6 铁的比色测定
邻二氮菲分光光度法测定微量铁_6
实验二邻二氮菲分光光度法测定微量铁试验目的1.掌握紫外可见分光光度计的基本操作。
2.掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法。
3.掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长的选择。
4.掌握标准曲线的绘制及应用。
实验原理邻二氮菲（1,10-邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe离子形成红色配位离子：在pH=3~9范围内，该反应迅速完成，生成的红色配位离子在510nm 波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1*104，反应十分灵敏，Fe2+离子浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。
实验中，采用pH=4.5~5的缓冲溶液保持标准系列溶液与样品溶液的酸度，采用盐酸羟胺还原标准液及样品溶液中的Fe3+离子并防止测定过程中二价铁离子被空气氧化。
实验仪器与试剂1.V-1100D型可见分光光度计2.标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）3.邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）4.盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）5.醋酸盐缓冲液6.50ml容量瓶7个7.5ml移液管4只8.1cm玻璃比色皿2个9.铁样品溶液实验步骤1.标准系列溶液及样品溶液配制：按照下表配制标准系列溶液及样品溶液。
2.吸收曲线绘制：用1cm的比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在不同波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并从吸收曲线上找出最大吸收波长。
3.标准曲线制作：在选定的最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2~7号溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。
实验数据处理与结果1.吸收曲线：2.标准曲线：样品铁溶液中铁含量计算：Cx=C 读取值×50.200.50=9.9×10-4mol/L摩尔系数计算：ε=1212C C A A --=1.219×104 实验思考与讨论1.标准曲线的线性不好的原因：所选标准溶液的浓度可能只有一部分在线性范围内，该实验5、6号之间的线性不是很好，很大的原因可能是它们之间的某一浓度之后便超出了线性的范围。
实验_邻二氮菲分光光度法测定铁
实验邻二氮菲分光光度法测定铁一、实验目的1 掌握研究显色反应的一般方法；2 测定未知试样中的铁含量．二、实验原理由于某些无机离子本身没有颜色或者浓度低颜色过浅，其吸光值与浓度的关系不在线形范围内，则需要显色剂与被测物形成有色配合物。
该配合物的浓度与吸光度能够符合朗伯比尔定律。
因而可以间接测定出被测物的浓度。
(1) 显色剂与被测物的λmax应相距60 nm以上(2) 显色剂的用量：a保证显色完全，b用量过多会产生副反应(3) 显色时间：有些反应瞬时完成，溶液颜色很快达到平衡状态，并长时间保持不变．有些能迅速完成，但褪色较快，有些反应则较慢。
(4) pH值的影响：影响显色剂的溶解和金属的离子状态，进而影响有色配合物的生成和稳定性。
HR＝H- + R+酸浓度改变，平衡移动三、实验步骤(一) 绘制吸收曲线取两个25mL容量瓶，其中一个加入0.3mL铁标准溶液，然后在两国容量瓶中各加入0.5mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置2min。
各加入1.0mL邻二氮菲溶液和2.5mL 醋酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
