无菌转
无菌操作技术(二)
实验步骤
8.灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，20min 高压蒸汽灭菌。
实验目的
1.学习掌握培养基的配制原理，同时
通过对几种培养基的配制掌握配
制
培养基的一般方法和步骤。
2.了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范 围，学习高压蒸汽灭菌的操作技术。
3.证实实验室环境与人体表面存在微 生物，体会无菌操作的重要性。
实验目的
4.熟练掌握从固体培养物和液体培养 物中转接微生物的无菌操作技术，熟知各 种菌种保藏方法，以及各个方法的特点和 区别。
实验步骤
五、细菌制片及简单染色 1.涂片 取一块载玻片，用记号笔平均分为两个区域并标 记；各滴一小滴生理盐水于两个区域中央；用接 种环无菌操作分别由枯草芽孢杆菌营养琼脂斜面 和金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面挑取适量菌苔， 将沾有菌苔的接种环置于载玻片的生理盐水中涂 抹，使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜。若用液 体培养基涂片，可用接种环蘸取1~2环菌液直接 涂于载玻片上。
实验步骤
3.实验室环境的检查 ①将标有“空气1”的平板在实验室打开皿盖， 使琼脂培养基表面完全暴露在空气中；将另一个 标有“空气2”的平板放在已灭菌的无菌操作箱 （室）内，打开皿盖，1h后盖上两个皿盖。 ②取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm2的范 围，然后将棉签从平板的开启出伸进平板表面， 在E区滚动一下，立即闭合皿盖，放回棉签。用 同样的方法将擦拭了门旋钮的棉签在F区进行滚 动接种，将沾有灰尘的棉签在G区接种。将灭菌 棉签在H区接种。
微生物实验室无菌操作技术规范
1.目的规范无菌操作流程，减少及避免发生染菌现象出现。
2.使用范围无菌室及洁净区的操作。
3.无菌操作技术原则3.1环境要清洁，在每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗；且避免操作前进行清扫。
3.2做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。
3.3在无菌操作时，不可讲话，打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品，不可使用。
4.内容4.1.1 准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲；备齐用物（如：接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等）；核对无菌用品，接种菌种的种类、型号。
4.1.2 所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀；进入洁净区前需要经传递窗进行紫外表面消毒30min以上；4.1.3 开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上；超净台避免放入过多的物品（一般只放入当次的实验所有的物品），所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌（灭菌日期超过4天的需重新消毒）。
4.1.4 进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，使臭氧尽量排放干净。
4.1.5 除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发，不暴漏口鼻，不暴漏躯干皮肤和衣物。
4.1.6 双手要进行清洗、消毒。
4.1.7 要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。
4.1.8 在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。
4.1.9 实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员（不超过4人/间）并尽量减少人员走动。
4.1.10 所有要放入超净工作台的物品都需进过消毒液喷洒擦拭消毒。
4.1.11 无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用；无菌液体在取离超净台前必须密封其开口；密封的无菌液体容器在放入超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。
4.1.12 在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。
STS胶塞无菌转运
S T S胶塞无菌转运系统上海严复机械科技有限公司2010．5Download from 上海严复机械科技有限公司（下简称上海严复或严复科技）成立于2005年，近5年来，我们从小做起，逐步发展。
从最初简陋的办公场所到今天拥有了现代化的生产基地、实验室及研发中心，拥有同行业最先进的生产、检测设备和技术。
严复科技从未停止过对未来的求索。
这5年来我们在技术研发和自主创新上投入了大量的资金和人力资源。
