RNA干涉培育低木质素杨树

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通过RNAi技术抑制杨树c3h基因表达提高糖转化效率

ＤＯｒｇＩｔｎｏｕｒｙｉｉｔ一ｙｏｙａｅｉｗｎｅｕａｉｆＣｏｍａｏｌＯＳｈｋｍａｅ３ｈｄｒｘｌｓｎＰｌｙＲＮＡｉｃｎｑｅｏｐａｒｂＴｅｈｉｕ
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Ａｂｔａｃ：Ｅｆｃｅｔｈｄｏｙｉｆｌｇｏｅｌｏｅｉｈｉｇｓｅｈｉａｈｌｎｅｎｆｒｔｂｏｎｇｅｅｏｓｒｔｆｉｎｙｒｌｓｓｏｉｎｃｌｓｓｔｅｂｇｅｔｔｃｎｃｌｃａｌｇｏｏｅｉｅｅｙｄｖｌｐｍｅｔｄｅｔｉｎｎｈｎｄａｃｏｉｕｌｅｓｓｒｎｕｏｌｇｉｉｒｎｅｔ
ｄｓＲＮＡｓｃｎｔｕｔ．ｒｎｇｎｃｌｓｈｒｏｉｅＲＮＡｉｏｔｃｗｅｅｏｔｉｅｉｅｆｄｓｔｏｄｐｏａａｅｙｃｔｎｇｆｒｃ — ｗａｏｓｒｃｅ８ｔａｓｅｉｎｅａｂｒｄｉｎｇｔｈｎｓｕ￣ｃｒｒｂａｎｖａｔｌａ－ｉｃｍｅｈｄａｒｐｇｔｂｕｔｏｈｄｈｅｎｄｉａｅｌｎｎｔｅｇｅｎｏｅＴｈａｓｒｐｉｎｌｖｌｆｃｈｉｅｉｒｅｈｕｓ．ｅｔｎｃｉｔｏｅｅ３ｌｉＲＮＡｉｉｈｂｔｏｎｓｎｃｌｓａｙｅｙａ—ｉｅＰＣＲｅｒｓ９．４％，２．２ａｄｓｈｒｏｎｉｉｎＷａｇｅｉｎｅａｌｚｂｒｌｔｎｉｉｎｄｅｍｄｃｅｅ８０ａｄ８２％ｎ

沉默CCR和CAD基因培育低木质素含量转基因多年生黑麦草_胡可

沉默ＣＣＲ和ＣＡＤ基因培育低木质素含量转基因多年生黑麦草胡可１，２，严雪锋１，２，栗丹１，唐晓梅１，２，杨宏１，王艳１，邓洪渊１，马欣荣１＊（１．中国科学院成都生物研究所，四川成都６１００４１；２．中国科学院研究生院，北京１０００４９）摘要：木质素作为维管植物的重要成分之一，主要存在于细胞的次生壁中。

然而，木质素却是许多工农业加工过程的限制因素，例如在化学制浆、牧草消化以及木质纤维转化为生物酒精等过程中。

肉桂酰辅酶Ａ还原酶（ＣＣＲ）和肉桂醇脱氢酶（ＣＡＤ）是催化木质素单体生物合成最后两步的关键酶。

本研究根据ＮＣＢＩ中黑麦草ＣＣＲ和ＣＡＤ基因序列设计特异引物并添加相应酶切位点，从野生型多年生黑麦草ｃＤＮＡ分离克隆ＣＣＲ和ＣＡＤ基因片段，分别构建了含正反方向目的片段的植物表达干扰载体ｐ２３－ｉＣＣＲ和ｐ２３－ｉＣＡＤ。

通过根癌农杆菌ＥＨＡ１０５介导转入多年生黑麦草胚性愈伤组织，经过巴龙霉素筛选和ＰＣＲ检测获得导入了干扰ＣＣＲ和ＣＡＤ基因片段的转基因株系ｉ－ＣＣＲ和ｉ－ＣＡＤ。

常规方法测定相对木质素含量，结果显示，与对照相比，有９株ｉ－ＣＣＲ植株和１１株ｉ－ＣＡＤ植株木质素含量显著降低，分别平均降低了３４．６７％，３３．８６％，且生长正常。