用水作参比溶液，分别绘制上述两种溶液的吸收曲线。
再用不含铁的试剂溶液作参比溶液，绘制有色配合物的吸收光谱。
比较上述3种吸收光谱，选取合适的测定波长。
（二）显色剂用量实验：在8个50 mL比色管中，加入0.30 mL铁标准溶液，0.5 mL盐酸羟氨溶液，然后分别加入邻二氨菲溶液0，0.1，0.3，0.5，0.7，1.0，1.5和2.0 mL。
最后在个瓶中加入2.5 mL醋酸钠溶液，用水稀释至25 mL刻度，摇均，用1 mL比色皿，从不含显色剂的溶液作参比溶液，在508 nm下测定吸光度，记下各个吸光度值。
(三) pH值的影响：在7个50 mL比色管中，加入0.3 mL铁标准溶液，0.5 mL盐酸羟氨溶液．静置2 min后，个加入1.0 mL邻二氨菲溶液，然后用滴定管依次加入0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL氢氧化钠溶液，用水稀释至25 mL刻度摇均（用pH计测定上列溶液的pH值，记下其数值）．用1 cm比色皿，以水作参比溶液，在508 nm测定吸光度，记下吸光度值。
实验二 铁的比色测定
实验二 铁的比色测定（吸光光度法）一、实验目的1、学习比色分析法测定中标准曲线的绘制和试样测定方法。
2、了解分光光度计的性能，结构及使用方法。
二、实验原理Fe 2+离子在pH=3～9的水溶液中与邻菲罗啉生成稳定的橙红色的[Fe （C 12H 8N 2）3]2+螯合物：Fe 2+＋3 C 12H 8N 2=[Fe （C 12H 8N 2）3]2+（橙红色）；橙红色的络合物对光的吸收符合朗白（Lambert ）—比尔（Beer ）定律: k b C T I I A t ===1lg lg 0本实验就是利用它来比色测定亚铁的含量。
采用盐酸羟胺还原溶液中的高铁离子，即可以测定溶液中总铁量，从而求出高铁离子的含量。
三、仪器与试剂（一）仪器1、72型或721型等分光光度计或UV-VIS 光谱仪。
2、玻璃比色皿（1cm ）。
3、比色管或容量瓶（50mL 等)，比色管架。
4、烧杯，洗瓶，移液管和吸量管。
5、擦镜头纸。
（二）试剂1、.NH 4Fe （SO 4）2标准溶液的配制：称取0.2159g 分析纯NH 4Fe （SO 4）2·12H 2O ，加入少量水及20mL6mol·L -1HCl 溶解后，转移至250mL 容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，此溶液Fe 3+浓度为100mg·L -1。
吸取此标准储备液25.00mL 于250mL 容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，此标准溶液Fe 3+浓度为10mg·L -1。
2、邻菲罗啉水溶液（ω为0.0015或0.15%）。
3、盐酸羟胺水溶液（ω为0.10或10%，此溶液只能稳定数日）。
4、NaAC 溶液（1mol·L -1）。
5、HCl （6mol·L -1）。
四、实验步骤1.标准曲线的绘制在5只50mL容量瓶（或比色管）中分别加入2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mLNH4Fe（SO4）2标准溶液（Fe3+浓度为10mg·L-1），然后再各加入1mL 盐酸羟胺，摇匀，再加入5Ml1mol·L-1NaAC溶液、2mL邻菲罗啉水溶液，最后用去离子水稀释至标度，摇匀。
铁含量的测定方法
铁含量的测定方法铁含量的测定采用邻菲啰啉比色法。
一、原理在一定酸度条件下，试液中亚铁离子（Fe2+）与1,10-邻菲啰啉生成红色配合物，于波长为506nm处，测定其吸光度，即可计算出铁含量。
二、试剂和仪器柠檬酸三钠水溶液，150g/L；盐酸羟胺溶液，50 g/L；盐酸溶液，3mol/L；氨水溶液，2.5%；1,1 0-邻菲啰啉溶液，2.5 g/L：称量2.5g1, 10-邻菲啰啉溶于80℃的约l00ml水中，加lml浓盐酸，冷却后加水稀释至1000ml，储于阴凉处备用；醋酸-醋酸钠缓冲溶液：称量272g醋酸钠（NaCH3·CO2·3H2O）于约500m1水中，加入冰醋酸240ml，加水稀释至1000ml；Fe2+标准溶液，lmg/ml：称量7.024g硫酸亚铁铵于约500ml水中，加入浓盐酸10ml，移入l000ml 容量瓶中，稀释至刻度；Fe2+标准溶液，20ųg/ml：吸取lmg/ml的亚铁标准溶液20ml于1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，临用前配制。