我们了解制药工业，我们扎根并服务于制药工业，我们专注于制药工业前沿设备的研发与生产。
如果把人类的医药健康事业比作一座高山，那么我们愿意成为这座大山的一块坚石。
为中国制药工业，乃至全球医药健康事业，贡献我们的一份力量。
也许这份力量还很有限，但是我们绝对不会放弃。
因为这是我们赖以生存的责任与使命。
严复科技坚持前瞻性的理念，时刻保持谦虚奋进的工作作风。
我们总是踏踏实实地做好研发，认认真真地做好生产，兢兢业业地做好服务。
我们尊重客户，我们关注市场。
从客户的使用体验出发，从提升产业科技含量入手，以全球领先的技术、理念，创造新的产品并提供高质量的服务。
我们深深地认识到“不积跬步，无以至千里。
不积小流，无以成江海。
”严复对待这份事业严谨而扎实，客户的赞誉和市场的认可更加鼓励着我们把细节做精做好！严复科技在这5年一直重视每一个合作伙伴，“轻财货，重信义”，与国内外知名的厂商合作将全球领先的技术和理念引入中国。
让使用或体验过严复产品和服务的客户提升了产品科技含量，改善了产品品质，得到了前所未有的便利。
严复科技是一家有社会责任感和高度使命感的创新型企业。
严复科技遵守国家各项法律、法规，秉承“厚德载物”的管理理念，沿着健康发展的方向高速前行。
严复科技尊重知识，依靠自身的力量不断地自主创造、自主创新！为了健康事业的和谐进步，为了维护市场的稳定有序，我们从不搞恶意竞争，也从不恶意地模仿、窃取他人的劳动成果！严复科技愿与您携手并进，共创美好未来！技术特点：▲整个过程没有人员与胶塞直接接触的可能，减少了二次 污染的可能。
无菌转接操作过程及注意事项
无菌转接操作过程及注意事项英文回答：Aseptic transfer is a critical technique used in microbiology and biotechnology laboratories to prevent contamination of cultures or samples. It involves transferring microorganisms or sterile materials from one container to another without introducing any unwanted microorganisms.The process of aseptic transfer typically involves the following steps:1. Preparation: Before starting the transfer, it is important to gather all the necessary equipment and materials, including sterile gloves, a Bunsen burner or a laminar flow hood, sterile culture tubes or plates, and a transfer loop or pipette.2. Sterilization: Sterilize the transfer loop orpipette by heating it in the flame of the Bunsen burner until it turns red-hot. This helps to kill any microorganisms present on the loop or pipette.3. Flame sterilization: Flame sterilize the neck of the culture tube or the surface of the agar plate by passing it through the flame of the Bunsen burner. This helps to kill any microorganisms present on the surface.4. Transfer: Using the sterilized transfer loop or pipette, transfer a small amount of the culture or sample from the source container to the target container. It is important to avoid touching any non-sterile surfaces or coming into contact with the mouth of the containers.5. Sterilization and sealing: Flame sterilize the transfer loop or pipette again to remove any remaining microorganisms. Then, seal the target container to prevent contamination.During the aseptic transfer process, it is important to observe certain precautions to ensure the success of thetechnique:1. Maintain a sterile environment: Work in a clean and organized area, preferably inside a laminar