本研究表明通过干扰ＣＣＲ和ＣＡＤ基因表达，可以获得低木质素含量的多年生黑麦草，为进一步培育易消化吸收的黑麦草提供了良好的种质资源。

关键词：木质素；肉桂酰辅酶Ａ还原酶；肉桂醇脱氢酶；多年生黑麦草；ＲＮＡｉ；遗传转化中图分类号：Ｓ８１６；Ｓ５４６＋．６０３；Ｑ９４３．２文献标识码：Ａ文章编号：１００４－５７５９（２０１３）０５－００７２－１２ＤＯＩ：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０５０９木质素是一种复杂的芳香族化合物多聚体，主要存在于植物细胞的次生壁，与纤维素和半纤维素共价结合，赋予细胞壁强度和硬度，为植物组织提供机械支持，使得植株向上生长。

木质素还使植物的脉管组织具有疏水性，便于水分和营养物质的长距离运输［１］，还能保护植株避免病原体入侵［２］。

杨树纯化木质素分离及其表征的研究-精选学习文档

杨树纯化木质素分离及其表征的研究前言21世纪世界各国面临着资源消耗过度、环境污染加剧的困境，积极寻找可再生能源、采用绿色化学土艺、减少环境污染是人类社会能够持续发展的唯一出路。

国际能源局（IEA）声明，到2050年生物燃料有望提供世界总运输燃料需求量的27%，可达7.5亿吨石油当量。

杨树是一种全球大面积栽培的木本作物，具有适应性广、年生长期长和生产速度快等特点，是木质纤维素的重要研究代表，杨木的资源化利用具有着重要的意义。

通过对木质纤维素原料进行预处理、酶解可以得到葡萄糖，进而发酵制取纤维乙醇。

目前，纤维乙醇的制取土艺是可行的，然而土艺成本和产品经济性确是制约发展的重要因素。

预处理过程中，有效地将木质素分离纯化并加以利用，能够提升纤维乙醇的整体经济性。

木质素是单体繁多、结构复杂的一类三维立体高聚物，由苯丙烷结构单体通过醚键和碳碳键联结而成的无定形高聚物，侧链上存有各种官能团，半纤维素和木质素间的化学键联结形成的网络结构使其难以分离提取。

本研究通过磷酸丙酮法、碱法蒸煮法和有机溶剂法对杨树进行预处理，将分离纯化的木质素[[7]作为研究对象，并与国标法所提取木质素进行对比。

通过红外吸收光谱和核磁共振进行表征，从木质素产率和改性程度的角度入手，寻求能够实现生物质资源全组分利用的最为适合的预处理方法，提升纤维乙醇的产品经济性。

1实验部分1.1试剂和仪器杨树枝取自北京吕平，杨树末是经过去皮、烘干、截块、粉碎、筛分J步处理而得，过0.84mm筛孔，在索氏抽提器中苯醇抽提4h，空气中自然放置备用。

所用化学试剂均为分析纯，所用水为去离子水。

红外光谱测定在Nicolet6700型FT}R（美国热电公司）上进行，由于所制得木质素是有机粉状物，需采用含有1%I}B:压片法进行预处理。

液体‘HNMR在400MHz的400NMR型谱仪（瑞士Bruke:公司）上进行，准备25mg样品溶解在1.0mL 氖代二甲亚矾DMSOI6中，在25℃条件下测定HNMR，每个样品扫描16次70。

农杆菌介导转化和再生的杨树讲解

农杆菌介导法转基因杨树摘要：杨树品种已发展为一种植物转化和再生系统。

叶植，从稳定发芽培养的一个杨树杂交NC - 5339（银白杨标本），被共培养用于农杆菌遗传转化关于一个烟草的看护培养。

致瘤的和无防备的农杆菌株隐藏包含一个双元载体，其中包含两个新霉素磷酸转移酶II(NPT II')和细菌5莽草酸3-磷酸合酶（EPSP）（AROA）嵌合基因融合。

没有开发芽，叶外植体时，双元缴械拉力的根癌农杆菌菌株共培养。

然而，转化的植物，没有野生型的T-DNA获得使用农杆菌株原癌基因的二进制。

NPT II '酶的活性检测，Southern印迹法分析和免疫学检测证实了遗传转化成功细菌EPSP合酶Western印迹。

这是首次报道成功收回转化植株森林树，也是第一个记录的插入和重要农艺性状的外源基因的表达成木本植物物种。

关键词：白杨；转化；农杆菌前言基因工程树种的能力将是特别有用的遗传改良，如大型成熟的植物并长期有性世代倍(Nelson and Haissig 1984; Sederoff and Ledig 1985)。