仪器：分光光度计；1cm比色皿。
三、测定步骤（一）工作曲线的绘制量取20ųg/ml的亚铁标准溶液0.00m1、2 .50m1、5 .00ml、10.00ml、20.00ml(相当于分别含0、50、100、200、400ųg/ Fe2+)分别加入l00ml烧杯中，用水稀释至50ml，加入150g/L柠檬酸三钠溶液5m1，用3mol/L盐酸或2.5%氨水溶液调节溶液pH为2.4~2.6，加入50 g/L盐酸羟胺溶液5ml混匀，加入1,10-邻菲罗琳溶液5m1，加入醋酸-醋酸钠缓冲溶液l0ml，将溶液移入到l00 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀放置60min。
用分光光度计在波长506nm处用lcm比色皿，以水为参比溶液测定该标准系列的吸光度，以Fe2+标准溶液浓度（ųg/100ml）为横坐标，以其对应吸光度作纵坐标绘制工作曲线。
分析化验分析规程铁含量的测定
铁含量的测定方法一磺基水杨酸分光光度法1适用范围本方法适用于循环冷却水及冷却水系统磷锌预膜液中铁含量的测定，测尢范围为0—2mg/Lo2分析原理在pH=9〜11.5的氨性溶液中，试液中的Fe3+与磺基水杨酸根离子(以SaP表示)定量发生如下显色反应：3+ 2- 3-Fe +3Sal - — Fe(Sal) 3_反应产物Fe(Sal) 33-为黄色的配离子一三磺基水杨酸合铁(III)配离子，其稳定性比聚磷酸铁更高，故可避免大量聚磷酸盐的干扰。
在波长为420nm处，以分光光度计测量该黄色配离子的吸光度，并按标准曲线法进行定量。
水样的F/+可借加入浓硝酸并加热煮沸的方法使其转化为Fe3+,再与显色剂作用，进而与原有Fe3+—同被测定。
3试剂和仪器3.1试剂3.1.1磺基水杨酸溶液(100g/L) o3.1.2 氨水(1+1)。
3.1.3盐酸溶液(1+1)。
3.1.4 硝酸(AR)o2+3.1.5铁离子标准工作溶液(0.01mgFe2+/mL)用3.1.5.1或3.1.5.2均可配制出0.01mgFe2+/mL的Fe2+标准工作溶液。
3.1.5.1准确称取0.2500g高纯铁丝于250mL烧杯中，加入20mL盐酸(1+1),加热使之溶解。
冷却后使其完全转移到500mL容量瓶中，用水稀释至刻度。
所得溶液中Fe2+浓度为1 mg/mL。
将该溶液稀释至100倍，即得0.01 mgFe 2+/mL的F*+标准溶液。
3.1.5.2准确称取0.7020g优级纯硫酸亚铁鞍(FeSO 4 (NFk) 2SO4 • 6H2O),溶于50mL水中，力口20mL浓硫酸后，完全转移于lOOOmL容量瓶中，以水稀释至亥0 度。
所得溶液中F*+含量为0.1mg/mLo将该溶液稀释10倍，即得0.01 mgFe2+/mL 的F/+标准工作溶液。
3.2仪器3.2.1分光光度计，具3cm玻璃比色皿。
3.2.2 50mL 容量瓶。
4操作步骤4.1标准曲线的绘制4.1.1准确移取0, 1, 2, 3, 4, 5mL Fe 2+标准工作溶液(0.01mg/mL)分别置于六个50mL 烧杯中，各加3滴浓硝酸和15mL水，加热煮沸约1 min,冷却后移入50mL容量瓶中，加5mL 100g/L磺基水杨酸和5mL(1+1)氨水溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
实验6 铁的测定——邻菲罗啉法
实验铁的测定——邻菲罗啉法一、目的掌握分光光度计的测定原理、方法及其结构。
掌握吸收曲线的绘制及样品的测定原理。
二、原理亚铁离子（Fe2+）与邻菲罗啉生成稳定的橙红色络合物，应用此反应可用比色法测定铁。
橙红色络合物的吸光度与浓度的关系符合朗伯-比耳定律。
三、仪器721型分光光度计、容量瓶（50ml）等。
