As及其复合污染对蚕豆根尖细胞MCN‰和相对有丝分裂指数的影响T able2E ffects of Cu,As and their combination pollution on MCN‰and RIM%of root tips cell in Vicia f abaCu+As(mg・L-1)X±SE X-CK PI RIM% 400+30 3.03±0.01 1.70 2.2872.01 400+1511.97±0.0510.649.0079.23 400+520.52±4.6919.1915.4388.70 400+118.42±1.1817.0913.8582.67 400+0 2.75±0.16 1.42 2.0768.20 200+3019.93±0.9818.6014.9985.43 200+1521.68±5.6220.3516.3093.77 200+522.33±2.0421.0016.7991.26 200+137.60±3.7236.2728.2793.78 200+040.52±2.0339.1930.4787.16 100+3015.07±0.7313.7411.3384.16 100+1521.12±3.2519.7915.8891.25 100+522.88±2.5721.5517.2094.60 100+134.91±0.3133.5826.2698.01 100+034.99±2.4533.6626.3190.17 50+307.76±0.20 6.43 5.8376.54 50+1513.20±1.0011.879.9384.82 50+523.37±4.9222.6417.5797.21 50+125.±1.4124.1419.1597.83 50+029.89±3.7628.5022.47106.280+3018.18±1.0415.3113.6979.270+1520.09±1.1418.7615.1083.220+59.54±0.35 6.217.1894.120+1 3.67±0.01 2.34 2.76103.31 CK 1.33±0.20--100 单一Cu处理下,随着Cu浓度的增加,MCN‰上升,表明Cu对蚕豆根尖细胞毒害作用增强;当Cu浓度达到400mg・L-1时,MCN‰下降很多,同时发现蚕豆根尖细胞有丝分裂受到严重阻碍,处于有丝分裂过程的细胞数明显低于对照组,RIM%仅达68.20%;随着As的加入,Cu的生长抑制效应得到缓解,蚕豆根尖细胞分裂数增加,MCN‰则上升;As浓度进一步提高时,As表现出拮抗Cu对蚕豆根尖细胞毒害的作用, MCN‰又下降.Cu浓度低于200mg・L-1时,Cu对蚕豆根尖细胞毒害明显,MCN‰较高;而As的加入又使MCN‰下降.单一As处理下,As浓度低(1mg・L-1)时,MCN‰较低,而RIM%却高于对照,说明低浓度As对蚕豆根尖细胞的毒害作用较小,甚至有刺激、促进生长的作用;随着As浓度增加,MCN‰显著上升, As的毒害作用增强,当As浓度超过15mg・L-1后,蚕豆根尖细胞的分裂数显著降低,同时MCN‰下降. 综上所述,Cu、As对MCN‰的影响不呈简单的正表3 蚕豆根尖微核检测的F检验T able3F2test in micronucleus test in Vicia f aba root tips cell变异Variation DF SS MS F F0.05F0.01处理Handle244688.38195.35 5.47 1.74 2.18误差Error501786.2735.73总变异Total variation746474.65相关,当Cu的浓度低于100～200mg・L-1,As浓度低于15～30mg・L-1时,MCN‰与Cu、As的浓度呈正相关,当超过这个范围后,会抑制蚕豆根尖细胞分裂,造成MCN‰增长减弱,直至呈负相关.较低浓度Cu(< 200mg・L-1)、As(<30mg・L-1)复合处理时,由于相互拮抗,减弱了彼此的毒性,MCN‰较其单独作用时为低.较高浓度Cu(>200mg・L-1)、As(≥30mg・L-1)复合处理时,相互的拮抗作用,减弱了其单独作用对细胞有丝分裂的抑制作用,MCN‰较单独处理时为高.312 关于Vicia2MCN技术的分析Vicia2MCN技术因材料易得,操作简单,反应灵敏等优点,目前研究和运用较多,同时由于它克服了动物培养细胞需要一定条件和时间,细胞同步化困难,微核率低及细菌检测方法中菌种鉴定、操作严格等缺点而成为拟代替其它生物检测系统的一种常规的环境污染物和危险化学品的检测指标,其广泛性很大.然而,化学诱变物质的遗传毒害是在细胞分裂间期时的DNA和染色体的复制合成过程中产生的[1,6],这种损害在细胞学上的可见标志是在分裂中通过微核形式显示的.没有细胞的分裂活动,毒性物质就没有作用遗传物质的机会,就难以表现这种物质的遗传毒性;也就是说,没有细胞的分裂活动,即使毒性很强的物质,也无法通过微核等细胞遗传学的手段检测[6].