高效液相色谱同时测定饲料中三种抗生素
SDS作用下土壤中四环素类药物的解吸性能
SDS作用下土壤中四环素类药物的解吸性能王勇力;刘金彦;王璐【摘要】高效液相色谱法可同时测定三种四环素类抗生素:四环素(TC)、金霉素(CTC)、差向金霉素(CQC),本文利用该方法分析SDS作用下四环素在土壤中的解吸性能.采用C18色谱柱(3.9 mm×150 mm,5μm),流动相为N,N-二甲基甲酰胺:水:2 mol/L磷酸溶液=28:70:2,紫外测定波长λ=365 nm,柱温35℃.四环素、金霉素、差向金霉素保留时间分别为1.40 min、10.64 min、8.62 min.实验结果表明,加入表面活性剂SDS对土壤中单一的四环素和三种四环素类药物都有解吸作用;在表面活性剂浓度为6 cmc,作用时间为10h的条件下,三种四环素类抗生素解吸作用都达到了60％以上.【期刊名称】《能源环境保护》【年(卷),期】2019(033)001【总页数】4页(P33-36)【关键词】高效液相色谱;四环素类抗生素;解吸作用;土壤【作者】王勇力;刘金彦;王璐【作者单位】内蒙古科技大学化学与化工学院,内蒙古包头014010;内蒙古科技大学化学与化工学院,内蒙古包头014010;内蒙古科技大学化学与化工学院,内蒙古包头014010【正文语种】中文【中图分类】X53由于四环素类抗生药物具有广谱抗生活性，可用于抗革兰阳性和阴性菌感染[1,2]，并且价格便宜，经常作为饲料添加剂给禽畜进食。
通过食物链进入人体富集，对人体产生伤害，同时动物的排泄物也会对土壤造成污染，其环境行为受到广泛关注[3,4]。
近年来，有人提出表面活性剂强化土壤修复技术，即利用表面活性剂增溶洗脱土壤颗粒上的吸附态药物污染物提高生物可利用性[5,6]。
研究表明阴离子表面活性剂能够有效的解吸土壤中的抗生素。
本文发现，高效液相色谱法可以同时测试动物饲料中常见的三种四环素类抗生素，四环素、金霉素、差向金霉素。
同时研究了在阴离子表面活性剂SDS的作用下，土壤中四环素类药物的解吸性能。
应用高效液相色谱法对饲料中五种抗生素的同时检测
行紫外扫描 ， 。 结果表 明五种共均在 ２ １ ０ ｎ ｍ波长处
１ ． １ ． ２ 试剂 甲醇、 乙腈 为色 谱纯 ；甲酸 ；纯净 有吸收 ，且杂质峰影 响较小 ，因此选用 ２ １ ０ ｎ ｍ作
水 ；金 霉 素 （ ｃ ｈ ｌ ０ ｒ ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｃ ｙ ｃ ｌ ｉ ｎ ｅ ，Ｃ Ｔ Ｃ ） 氯 霉 素 为检测波长。
（ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ａ ｍ ｐ ｈ ｅ ｎ ｉ ｃ ｏ ｌ ，Ｃ Ａ Ｐ ） 、红 霉 素 （ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ， ２ ． ３ 专 属性试 验
分别取 空 白饲料 溶液 、混合
Ｅ Ｒ Ｙ ） 、罗红霉 素 （ ｒ ｏ ｘ ｉ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ，Ｒ Ｏ Ｘ） 、青 霉素 抗生素 标准 品溶液 、供试 品溶液 ，按照色谱条件 钾（ ｂ ｅ ｎ ｚ ｙ ｌ ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ ｐ ｏ ｔ ａ ｓ ｓ ｉ ｕ ｍ，Ｐ Ｇ ）标准品 。 进行考 察，结果见图 １ 。
２ ０１ ３ ，１ ２
【 作者简介】 李丽 （ １ ９ ７ ８ 一 ） ， 女， 博士 ， 讲师， 研究方 向为药物新剂
型 的研究 。
『 通讯作者】 陈立江（ １ ９ ６ ９ 一 ） ， 硕 士， 教授 ， 研 究方向为药物 新剂型
及药物机理 。
ｆ 基金 项 目１ 沈阳 市科技计划项 目“ 动物饲料 中多种抗生 素检测
的技术服务” （ Ｆ Ｉ １ － ２ ５ ５ — ４ — ０ ０ ）
畜牧 兽 医
饲黹 ｉ Ｉ 兽药