四、试剂1、铁盐标准溶液：准确称取0.0730克分析纯硫酸亚铁铵于100毫升烧怀中[（NH4）2Fe（SO4）2·6H2O]，加50毫升1mol/LHCl，完全溶解后，移入1升容量瓶中，再加50毫升1mol/LHCl，并用水稀释到刻度，摇匀，所得溶液每毫升含铁0.01毫克；2、0.1%邻菲罗啉水溶液；3、1%盐酸羟胺水溶液；4、醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH4.6）：称取136克分析纯醋酸钠，加120毫升冰醋酸，加水溶解后稀释至500毫升。
五、测定步骤1、邻菲罗啉铁吸收曲线的绘制吸取上述标准铁盐溶液2.0ml于50ml容量瓶中，加入5ml醋酸-醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，用3厘米比色皿，以蒸馏水作参比溶液，在分光光度计上，从波长440～600nm分别测定其吸光度A。
以波长为横坐标，吸光度A纵坐标，绘制邻菲罗啉铁的吸收曲线，求出最大A值时的波长入m。
2、标准曲线的绘制：分别吸取铁的标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml于八只50ml容量瓶中，依次分别加入5ml醋酸－醋酸钠缓冲溶液，2.5ml盐酸羟胺溶液，5ml邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，然后用分光度计在其最大吸收的波长下测得吸光度，以不加铁的试剂溶液作参比。
以吸光度为纵坐标，铁含量（mg，50ml）为横坐标，绘制出标准曲线。
3、试样中铁含量的测定吸取试样溶液10ml（其中含铁0.02～0.06mg）于50ml容量瓶中，按绘制标准曲线的操作，加入各种试剂使之显色，用水稀释至刻度，摇匀。
原材料铁含量检测标准
原材料铁含量检测标准一、检测方法1.采用化学分析方法，使用滴定管、比色法等方法测定原材料中的铁含量。
2.在进行检测前，应确保使用的试剂、试样、标准品等符合相关要求，并按照规定的操作步骤进行。
二、检测精度1.检测结果应精确到小数点后两位，以确保数据的准确性和可比性。
2.对于高含量的铁，应采取适当的方法进行稀释或处理，以适应检测范围。
三、检测频率1.原材料铁含量的检测频率应根据生产需求和质量控制要求确定。
通常情况下，每个批次原材料都应进行检测。
2.在某些情况下，可以根据原材料的稳定性、供应商的质量保证等情况适当调整检测频率。
四、异常处理1.如果检测结果出现异常，应立即进行复检，并查找可能的原因。
2.如果复检结果仍不符合标准，应立即通知相关人员，并进行相应的处理，如退货、降级使用或报废等。
五、人员资质1.从事原材料铁含量检测的人员应经过专业培训，并具备相应的检测技能和知识。
2.人员资质应定期进行审核和更新，以确保检测结果的准确性和可靠性。
六、设备维护1.用于铁含量检测的设备和仪器应定期进行检查和维护，以确保其正常运转和准确性。
2.对于关键设备和仪器，应制定详细的维护计划，并建立相应的维护记录。
七、环境控制1.铁含量检测应在干燥、无尘、无震动的环境中进行，以确保检测结果的准确性。
2.环境温度和湿度应控制在适宜的范围内，以保证设备的稳定性和精度。
八、安全操作1.操作人员应了解并掌握所有涉及到的化学品和仪器的安全使用方法。
2.在进行铁含量检测时，应佩戴必要的个人防护装备，如化学防护眼镜、实验服、化学防护手套等。
3.废弃的化学品和废液应按照相关规定进行妥善处理，以防止对环境和人员造成危害。
铁的比色测定
铁的比色测定引言铁是一种重要的金属元素，在生活和工业中有着广泛的应用。
因此，准确、迅速地测定铁的含量对于品质控制和实验室分析至关重要。
比色法是一种常用的测定铁含量的方法，通过将待测样品与试剂发生化学反应，形成带色物质，再用分光光度计测定该物质的吸光度来确定铁的含量。
比色法的原理比色法利用化学反应产生的带色物质与铁的含量成正比的关系来测定铁的含量。
通常使用的试剂是邻二氮菲（1,10-苯并菲啰啉），它与铁离子反应生成紫色络合物，这种络合物在可见光区域有明显的吸光度。
实验步骤试剂与设备准备1.邻二氮菲试剂：取适量邻二氮菲，溶解在适量盐酸中，稀释为一定浓度的邻二氮菲溶液。
2.待测样品：将待测溶液取适量样品。
3.分光光度计：打开分光光度计，根据试剂的吸光度范围选择合适的波长。
标准曲线的绘制1.准备一组已知浓度的铁标准溶液。
