法国ABX血液分析仪检测原理

ABX Pentra系列五分类血细胞分析仪简介ABX Pentra系列全自动五分类血细胞分析仪，采用了白细胞计数通道，双鞘流检测通道(LMNE散点图)和白细胞/嗜碱细胞（WBC/BAOS）通道同时进行检测来完成白细胞五分类的全面分析。

LMNE检测通道采用三种技术原理同时进行白细胞的分类：1、双鞘流原理（DHSS）2、细胞化学染色（Cytochemistry）结合吸光法原理3、鞘流阻抗技术（Focused Flow Impendance）。

白细胞/嗜碱细胞检测通道：采用生物溶解技术，阻抗技术，域值界标技术进行白细胞计数及嗜碱细胞的检测。

ABX采用了先进的DHSS专利检测技术，在分析五分类的同时能够检测两群异常白细胞亚群：①巨大未成熟细胞（LIC）百分比及绝对值②异型淋巴细胞（ALY）百分比及绝对值。

ABX先进的白细胞分类原理能够满足临床对异常细胞群的较高检测灵敏度，能够提供82种不同的报警信息及提示信息，形成了一套非常完整的白细胞分类的报警系统。

检测技术介绍：⑴流式细胞技术（FCM）：在此检测器中，细胞/颗粒在鞘流液的作用下，聚焦成一条单个细胞排列的直线，然后依次通过流式通道中的检测器，进行细胞的不同物理/化学参数的测定。

⑵ DHSS技术（Double Hydrodynamic Sequential System）简称双鞘流系统：流式通道中有二个检测装置①60µm鞘流微孔用于细胞体积的测定②42µm的光窗测定吸光比率由于分析细胞的内容物。

细胞经鞘流稀释液作用，排列在流式通道中央，细胞经第一束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真正体积，然后经第二束鞘流后，到达光窗进行细胞的光散射及光吸收的测定，分析细胞的内部结构。

ABX DHSS通道应用此技术，实现了对大量细胞进行依次、准确、快速的测定。

技术优势：¾避免了多个细胞同时通过检测器而造成的计数误差¾防止气泡及静电的队细胞分类的影响，大大提高了白细胞分类的准确度及精密度¾可识别两类异常白细胞亚群：不大未成熟细胞（LIC）及异型淋巴细胞（ALY）¾样品稳定期（Post-draw）：超过48小时⑶时间检测装置（Time Fixed Device）：ABX DHSS独特的设计，能够保证每个细胞依次通过鞘流微孔，检测细胞体积测定，在200µs内细胞应到达光窗，检测细胞的光散射/吸收，进行细胞内容物的分析。

此检测装置能够有效防止气泡及静电的干扰，保证获得高精度的白细胞的分类结果（LMNE散点图）。

⑷细胞化学染色技术（Cytochemistry）：是经典的细胞分类技术，此染色剂中含有溶血素及氯唑黑活体染料（Chlorazol Black E）。

在仪器的LMNE检测池中，全血样品与染色剂充分混匀，在35度下进行孵育，此过程的作用为：①溶解红细胞②对单核细胞的初级颗粒、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的特异颗粒进行不同程度的染色，同时对细胞的膜（细胞膜、核膜、颗粒膜）也进行不同程度的着色③固定细胞的形态，使其保持自然状态。

由于淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞对染色剂的着色程度不同、每种细胞特定的细胞核形态和颗粒的结构造成光散射的强度不同，产生了特定的吸光比率。

注：细胞化学染色技术请参阅Lawrence Kass M.D.Staining of Granulocytic Cells by Chlorazol Black E 0002-9173/81/1200/0810-0812;American Society of Clincial Pathologists.⑸生物溶血素技术：在嗜碱细胞检测通道中，全血样品与BasylyseII（PH2.4）溶血素结合，嗜碱细胞保持自然状态，红细胞完全溶解，而其他百细胞膜被破坏，胞浆溢出，形成膜包裹核的状态，应用阻抗原理进行体积分析。

⑹浮动界标技术：主要应用在血小板检测及嗜碱细胞的检测，直方图的最大界标依据细胞群的变化做出相应的调整，是不断变化的。

⑺白细胞平衡检测原理（WBC Count Balance）：白细胞的计数在WBC/HGB通道中，同时此结果与LMNE双鞘流池及WBC/BASO通道结果相联系。

⑻血小板的防返流装置：为了防止涡流现象对血小板计数的影响，ABX采用了一种真空装置有效的减少了涡流现象的影响。

白细胞分类的方法学：1.细胞经染色孵育后，到达光窗检测侧细胞的吸光比率,将此光信号转化为仪器可识别的电子脉冲信号，脉冲信号的大小及形状与被检测的细胞的核及颗粒具有一致性。

从而可以反映了每个被检测细胞的内部结构特性（核，颗粒的特性），为精确分析白细胞分类提供了可靠信息。

在DHSS检测通道中，鞘流微孔提供了细胞真正的体积，光窗检测提供了细胞特异性的吸光比率，将两个参数分别设定为LMNE散点图的X轴和Y轴，把每一个细胞分别定位在相应的矩阵中，此两种技术完美结合提供了科学、全面的白细胞分类原理。

