丹参主要居群的遗传关系及药材道地性的初步研究_郭宝林
丹参类中药的品种与鉴定研究概述_苟占平
收稿日期:2008-06-16; 修订日期:2008-09-26基金项目:国家自然科学基金(N o .30672470)作者简介:苟占平(1970-),男(汉族),甘肃临洮人,现任广东医学院药学院副教授,博士学位,主要从事中药的品种品质研究工作.丹参类中药的品种与鉴定研究概述苟占平1,2,吕应年2,龚先玲2,程纪伦1,崔 燎1,2(1.广东医学院药学院,广东东莞 523808;2.广东医学院广东天然药物研究开发重点实验室,广东湛江 524023)摘要:综述了丹参类中药在本草考证、品种调查、伪品品种研究、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定、微形态学研究和分子生物学研究等方面的研究进展,为丹参类中药的资源利用和深入研究提供参考。
关键词:丹参; 品种; 鉴定中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2008)12-2869-03Revie w of Varieties and Identification of Traditional Chinese H erb DanshenGOU Z han -ping1,2,L Y i n g -nian 2,GONG X ian -ling 2,C HENG J -i l u n 1,C U I L iao 1,2(1.College o f Phar macology,Guangdong M ed ical College ,D ongguan 523808,Ch i n a;2.Guangdong K ey La-boratory o f Research and D evelopm ent of NaturalDrug s ,Guangdong m ed ical Co llege ,Zhanjiang 524023,Chi -na)Abst ract :T his paper rev i ewed the research prog ress of he rb D anshen of t he textua l research ,va riety i nvesti ga ti on,counter -fe its var i e t y study ,m acroscop ic i dentifi ca tion ,m icroscop i c i dentifi cation ,phys i ca l and che m i ca l identifi cation ,m icromo rpho l og-ica l st udy and mo lecu l a r b i o l og ical study etc ..T he paper m ay be use f u l for t he resource utility and furt her study of D anshen .K ey w ords :D anshen ; V ariety ; Identificati on丹参为唇型科L ab i a tae 植物丹参Sal v i a m iltiorrhi za Bge .的干燥根及根茎[1],系应用历史悠久的常用中药,属活血调经之要药[2],现代药理实验证明其具有十分广泛的生理活性[3]。
全国丹参生产现状的调查和分析概要
全国丹参生产现状的调查和分析作者：赵魁，郭晓恒，宋杰，王睿婷，杨新杰，林贵兵，严铸云【摘要】目的总结、分析全国丹参的生产现状和存在的问题，以期为体现中药特点的丹参药材规范化生产模式的探索提供参考。
方法采用实地调查采样和访问方式，对全国栽培丹参产量大的山东、四川、河南、河北、山西、陕西、安徽、江苏等8省21个样点进行数据采集，分析。
结果掌握了主要的商品产地，栽培规模和栽培方法以及存在的实际问题。
相同品种丹参不同地域差异较大，因此从栽培和商品量对丹参药材划分5个一级区系。
结论栽种时应因地制宜，在规范化的模式下，就区系栽培带地理标志的商品。
【关键词】丹参；产地生态；栽培区系；规范化生产模式丹参为唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bunge．的根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效，用于治疗心绞痛、冠心病等症［1］，一直为临床常用中药，也是国家药品标准收载的320多个中成药的原料［2］。
目前丹参的商品药材主要分为野生丹参和家种两类［3］。
文献报道丹参药材的来源涉及植物有丹参、甘西鼠尾、滇丹参、南丹参、三叶丹参及其变种或变型等十余种(含变种、变型)［4］。
同时丹参也存在小叶型、大叶型、单叶型、皱叶型和白花丹参等一些种内变异［5，6］。