使用容量瓶将不同浓度的铁标准溶液配制出来。
2.取一系列标准溶液，加入适量邻二氮菲溶液，接着加入等量的盐酸，充分混合反应。
3.将混合后得到的溶液转移到分光光度计试管中，测定各个浓度溶液的吸光度。
4.依据所使用的盐酸、邻二氮菲溶液的浓度，制作铁离子浓度与吸光度之间的标准曲线。
测定待测样品的含铁量1.取待测样品，加入适量邻二氮菲溶液，接着加入等量的盐酸，充分混合反应。
2.将混合后得到的溶液转移至分光光度计试管中，测定其吸光度。
3.根据标准曲线，查找待测样品吸光度对应的铁离子浓度。
4.计算待测样品中铁的含量。
实验操作要点与注意事项1.实验室操作要卫生，化学品的操作应符合安全规范。
2.试剂的配制过程应准确无误，以免影响测定结果。
3.混合反应后的溶液应充分摇匀，以确保反应均匀。
4.分光光度计的操作应正确，准确记录吸光度数值。
结语铁的比色测定是一种简单、快速、准确的测定方法。
通过形成带色物质，并利用分光光度计测定其吸光度，我们可以确定待测样品中铁的含量。
比色法广泛应用于矿石矿泉水、工业废水和食品等领域中。
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铁的比色测定
一．实验目的
1. 学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理；
2. 掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；
3. 学会722型分光光度计的正确使用，了解其工作原理；
4. 学会数据处理的基本方法；
5. 掌握比色皿的正确使用。
二．实验原理
根据朗伯—比耳定律：A = εbc ，当入射光波长λ及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A 与该物质的浓度c 成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c 为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用的显色剂有邻二氮菲(又称邻菲啰啉)及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
而目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
在pH=2～9的溶液中，Fe 2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+，
此配合物的lg K 稳 = 21.3，
摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol –1·cm –1，而Fe 3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK 稳 = 14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH 2OH·HCl)将Fe 3+还原为Fe 2+，其反应式如下：
2Fe 3+ + 2NH 2OH·HCl → 2Fe 2+ + N 2 + H 2O + 4H + + 2Cl –
测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜。
三．仪器与试剂
仪器：722型分光光度计、容量瓶(100 mL ，50 mL)、吸量管
试剂：硫酸铁铵NH 4Fe(SO 4)2·12H 2O(s)(A.R.)、硫酸(3 mol·L –1)、盐酸羟胺(10%)、NaAc(1
mol·L –1)、邻二氮菲(0.15%)。
四．实验步骤
1. 吸收曲线的制作
用吸量管移取1.000 × 10–3 mol·L –1铁的标准溶液10.00 mL 于50 mL 容量瓶中，用吸量管依次加入10%的盐酸羟胺溶液1 mL ，摇匀，加0.15%邻二氮菲溶液2 mL ，1 mol·L –1 NaAc
2+N N 3Fe 2++
溶液5 mL，以水稀释至刻度，摇匀。