峪予华 仪器厂 ） ；旋转蒸发 器 （ Ｒ Ｅ ５ ２ — ９ ９ ，上海亚 Ｒ Ｏ Ｘ 、Ｐ Ｇ 对照品溶液在２ ０ ０ ， － ￣ ８ ０ ０ ｎ ｍ波长范围内进
高效液相色谱法在抗生素类药物分析中的应用分析
利用高效液相色谱法可以进行快速分析，有效节约分析时间，随着现代技术的应用，各种新设备不断被开发应用在抗生素的药物分析中，高灵敏检测器灵敏度非常高，为抗生素药物快速准确分析导向基础，就目前的高效液相色谱法应用来看，此种方法广泛应用在头孢他酶酯药物分析中，在整个研究过程中进行质量控制。
3）体内药代动学和生物等效能研究
现代技术不断创新在实践中广泛应用，高效液相色谱分析法的优势非常明显，所以在临床上经常被用来进行血药浓度检测，除此之外也可能被利用来测定药物所含有的代谢产物含量和相关的效能研究。有学者针对此方面进行实验研究，实验过程中选择合适数量的志愿者，此些志愿者都是健康人群，实验初期首先让他们禁食12小时，在病人静脉抽取3毫升的静脉血进行备用，然后让志愿者口服盐酸头孢他酶酯药剂，每人服用0.5克，然后再次抽取3毫升静脉血，分别把两次抽取的血清进行分离处理，利用专业仪器准确测量取出0.2毫升，在精密吸取的血浆内部加入0.2毫升浓度为6%的高氯溶液，然后震荡摇匀之后进行离心处理，在高效液相色谱分析仪器中加入上清液，分析血浆情况了解服药后不同时间药物活性含量，并且分析药物代谢物的时间以及整个过程，在经有效总结之后为临床提供数据参考。
三、HPLC及其联用技术在药物分析中的作用
临床医学研究在现代化发展过程中不断深入，结合现代新技术研发各种新设备，从高效液相色谱分析方法提出之后在实践中研发相关设备仪器，当前发展条件下高效液相色谱仪的色谱柱和检测器等相关构件性能不断完善，在实践中不断创新有了新的发展，特别是为了满足人们当前的分析需求，检测器快速发展结合现代技术实现各部件的改进，具体检测过程中各种新方法不断涌现，而且设备的灵敏度也不断提高。比如在进行多糖蛋白质类药物快速检测时为了了解其高分子质量物质可以利用小角度激光散射检测器进行分析，此时可以准确了解其中的高分子质量物质分布，而且样品分析过程中不需要选取标准物质进行对照。除此之外当前联用技术快速发展应用逐渐广泛，在高效液相色谱分析时结合此项技术可以获得新发展。在分析过程中通过高效液相色谱后续联合热喷雾-质谱，可以实现对同一种溶液的同步分离检测，了解不同组分的实际情况，基于此可以有效提升高效液相色谱分析的效率，节俭相关步骤可以降低检验分析所需的样品量，消耗较低的流动相，可以实现药物分析成本的缩减；除此之外还可以实现高效液相色谱与核磁共振的联用进行抗生素药物杂质测定分析，在分析过程中可以实现分子离子的多级裂解状态，从而可以获取化合物分子量相关信息并且获取一定的碎片信息，此时进行信息总结可以了解整个结构信息，以此为基础进行分析，在技术联合应用过程中的干扰因素比较少，比如流动相的缓冲盐溶液此时对分离检验不存在干扰的作用。
高效液相色谱法检测饲料中的硝基呋喃类药物
２６ 混合 型 阳离 子交 换柱 ： ． 规格 为 ６ ｍ 。 ０ ｇ ２７ 微孔滤 膜 ： 格 为 ０２ ｍ。 ． 规 ．１ ｘ ２８ 呋喃西 林 （ ｉｏｕａｏ ｅ ： ． Ｎ ￣ ｆｒ ｎ ） 纯度 Ｉ９ ％。 ｚ ＞ ９ ２９ 呋喃妥 因（ ｉｏｕ ｎｉｎ ： 度 Ｉ９ ％。 ． Ｎ ｔ ｆａ ｔ ）纯 ＞ ９ ｒ ｏ ２１ 呋 喃它酮 （ ｕＭ ａ ｏ ｅ ： 度 ＞９ ％。 ． ０ Ｆ ｒ ｔｄ ｎ ）纯 １ ９ ２１ 呋 喃唑酮 （ ｕａｏｉｏ ｅ ： 度 Ｉ９ ％。 ．１ Ｆ ｒｚｌ ｎ ）纯 ＞ ９ ｄ ２１ ２ ． ２ ％甲酸 溶液 ： 甲酸＋ ＝ ＋ ８ 水 ２９。 ２１ ｌ ．３ ％氨水 溶液 ：５ ３ ％氨水＋ ＝ ＋ ９ 水 １９ 。 ２１ 固相 萃取 柱洗脱 液 ：％氨水＋ ． ４ ｌ 甲醇＝ ０ ７ 。 ３ ＋０ ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准 贮 备 液 （０ ｍ￣ ． ５ １０ ｍＬ ： 称 取 ４ 种 硝 基 呋 喃 类 药 物 （． ，． ， ） ２８ ２９ ２１ ，．１ 各 １ ０ （ 确 到 ００ ０ ｇ 于 １ｍＬ容 ． ２１ ） ０ ． ｇ精 ０ ． １） ０ ０ 量瓶 中 。 乙腈溶 解定 容 。一 ０ 用 ２ ℃保存 ６个月 。 ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准贮 备 液 （０ １ ／ ．６ ２ ０ｘ ｇ
