正交实验法优选广山楂总黄酮提工艺初探

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山楂叶中黄酮类提取工艺与质量标准的研究

山楂叶中黄酮类提取工艺与质量标准的研究一、实验目的1 掌握从山楂叶中提取总黄酮的原理、方法及操作要点。

2掌握正交试验的原理及方法。

3 掌握UV含量测定、TLC的原理和方法。

二、实验原理利用正交试验法筛选最佳提取工艺，以总黄酮量为指标，芦丁为对照品进行含量测定，以得出的最佳工艺做验证实验，TLC的结果做质量标准的研究。

三、材料与仪器材料：山楂叶、芦丁标准品、聚酰胺板试剂：95%乙醇、甲酸、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3、AlCl3仪器：UV2550紫外可见分光光度计(日本岛津)、循环水式真空泵、旋转蒸发仪、抽滤装置、圆底烧瓶、冷凝管、层析缸、电子天平四、实验步骤1 山楂叶总黄酮的提取用剪刀将干燥的山楂叶剪碎，准确称取5.0g置于烧杯中，称取9份用来做正交试验，根据正交试验要求加入一定浓度、体积的乙醇回流提取一定时间。

趁热抽滤，用50ml 50%乙醇洗涤，合并滤液，减压浓缩至体积小于100ml，用60%乙醇定容至100ml，作为待测液。

2 标准曲线的制备将芦丁于120℃干燥至恒重，精密称取芦丁标准品9.28mg，用60%乙醇溶解，定容于50ml，得浓度为0.186mg/ml芦丁标准液。

准确吸取芦丁标准液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于25ml容量瓶中，每瓶加去离子水至6ml，加5% NaNO2溶液1ml，摇匀，放置6min 后加入10% Al(NO3)3溶液1ml，摇匀，放置6min后加入4%NaOH溶液10ml，去离子水定容，摇匀，15min后于500nm处测定吸光度A，得芦丁含量与A之间的回归方程。

3 山楂叶总黄酮的测定准确吸取待测液0.4ml于25ml容量瓶中，步骤同上，测定其在500nm 处吸光度，计算每组山楂叶中总黄酮含量。

算出正交试验中的K和R 值，从而得出最佳工艺。

4 验证实验根据最佳工艺，做验证实验，提取、含量测定方法如上。

5 TLC鉴定吸附剂：聚酰胺板展开剂：乙醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v）以最佳工艺提取出的溶液为供试品溶液，另取配好的芦丁对照品溶液各2-3μl，分别点于同一聚酰胺板上，以乙醇-甲酸-水（4:0.01:1 v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。

山楂中黄酮类化合物的提取研究

ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆＦｌａｖｏｎｏｉｄｓＦｒｏｍＨａｗｔｈｏｒｎｓ
ＬｉｕＸｕａｎｗａｉ，ＬｕｏＷｅｉｗｅｉ，ＤｉａｏＱｕａｎｐｉｎｇ，ＪｉＢｉｎｈｕｉ，ＱｉｎＨａｎｑｉ，ＪｉａｎｇＨａｏ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＡｎｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｓｈａｎ１１４００７，Ｃｈｉｎａ）
２试验方法２．１标准曲线的绘制
称取２０ｍｇ芦丁标准品，用甲醇溶液使其溶解，定容于１００ｍＬ容量瓶中，得０．２ｍｇ／ｍＬ的黄色透明标准芦丁溶液；并将所得溶液分别稀释得到０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ的芦丁标准溶液。以不加标准溶液的
黄酮类化合物是一类存在于自然界并具有２－苯基色原酮结构的化合物。在体内无法自主合成，只能从日常生活的饮食当中摄入［９］。近年来国内外相继开发出黄酮类的茶叶、牙膏、口香糖等产品［１０］，目前更注重研发纯度更高的保健品和药品。黄酮作为植物中非常重要的一类次生代谢产物，在植物中广泛存在，并且一直备受关注，其因独特的结构而具有良好的抗氧化、抗癌、抗菌和抗炎等功能。本实验将对黄酮类化合物的提取条件进行研究。
甲醇溶液为空白对照，在１９０ｎｍ～４００ｎｍ间进行紫外光谱扫描，不同浓度的芦丁标准溶液吸光度的测定波长以最大吸收波长为标准，绘制出标准曲线［１１］，得到线性方程。
２．２单因素试验
２．２．１甲醇浓度对黄酮提取的影响称取５份样品，用固定的料液比，固定的时间，以不同浓度