实验结果证明了这一点,在大剂量的重金属作用下,理论上它应有较高的诱变性能,但对各实验处理组和对照的多重比较(表4)则表明,较高浓度的Cu(400mg・L-1)或As(30mg・L-1)处理组严重阻碍根尖细胞分裂,RIM%仅68.20%～79.27%,其MCN‰和对照组表4 蚕豆根尖微核检测的q检验T able4q2test in micronucleus test in Vicia f aba root tips cellCu+As(mg・L-1)MCN‰显著水平Significant level01050101Cu+As(mg・L-1)MCN‰显著水平Significant level01050101 200+040.52a A200+3019.93bc B200+137.60ab AB400+118.42bc B100+034.99ab AB0+3018.18bc B100+134.91ab AB100+3015.07bc B50+029.89ab AB50+1513.20bc B50+125.47b AB400+1511.97bc B50+523.37bc AB0+59.54bc B100+522.88bc AB50+307.76c B200+522.33bc AB0+1 3.67c B200+1521.68bc B400+30 3.03c B100+1521.12bc B400+0 2.75c B400+520.52bc B Ck 1.33c B0+1520.09bc B877应 用 生 态 学 报 12卷差异不显著;而能保证细胞具有一定程度分裂水平的处理(如50～200mg・L-1的Cu处理)和对照组则差异显著或极显著.所以在利用蚕豆根尖细胞微核试验进行监测时,首先必须保证测试材料具有一定的细胞分裂水平,也即被检测对象不会严重阻碍细胞分裂,否则过低的细胞分裂水平会导致过低的微核千分率,而不能反映出被检测对象的实际诱变能力.可以认为,在RIM%低于或接近80%时,应考虑该方法的可靠性.其次,检测时要保证MCN‰在合理的剂量效应区内,过低或过高的检测剂量有时会产生相反的结果,如单用1mg・L-1As处理,RIM%达103.31%,MCN‰较低,和对照差异不显著,容易得出As无明显遗传毒性的错误结论,至于被检测对象的剂量效应区需按检测对象的不同进行具体研究.4 结 论411 Cu、As单独处理条件下,随着浓度的增加,遗传毒性逐渐增强,甚至会抑制植物细胞的有丝分裂活动. Cu和As复合处理具有相互拮抗作用,表现为促进植物生长和分裂活动,较低浓度Cu(≤200mg・L-1)和As共存使MCN‰降低,而较高浓度Cu(>200mg・L-1)、As复合则表现为MCN‰上升.412 在利用蚕豆根尖细胞微核试验进行监测时,应该满足两个基本条件:首先,必须保证测试材料具有一定的细胞分裂水平,这是正确检测的首要条件;其次应确保被检测对象在合理的剂量效应区范围内.参考文献1 Chang X2X(常学秀)et al.1999.Correlation analysis between UDS and MCN in V icia f aba treated with Cd2+and Al3+and UDS2tech2 nique in higher plants.Chi n J A ppl Ecol(应用生态学报),10(5):596～598(in Chinese)2 Chen G2R(陈光荣)et al.1983.The utilization of micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the lesion of pesticide reagente.J Cent ral Chi na Teachers College(华中师范学院学报),3(4):69～75(in Chinese)3 Chen G2R(陈光荣)et al.1985.A preliminary study on the utilization of micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the pollution of Qingshan lake.Chi na Envi ron Sci(中国环境科学),5(4):2～7(in Chinese)4 Degrassi FR et al.1982.Micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect mutagen danger in fresh2water pollution.M utat Res,97:19～335 Duan C2Q(段昌群)et al.1992.The effects of heavy metals on con2 tent of nucleic acid and activity of nuclease of V icia f aba.Envi ron Sci (环境科学),14(3):31～36(in Chinese)6 Duan C2Q(段昌群)et al.1995.Cytogenetical toxical effects of heavy