森林树种的应用重组DNA技术的一个先决条件是发展的基因转移系统。

方法，例如显微注射(Crossway et al.1986)和直接DNA摄入(Paszkowski et al. 1985; Fromm et al. 1986) 已被用于外源基因引入到草本作物物种，但是，最有效的基因转移的方法，利用自然感染冠瘿病的机制造成的有机体，农杆菌(Bevan et al. 1983 ; Fraley et al. 1983 ; Herrera-Estralla, 1983). 。

根癌农杆菌的自然感染周期期间，细菌的T-DNA 整合到宿主植物的染色体，从而导致肿瘤对植物的生产（奇尔顿等人，1980）。

可以删除和替换而不影响根癌农杆菌的T-DNA转移到植物（DeGreve等，1982）的能力，由异源基因的肿瘤诱导基因。

2022-2023学年浙江省丽水、湖州、衢州三地市高三教学质量检测生物试卷+答案解析(附后)

2022-2023学年浙江省丽水、湖州、衢州三地市高三教学质量检测生物试卷1. 方便面中脱水蔬菜的加工过程主要如下：原料挑选→切削→烫漂→冷却→沥水→烘干。

下列叙述正确的是（）A. 烫漂使蔬菜细胞破裂，大量游离态水流出B. 切削后的胡萝卜可用于还原糖的鉴定C. 烘干蔬菜含有的无机盐能为细胞提供能量D. 脱水蔬菜方便好吃，可以完全替代新鲜蔬菜2. 生物技术安全性和伦理问题是社会关注的热点。

下列叙述错误的是（）A. 克隆人的出现会增加社会不稳定因素B. 转基因作物可能对生物多样性造成严重影响C. 治疗性克隆会产生伦理道德和法律等方面问题D. 生物武器会对人类造成严重威胁和伤害3. 人类对自然资源的过度开发和利用，正在对自身和所有生物的生存环境造成巨大压力。

关于全球生态环境问题，下列叙述错误的是（）A. 臭氧减少会导致到达地面的紫外辐射强度增加B. 大量排放二氧化碳、甲烷等气体会导致全球变暖C. 人类对生物资源的过度开发利用是生物多样性减少的原因之一D. 人类向大气中排放过多的硫和碳的氧化物是形成酸雨的主要原因4. 如图是某生物细胞结构示意图，下列关于该细胞叙述正确的是（）A. 存在生物膜系统B. 遗传物质是DNAC. 核糖体的形成与核仁有关D. 图中各结构都能在光学显微镜下观察到5. 某同学设置如图所示实验装置，探究酵母菌细胞呼吸方式。

下列叙述正确的是（）A. 甲瓶中需加入植物油，乙瓶中可加入澄清石灰水B. 反应结束后取甲瓶中样液加入重铬酸钾溶液，出现黄色C. 甲瓶中添加葡萄糖浓度越高，越有利于酵母菌的生长繁殖D. 若向甲瓶中插管通入无菌空气，可用来探究酵母菌是否存在需氧呼吸方式6. 研究发现，环境中存在以蓝藻为主要宿主的浮游病毒，称为噬藻体。

这一发现为湖泊蓝藻的治理提供了一种新思路。

下列叙述正确的是（）A. 噬藻体属于生态系统中的分解者B. 噬藻体的传播速率随蓝藻密度增加而下降C. 噬藻体是调节蓝藻数量增长的外源性调节因素D. 蓝藻裂解后释放的有机碳不再参与碳循环的过程7. 猴疽是由猴痘病毒(MPXV)感染导致的人畜共患疾病，临床症状与天花相似，症状较轻。