山楂中黄酮的提取研究技术

(2)温度极差从图中可得温度极差最小值出现在水平l位置，最大值出现在水平3位置，水平2和水平3之间差别不大，说明当温度升到一定值的时候，温度升高不影响黄酮提取量。
(3)时间极差水平2比水平1的增加十分明显，然而水平3 只比水平2有一点的增加。提取时间一增长，黄酮提取量就慢慢开始恒定。
这说明了各个实验因素与因素水平对山楂中黄酮提取量的影响有一定的差异，由分析结果可以得出：因素B>A>C(注：A 、提取温度 B、提取时间 C、乙醇浓度)。
(3)液料比极差液料比极差值从水平1到水平3的数值逐渐加高，但是变化幅度不是很大，这说明随着加入的液料比的增加，黄酮提取量也随着增加。
各个实验因素与因素水平对山楂中黄酮的提取用超声波法提取的影响表现出一定的差别，从极差的分析结果可以得出：因素A>B>C(注：A、超声时间 B、液料比 C、乙醇浓度)
在用索氏提取法中，使用正交实验设计分析的方法，通过4因素3水平的正交实验得出最佳提取工艺为80℃、70％乙醇、3h、液料比为20的提取。索氏提取法原理与浸渍法类似，都是根据相似相溶的原理，但是它的提取率高于浸渍法。液料比的选择为20,增大液料比，黄酮的提取效果也随之增加，但是当液料比大于20的时候，提取效率增加不大。索氏提取法提取效果比较好，可以在提取后直接在此温度下进行浓缩，减少能量损失，可以用于工业生产。
黄酮传统提取方法主要是溶剂提取法，乙醇和甲醇为常用的黄酮提取溶剂，高浓度醇(90％，95％)适于提取黄酮苷元，中等浓度醇(60％左右)适用于提取黄酮苷。提取次数一般是2-4次。溶剂提取法又分为：浸渍法、索氏提取法、超声波提取法，本文主要是比较一下三种方法。
2 实验方法
1.浸渍法

山楂中黄酮提取的研究

３结语
经过实验，萃取分离山楂中总黄酮的最佳双水相体系条件是２５％ＰＥＧ８００和１２％（ＮＨ４）２ＳＯ４，样品加入量３ｍＬ，ｐＨ＝９。在此条件下，黄酮的萃取率能达到９５％以上。因此，实验中采用ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４双水相体系萃取分离山楂中总黄酮的方法是可行的，可以作为黄酮类化合物萃取分离的一种有效方法。
摘要：通过利用紫外分光光度计测定吸光度的方法，研究了山楂中总黄酮在ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４形成的双水相系统中的萃取结果，最终的实验结果表明：在ｐＨ＝９的环境下，将３ｍＬ的粗提液加入到质量浓度２５％ＰＥＧ８００与质量浓度１２％ＰＥＧ／（ＮＨ４）２ＳＯ４形成的双水相体系中进行分离萃取，总黄酮在上、下相的分配系数和萃取率达到最高。从而确定了本实验方法对于萃取分离山楂中的总黄酮是有效的。
所有试剂均为分析纯。１．２山楂粗提液的制备
准确称取山楂碎末５ｇ，放到烧杯中，向烧杯中加入６０％乙醇１２０ｍＬ，混合５ｍｉｎ，然后将溶液转移至２５０ｍＬ容量瓶中，补加蒸馏水至刻度，摇匀，充分混合，静置４ｈ后，减压过滤得到暗红色的山楂粗提液。１．３芦丁标准溶液的配制
厂）、恒温水浴锅（上海仪器有限公司）、干燥箱（江苏曙峰企业）、分析天平（莱阳化工有限公司）。

山楂中总黄酮的提取工艺的研究【开题报告】

毕业设计开题报告应用化学山楂中总黄酮的提取工艺的研究一、选题的背景和意义总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。

在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。

山楂为蔷薇科植物山里红或山楂干燥成熟果实。

主要功能为消食健胃，行气散瘀，用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，高血脂症等。

对山楂的研究发现其具有丰富的化学成分而且具有重要的药理活性。

主要含有机酸和黄酮类化合物 , 随着药理学的发展,对山楂的药理活性研究发现其中有机酸为山楂消食化积的主要有效成份,黄酮类化合物能扩张冠状动脉,改善微循环,抗动脉粥样硬化,且可调节血脂、降低胆固醇,预防心血管疾病,临床试验证明其疗效显著且安全无毒副作用。