中 的硝 基 呋 喃 类 药 物 。 缩 近 干 ， ２ 甲酸 溶 解 ， 混 合 浓 用 ％ 经
除非 另有 说 明 ． 分 析 中仅使 用 确 认 为分 析 在 纯 的试 剂 和 Ｇ ／ ６ ２ ２ ０ （ 析实 验室 用水 规 ＢＴ ６ ８ — ０ ８ 分 格 和试 验方 法》 中规定 的二级 水 。
超高效液相色谱法测定饲料中斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯含量方法的研究
DOI :10.15906/11-2975/s.20210316基金项目:贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2019]2318号);贵州家禽产品质量安全风险监测专项(GZ2020JQFX01);家禽产品质量安全监测关键技术研究与示范项目(GZ2020JQFX0101)*通讯作者[摘要]为有效快速测定饲料中斑蝥黄和β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯含量,饲料经甲醇、正己烷和乙酸乙酯混合液萃取后,在氮气保护下浓缩,用甲基叔丁基醚-乙腈溶液复溶,注入超高效液相色谱仪中进行测定。
结果表明:斑蝥黄浓度为1.25~10.0μg/mL ,β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯为2.50~20.0μg/mL 线性关系良好;斑蝥黄和β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯的检测限为0.06mg/kg ,定量限为0.20mg/kg 。
斑蝥黄5个添加水平的平均回收率为72.8%~82.8%,相对标准偏差(RSD )为0.41%~1.06%;β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯5个添加水平的平均回收率为72.0%~82.8%,RSD 为0.46%~1.41%。
说明该方法简便、快速、灵敏度高、准确度好,适用于测定饲料中斑蝥黄和β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯含量。
[关键词]超高效液相色谱法;斑蝥黄;β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯;含量;饲料[中图分类号]S816.17[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2021)03-0078-05斑蝥黄又称角黄素、斑蝥黄质,化学名称为β,β-胡萝卜素-4,4-二酮(汪洪涛等,2003),存在于某种蘑菇、甲壳类、鱼类、藻类、蛋、血液、肝脏等中,含量极微(凌关庭等,1989),可增加禽皮肤、脚、酮体和蛋的颜色及亮度(王慧文等,2015),应用于鸡饲料中给“三黄鸡”和蛋黄着色(付叔海和刘婷,2017)。
β-阿朴-8'-胡萝卜素酸乙酯又叫阿朴胡萝卜素酸乙酯或阿朴酯,是类胡萝卜素中一种含氧的阿朴胡萝卜素类化合物(朱基美,2012),可用于蛋黄和鸡肉皮肤着色,对家禽的皮肤、脚胫和皮下脂肪着色有明显作用(张洪丽,2016)。
同时测定饲料中乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮3种药物方法的研究
同时测定饲料中乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮３种药物方法的研究摘要建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定饲料中乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮3种药物含量的方法，饲料中3种药物经磷酸盐缓冲液（pH值3.0）-乙腈-甲醇（55∶25∶20）超声提取，采用Waters公司C18（4.6×250mm，5μm）色谱柱，流速1.0mL/min，进样量20μL，柱温24℃，检测波长260nm。