metals on V icia f aba and inquires into the Vicia2micronucleus.Acta Bot Si n(植物学报),37(1):14～24(in Chinese)7 Guizhou Agricultural College(贵州农学院).1983.Statistical of Biolo2 gy and Experimentation Design.Beijing:Agricultural Press.14～27,76～114(in Chinese)8 K ihlman BA.1986.Handbook of Mutagenicity Test Procedures.Lon2 don:Elsevier Press.531～5549 Liu L2F(刘来福)et al.1988.Biological Statistics.Beijing:Beijing Normal University Press.248～260(in Chinese)10 Ma TH.1982.V icia cytogenetic tests for environmental mutagens:A report of the U.S.environmental protection agency gene2tox program.M utat Res,99:257～27111 Ma TH et al.1995.The improved A lli um2V icia root tip micronucle2 usassay for dastogenicity of environmental pollutants.M utat Res,344(2)185～19512 Shahin SA,El2Amovdi KH.1991.Induction of numerial chromosome aberrations during DNA synthesis using the fungicides nimrod and ru2 bigan24in root tips of V icia f aba L.M utat Res,261:169～17613 Wang H2X(王焕校)et al.1997.A preliminary study on the utilization of micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the pollution of Dianchi lake.J Y unnan U niv(云南大学学报),15(1):138～145 (in Chinese)14 Wang Y2X(王永兴)et al.1997.A study on the utilization of mi2 cronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the pollution of Tai2 hu lake.Chi na Envi ron Sci(中国环境科学),17(3):252～255(in Chinese)15 Wang Y2Y(王英彦)et al.1988.The present situation of V icia2mi2 cronucleus test.Envi ron Sci(环境科学),10(4):66～70(in Chinese) 16 Zhu G2L(朱广廉)et al.1990.Plant Physiology Experimentation.Bei2 jing:Peking University Press.13～16,161～165(in Chinese)作者简介 张 莉,女,1972年生,硕士研究生,现主要从事植物生态学和植物保护生物学研究.已发表论文2篇.E2mail: wybzl@9775期 张 莉等:利用蚕豆根尖细胞微核技术检测Cu、As污染的诱变性。
入侵植物紫茉莉遗传毒性的初步研究
学校级重点项目 (061k008) 作者简介 :周晓奎 (1981 - ) ,男 ,四川苍溪人 ,硕士研究生 , 3 为 通讯作者 。
物 [ 1 ] ,对中国生态安全存在着一定的隐患 。化感作 用是指一种植物通过释放化学物质到环境中而对另 一种植物产生的负面效应 ,被认为是入侵植物成功 入侵的一种机制 [ 3 ] 。有关紫茉莉化感作用的研究 至今未见报道 。本研究首次采用蚕豆根尖微核技 术 ,研究紫茉莉对蚕豆根尖细胞有丝分裂及微核的 影响 ,旨在初步探明紫茉莉入侵机理 ,为防治其蔓延 提供的理论依据 。
- 0. 191
0. 100
8. 120b
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7. 932c
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The genetic tox ic ity of an inva sive plan t, M irab ilis ja lapa L.