山楂果肉及山楂叶中含有丰富的黄酮类化合物，由于其对心脑血管疾病有显著疗效而被受人们的关注。

山楂在全国各地均有栽培,为药食同源植物。

其资源丰富,将其做为保健食品和治疗药品开发有着广阔的前景。

总黄酮的提取方法有很多，包括传统的乙醇提取方法和新型提取技术如超声提取、微波提取、超临界流体提取、酶法提取、半仿生提取法等。

不同的提取方法所提取的总黄酮的量会有所不同。

近年来国内外对茶多酚、银杏类黄酮等的药理和营养性的广泛深入的研究和临床试验，证实类黄酮既是药理因子，又是重要的营养因子为一种新发现的营养素，对人体具有重要的生理保健功效。

目前，很多著名的抗氧化剂和自由基清除剂都是类黄酮。

例如，茶叶提取物和银杏提取物。

葛根总黄酮在国内外研究和应用也已有多年，其防治动脉硬化、治偏瘫、防止大脑萎缩、降血脂、降血压、防治糖尿病、突发性耳聋乃至醒酒等不乏数例较多的临床报告。

随着对生物总黄酮与人类营养关系研究的深入，不远的将来可能证明黄酮类化合物是人类必需的微营养素或者是必需的食物因子。

二、研究目标与主要内容（含论文提纲）以总黄酮类化合物的提取率为指标，通过单因素试验和正交试验设计优化山楂中黄酮类化合物的提取工艺。

正交优选表面活性剂提取山楂黄酮的工艺研究

ｓｌｔｎ１５ｔｍｐｒｔｒｆｓａｔｎ９ ℃；ｉｆｘｒｃｉｎ１ｈｔｉｅａｄｔｅｓｌ —ｌｕｄｒｔ：０（ｍ１Ｃｎｌ．ｏｕｉ－ｏ％；ｅｅａｕｅｏｔｃｏ０ｔｏｔｔ；ｗｃｎｏｉｉｉａｉ１ｅｒｉｍｅｅａｏｈｄｑｏ４ｇ）ｏｃｕ／．
Ｏｐｉｕａｏｏｄｘｒｃｉｎｆｏａｈｒｒｉｔｕｆｃａｔｔｍｍｆｖｎｉｓｅｔａｔｏｒｍｈｗｔｏｎｆｕｔｗｉｈｓｒａｔｎｌｓ
ＰＮａｇａｇＧｉＣＥｒｇＡＦｎｆｎ，Ａ０ＪｏＨＮｎ，ｉ
（ｒｔｅｕｕｅｔｉｔｕｃ）干燥成熟果实。山楂性酸、ＣａｇｓｃｎａａＳｅｅＺｃ．的ａｂ
１２仪器．
电子天平［Ｐ４２ＳＳ０Ｆ型，特勒一利多（梅拖常州）重设备称
系统有限公司制造１Ｔ一９０双光束紫外可见分光光度计；Ｕ１０（京普析通用仪器有限责任公司）北。
Ｔｅｏｔｈｐｉｍｘｒｃｉｇｃｎｉｉｎｏｘｒｃｉｇｆａｏｅｒｍａｈｒｓｓｏｄａｏｌｗｓｍｕｅｔｔｏｄｔｆｅｔｔｖｎｓｆｏｈｗｔｏｎｗａｈｗｅｓｆｌａｎｏａｎｌｏ，ｍａｓｆａｔｎｏｗｅｎ８ｓｒｃｉｆＴｅ０ｏ
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山楂中总黄酮的提取工艺研究

山楂中总黄酮的提取工艺研究作者：高世杰齐冬梅杨虎张珊珊张锋来源：《当代化工》2019年第10期摘; ; ; 要：运用均匀试验及正交试验，以黄酮类化合物得率为指标对山楂中黄酮类化合物的超声波水提取工艺进行优化。

在固定超声功率为40 kHz的条件下，通过均匀试验设计对超声温度、超声时间、料液比三个因素进行考察，并在均匀设计结果的基础上选取因素水平进行正交试验设计，对提取工艺进行优化。