随着其用量的日益增大，其品质问题也备受关注。
为此，我们近两年来对全国各地丹参的生产情况进行了调查，以供教学、科研、生产参考。
1 调查方法参照有关生态调查方法［7，8］，采用样地调查和访问调查，根据药材收购信息，选择有代表性的地块设立标准，每主产区至少设置两个。
样点全球卫星定位系统（GPS进行现地测定。
同时走访当地中药企事业单位、收购站、农业局和药农，考察丹参的生长环境、生长状况、栽培品种、物候期、栽培技术、栽培面积和产量等。
本次调查的区域和示意图如图1（GPS定位作图）。
2 调查结果从丹参生态环境调查中，大部分的地貌为山地和丘陵，地域性异质程度高，分异程度表现在多样化系数值大，丹参的生态适应性较强。
丹参种质资源研究进展_郭宝林
%
产地
河南1)(野)
河南2)(栽)
山东3)(野)
山东4)(栽)
四川中江(栽) 四川成都(栽) 上海崇明(栽)
陕西西安(栽) 河北 辽宁 江苏(栽) 安徽 湖北 江西 湖南 浙江 山西浦城
第 27 卷第 7 期 2002 年 7 月
中 国
China Journal of
中药杂志
Chinese Materia
Medica
V
ol .27 , N o .7 July ., 2002
·综述·
丹参种质资源研究进展
郭宝林 , 冯毓秀 , 赵杨景
(中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所 , 北京 100094)
总丹参酮
6 .0[ 9]
3 .0 [ 9]
2 .39 ～
7 .0 [ 9 ,11] 0 .92 ～
2 .6[ 9, 11]
1 .4[ 9] 1 .4[ 9]
3 .6[ 9]
0 .16[ 8] 0 .06[ 8]
丹参酮 ⅡА 0 .42 ～
隐丹参酮 0 .135 ～
丹参素
0 .09 ～ 0 .15[ 11] 0 .09 ～ 0 9]
0 .035 ～ 0 .22[ 9, 11] 0 .046 ～ 0 .20[ 9, 11]
0 .015[ 9] 0 .049[ 9]
0 .06 ～ 0 .158 ,10]
0 .06 [ 10]
0 .18[ 8]
0 .07[ 8]
0 .10[ 8]
0 .04[ 8]
0 .8 [ 10]
0 .06 [ 10]
0 .116 [ 10, 13]
0 .05 ～ 0 .12[ 10] 0 .07 ～ 0 .19[8 , 10] 0 .097 ～ 0 .13[ 8, 13] 0 .04 ～ 0 .15[8 , 10]
植物生长调节物质对滇丹参种子萌发影响的研究
植物生长调节物质对滇丹参种子萌发影响的研究摘要：以滇丹参成熟种子为材料，采用l9（34）正交试验方法研究了植物生长调节物质赤霉素（ga3）、6-苄基腺嘌呤（6-ba）、吲哚乙酸（iaa）的不同浓度及浸种时间对滇丹参种子萌发的影响。
结果表明，滇丹参种子发芽的最佳处理组合是a1b3c2d2，即ga3 40 mg/l +6-ba 20 mg/l +iaa 5 mg/l+浸种24 h，该处理的滇丹参种子发芽率达90.3%，而且种子发芽较快、发芽持续时间较短，是滇丹参种子发芽的理想处理方法。
方差分析显示，ga3浓度对滇丹参种子发芽率的影响达显著差异水平（p2.2 方差分析对表2的数据进行方差分析，结果见表4。
由表4可知，因素a （ga3）对滇丹参种子发芽率的影响达显著差异水平（p<0.05〉，因素b（6-ba）、因素c（iaa）、因素d（浸种时间）对滇丹参种子发芽率的影响均不显著，4个因素对滇丹参种子发芽率作用的大小排序是ga3浓度、浸种时间、6-ba浓度、iaa浓度。
2.3 滇丹参种子发芽验证试验结果根据ga3浓度、6-ba浓度、iaa浓度及浸种时间4因素、3水平正交试验l9（34）对滇丹参种子发芽情况的影响结果分析，滇丹参种子发芽的最佳处理组合是a1b3c2d2，即ga3 40 mg/l +6-ba 20 mg/l +iaa 5 mg/l+浸种24 h。
用此组合处理滇丹参种子进行种子萌发验证试验，结果种子萌发率达到了90.3%，与理论结果相近，而且种子开始发芽的时间较快，种子发芽的持续时间较短，是比较理想的种子发芽处理组合。
证明了试验所得结果具有正确性、可重复性，可以作为滇丹参种子田间育苗的处理参考，以完善植物生长调节物质对滇丹参种子育苗的系统研究。
3 讨论种子萌发技术是开展滇丹参种子人工育苗、gap规范化种植的关键技术。
目前国内对丹参种子萌发的研究比较深入[6-17，20-22]，对滇丹参种子萌发的研究还末见报道。
丹参综述,
丹参综述摘要：丹参是一种具有广泛的药理活性和应用价值的常用中药材，通过查阅相关文献资料，进行分类总结，本文从丹参的品种考证、种类资源、化学成分、药理作用、丹参制剂及其质量控制、展望等方面对有关丹参的研究进行综述。
关键词：来源资源状况有效成分药效作用中成药制剂丹参是著名的活血化瘀药，现代药理研究表明丹参对心血管系统，血液系统的作用十分显著。