木质素生物合成途径及其基因调控的研究进展

关键词：木质素生物合成基因调控
ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＬｉｇｎｉｎＢｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＩｔｓＭｏｌｅｃｕｌａｒＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ＧａｏＹｕａｎ１ＣｈｅｎＸｉｎｂｏ１，２ＺｈａｎｇＺｈｉｙａｎｇ１
（１ＣｒｏｐｇｅｎｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｕｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８；２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢａｓｔｆｉｂｅｒＣｒｏｐｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０２０５）
摘要：木质素是植物体内含量仅次于纤维素的一类高分子有机物质，在植物体的机械支持、水分运输及抵抗外界不良环境的侵袭方面起着重要的作用。然而，它的存在严重影响植物材料在造纸工业、纺织业、畜牧业生产中的应用。木质素代谢过程中存在多基因现象使得木质素的合成途径出现多样性，利用共抑制、反义抑制等转基因技术开发低木质素含量的优良新品种具有重要的意义。
苯丙烷（ｐｈｅｎｙｐｒｏｐａｎｏｉｄ）途径是植物体次生代谢中的一个通用途径，由１０余种酶来催化。包括以下几种：ＴＡＬ（ｔｙｒｏｓｉｎｅａｍｍｏｎｉａｌｙａｓｅ，酪氨酸脱氨酶）、ＰＡＬ（ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅａｍｍｏｎｉａｌｙａｓｅ，苯丙氨酸裂解酶）、Ｃ４Ｈ（ｃｉｎｎａｍａｔｅ４－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，肉桂酸－４－羟基化酶）、Ｃ３Ｈ（ｃｏｕｍａｒａｔｅ３－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，香豆酸－３－羟化酶）、Ｆ５Ｈ（ｆｅｒｕｌａｔｅ－５－ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，阿魏酸－５－羟基化酶）、４ＣＬ（４－ｃｏｕｍａｒａｔｅＣｏＡｌｉｇａｓｅ，４－香豆酸辅酶Ａ连接酶）、ＣＣｏＡＯＭＴ（ｃａｆｅｏｙ１－ＣｏＡ３－Ｏ－ｍｅｔｈｙ１ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，咖啡酰辅

RNA干涉培育低木质素杨树

（徽农业大学生物质改良与转化省级重点实验室安合肥２０３）３０６
摘
要：采用改良的ＣＡＴＢ法提取南林９５杨的基因组ＤＡ，ＰＲ扩增得到肉桂酰辅酶Ａ还原酶ＣＲ基因的Ｎ经ＣＣ
ｆｇｎ（４ｂｒｍｅｔ３０ｐ）ｆｍＣｇｎｍｅｍｐｉｅｂｕｉｇＣｔｏｓＴｅＰＲｒｄｃｓｅｅｕｃｏｅｉｔａｒＣＲｅｏａｌｉｄｙｓＰＲｍｅｈｄ．ｈＣｐｏｕｔｏｆｎｗｒｓｂｌｎｄｎｏ
ＡｂｔａｔＴｔｌＤＡｏ ‘ ａｌ５’ｐｐａａｓｌｅｙＣＡＢｍｅｈｄｗｔｄｕｔｅｔｎｈｏｒｘｒｎｓｒｃ：ｏａＮｆＮｎｉ９ｎｏｌｒｗｓｉａｄｂＴｔｏｉａｊｓｍｎ，ａｄｔｅｆｕｔｅｔｏｔｈｈｏ
第４个外显子部分序列，过中间载体ｐＣＲＡ，建含正反向干涉片段的ｐＩ２通ＵＣＮｉ构Ｂ１１表达载体，入农杆菌导ＬＡ４４Ｂ４０。利用叶盘法侵染南林９５杨，得３株转基因植株，分子鉴定证实干涉片段已导入南林９获经５杨。测定Ｋａｏｌｓｎ木质素及综纤维素含量的结果显示：基因植株Ｋａｏ转ｌｎ木质素含量与对照相比平均降低了９８％，纤维ｓ．６综素含量与对照相比平均增加了３１％，维长宽比明显增加，表明转基因植株更有利于造纸。．７纤均关键词：ＣＲ；ＲＡ；质素；传转化ＣＮｉ木遗