所得最佳提取条件为：超声温度60 ℃，超声时间80 min，料液比（g∶mL）1∶70。

此条件下黄酮得率达到最高，为6.99%。

关; 键; 詞：均匀试验;正交试验;山楂;黄酮;提取中图分类号：TQ041+.7; ; ; ;文献标识码： A; ; ; ;文章编号： 1671-0460（2019）10-2254-04Abstract： Uniform design and orthogonal design were used to optimize the ultrasonic water extraction process of flavonoids from Crataegus pinnatifida with the yield of flavonoids as the target. Under the condition of fixed ultrasonic power of 40 kHz， the ultrasonic temperature， ultrasonic time and the ratio of material to liquid were investigated by uniform experimental design. On the basis of uniform design results， the orthogonal experimental design was carried out to optimize the extraction process. The optimal extraction conditions were as follows： ultrasonic temperature 60℃， ultrasonic time 80 min， material/liquid ratio 1：70. Under these conditions， the extraction yield of flavones from Crataegus pinnatifida was 6.99%.Key words： Uniform design experimentation; Orthogonal designexperimentation; Crataegus pinnatifida; Flavones; Extraction山楂（Crataegus pinnatifida）是蔷薇科植物山里红的干燥成熟果实[1]，是中国传统的药食两用中药材之一。

山楂黄酮提取方法及主要山楂属植物黄酮含量初步研究的开题报告

山楂黄酮提取方法及主要山楂属植物黄酮含量初步
研究的开题报告
一、选题背景及意义
山楂（Crataegus spp.），是蔷薇科山楂属（Crataegus L.）的植物，广泛分布于世界各地。