1997年，复方丹参滴丸成为第一个向美国FDA以治疗药身份申报的品种，意味着丹参将成为首例用国际标准进行评价的传统中药。
此后丹参的研究又形成了一个新的热潮。
本文就丹参各方面的研究概况进行综述。
1、丹参道地性、资源状况、产地迁移丹参是唇形科多年生草本植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎[1]，在我国应用历史悠久，始载于《神农本草经》,被列为上品。
但历代本草对其道地产区叙述多有不同。
按郭宝林考证，《名医别录》述：“生桐柏山谷及太山”(今河南和湖北交界及山东泰山一带)；《图经本草》：“今陕西河东州郡及随州皆有之”(今山西、湖北，河东州郡应归为山西而非陕西)；《本草品汇精要》：“道地随州”(今湖北随州)；《药物出产辨》：“产四川龙安府为佳”(今四川平武)。
现代研究表明：丹参在我国分布甚广，南起江西、湖南,北达辽宁，西至四川，广布于海拔120-1300m的山地丘陵。
丹参野生、家种兼有，野生品有效成分高于栽培品,但栽培丹参的种植面积和规模较大,生长条件稳定,产量大,已经成为目前丹参商品的主流。
栽培面积较大的有山东、四川、河南、河北、陕西、安徽等省。
丹参的化学成分在地理空间上没有一定的规律可循，表明在较大尺度上，气候、大的土壤类型等生态因子对丹参次生代谢产物积累的影响不明显。
丹参化学成分在同一个省内的变异可能会大于空间距离更远的不同的省之间，提示遗传背景及小尺度上的生态因子，如区域土壤、小气候及人为影响等，对丹参中化学成分的积累有重要影响。
以中江丹参为例：四川中江丹参大面积人工栽种历史约300年，中江丹参作为我国丹参的主源优质道地药材，以其根粗壮、色泽朱红、药味浓郁、药效高而弛名海内外。
丹参药材道地性探讨_赵宝林
参考文献:
[ 1] [ 2] [ 3] 吴弥漫 . 治 未病 贯 彻 以 人为 本 理念 的中 医防 治疾 病 的思 想 [ J] . 新中医 , 2007 , 39( 5 ): 1 . 李 力 , 薛晓琳 , 徐雯洁 , 等 . 治未病 思想在亚健康防治中的应用 [ J] . 北京中医药 , 2008 , 27 ( 1) : 76 . 华浩明 . 膏方历史源流 及现代进展概要 [ J] . 江苏中医 药 , 2007 , 27 ( 11 ): 1 .
3101
时珍国 医国药 2009 年第 20 卷第 12 期
LISH IZHEN M ED IC I NE AN D MA TER I A M ED I CA RESEAR CH 2009VO L. 20 NO. 12
从本草考证看来 , 丹参主产区和道地产区出现较大变迁。丹 参主要产地 或 道地 产 区先 后有 : 河南、 山 东、 陕 西 ( 或 山西 ) 、 湖 北、 安徽、 四川等地。胡世林的 中国道地 药材 将丹参列 为川产 道地 药材。在常用 中药中 , 道地产区 变迁十分 普遍 , 产生变迁的 原因除了自然环境、 经济原因之外 , 与人 文背景关系也相当密切 , 因此对一些产地比较 广泛、 道 地记述 变迁较 大的中 药材 , 其道地
秋冬养 阴 的原则 , 针对 机体 阳气四 时各 有不 同特 点 , 结 合某 些 疾病的规律 , 产生了 冬病夏治 和 夏病冬治 的特色疗法。 冬 病夏治 针对冬天阳 气不 足 , 寒从内 生的 时令 特点 , 一些 旧疾 如 哮证、 喘证、 痹证等 易复发 , 这时就 需要在夏季 阳气充盛 时 , 予 以 质重味厚之辈制 以膏方 , 使机体阴阳平衡 , 气血调和 , 脏腑功能 健 旺 , 以治疗疾病 , 减轻病 情发作 ; 夏 病冬治 是 针对冬 季阳气 在 内 , 阴气在外 , 一些湿热型 的脾胃病相应减少 , 可予以益气温阳 健 脾的 药物制以 膏方 , 以厚脾胃 , 以达治 疗目的。瘥后 防复这一 阶 段使 用的膏方是 综合处方 , 防治 结合 , 寓治于防 , 在缓解 期服用 , 有效缓 、 稳定、 持 久的特点 , 达到扶正固本 , 增强抗病能力的目的。 不仅能 减少急性发作 , 还可使疾病向痊愈方向发展。 3 展望 在 当今社会 , 人们的生 活水平 不断提高 , 对 健康要求 越来 越 高 , 祖国传统医 学中 治未 病 的思想 越显 突出。膏 方作 为祖 国 医学传统制剂之 一 , 根据患者不同体质特点和不同症状、 体征 , 通 过辨证 论治而组 方 , 用 于临床兼顾 面广 , 口感好 , 不伤脾 胃 , 适 宜 久服 , 简单方便 , 是临床的一 种个性 化的 防治 疾病的 手段 , 能 很 好地体 现 治未 病 的思想。 因此 , 膏方 的深入 研究 与开 发对 构 建 治未病 特色预防保健治疗服务体系 有着重要的意义。
丹参营养器官的结构及药用成分含量分析的开题报告
丹参营养器官的结构及药用成分含量分析的开题报告一、选题背景丹参是一种常见的中药材，其所含有的营养成分及药用效果备受关注。