在分光光度计上用l cm 比色皿，以试剂空白为参比溶液，在440~560 nm 间，每隔10 nm测定一次吸光度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长λmax。
2. 显色剂浓度的影响
取7只50 mL容量瓶，用吸量管依次加入1.000 × 10–3 mol·L–1的铁标准溶液2.00 mL和10%盐酸羟胺溶液1 mL，摇匀，分别加入0.15%的邻二氮菲溶液0.10 mL，0.30 mL，0.50 mL，0.80 mL，1.00 mL，2.00 mL，4.00 mL，然后加入1 mol·L–1 NaAc溶液5 mL，以水稀释至刻度，摇匀。
在分光光度计上，用l cm 比色皿，在最大吸收波长下，以试剂空白为参比溶液，测定以上七个溶液的吸光度。
以邻二氮菲的体积(mL) 为横座标，相应的吸光度为纵座标，绘制吸光度－显色剂用量曲线，找出在测定中应加人的显色剂的体积(mL)。
3. 有色溶液的稳定性
在50 mL容量瓶中，用吸量管依次加入1.000 × 10–3 mol·L–1铁的标准溶液2.00 mL，10% 的盐酸羟胺溶液1 mL，0.15%的邻二氮菲溶液2 mL，l mol·L–1的NaAc溶液5 mL，以水稀释至刻度，摇匀。
立即在所用波长下，用l cm 比色皿，以相应的试剂空白为参比，测定吸光度，然后放置5 min，l0 min，30 min，1 h，2 h，3 h，测定其吸光度，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度－时间曲线，找出络合物稳定的时间范围。
4. 溶液酸度的影响
在9只50 mL容量瓶中，用吸量管依次加入1.000 × 10–3 mol·L–1的铁标准溶液2.00 mL，10%的盐酸羟胺溶液1 mL，0.15%的邻二氮菲溶液2 mL，再分别加入l mol·L–1的NaOH 溶液0.00 mL，0.20 mL，0.50 mL，0.80 mL，1.00 mL，1.50 mL，2.00 mL，2.50 mL，3.00 mL，以水稀释至刻度, 摇匀。
用精密pH 试纸或pH 计测定各溶液的pH值。
在所用波长下，用l cm 比色皿，以各自相应的试剂空白为参比，测定九个溶液的吸光度，以pH 值为横座标，吸光度为纵座标，绘制吸光度－pH曲线，找出测定的适宜pH范围。
5. 工作曲线的绘制
在6只50 mL容量瓶中，用吸量管分别依次加入1.000 × 10–3 mol·L–1的铁标准溶液0.00 mL，2.0 mL，4.0 mL，6.0 mL，8.0 mL，10.0 mL，再分别加入10%的盐酸羟胺溶液1 mL，0.15%的邻二氮菲溶液2 mL，1 mol·L–1 NaAc溶液5 mL，以水稀释至刻度，摇匀。
在所用波长下，用l cm比色皿，以试剂空白为参比，测定各溶液吸光度，绘制工作曲线，并计算摩尔吸光系数。
6. 络合物组成的测定（摩尔比法）
取9只50 mL 容量瓶，用吸量管依次加入1.000 × 10–3 mol·L–1的铁标准溶液1.00 mL，10%盐酸羟胺溶液1 mL，依次加入1.000 × 10–3 mol·L–1的邻二氮菲溶液1.00 mL，1.50 mL，2.00 mL，2.50 mL，3.00 mL，3.50 mL，4.00 mL，4.50 mL，5.00 mL，然后各加入1 mol·L–1 NaAc 溶液5 mL，用水稀释至刻度，摇匀。
在所用波长下用l cm比色皿，以各自试剂空白
为参比，测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵座标，以C R/C M为横座标，绘制曲线。
根据曲线上前后两部份延长线的交点位置，确定反应的络合比。
7. 铁含量的测定
准确移取10.0mL未知液，按工作曲线的测定步骤，测定其吸光度，从工作曲线上求出未知液中Fe的含量（mg·mL–1）。
注：由于本实验所使用的邻二氮菲、盐酸羟胺、醋酸钠、NaOH 等溶液，均为无色透明的水溶液，所以实验中所有参比溶液，均可使用蒸馏水。
五．思考题
1.本实验中哪些试剂应准确加入，哪些不必严格准确加入?为什么?
2.加入盐酸羟胺的目的是什么?
3.配制NH4Fe(SO4)2·12H2O溶液时，能否直接用水溶解?为什么?
4.如何正确使用比色皿?
5.何谓―吸收曲线‖、“工作曲线”? 绘制及目的各有什么不同?。