该色谱条件下，3种药物分离良好，在2～100μg/mL之间，线性良好（r＞0.999 6），平均添加回收率均高于80%，RSD≤10%，检出限2mg/kg。
该方法操作简便易行，准确可靠，能够满足实际样品的分析要求。
关键词饲料药物测定；乙酰甲喹；喹乙醇；喹烯酮；高效液相色谱法喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮是喹噁啉类合成抑菌药物，该类药物具有抗菌效果好、促生长、价格便宜等优点，被广泛添加到饲料中用于生产养殖，但由于不正确使用，中毒事件时有发生，同时该类药物的残留对人体具有潜在致癌性和产生抗药性的可能，国际上大多数国家将其列为限用药物。
我国对饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮单个检测研究较多，但对于饲料中3种药物多残留检测方法研究较少。
因此，建立一种准确、高效地同时测定饲料中3种药物多残留的检测方法十分必要。
试验采用高效液相色谱法同时测定饲料中乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮3种药物，该方法的建立将为饲料产品中其他喹噁啉类药物多残留检测提供参考。
1 材料与方法1.1药品、试剂喹乙醇、乙酰甲喹、喹烯酮对照品（纯度>98%）均购自中国兽医药品监察所；乙腈、甲醇：色谱纯，美国Fisher Chemical公司；二甲基甲酰胺、三乙胺、85%磷酸均为国产分析纯。
1.2 仪器与设备Agilent 1100高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；十万分之一天平、pH 酸度计（赛多利斯公司）；离心机（日立公司）；超声波仪（江苏昆山市超声仪器有限公司）；超纯水器（成都康林公司）。
超高效液相色谱法检测饲料中四种硝基呋喃类药物
超高效液相色谱法检测饲料中四种硝基呋喃类药物彭莺;吴治将;殷少有【摘要】对饲料中硝基呋喃类药物呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林的超高效液相色谱检测方法进行了研究.采用0.1%甲酸水-乙腈超声提取样品中的待测物,经MCX固相萃取小柱净化后用超高效液相色谱法测定,检测波长为365nm.呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因在0.1-25 mg/L均与对应峰面积呈良好线性关系.对饲料进行硝基呋喃类药物的添加回收实验,添加质量浓度为0.25 mg/kg、5 mg/kg和100 mg/kg时,回收率在79.6%-85.5%之间,变异系数在3.9%-5.2%,方法检出限为0.25 mg/kg.结果表明,该法操作简便、灵敏、准确,适用于饲料中硝基呋喃类药物含量的测定.【期刊名称】《顺德职业技术学院学报》【年(卷),期】2010(008)001【总页数】3页(P13-15)【关键词】呋喃唑酮;呋喃它酮;呋喃西林;呋喃妥因;超高效液相色谱法【作者】彭莺;吴治将;殷少有【作者单位】广州市质量监督检测研究院,广东,广州,510110;顺德职业技术学院,机电工程系,广东,佛山,528333;顺德职业技术学院,机电工程系,广东,佛山,528333【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2呋喃西林，亮黄色结晶性粉末；无臭，味初淡，余味发苦。
日光下色渐变深黄色。
极微溶于水，微溶于乙醇，溶于碱性溶液后色泽渐变为暗棕色，饱和水溶液酸碱度为5.5～7.5，是呋喃类药物中的一种，属于抗感染常用的药物，能干扰细菌的糖代谢过程和氧化酶系统而发挥抑菌或杀菌作用，主要干扰细菌糖代谢的早期阶段，导致细菌代谢紊乱而死亡，其抗菌谱较广，对多种革兰阳性和阴性菌有抗菌作用，对绿脓杆菌抗菌力弱，对假单孢菌属及变形杆菌属有耐药性。