在中药学和食品工业中，山楂被广泛应用于治疗
消化不良、降低血脂和保健等方面。

其中，山楂黄酮作为其主要药效成
分之一，也被广泛关注。

山楂黄酮是指一类多环黄酮类化合物，其化学结构中含有3-酰化基，常见的有芦丁、槲皮素、山奈黄素等。

许多研究表明，山楂黄酮具有广
泛的生物活性，如抗氧化、抗炎、降血脂、降血压、抑制血小板凝集等
功效。

因此，研究山楂黄酮提取方法和山楂属植物黄酮含量具有重要的
科学意义和应用价值。

二、研究目的
本研究旨在探讨山楂黄酮的提取方法，并初步分析主要山楂属植物
的黄酮含量，为山楂黄酮的应用奠定基础。

三、研究方法
1. 山楂黄酮提取方法的优化：采用正交实验法设计实验，通过改变
提取剂、时间、温度、比例等条件，优化提取方法。

2. 主要山楂属植物黄酮含量的测定：采用高效液相色谱法（HPLC）对不同种类山楂属植物中的黄酮含量进行测定，并根据结果进行初步分析。

四、研究预期结果
1. 优化出较优的山楂黄酮提取方法。

2. 确定主要山楂属植物的黄酮含量并初步比较不同种类之间的差异。

五、研究意义
1. 为山楂黄酮的提取及其应用提供参考依据。

2. 为山楂属植物资源的合理利用提供科学依据。

3. 为进一步深入研究山楂黄酮的药效成分及其作用机制提供基础数据支持。

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采用ＤＮＡ提取试剂盒，按说明书提取组织ＤＮＡ的方法提取带绦虫
方法鉴别三种带绦虫，猪带绦虫扩增出约１５０ｂｐ，牛带绦虫扩增出
１５０ｂｐ和５９９ｂｐ两条明显的条带，亚洲带绦虫扩增出５９９ｂｐ和３５８ｂｐ两条带，与所查文献一致】。既往的普通ＰＣＲ方法往往需要再次测序然后与Ｇｅｎｂａｎｋ￣的三种带绦虫基因序列进行比对，从而增加了其鉴别难
ＡＡＧＡＡＴＧＧＡＧＴＴＧＡＡＧＧＴ＿３）；ＰＨＤＰ２ＴＳＡＦ３（５一ＣＡＡＡＣＡＧＴＴＴＴＴＴＧＣＣＡＧＡＧＣＧＧ一３）。１．３．２．２ＭＰＣＲ反应体系及条件１０Ｘｂｕｆｆｅｒ５Ｌ，ｄＮＴＰＳ２Ｌ（２００ｍｍｏ／Ｌ），弓Ｉ物
ＰＴｓ７Ｓ３５Ｆｌ、ＰＴｓ７Ｓ３５Ｒ１各１Ｌ（１００ｍｍｏ／Ｌ）ＰＨＤＰ２ＴＳＡＦ３０．５Ｌ
地区的误诊率，提高当地人民生活水平。参考文献
【ｌ】ＧｏｎｚｉｆｌｅｚＬＭ，ＭｏｎｔｅｒｏＥ，ＭｏｒａｋｏｔｅＮ，ｅｔａ１．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆ
４４２・实验研究・
绦虫病感染者，以摈榔、南瓜子驱虫，以流水、生理盐水冲洗干净，
Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１３，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．５围衄
伪ＮＤ１２３４５６
８嚣１０１１１２１３１４ｅ点ｌＩ｛ｌ
鉴别报道，而云南省为三种带绦虫的混合流行区域，带绦虫ＨＤＰ２序列的分析仅仅通过一次ＰＣＲ￣ＩＪ可实现对三种带绦虫的鉴别，可以广泛
地应用到绦虫病流行区的普查，提供更为简便的鉴别方法，降低流行
ＣＡＧＴＧＧＣＡＴＡＧＣＡＧＡＧＧＡ．ＧＧＡＡ一３）；ＰＴｓ７Ｓ３５Ｒ１（５一ＧＧＡＣＧ
ＴａｅｎｉａｓａｇｉｎａｔａａｎｄＴａｅｎｉａｓａｇｉｎａｔａａｓｉａｔｉｃａＴａｅｎｉａｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈ
（１００ｍｍｏ／Ｌ），ＴａｇＤＮＡ聚合酶０．４Ｌ（５ｕ／Ｌ），模板ＤＮＡ１ＩＪＬ（２００ｎｇ／Ｌ），无菌双蒸水补足至５ＯＨＬ。ＰＣＲ反应条件：９４￣Ｃ预变性６ｍｉｎ，９４ ℃变性ｌｍｉｎ，５５ ℃退火３０ｓ，７２＂Ｃ延伸３０ｓ，３０个循环，７２＂Ｃ再延伸１０ｍｉｎ，４ ℃保存。１．３．２．３ＰＣＲ产物１％琼脂糖凝胶电泳检测。２结果２．１ＰＣＲ￣ａ：物琼脂糖凝胶电泳１％琼脂糖凝胶电泳显示，扩增出四地区带绦虫标本ＨＤＰ２基因长
１． … ’ 萄）
置７０％酒精中固定保存。猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫标准株由本课题组保存。
１．２主要试剂
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动物基因组ＤＮＡ快速抽提试剂盒（上海生工生物工程技术服务有限
公司），引物ＰＴｓ７Ｓ３５Ｆ１、ＰＴｓＴＳ３５Ｒ１、ＰＨＤＰ２ＴＳＡＦ３（上海生工生物工程技术服务有限公司），琼脂糖（西班牙Ｂｉｏｗｅｓｔ公司），ｄＮＴＰｓ（附带
ＭｇＣＬ２和ｂｕｆｅｒ）（上海生工生物工程技术服务有限公司）ＴａｇＤＮＡ聚合酶（上海生工生物工程技术服务有限公司）溴化乙锭（ｅｔｈｉ￣ｕｍｂｒｏｍｉｄＭＰＣＲ产物１．５％琼脂糖凝胶电泳
１－３方法
形态非常相似，仅依靠形态特征进行鉴别比较困难。随着分子生物学技术的发展，巢式ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ等技术被用于绦虫的分子鉴别口卅但多数方法仍局限于对猪带绦虫和牛带绦虫的鉴别。该实验应用ＭＰＣＲ
１－３．１绦虫基因组ＤＮＡ提取
成虫成节节片组织，经紫外吸收法检测ＤＮＡ含量。１．３．２ＭＰＣＲ扩增ＨＤＰ２基因区段
１．３．２．１引物
使用参考文献” 所提及的引物为：ＰＴＳ７Ｓ３５Ｆ１（５
．
度。国外研究仅限于利用ＭＰＣＲ对猪带绦虫、牛带绦虫和细粒棘球绦虫进行鉴别，尚未见对ＭＰＣＲ对猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫的
ＤＱ４；ＣＥ：空白对照；Ｍ：１０００ｂｐＤＮＡ标志物
ＥＢ）（上海生工生物工程技术服务有限公司）１００ｂｐ＋１．５ｋｂＤＮＡＭａｒｋｅｒ－Ｋ
（加拿大ＢｉｏＢａｓｉｃＩｎｃ公司），无菌双蒸水由本实验室提供。
ＮＤ：牛带绦虫Ｙｚ：亚洲带绦虫ＺＤ：猪带绦虫１ — ２，ＤＬ１一ＤＬ２：大理带绦虫标本；３，４，５，６，ＢＳ１一ＢＳ４：保山带绦虫标本；７，８，９，１０，ＮＪ１一ＮＪ４：怒江带绦虫标本；１１，ｌ２，ｌ３，ｌ４，ＤＱＩ —