丹参是丹参科植物丹参的根及根状茎，其主要功效是活血化瘀，舒筋活络，降低血脂、抗凝血等，临床常用于心脑血管疾病、胃肠道疾病以及妇科疾病等的治疗。
二、研究内容1. 丹参的营养器官结构：研究丹参的根及根状茎的结构、形态、组织学和生理学特征等方面；2. 丹参的药用成分含量分析：通过对丹参进行色谱质谱等技术的分析，研究其有效成分及含量，包括丹参素、丹酚酸B、丹酚酸A等成分。
三、研究意义1. 丰富了对丹参的认识及使用：通过对丹参的结构和成分等方面的分析，可以更好地了解丹参的作用及机理，为其合理的应用提供科学依据。
2. 为丹参的开发利用提供基础：丹参作为中药材具有广泛的用途和应用前景，深入研究其营养器官的结构及药用成分含量分析，可以为丹参的深度开发利用提供基础。
四、研究方法1. 形态学和组织学分析：对丹参的根及根状茎进行标本制片，通过显微镜观察并拍摄相应的形态学和组织学照片，分析其结构特点、形态特征等；2. 色谱质谱分析：通过色谱质谱等技术对丹参进行分析，建立成分分析方法，分析其有效成分及含量，评价其药用价值。
五、预期结果1. 建立丹参营养器官的结构分析方法；2. 建立丹参有效成分的分析方法，分析丹参营养器官中有效成分的含量及比例；3. 对丹参的药用价值做出较为全面的评价和分析。
六、研究计划1. 论文写作及撰写：在对丹参进行深入研究后，进行论文写作，包括开题报告、中期答辩、毕业论文等环节；2. 数据采集与分析：严格按照研究计划，对丹参进行采集、加工、分离、检测及数据的整理、归纳、分析；3. 论文完成及答辩：完成毕业论文，进行论文答辩，并进行相关任务的总结和归纳。
药用植物道地性的研究进展
药用植物道地性的研究进展摘要：随着现代中医药的不断发展以及中药材GAP的全面实施，人们对中药材的质量问题越来越重视，通过掌握药用植物的道地性的研究进展，了解道地性诸多丰富而深刻的内涵，揭示影响道地性的因素，对实现中药材GAP、SOP，保护和有效利用地道药材有重要的理论和实际意义。
关键词：药用植物道地性道地药材是我国传统药物学的一大特色，是我国历代医学家在长期医疗实践中经过反复对比总结出来的，它不仅是人们防病治病的有力武器，而且也是中国特有的中药材品质评价的综合标准。
自1986年国家中医药管理局首次确立了“中药道地药材研究”课题，近20年来，我国先后对常用道地中药的品种与质量开展了较为深入系统的研究，分别对大约300种中药材进行了包括品种考证、生态、性状、显微特征、理化特性、化学成分、药理、质量控制等方面的系统研究。
尤其是“九五”、“十五”期间，国家通过“973”计划、“863”计划、国家攻关计划、公益性研究专项、科技资源平台建设专项、自然科学基金等计划，支持了部分道地中药材的研究与创新，对道地中药材品种规范化种植关键技术、中药材现代质量标准、中药化学对照品、中药材和中药饮片等有害物质限量标准进行了研究，涉及了中药材的种质、生态、环境、生理、栽培、加工，以及化学、药理、质控等方面的内容。
这些研究为揭示中药道地性的科学内涵奠定了工作基础，但对中药道地性科学内涵尚未形成统一的认识。
[1]道地药材及其形成因素道地药材是历代医家保证药材质量的成功经验，也是我国传统药物学的一大特色。
道地药材的概念古已有之，唐《新修本草》序云：“动植形生，因方舛性，春秋节变，干气殊工。
离其本土，则质同而效异。
”“道地”思想是中华民族在天然药物质量控制方面对于世界文明的一大贡献，值得发扬光大。
那么什么是“道地药材”呢？由于天时、地利的生长条件和多年来劳动人民精心培植和加工，逐渐形成了历史悠久、品种优良、生产及加工技术成熟、稳定、临床常用的著名药材，这些药材在中药行业被称为“道地药材”。
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·药材·丹参主要居群的遗传关系及药材道地性的初步研究郭宝林1,2,林 生2,冯毓秀1,赵杨景1(1.中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京 100094; 2.北京中医药大学,北京 100029)摘 要:目的 研究丹参主要居群的遗传关系及药材的道地性问题。
方法 选择丹参主要产地样本44个(包括9个居群样本),进行R APD分析,得到的扩增条带用N T SY S-pc和AM OV A软件进行数据处理。
结果 (1)从100多个引物中选择出11个多态性强和重复性好的引物,扩增得到129条带;(2)不同居群内多态位点比率为20.9%～55.0%;(3)用U P GM A法得到所有样本的聚类图,可分为6个主要分支组和3个组外个体,其中四川中江居群的5个样本聚为一组,并与其他样本遗传距离较大;(4)按产地分组,遗传差异的80.44%存在于居群内,8.29%来自于组内居群间,11.27%的遗传差异来自于组间。