在体外能抑制一般的细菌，高浓度时可杀菌。
呋喃妥因，是具有广谱抗菌性质，主要用于水产中疾病预防和治疗，对葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奈瑟球菌（淋球菌等）、枯草杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等有良好的抗菌作用；对变形杆菌、克雷白杆菌、肠杆菌属、沙雷杆菌等作用较弱；对绿脓杆菌无效。
高效液相色谱法同时测定饲料及兽药中四种硝基呋喃类药物
Ａｕ ｓ ｕｇＧｅｍａ ｙ 乙腈 （ 谱纯 ） 甲醇 （ ｇ ｂ ｒ ｒ ｎ ； 色 、 色谱 纯 ） 、
二 甲基 甲酰胺 （ 色谱 纯） 正 己烷 （ 、 色谱 纯） 无水 硫酸 、 钠（ 分析 纯） 天津科 密欧公 司 ） （ 。
临用 时 吸取 １ ０ ． ｍＬ混合 标准 中间液 ， 用 定容 使
Ａｇｌ ｔ１ ０高效 液相 色 谱仪 ， ｉｎｌ０ ｅ 配置 Ｄ ＡＤ检 测 器 ， 国 Ａｇｌｎ 科 技公 司 ； 涡混 合仪 Ｘ ～ ０ 美 ｉ ｔ ｅ 旋 Ｗ ８ Ａ， 上海青浦 沪西仪 器厂 ； 离心机 ＴＤ 一 一 上海 飞鸽 Ｌ ５ Ａ，
分别 吸取 １ ． ｍＬ 的 四种 标 准 品储 备 液 ， 乙 ００ 用
腈稀 释 定 容 至 １ ０ ０ ｍＬ， 成 浓 度 为 １ ￣ ／ 制 ０ ｇ ｍＬ的混
１ 材 料 与 方 法
１ １ 仪器 与材料 ．
Байду номын сангаас
合 标准 中间 液 ， ～４ ｏ ℃避 光保存 。
１ ３ ３ 混合 标准 工作液 ．．
１ ３ 标 准溶 液的配 制 ．
１ ３ １ 标 准 储 备 液 ．．
分别 准确称 取 １ ． ０ ０ （ 确 至 ０ ０ ０ ｍｇ ０ ０ ０ ｍｇ 精 ． ０１ ） 的四种硝基 呋 喃标 准 品 ， 中 ， 喃它 酮 、 哺西林 其 呋 呋
使用 。在 国内外 已经 发表有 关硝基 呋喃 类抗生 素 ］ 的残 留检测方 法 的文 献 中 ， 期 的文献 报道 大 多数 早
溶 剂稀释 定容 至 １ｍＬ， 制成 ｌ ／ ０ 配 ｍｇ Ｌ的混 合标 准
工 作液 。
１ ４ 试 剂 的 配 制 ．
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D /% 88. 0 60. 0
88. 0 70. 0
注 : C表示乙腈 , D 表示磷酸二氢钠
结果表明 ,洗脱方式 ⑤对低浓度的检测灵敏 度不高 ;方式 ⑥、⑦、⑧中 , 13m in时随着乙腈浓度 的增大 ,三种物质的保留时间提前 ,分离度变小 , 综合考虑 ,选择梯度洗脱方式 ⑦。 2. 1. 3 柱温的优选 实验结果表明 ,随柱温升 高 ,三种目标物的保留时间提前 ,而色谱峰更高更 窄 。40℃时 ,色谱峰出现细小分叉导致色谱峰变 宽 ,对称性差 ; 30℃时 ,色谱峰出现拖尾 ; 35℃时 , 三种物质的色谱峰高而窄 ,对称性好 ,因此选择柱 温为 35℃。 2. 1. 4 流速的优选 分别设定流速 0. 8mL /m in、 1. 0mL /m in、1. 5mL /m in、2. 0mL /m in,测定混合标 准溶 液 。实 验 结 果 表 明 , 流 速 1. 5mL /m in 和 2. 0mL /m in时 ,杂质色谱峰和目标物色谱峰不能完 全分离 , 0. 8mL /m in和 1. 0mL /m in时 , 3 种目标物 得到了很好的分离 ,但流速 0. 8mL /m in,分析时间 太长 ,故选择流速为 1. 0mL /m in。 2. 1. 5 进样量的优选 分别设定进样量 5μL、 10μL、15μL、25μL , 测定混合标准溶液 。结果 表 明 , 15μL、25μL 进样量时 ,色谱峰变宽变低 ,对称 性差 ,柱效低 ; 5μL、10μL 进样量时 ,色谱峰对称性
(1)乙二酸溶液 :
[C
(
1 2
H2 C2 O2
)
= 0.