ZHOU Xiao2kui1 ,MA Dan2wei13 , ZHOU Quan2quan2 , HE W ei1 , CANG Peng1 ( 1. L ife Science College, Sichuan Normal University, Sichuan Chengdu 610066, China; 2. L ife Science College, Sichuan University, Si2 chuan Chengdu 610064, China)
2 结果与分析
加改进 [4 ] 。挑选饱满 、大小均匀 、无损伤的蚕豆种 211 紫茉莉对蚕豆根尖形态的影响
子 , 自来水洗净后用 0. 5 % KM nO4 消毒 30 m in,蒸 馏水冲洗 3～5次 。用蒸馏水浸种 ,在培养箱中无光 培养 ( 24 ±0. 5 ℃) ,待根长直 2. 0cm 时 ,移至盛有 等量洗净灭菌石英砂的培养皿中 ,每个培养皿 20 粒 ,分别加入 0. 025、0. 05、0. 075和 0. 1 mg·L - 1紫 茉莉水浸提液 40 mL ,以蒸馏水作对照 ,于 24 ℃、湿 度 80 %、光照 14 h / d的条件下继续培养 3 d,每天 从每个处理浓度中随机选取 25颗蚕豆种子 ,蒸馏水 浸洗 3次 ,每次 3 m in,然后移至湿砂中在 24 ℃恒温 箱中进行恢复培养 24 h后切取长度为 1 ～1. 5 cm 左右的根尖 ,用卡诺氏固定液 (无水乙醇 ∶冰醋酸 = 3∶1, V /V ) 固定 24 h, 转入 70 %乙醇中置于 4 ℃ 冰箱保存 。常规制片 , 用改良石炭酸品红染液染色 压片镜检 ,记录视野下有丝分裂的细胞数 ,微核数以 及细胞总数 。每个处理观察 8000～10 000个细胞 , 3次重复 。N icon E200摄影显微镜拍照 。有丝分裂 指数用根尖中分裂期细胞占根尖细胞总数的百分率
蚕豆根尖微核检测
蚕豆根尖微核检测指导老师：吴麟组长：路青瑜小组成员:何悦李婷陈鸿谭小娥刘清唐珍冯沁李双吴海林符方亮摘要：本实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用0.25mg/mL染发剂、0.5mg/mL 洗洁精对蚕豆根尖做处理，同时以0.25 mol/L叠氮化钠处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。
镜检后测得其微核率分别为17.55%，19.82%，23.18%，11.16%；染发剂、洗洁精处理的污染指数分别为1.7、1.8，结果表明均属于轻度污染。
关键词：蚕豆微核检测微核率Abstract：This experiment using vicia faba micronucleus test technology, respectively for 0.25 mg/mL colourants, 0.5 mg/mL of vicia faba detergent, at the same time to do processing mol 0.25 / sodium azide processing vicia faba do positive, negative control for water. After the microscopic micronucleus rate 17.55% respectively, 19.82%, 23.18%, 11.16%, Hair, detergent pollution index respectively with 1.7, 1.8, results show that belong to light pollution.Key word：Horsebean micronucleus test；micronucleus rate引言：染发剂和洗洁精都是我们生活中的日用品，特别是洗洁精。
化学去污剂主要分为阳离子型、阴离子型和非离子型3类(其中阴离子型表面活性剂使用频率最高)。
利用蚕豆根细胞微核技术检测洗涤剂的毒性
学生设计性实验论文题目：利用蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名学号20121321专业生物技术班级123 班相关实验课程名称细胞生物学实验指导教师及职称实验学期2013-2014学年二学期太原师范学院教务处编印利用蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性摘要：蚕豆根尖细胞微核试验（Micronucleustest，MC-NT）技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的微核检测方法。
本次实验以蚕豆根尖细胞为材料，研究洗衣粉的诱变效应。
结果表明：关键词蚕豆根尖细胞微核洗衣粉引言：微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。
20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。
微核试验与染色体畸变实验有良好的相关性，微核与患癌率也有较好的相关性[1]，蚕豆和动物之间对环境致突变物所引起的染色体畸变等定性反应的一致性可达99%以上。
蚕豆和动物的肿瘤细胞有许多共同性，而且致癌因素有许多也是相同的[2]。
由于蚕豆根尖细胞微核试验具有许多优点[1，3]，而广泛应用于遗传病理学、环境科学、预防医学等学科的研究，这种方法已经规范化[4]。
目前，各种化学产品与日俱增，研究和探索与人民生产和生活密切相关的化学药品对人类健康的影响和潜在危害性，已引起国内外的普遍关注[5,6]而洗涤剂的遗传病理效应，目前报道很少，而且结果不一。