杨树幼茎特异表达基因及PsnLAC基因的克隆

１材料与方法
１１ｅＮ — ＦＰ分析及差异片段的克隆．ＤＡＡＬ２００９年４月，采集东北林业大学哈尔滨实验林场同一株小黑杨（ｏｕｕｉｏｉＰｐｌｓｎｉ×Ｐｉｒ）ｓｍ．ｎａ的幼茎和幼叶（去叶ｇ除
１）黑龙江省科技攻关项目（Ａ９２１４。Ｇ０Ｂ０ — ）第一作者简介：丽丽，，８吴女１４年１月生，９Ｏ林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室（Ｅ东ｊ林业大学）硕士研究生。，通信作者：姜廷波，林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室（东北林业大学）教授。Ｅｍｉｔｉｇａｏ．ｏ．ｎ， — ａ：ｊｎ＠ｙｈｏｃｒｃ。ｌｂａｎ收稿日：１９３Ｅ。期２０年月ｌ０
ＤｉｅｅｔｅｐｅｓｄｇｎｓｂｔｅｎｓｅｎｅｖｓｏＰｐｌｓｉｏｉｆｒｎｘｒｓｅｅｅｅｗｅｔｍｓｄｌａｅｆｏｕｕｍｎｉ×ＰｎｇａｗｒｂｅｖｄｂｈＤＮＡＬｍｅｈａｓｉｒｅｅｏｓｒｅｙｔｅｃＡ．ＦＰｔ－ｏ．Ｒｅｕｔｓｏｅａａｔｔｌｏ４１２ｆａｍｅｔｗｒｍｐｉｅｒｍｈＤＡｆｔｍｓａｄｌａｅ，ｄａｔｔｌ２２５ｆｇｄｓｌｈｗｄｔｔｏａｆ９ｒｇｎｓｅｅａｌｄｆｈｉｆｏｔｅｅＮｏｅｎｅｖｓａｏａｓｎｆｏ７ｒ－ａｍｅｔｗｒｉｅｅｔｉｌｙｅｅｅｗｅｔｍｓａｄｌａｅ．Ｆｕｒｇｎｓｆｏｓｅｅｅｃｏｅｎｅｕｎｅ．ｎｓｅｅｄｆｒｎｉｄｓａｅｇｎｓｂｔｅｎｓｅｎｅｖｓｏｒｆａｍｅｔｒｍｔｍｓｗｒｌｎｄａｄｓｑｅｃｄｌａｐｄ