结论 (1)丹参居群内遗传多样性十分丰富;(2)山东和河南的栽培居群栽培种源来自于当地野生居群,尚没有进行人工选择,丹参酮ⅡA等成分的减少的原因主要是栽培条件不理想;(3)地区间居群的遗传分化不均衡,四川中江和河北承德居群与其他居群距离较远;(4)丹参的道地性的确定应当依据现代的优质药材评价系统,山东和河南产的丹参也可认为是丹参的道地药材。
关键词:丹参;RA PD;居群遗传关系;丹参药材道地性中图分类号:R282.21 文献标识码:A 文章编号:02532670(2002)12111304Primary research on genetic relationship among main populationsof Salvia miltiorrhiza and genuineness of herbGUO Bao-lin1,2,LIN Sheng2,FENG Yu-xiu1,ZHAO Yang-jing1(1.Institute o f M edicinal Plant,Chinese Academy o f M edical Sciences and Peking U nio n of M edical Colleg e,Beijing100094,China;2.Beijing U niv er sity o f T CM,Beijing100029,China) Abstract:Object To resea rch o n genetic rela tio nship amo ng the main popula tio ns of Salvia miltior-rhiza B g e.and the g enuineness of the herb.Methods Fro m main distributed places,44samples(includ-ing nine popula tions)w ere analy zed by RAPD.The data of amplified bands w ere analy zed by the so ftw are N TSYS-pc and AM OV A.Results (1)Fro m mo re than100primers,11primers producing polymo rphism and reproduceable bands w ere selected,129bands w ere amplified.(2)The percentage o f po lymo rphic bands within different popula tions w ere20.9%-55.0%.(3)The cluster map including all samples w ere o btained by U PGM A.In the ma p,there w ere six cluster g roups and three individuals outside the g ro ups. The bra nch w ith five sam ples of Zho ng jia ng Sichuan popula tion w ere far from other samples in g enetic dis-tance.(4)Acco rding to the distribution provinces five g roups were divided in g enetic v ariance analy sis. Genetic v ariance80.44%existing within population,8.29%among populations and11.27%amo ng g roups.C onclusion (1)The g enetic div ersity within popula tio n o f tiorrhiz a is plentiful.(2)The seeds of the cultiv ated popula tion in Shando ng and Henan Provinces come from the wild ones o f sam e places.The cultiva ted plants lack artificial selection.The decrease of chemical compound is mainly due to the undesired co nditio n of cultiv ating.(3)The genetic differentia tion among the populations from different provinces is unbalance.Tw o popula tion from Zho ng jiang Sichuan a nd Cheng de Hebei are far from the oth-er popula tion.