阻抗（细胞大小）ABX DIAGNOSTICS -SAUDI ARABIA -April 1999LMNE分类散点图演示⑴淋巴细胞：典型的淋巴细胞体积较小、形态规则、胞浆内没有颗粒，其吸光率最低，所以定位在散点图的右下部矩阵中，正常淋巴细胞散点图为正态体积分布。

⑵单核细胞：典型的单核细胞体积较大、肾状核、胞浆内有初级颗粒（几乎不着色），细胞核一般不分叶，光散射较少，所以位于吸光率轴的最下端，依据单核细胞的体积，位于体积轴的最右端。

另外，异常单核细胞及特大单核细胞可出现在LIC(巨大未成熟细胞)矩阵中。

⑶中性粒细胞：典型的中性粒细胞具有中性颗粒及核的分叶结构，中性颗粒部分着色，同时由于颗粒及核的分叶等形态上的复杂性，而产生的光散射。

所以中性粒细胞群散点图位于中部。

核分叶越多的中性粒细胞，吸光性越强，在散点图上的位置向右移。

同时杆状细胞（Bands）体积与中性粒细胞接近，但核的复杂程度低，吸光率低，散点图位于中性粒细胞与单核细胞之间。

⑷嗜酸性粒细胞：由于嗜酸性粒细胞含有特异颗粒，与染色液特异性着色，其着色强度最深，位于Y-轴的最上端，此方法提高了嗜酸性粒细胞的分类的准确性。

⑸巨大未成熟细胞（Large Immature Cell）：未成熟粒细胞因其体积较大，可含有颗粒，光散射强，位于嗜中性粒细胞散点图的右侧，在LIC矩阵图中从左到右依次排列晚幼粒、中幼粒、早幼粒细胞，另外各种原始细胞位于单核细胞的右侧区域中。

由于此散点图中可能有大单核细胞，引起LIC假性计数的增加（LIC的计数结果被计算到在嗜中性粒细胞中）。

LIC包括：大单核细胞、高嗜碱性的单核细胞、巨大中性粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、原始细胞。

⑹异型淋巴细胞(Atypical Lymphs)：在散点图中位于淋巴细胞与单核细胞之间的一群细胞，包括：小原始粒细胞、大淋巴细胞、反应性淋巴样细胞（Reactive lymphoid forms）、刺激性淋巴细胞（Stimulated lymphocytes）、浆细胞等。

嗜碱细胞的检测通道：在WBC/BASO 检测池中，全血样品与BasolyseII （PH2.4）溶血素混合，在35°C 恒温下，溶解红细胞，由于嗜碱性粒细胞具有抗酸性，能够保持形态完整，而其他白细胞胞浆溢出，成为裸核状态。

细胞通过鞘流微孔(80µm)，每个细胞产生于细胞体积成比例的电子脉冲，绘制WBC/BASO 直方图。

依据阈值设定，区分白细胞裸核与嗜碱性粒细胞。

Parameters (12)Basophils嗜碱性粒细胞测定为了更好的保证白细胞的总比为100%，仪器会用嗜碱细胞计数结果对中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞进行校正。

从而保证了LMNE 分类通道与WBC/BASO 检测通道协调合作，完成了白细胞全面的分类结果。

LMNE散点图的矩阵/阈值设定仪器出厂时，设定了各细胞群的分界阈值，在正常情况下，每种细胞分配到不同的散点图中，如果某种细胞的形态学发生改变，相应的散点图会发生相应的变化，用户可依据散点图的变化来判断白细胞的各亚群的生理/病理的变化。

X-轴，Y-轴各设定为128计数通道（0-127），共分为13个标尺，每个标尺设定为10个通道，仪器用通道数表示阈值。

用户可通过调整阈值参数，达到最佳的分类效果，也可调整仪器的筛选灵敏度。

一般情况下，仪器在出厂时已经调整为最佳状态，不需调整，如果必须调整时，应取得厂家授权工程师的认可，同时所修改的阈值应在限定范围内。

调整的条件：¾由于抗凝剂的种类或数量的改变及仪器内部调整后，进行调整达到最佳的白细胞亚群的分离的效果。

¾修改仪器的报警限，提高仪器的检测灵敏度。

¾为了科研的需求，提高特定细胞亚群的分类精度，修改1个或多个矩阵图。

白细胞分类报警/提示信息简介：ABX系列五分类血细胞分析仪为了提高对白细胞异常细胞群的变化的检测的灵敏度，在LMNE散图中提供了一套完善的白细胞分类异常时的报警系统（提供相应的病理信息）。

临床血液检验医师应能够依据散点图的变化，实现更加准确的诊断及疗效观察，如果没有注意到这些报警提示，可能会影响检测的灵敏度。

用户通过LMNE散点图及报警系统，可实现最大限度的代替手工操作，减少了检验人员的工作量，得到最佳的筛选效果。

白细胞报警含义报告：当一个或多个的矩阵图中白细胞亚群出现异常，仪器会提示一些报警提示（带”!”符号）。

如果结果出现多个报警提示，此样品应重新测定。

(病理性、样品凝集等原因)NO−噪音干扰（在背景干扰区出现大量的颗粒）z血小板凝集z大量的血小板z抗溶血红细胞（Stroma）z有核红细胞z污染物LL−Left Lymphoctes(在淋巴细胞左区出现大量的颗粒)z小淋巴细胞z血细胞凝集。