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ＲｅｅｒｈｏｓａｃｎＲＮＡ－ｎｅｆｒｎｅＢｒｅｉｇｏｏｌｎｎＰｐａｒｅｉｓｉｔｒｅｅｃｅｄｎｆＬｗ－ｉｉｏｌｒＶａｉｔｇｅＳＯＮＧ－ｕ；ＣＡＩＣｅｇＷＥｏＧＡＯＨｕ，ＸＩＥｎｈｉｈｎ，ＩＧｕ；ｉＡＮＧＹａｎ
比平均增加了３１％，．７纤维长宽比明显增加，均表明转基因植株更有利于造纸。
关键词：ＣＲＡ；ＣＲ；Ｎｉ木质素；遗传转化中图分类号：７８４￥１．６文献标识码：Ａ文章编号：０５０５（０２０ — ０８０２９ — １２２１）２０５ — ５
ｓｇｎｆＣＲｅｏｒｍＣｎａｙｏｎｙｗａｂａｎｄｗｉＣＲ．ＴｅｐＩ２１ｘｒｓｉｎｖｃｏｆｔｅｏｗｒｅｍｅｔｏＣｇｎｍｅｆｏｉｎｍｏｌｃｅｚｍｅＡｓｏｔｉｅｔＰｈｈＢ１ｅｐｅｓｏｅｔｒｏｈｆｒａｄ
１．基因组ＤＡ提取及目的片段扩增．１２Ｎ采集南林９杨新鲜幼嫩叶片提取基因组ＤＡ￣５ＮＯ，根据ＣＲ基因全长基因序列的同源性搜索和比对分Ｃ析结果设计２对引物，为方便与ｐＣＲＡ载体连ＵＣＮｉ接，２在对引物中分别引入不同的酶切位点，Ｃ — ：ＣＲＦ
技支撑项目（０６ＡＤ３５５。２０Ｂ０Ａ１０）
通讯作者：项艳，，女教授。Ｅｍｉｘａｇａ＠ａａ．ｕｎ－ａ：ｎｙｎｈｕｅ．ｌｉｄａ
３８卷２期
宋恩慧等：ＮＲＡ干涉培育低木质素杨树
５９
用四。目前降低木质素主要采用反义抑制ＲＡ表达，ＮＰｑｅａ等同用已知的冈尼桉（ｕａｐｕｕｎｉｉｕｍｌ利Ｅｃｌｔｇｎｉｙｓ）ＣＲｅＮＣＤＡ序列获得烟草（ｉｔｎａａｕＣＲＮｃｉａｔｃｍ）ＣｏａｂｃＮＤＡ序列并反义转人烟草中，分析木质素空间分布的结果支持了ＣＲ下调对改善制浆用木材品质的Ｃ作用。ＲＡ可以抑制特定基因的表达，效地使目Ｎｉ有标基因沉默。研究表明，Ｎｉ泛存在于从真菌到ＲＡ广植物、从无脊椎动物到哺乳动物的各种生物中［］７，－利０
ｓｇｉｃｎｌｉｃｅｓｄｅｇｈ－ｄｈａｉ．Ｔｅｅｕｔａｌｈｗｄｈｔｈｇｎｔａｌ－ｄｆｄｌｎｓｒｍｏｅｕｔｂｅｏｉｎｆａｔｉｙｎｒａｅｌｎｔｗｉｔｒｔｏｈｒｓｌｓｌｓｏｅｔａｔｅｅｅｉｌｍｏｉｅｐａｔａｅｃｙｉｒｓｉｌｆｒａ
带、寒带及地中海沿岸国家与中东地区。由于它速
培育低木质素含量的植物新品种，对造纸、纺织和饲草等原料生产有重要意义。选择木质素合成的特异途径，即从羟基肉桂基辅酶Ａ酯类到合成木质素单体及其聚合物的过程中涉及的酶作为对象进行遗传操作，可以从根本上降低木质素的含量，从而降低造纸成本以及减少环境污染。肉桂酰辅酶Ａ还原酶（ｉｎｍｏｌＣＡｒｄｃｓ，ＣｃａｙｏｅｕｔｅＣＲ）可还原３ｎａ
段干涉效果，其转化后对转化后代农艺性状影响小，
３（弓人Ｓｌ ’ １ａＩ和ＳｃａＩ位点）ＣＲ— ： ’ ；ＣＲ５一
ＡＣＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＡＡＧ一３’
（引入Ｓｌ和ＸａＩａＩｂ位点）。用引物ＣＲＦＣＲＲＣ — ，Ｃ — 及ＣＲＦＣＲＲ分别对ＣＲ基因进行ＰＲ扩增，Ｃ — ，Ｃ — ＣＣ扩增条件均为： ℃ 预变性：ｍｎ９％３，３９４５ｉ；４０ｓ６￣Ｃ３，２３，共３个循环； ℃延伸５ｍｎ４０ｓ７℃ ０Ｓ５７２ｉ；￣Ｃ保温。将ＰＲ产物送上海生二测序并将克隆的基因Ｃ［
ｍａｉｇｐａｅ．ｋｎｐｒ
Ｋｅｒｓｙｗｏｄ：ＣＣＲ；ＲＮＡ— ｎｅｆｒｎｅＬｇｉＧｅｅｉｔａｓｏａｉｎｉｔｒｅｃ；ｉｎｎ；ｅｎｔｒｎｆｒｔｃｍｏ
杨树（ｏｕｓｓｐ）Ｐｐｌｐ．ｕ是世界上分布最广、适应性最强的树种，主要分布在欧洲、洲、美洲的温亚北