01mol/L ]
乙二酸溶液 +乙腈 (色谱纯 ) +甲醇 (色谱
纯 ) = 10 + 3 + 2
(2) 15%甲醇 (色谱纯 )溶液 (用乙酸调 pH 到
2. 8) (3)乙腈 + 0. 01mol/L 磷酸二氢钠溶液 (用
10%的磷酸调 pH 到 2. 5) = 25 + 75 (4)乙腈 + 0. 02mol/L 乙酸铵溶液 = 25 + 75 实验结果表明 ,对四种不同流动相 ,三种目标
至 100mL。 标准工 作 液 用 时 可 根 据 需 要 将 标 准 储 备 液
稀释 。
2 结果与讨论
2. 1 高效液相色谱参数的优选 本实验采用单因素法 ,对影响反相 HPLC 同
时测定土霉素 、四环素 、金霉素的主要参数流动
相 、流速 、柱温 、进样量和检测波长等进行优选 。
配制以下溶液 : 13 —土 霉 素 ( 100. 0μg/mL )、四 环 素
第202019卷年第1月1期
化学研究与应用 Chem ical Research and App lication
文章编号 : 100421656 (2009) 0120025206
Vol. 21, No. 1 Jan. , 2009
高效液相色谱同时测定饲料中三种抗生素
姚玉玲 1 ,李绍波 2 ,万喻平 2 ,黄 荔 2 ,但德忠 13
分别用表 1中四种不同的梯度洗脱方法 ( ①、
第 1期
姚玉玲等 :高效液相色谱同时测定饲料中三种抗生素
27
②、③和 ④)对 13 标准混合溶液进行测定 。
表 1 四种不同的梯度洗脱方法 (13 混合溶液 ) Table1 Four types of gradient elution methods( for 13 m ixture standard solution)
洗脱方式 ⑤
⑥
时间 /m in
0. 0 7. 0 14. 0 0. 0 13. 0
C/%
12. 0 12. 0 60. 0 12. 0 50. 0
D /%
88. 0 88. 0 40. 0 88. 0 50. 0
洗脱方式 ⑦
⑧
时间 /m in 0. 0 13. 0
0. 0 13. 0
C/% 12. 0 40. 0
中图分类号 : O65717 文献标识码 : A
自著名学者 Suann1969 年发表用抗生素作饲 料添加剂可能会使细菌产生抗药性而危害人体健 康的声明以来 [ 1 ] ,消费者限制使用抗生素做动物 促生长素的要求越来越强烈 , 一直延续到今天 。 近年来 ,添加剂因其能促进畜产品产出而被大量 用于动物饲料中 [ 2 ] ,而同时 ,由饲料安全问题引发 的事件此起彼伏 ,比如 :在动物体中出现万古霉素 抗药性事件就与将万古霉素作为饲料添加剂促进 动物生长有莫大的关系 [ 3 ] 。这些事件引起了全世 界的恐慌 ,也引起消费者对滥用饲料作饲料添加 剂越来越强烈的反对 ,同时也充分说明饲料安全 已严重威胁到人类健康和生存 。
如抗生素 (土霉素 、四环素 、金霉素等 )在饲料 中添加的数量 、方式和方法不当会产生令人担忧 的问题 :一是耐药性问题 ,抗生素添加剂的长期使 用和滥用导致细菌产生耐药性 ,而这将会给人类 健康带来了巨大危害 ;二是残留问题 ,抗生素被动 物吸收后 ,可以分布全身 ,但肝 、肾 、脾等组织分布 较多 ,也可通过泌乳和产蛋过程而残留在乳 、蛋 中 ,从而广泛地畜产品中残留 ,并且抗药性细菌会 通过屠宰和处理的过程传播到动物产品中 ,若人 类吃了含药残的肉类 ,则可使人体产生抗药性 ,引 起功能性疾病甚至中毒死亡 ,对人体的健康造成 重大伤害 。三是抗生素的大量使用对畜禽健康也 构成直接威胁 。
C/% 12. 0 12. 0 60. 0 8. 0 8. 0 60. 0
D /% 88. 0 88. 0 40. 0 92. 0 92. 0 40. 0
注 : C表示乙腈 , D 表示磷酸二氢钠
采用以上梯度洗脱时 ,第一时间段 ,乙腈浓度 在 8% ～15%间变化时 ,土霉素与四环素的保留时 间无大变化 ,随乙腈浓度增大 ,土霉素与四环素的 色谱峰变窄变高 , 灵敏度提高 , 但两者分离度变 差 ;在第二时间段 ,随乙腈浓度的增大 ,金霉素的 保留时间提前 。综合考虑土霉素与四环素的灵敏