flow hood or under a Bunsen burner flame. This helps to minimize therisk of contamination.2. Use sterile equipment: Ensure that all equipment and materials used in the transfer are sterile. This includes culture tubes, plates, loops, pipettes, and gloves.3. Minimize exposure time: Keep the containers open for the shortest possible time to reduce the risk of airborne contamination. Close the containers immediately after transferring the culture or sample.4. Avoid cross-contamination: Do not touch any non-sterile surfaces or objects during the transfer process. This includes touching your face, hair, or clothing.5. Practice good hand hygiene: Wash your hands thoroughly before and after performing the aseptic transfer.This helps to minimize the transfer of microorganisms from your hands to the containers.中文回答：无菌转接是微生物学和生物技术实验室中常用的一项关键技术，用于防止培养物或样品的污染。
无菌操作技术(二)
组员：赵华 赵诣 陈珩 杜宇菲 高 宝才 高瑞钰 讲解：高宝才 PPT制作：杜宇菲 高瑞钰 资料查找人：赵华 赵诣 陈珩
无菌操作技术
无菌：在科学研究和生产实践中使用的
微生物必须是单一的纯种或菌株，不能 存在杂菌（非目的菌）。
无菌操作
防止微生物进入机体或物体的方法
在微生物操作过程中，除了使用的容器、用具 （试管、三角烧瓶、平皿和吸管等）和培养基必 须进行严格的灭菌处理外，还要通过一定的技术 来保证目的微生物在转移过程中不被环境中的微 生物污染，这些技术包括用接种环（针）、吸管、 涂棒等工具进行接种、稀释、涂片、计数和划线 分离等。
实验步骤
2.干燥 自然干燥或用电吹风干燥。 3.固定 涂菌面朝上，通过火焰2~3次。 4.染色 将载玻片平放于载玻片支架上，滴加染液覆盖涂 菌部位即可，吕氏碱性美篮1.5min，草酸铵结晶 紫染液或齐氏石炭酸复红染液1min。 5.水洗 倾去染液，自来水冲洗，水流不宜过急、过大， 勿直接冲涂片处，至洗出无色水为止。
实验原理
5.通过分离纯化得到的微生物纯培养物，还 必须通过各种保藏技术使其在一定时间内不 死亡，不会被其他微生物污染，不会因发生 变异而丢失重要的生物学形状，否则就无法 真正保证微生物研究和应用工作的顺利进行。 保藏菌种的方法包括传代培养保藏、冷冻保 藏和干燥保藏。
实验原理
6.对个体较小的细菌进行制片时采取涂片法， 通过涂抹使细胞个体在载玻片上均匀分布， 避免菌体堆积而无法观察个体形态，通过加 热固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片 上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而 且不破坏细胞形态。
实验步骤
五、细菌制片及简单染色 1.涂片 取一块载玻片，用记号笔平均分为两个区域并标 记；各滴一小滴生理盐水于两个区域中央；用接 种环无菌操作分别由枯草芽孢杆菌营养琼脂斜面 和金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面挑取适量菌苔， 将沾有菌苔的接种环置于载玻片的生理盐水中涂 抹，使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜。若用液 体培养基涂片，可用接种环蘸取1~2环菌液直接 涂于载玻片上。
无菌转接操作过程及注意事项
无菌转接操作过程及注意事项无菌转接操作是实验室中常见的操作之一，它需要保持实验环境的无菌状态，以避免外源细菌或其他微生物的污染。
无菌转接操作一般用于制备培养基、接种菌种、分装细菌液体培养物等操作。
下面将详细介绍无菌转接操作的过程及注意事项。
一、操作过程1.准备工作在进行无菌转接操作之前，需要将实验室台面、手套、试剂瓶、培养皿等工具进行消毒处理。
可以用75%的乙醇或其他消毒剂对操作台面进行消毒，然后穿戴好实验室手套。
同时需要准备好所需的培养基、菌种、移液器、吸管等工具。
2.取样将待转移的培养物制备在无菌环境中，打开内外两个门的无菌平台，等内部无菌环境达到标准，再打开微生物箱内门。
不大强风从箱外在箱内，接种要做到瞬间放下，尽量避开箱外的空气进入箱内。
3.移液操作将培养物移入无菌培养基中时，需要使用移液器或吸管进行操作。
在操作时需要保持移液器或吸管的头部远离任何可能的污染源，如实验室台面、手套等。
同时，需要准确控制移液器或吸管的移液量，避免在操作过程中产生飞溅或者滴落现象。