因此本次应用蚕豆微核技术对洗衣粉的诱变效果进行探究。
目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；（2）小核的着色与主核相当或稍浅；（3）小核形态可为圆形，不规则等。
1 用品和方法1.1 实验用品1.1.1 材料：饱满的蚕豆种子1.1.2 器材：镊子，刀片，显微镜，水浴锅，大托盘，培养皿，载玻片、盖玻片若干，滤纸1.1.3 试剂：卡诺固定液（无水乙醇：冰醋酸=3:1），1mol/L盐酸，吉姆萨染液，雕牌洗衣粉，奇强洗衣粉，碧浪洗衣粉，立白洗衣粉1.2 实验方法1.2.1浸种催芽：选取大小均匀的饱满的蚕豆种子约20粒，直接放入盛有自来水的脸盆中，浸种24h，此间换水2次。
实验四 蚕豆根尖微核监测技术
实验四蚕豆根尖微核监测技术（VMT）一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。
在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。
而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。
三、器材与试剂（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。
（二）试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备）、Schiff试剂、SO洗涤液。
2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种：将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，臵25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。
（2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹臵解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。
待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍臵入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。
再经24~36h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。
2、被监测液处理根尖（1）每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸泡住根尖即可，用自来水处理作对照，方法相同。
（2）处理时间4~6h。
3、根尖细胞恢复培养：（1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。
（2）洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内，按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。
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比三部位 之间的化 感作 用潜力不存在 简单加和作 用 ， 仍以叶片效应最强。［ 但 结论］ 片具有最 高的化感作用潜力。 叶
关键 词 胜 红 蓟 ； 入 侵 植 物 ； 化 感作 用 ； 蚕 豆 根 尖 细 胞 微核 试验 中 图 分 类 号 ： Ｑ ４ ９５ 文献标识码 ： Ａ Ｄ Ｉ １． ９ ９ｊｉ ｎ ０ ２ —１ ４． ０ ２ ０ ． ０ Ｏ ： ０ ３ ６／．ｓ ． ５ ９ ５ ２ ２ １． １０ ５ ｓ
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效应 。ｒ 结果］ 胜红 蓟水浸提液具有较 强的遗传毒性 。在叶 、 花和地 上部 分水浸提 液作用下 ， 豆根 尖细胞有丝 茎、 蚕
分裂指数 下降， 微核率升 高， 细胞 中出现 了微核 、 色体桥 、 色体 环等 多种 染色体 畸 变， 红蓟水浸提液 对蚕豆根 染 染 胜 尖的影响存在 显著的浓度 效应 。胜红 蓟叶、 、 茎 花和地上部分 的整 体效应为 叶＞ 茎＞花＞地上部 分， 与地 ｒｅｐ ｒｓ ｉ ｏ ｃｅ ｓ ｍｐｙ ｂ ｔ ｈ ｌ ｏ ａ ｓ ｔ ｎ ｅｔＥ ｏ ｃｕｉｎ ｈ ａ ａｈｃ ｏｅ ｔ ｅｔ ｅ ａｔｄｄｎ ｔｎ ｒａｅｓ ｌ， ｕ ｅ ｏｅ ｆｅ ｆ ｒ ｇｓ．Ｃ ｎ ｌｓ ］Ｔ ｅｌ ｆ ａｏ ｔ ｈ ｉ ｉ ｔ ｒ ｌ ｗａ ｓ ｏ ｏ ｅ
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利 用 蚕 豆根 尖 微 核 试 验 研 究入 侵 植 物 胜 红蓟 的化 感作 用潜 力
吴 亚 娟 ， 何 兴金
（ 四川大学生命科学学院 ，成都 摘要 ６０ ６ ） １ Ｏ ４
［ 目的］研 究入侵植 物胜红 蓟（ ｅａｕ ｃｎ ｚ ｉｅ Ｌｎ ． 的化感作 用潜力 。［ Ａｇ ｒ ｔｍ ｙ ｏｄ ｓ ｉｎ ） ｏ 方法］ 运用蚕 豆（ ｉ ａ ｂ Ｖｃ ａ ｉ
Ｌ） ． 根尖细胞微核 试验研究入侵 植物胜红蓟叶、 花 以及 地上部分 （ 茎、 除去根 以外的植物 体， 同） 下 水浸提 液的化感
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