近年来 ,一些工作者在这方面进行了探索 ,取 得了一定的效果 。 Furusawa描述了一种用于检测 鸡蛋中 OTC, TC, CTC 和 DC 的简单方法 ,它具有 分析时间短 (一次分析少于 30m in) 、有机溶剂用 量少 、精密度高的优点 [ 9 ] 。M aria Jose Gonzalez de la Huebra等建立了用 HPLC2ECD 检测一系列大环 内脂抗生素的方法 ,但主要工作是在获取的析出 物的净化上 [ 10 ] 。国内外对土霉素 、四环素 、金霉 素这三种抗生素的检测研究主要集中在畜禽肉制 品 、鸡蛋 、蜂蜜 、水产品以及其它动物源性食品中 。 而目前 ,我国现有的标准也仅有用于禽 、畜类和水 产品中这三种抗生素的测定 ,以及检测饲料中金 霉素的测定方法 [ 11 ] ,缺少土霉素 、四环素的国家 标准检测方法 ,更未实现对三种物质同时测定 。
洗脱方式 ①
②
时间 /m in 0. 0 7. 0 14. 0 0. 0 7. 0 14. 0
C/% 15. 0 15. 0 50. 0 14. 0 14. 0 70. 0
D /% 85. 0 85. 0 50. 0 86. 0 86. 0 30. 0
洗脱方式 ③
④
时间 /m in 0. 0 5. 0 13. 0 0. 0 5. 0 13. 0
乙腈 ( HPLC 级 , J. T. Baker 公 司 ) ; 甲 醇 (HPLC 级 , Fluka 公司 ) ; 土霉素 、四环素 、金霉素 标准品 ;磷酸二氢钠溶液 ( 0. 01mol/L , pH2. 5) ;去 离子水 。
标准储备液 : 土霉素 、四环素 、金霉素浓度分 别为 100. 0μg /mL、101. 6μg /mL、100. 0μg /mL。准 确称取土霉素标准品 0. 01000g、四环素 0. 01016g, 金霉 素 0. 01000g, 用 甲 醇 溶 解 、转 移 并 定 容
本文针对我国饲料中添加抗生素分析方法的 不足 ,以土霉素 、四环素 、金霉素三种四环素类抗
收稿日期 : 2008202225;修回日期 : 2008205212 联系人简介 :但德忠 (19472) ,男 ,博士生导师 ,主要研究方向环境监测与仪器分析 。 Email: dandezhong@ sina. com
最佳 。 用梯度洗脱方式 ④对 23 混合标准溶液进行
检测 ,发现对低浓度混合溶液的灵敏度低 ,故需进 一步优化梯度洗脱方法 。采用表 2中四种梯度洗 脱方法 ( ⑤、⑥、⑦和 ⑧)对 23 号标准混合溶液进 行测定 。
度 、分离度和金霉素的保留时间 , 梯度洗脱方式
表 2 四种不同的梯度洗脱方法 (23 混合溶液 ) Table 2 Four types of gradient elution methods( for 23 m ixture standard solution)
土霉素 、四环素 、金霉素的结构式见图 1。
图 1 土霉素 、四环素 、金霉素结构式 Fig. 1 The structures of OTC, ETC and CTC
Compounds O TC ETC CTC
R
R1
H
OH
H
H
CL
H
1 实验部分
1. 1 仪器 带有真空除气装置 、恒流泵 、自动进样装置和
(1. 四川大学建筑与环境学院 ,四川 成都 , 610065; 2. 成都市产品质量监督检验所 ,四川 成都 , 610041)
摘要 :建立了反相高效液相色谱法同时检测饲料中土霉素 、四环素 、金霉素的方法 。色谱柱为 A ichromBond2 AQ C18柱 , 150 ×416mm ,粒度 5μm;流动相 : 0101mol/L磷酸二氢钠溶液 ( pH215) +乙氰 ,采用梯度洗脱 ,乙氰 浓度在 0～13m in内由 13%上升到 40% ;柱温 35℃;流速为 110mL /m in;进样量 10μL;检测波长 375nm。方法 检出限 :土霉素和四环素 0125μg /mL、金霉素 0150μg/mL ,回收率 91170% ～101119% , RSD < 1139% ( n = 7) 。 关键词 :高效液相色谱 ;土霉素 ;四环素 ;金霉素 ;饲料