血清丙氨酸氨基转移酶活力的测定

血清丙氨酸氨基转移酶活力的测定
项目 血清/μL 血清 ALT底物液 底物液/mL 底物液 测定管 10 0.50 0.50 2,4-二硝基苯肼液 二硝基苯肼液/mL 二硝基苯肼液 混匀 血清/μL 血清 0.4mol/LNaOH/mL — 5.00 置于37℃水浴保温 置于 ℃水浴保温20min 10 5.00 对照管 — 0.50 0.50
丙酮酸 + 2,4 - 二硝基苯胫 → 丙酮酸 - 2,4 - 二硝基苯腙 + H 2 O
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OH —
• 丙酮酸-2,4-二硝基苯腙在碱性环境中呈现红棕色， 颜色的深浅与丙酮酸含量成正比，与标准丙酮酸的显 色进行比较，即可测定丙酮酸的含量。 • α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯腙结合成相应的苯 腙，在碱性条件下显色。两种苯腙的吸收光谱有差异， 在520nm比色时，丙酮酸-2,4-二硝基苯腙的吸光度值 远较α-酮戊二酸苯腙高。反应30min后，α-酮戊二 酸量减少而丙酮酸量增高，在一定范围内，520nm处 吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二 酸的物质的量之比呈线性关系。
0.50 混匀
0.50 置37℃水中 ℃ 5.0 57
0.50 水浴20min 水浴 5.0 97
0.50
0.4mol/L NaOH/ml 相当于ALT活 相当于 活 力（卡门氏 单位） 单位）
5.0 0
5.0 28
5.0 150
实验操作
• 将上述各管混匀，室温放置10min后以蒸馏 水调零，用520nm波长比色，读取各管吸 光度，然后以各管吸光度减去0号管的吸光 度之差（An-Ao）为纵坐标，各管相应的 转氨酶活力单位为横坐标，绘制标准曲线 • 取试管2只（标明测定管和对照管），将测 定前将底物液在37℃水浴中预温5min，再 按下表操作
血清丙氨酸氨基转移酶活力的 测定（改良赖氏法） 测定（改良赖氏法）
主讲人：杨宇光 主讲人： 小组成员： 小组成员：刘婷婷 刘杰 陈琪 杨宇光
实验目的
• 了解血清丙氨酸氨基转移酶活力单位的定 义 • 掌握血清丙氨酸氨基转移酶活力单位的测 定方法和临床意义
实验原理
ALT 丙酮酸 + α - 酮戊二酸 ← → 谷氨酸 + 丙酮酸
实验操作 0.00 丙酮酸标准
编号 0 液/ml ALT底物试剂 底物试剂 /ml 盐缓冲液 （pH=7.4） ） /ml 2,4-二硝基苯 二硝基苯 肼液/ml 肼液 0.50
1 0.05
2 0.10
3 0.15
4 0.20
0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 （1）标准曲线的绘制：取试管5支， 按表操作。 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.1mol/L磷酸 磷酸
• 混匀，室温放置10min后，以蒸馏水调零， 在520nm波长处比色，读取吸光度，用T管 得吸光度减去C的吸光度，查标准曲线，即得 到待测血清中所含ALT的酶活力。
临床意义
• ALT广泛存在于机体的各种组织中，但肝细 胞中含量最多，当肝脏有病变特别是急性 肝炎或肝细胞坏死时，血清中ALT的活力显 著升高