安徽林业科技，０２３（）５～２２１，８２：８６
ＡｎｕｏｅｔｃｅｃｎｅｈｏｏｙｈｉＦｒｓｒＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｇｙ
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宋恩慧，蔡诚，魏国，高慧，项艳
ｔｍｅａｉｎＢＡ４４ｅｅｉａｌ－ｄｆｄｐａｔｗｅｅｂａｎｄｉ ’ ｎｎ９ ’ ｌａｉｃｏｕｉａｉｎ，ａｄｔｅｐａｔｕｆｃｅｓＬ４０．３ｇｎｔｌｍｏｉｅｌｎｓｃｙｉｒｏｔｉｅｗｔｈＮａｈ５ｅｆｄｓｃｃｈｖｔｏｎｈｌｎｓｗｅｅｔｓｅｔｈｖｌｄ－ｎｅｏＤＮｒａｔｔｄｏａｅｅｉｇｎｍｅｅＡｏ ’ ｎｉ９．ＤｅｅｍｉａｉｎｆｔｅｌｓｎｉｎｎｎｈｌｃｌｌｓｃｎｅｔｆＮａｌｎ５’ ｔｒｎｔｏｈＫａｏｌｉａｄｏｏｅｌｏｅｏｔｎｓｏｇｕｓｏｅｈｔｔｅｌｓｎｌｎｎｃｎｅｔｆｔｅｇｎｔａ１ — ｄｆｄｐａｔａｏｅｈｎｔａｈｏｔｏｒｕｂ．６，ｈｗｄｔａｈＫａｏｉｉｏｔｎｏｈｅｅｉ１ｍｏｉｅｌｎｓｗｓｌｗｒｔａｈｔｏｔｅｃｎｒｌｇｏｐｙ９８％ｇｃｙｉｆａｄｈｈｌｃｌｌｓｃｎｅｔｆｔｅｅｅｉａｌ－ｄｆｄｌｎｓａｈｇｅｔａｔａｏｈｃｎｒｌｒｕｂ３１％ｎｔｅｏｏｅｌｏｅｏｔｎｏｈｇｎｔｌｍｏｉｅｐａｔｗｓｉｈｒｈｎｈｔｆｔｅｏｔｇｏｐｙ．７ｕｃｙｉｏｗｉｔｈ
种羟基肉桂酸的ＣＡ酯，成相应的肉桂醛，该ｏ生是
生、木材是优良的纸浆原材料而引起广泛关注。木质素是植物体中总量仅次于纤维素的第二大有机物质，占次生物质总量的９％以上，５在植物体内具有一定的生理功 ‘ 在制浆造纸中，１。脱出木质素需投人大量化学药品，并产生大量污染环境的废液，且木质素的存在可影响纸浆质量，增加造纸成本。因此，采用基因工程技术调控木质素的生物合成，
（ｅｒｖｃａｏａｒｆＢｏｓＩｐｏｅｎａｄＣｎｅｓｎＫｙＰｏｉｉＬｂｒｔｙｏｉｎａｌｏｍａｓｍｒｖｍｅｔｎｏｖｒｏ，ＡｈｉＡｒｕｔｒｌＵｉｒｉ，Ｈｆ３０６ｈｎ）ｉｎｕｇｃｌａｎｅｓｙｅｉ２０３，Ｃｉａｉｕｖｔｅ
收稿日期：０２０ — ２２１— ３２修稿日期：０２０ — ２２１— ５０
酶催化木质素单体生物合成途径的第一个特异步
骤，因此对进入木质素合成途径的碳流具有调控作
基金项目：安徽省２０年科技攻关计划重大科技专项（８１３２７）安徽省教育厅重点项Ｅ（Ｊ０８２）国家“ ０８０００００３；ｔＫ２０Ａ１８；十一五” 科
ＡｂｔａｔＴｔｌｅｏＤＮＡｆ ’ ｎｉ９ｐｐａｓｅｔａｔｄｉｉｒｖｄＴｍｅｈｄａｄｈｔｅｏｓｑｅｃｓｒｃ：ｏａｇｎｍｅｏＮａｌｎ５’ ｏｌｒｗａｘｒｃｅｗｔｍｐｏｅＣＡＢｈｔｏ，ｎｔｅ４ｈｘｎｅｕｎｅ
ａｄｒｖｒｅｓｏｔｉｔｒｒｎｎｅｅｓｈｒｎｅｅｇＲＮＡｓｇｎｓｗｓｔｃｕｅｔｈｉｔｒｄａｅｖｃｏＵＣｆｉｅｍｅｔａｓｕｔｒｄｗｉｔｅｎｅｍｅｉｔｅｔｒｐＣＲＮＡｉｎｌｄｔｒｂｃｅｉｍｒｈａｄｅｏＡｇｏａｔｒｕ
（安徽农业大学生物质改良与转化省级重点实验室，肥２０３）合３０６
摘要：采用改良的ＣＡＴＢ法提取南林９５杨的基因组ＤＡ，ＰＲ扩增得到肉桂酰辅酶Ａ还原酶ＣＲ基因的第４Ｎ经ＣＣ
Hale Waihona Puke 个外显子部分序列，通过中间载体ｐＣＲＡ，ＵＣＮｉ构建含正反向干涉片段的ｐＩ２表达载体，Ｂ１１导入农杆菌ＬＡ４４Ｂ４０。利用叶盘法侵染南林９５杨，获得３株转基因植株，经分子鉴定证实干涉片段已导入南林９５杨。测定Ｋａｏｌｎ木质素ｓ及综纤维素含量的结果显示：转基因植株Ｋａｏｌｎ木质素含量与对照相比平均降低了９６综纤维素含量与对照相ｓ．％，８