4.封口完成移液后，需要及时封闭培养皿或试剂瓶的盖子，避免空气中的微生物污染。
5.清洁工作在完成无菌转接操作后，需要及时清洁并消毒实验室台面、工具和其他可能受到污染的物品。
同时，要妥善处理培养物的废弃物，避免对环境造成污染。
二、注意事项1.保持操作环境的无菌在进行无菌转接操作时，需要保持操作环境的无菌状态。
尽量选择在无菌工作台或者无菌箱内进行操作，避免外源微生物的污染。
2.严格控制移液量在移液操作中，需要严格控制移液量，避免产生飞溅或者滴落现象，以免造成污染。
3.封闭容器盖子在转接培养物后，需要及时封闭容器的盖子，避免空气中的微生物污染。
4.及时清洁消毒在完成无菌转接操作后，需要及时清洁和消毒操作台面、工具和其他可能受到污染的物品，以保持实验环境的无菌状态。
5.个人卫生在进行无菌转接操作前，需要做好个人卫生防护工作，穿戴好实验室手套，避免手部或其他身体部位对培养物的污染。
无菌操作原则
无菌操作原则2008-6-23 15:4【大中小】【我要纠错】1、环境要清洁，进行无菌操作前半小时，须停止清扫地面等工作。
避免不必要的人群流动，防止尘埃飞扬。
治疗室应每天用紫外线消毒一次。
2、进行无菌操作时，衣帽穿戴要整洁。
帽子要把全部头发遮盖，口罩须遮住口鼻，并修剪指甲、洗手。
3、无菌物品与非无菌物品应分别放置。
无菌物品不可暴露在空气中，必须放于无菌包或无菌容器内，无菌物品一经使用后，必须再经灭菌处理后方可使用。
从无菌容器中取出的无菌物品，虽未使用，也不可放回无菌容器内。
4、无菌包应注明物品的名称、消毒灭菌日期，并按日期先后顺序排放，以便取用，放在固定的地方。
无菌包在未污染的情况下，可保存7-14天，过期应重新灭菌。
5、取无菌物品时，必须用无菌持物钳（镊）。
未经消毒的用物不可触及无菌物或跨越无菌区。
6、进行无菌操作时，如器械、用物疑有污染或已被污染，即不可使用，应更换或重新灭菌。
7、一份无菌物品，只能供一个病员使用，以免发生交叉感染。
无菌操作注意事项：1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
工艺验证及无菌转移
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3）必须对验证工艺深刻理解
对于工艺的理解直接影响到工艺验证执行 下列内容非常重要 整个工艺分为几个阶段； 每个阶段需要达成哪些目标； 如何对这些目标进行衡量； 有哪些因素会对过程的结果造成影响。
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4）确定验证对象和范围
确定验证范围 • 列出所有的产品清单，包括不同的规格 • 列出所有的工艺流程 • 列出所涉及的所有生产设备和介质 明确验证的起点与终点
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通过 已验证的工艺过程
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工艺验证包含的基本文件
工艺过程的标准及相关培训记录 批生产记录/设施历史
实验室测试方法，相关的方法验证及培
训记录
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性能确认(工艺验证)活动流程图
流程
工艺流程评价 工艺参数评价 选择重要工艺参数
验证过程设计
设备IQ/OQ确认 校准仪表及记录
批记录评价
SOP/人员培训 重要支持系统
要 素
确定取样计划 选择分析方法
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原材料,包材确认
取样方法/分析方法验证
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性能确认活动流程图
初试的验证方案
验证方案的确认
确定的验证方案
验证实施及报告
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IQ/OQ状态的确认
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五、工艺验证与风险管理
利用风险识别，识别需要验证的工艺，工艺的 范围，其他牵涉的工艺 评估风险确定关键工艺参数和验证的项目 验证结束后，评估风险确定后续行动方案，以 控制风险，减少风险 通过验证后的培训分享已知的风险
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1、全球最大的无菌砖企业是利乐公司，利乐公司创办人为卢本·罗兴，于1952年问世。
公司拥有23,425名员工，2012年度的净销售收入约为111.55亿欧元。
利乐的产品在超过170个市场上销售。
在2012年，公司共生产了1732亿件包装，为全球消费者提供了773亿升的液态食品产品。
利乐的客户包括伊利、光明、三元、蒙牛、娃哈哈、汇源等国内几大乳业及果汁饮料行业巨头，并在全国建立800多条生产线，只要这些生产线能保持稳定的生产，利乐就能源源不断地向它们提供利乐包装纸。
而目前在这个行业里，盈利几乎都来自于卖包装目前利乐中国70%的生意都在乳品行业。
仅2001年，伊利就生产了采用利乐包装的约20万吨超高温处理奶，一只250毫升的利乐包装盒，其市场价格在4角左右，利乐的盈利空间多大可想而知。
产品层次划分
动，康，品。
量，能。
月、
动，
，
，跑
耐
品
服务
便利品
选购品
特殊品。