(4)The g enuineness o f Radix Salv iae Miltiorrhizae sho uld be decided according to modern evaluatio n sy stem.The herbs from so me places of Sha ndo ng and Henan should be genuine ones.Key words:Salvia m iltiorrhiza Bg e.;RAPD;genetic rela tionship of popula tion;g enuineness of Radix Salviae Miltiorrhizae 丹参是著名活血化瘀药,现代药理研究表明丹参对心血管系统作用十分显著,已成为治疗冠心病最常用的中药之一。
《中华人民共和国药典》(2000年版)规定,丹参为唇形科植物丹参Salv ia miltior-收稿日期:2002-02-14基金项目:国家自然科学基金重点资助课题(39730500)rhiza Bg e.干燥根及根茎。
丹参的生态适应强,在我国广泛分布于华北、华东、中南,西北、西南部分省区也有分布。
随着野生资源的减少,20世纪70年代中期丹参已经供不应求,在全国许多地区都开始栽培,目前栽培品已成为丹参主要来源,全国丹参产量大的有河南、山东、四川、山西、陕西、湖北、安徽等省。
历代本草对丹参产地和道地产区叙述有所不同。
如《名医别录》(东汉)述:“生桐柏山谷及太山”(今河南和湖北交界及山东泰山一带);《图经本草》(宋朝):“今陕西河东州郡及随州皆有之”(今山西、湖北,河东州郡应归为山西而非陕西);《本草品汇精要》(明朝):“道地随州”(今湖北随州);《药物出产辨》(1930年):“产四川龙安府为佳”(今四川平武)。
总结起来,在历史上湖北、河南、山东和山西等几个省曾是丹参的主要产地或道地产区。
只是在近代才被认为川产丹参为佳品,但在《中国道地药材》中,丹参被列为川产道地药材[1],科技部在四川省中江建立了丹参的GAP种植基地,研究丹参的道地性,确立最佳生产地区对于优质药材的评价是十分有意义的。
本文通过对四川、河南、山东、山西、河北等丹参主要居群(包括野生和栽培)材料RAPD分析,研究类群间遗传关系,并就丹参的道地性问题进行一些探讨。
1 材料和方法1.1 材料:为1999年至2000年在丹参的主要产区采集的叶片,自然晒干或晾干,其中四川的样品为嫩叶经硅胶快速干燥。
另测定同一样本的根中丹参酮ⅡA含量[2](表1)。
每个居群取样3～5个(居群a～i),并提供该居群样本的成分含量情况[2],对丹参的主要分布区(河南和山东)的居群,补充了邻近居群的个体(16～21, 36,37),湖北样本为单一个体(44)。
1.2 仪器和试剂:离心机为Heraeus公司生产的表1 丹参材料来源和有效成分含量情况序号居群编号种源丹参酮ⅡA(%)序号居群编号种源丹参酮ⅡA(%) 1～5a四川中江(栽)0.440222～25d山东沂南(栽)0.7219 6～10b河南卢氏(栽)0.579726～29e山东沂南(野)0.6928 11～15c河南卢氏(野)0.964930～32f山东沂水(栽)0.369016河南灵宝(栽)33～35g山东沂水(野)0.806917河南灵宝(野)36山东莱芜(栽)18河南洛宁(栽)37山东莱芜(野)19河南洛宁(野)38～40h河北承德(栽)0.058520河南嵩县(栽)41～43i山西垣曲(栽)0.149521河南嵩县(野)44湖北武当山(野)0.1266B iofug e Stra tos,PCR仪为PERKIN ELM ER公司生产的Gene Am p PC R System9600,电泳仪为BIO-RAD公司生产POW ER PAC300。
Taq酶、DN A ladder(华美公司),dN TP、随机引物(上海Sango n),EB(SIGM A),β-巯基乙醇(M ERCK), Tris碱(GIBCO),EDT A(AM RESCO),琼脂糖凝胶(Spanish),其他溶剂为分析纯。
1.3 DN A提取方法:将丹参叶片约0.4～0.5g置于乳钵中,加入约40mg(重量约占叶片10%)PV P-40T(聚乙烯吡咯烷酮),在液氮环境下研磨成细粉状,装入离心管,加入4℃的提取液Ⅰ(0.25m ol/L Na Cl,0.25mo l/L Tris-HCl,50mm ol/L EDT A, pH=8.0),冰置10min4℃,7000r/min离心10 min,弃去上清液,加入65℃已预热的提取液Ⅱ(即2×CT AB)3.5m L(其中已加Vc0.4g,并调p H为6.0～ 6.5),再加2%的β-巯基乙醇约70μL,轻微振摇后放进水浴锅内65℃恒温1h,期间不断振摇。