总RNA的提取和检测 实验报告
总RNA 的提取电泳检测及浓度和纯度的测定
总RNA 的提取、电泳检测及浓度和纯度的测定撰写人：黄晶一、实验原理1、总RNA的提取见分子克隆（第三版）上册P522 “用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质”2、RNA的电泳见分子克隆（第三版）上册P540 “按大小分离RNA: 在含有甲醛的琼脂糖凝胶上进行的RNA电泳”3、RNA的浓度及纯度测定见分子克隆（第三版）下册P1695 “DNA或RNA的分光光度法测定”二、实验准备1、配制0.1%的DEPC水，37℃培养箱内放置过夜，之后灭菌两次。
2、准备大、中、小进口枪头各一盒，1.5ml进口离心管、0.2ml 进口PCR管各一瓶，灭菌两次（公用）3、准备研钵（n）、勺子（n+1）、50ml、100ml量筒各一个，180℃烤4小时以上（n=提取RNA的个数）4、10×MOPS缓冲液、甲醛、30％双氧水、胶布、氯仿（sigma）、异丙醇（sigma）、75％乙醇（以上试剂及物品公用，实验前请确定其是否齐备）三、实验步骤（一）总RNA的提取1．液氮研磨组织，取100mg组织，加入1ml Trizol，室温放置5min2．加入200ul氯仿，剧烈振荡混匀，室温放置3min，之后4℃，12000g,离心15min 3．上清移入新管，加入1/5体积的氯仿，剧烈振荡混匀，室温放置3min, 之后4℃，12000g,离心15min4．上清移入新管，加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置10min,之后4℃，12000g,离心15min5．弃上清，加入1ml 75%乙醇，振荡，4℃，7500g,离心5min6．弃上清，室温晾干，之后加入40ul DEPC水溶解（RNA不要完全干燥，否则不利于溶解）（二）RNA的电泳1．用3％-30％的双氧水浸泡RNA专用的电泳槽及胶板、梳子10分钟以上2．之后用0.1%的DEPC水洗涤3．配制1.2%的含有甲醛的琼脂糖凝胶1）称取0.36g RNA专用的琼脂糖，加入24ml DEPC水，熔化后冷却到60℃2）加入3ml 10×MOPS，混匀后再加入3ml甲醛，之后再加入3ul EB4．用DEPC水配制1×MOPS 100ml作为电泳缓冲液，55V 预电泳30-40min5. RNA电泳样品的制备1）将6ul RNA样品、1ul 10×MOPS、1ul甲醛、2ul RNA上样缓冲液混匀2）65℃加热10min,之后冰浴2min,短暂离心后可上样6．60V 电泳30-40min7．紫外检测（三）RNA浓度及纯度的测定1. 运行分光光度计中测定RNA的程序2. 200ul DEPC水作为空白, 5ul RNA样品+295ul DEPC水作为测量样品3. 测量的RNA样品的OD260/280应在1.8-2.0之间4. RNA样品的实际浓度等于分光光度计显示浓度ｘ60四、注意事项1. 整个实验过程中要戴口罩、一次性手套，一次性手套应经常更换，防止污染RNase2. 实验试剂及物品大多数为公用，请养成良好的实验习惯，用毕放回原处，试剂或物品用完或快用完，告知负责人，及时补充3．烤箱不能过夜工作，以免发生火灾4．DEPC为疑似致癌物，操作时应戴口罩、手套，小心吸取，避免污染实验台及物品注：10×MOPS的配制方法0.627g MOPS溶于12ml DEPC水中，加入1.2ml 1M NaAc (DEPC水配制)，用2M NaOH 调pH 7.0, 加入0.75ml 0.2M EDTA, 之后加入DEPC水定容为15ml。
植物rna提取实验报告
植物rna提取实验报告植物RNA提取实验报告植物RNA提取是生物学研究中常用的实验技术之一。
通过提取植物细胞中的RNA分子，可以进一步研究植物基因的表达和调控机制。
本实验旨在探究RNA提取的方法和步骤，并对提取得到的RNA进行分析。
一、实验材料和方法1. 实验材料：- 植物样本：可以选择自然生长的植物或实验室培养的植物。
- RNA提取试剂盒：常用的试剂盒有Trizol、RNAiso Plus等。
- 高速离心机：用于离心植物组织和提取液。
- 1.5 mL离心管和离心管架：用于混合试剂和样本。
- 离心管摇床：用于混合试剂和样本。
- 离心管架：用于离心植物组织和提取液。
2. 实验方法：- 准备植物样本：选择新鲜的植物叶片或其他组织，尽量避免使用老化或受损的植物材料。
- 细胞破碎：将植物样本放入1.5 mL离心管中，加入适量的RNA提取试剂。
使用离心管摇床将样本和试剂充分混合，破碎细胞壁释放RNA。
- 提取RNA：离心混合物，将上清液转移到新的离心管中。
加入适量的异丙醇，使RNA沉淀。
再次离心，将上清液倒掉，留下RNA沉淀。
- 洗涤RNA：加入75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心后将乙醇倒掉。
重复洗涤步骤，以去除污染物。
- 干燥RNA：将离心管开盖，放置在通风处晾干RNA沉淀。
- 溶解RNA：加入适量的RNase-free水或稀释缓冲液，使RNA溶解。
二、实验结果和分析通过上述步骤，我们成功地提取到了植物样本中的RNA。
为了验证RNA的纯度和完整性，我们使用紫外-可见光分光光度计检测了提取得到的RNA溶液的吸光度。
结果显示，RNA溶液的吸光度比例A260/A280在1.8-2.0之间，符合纯RNA的标准。
这表明我们成功地去除了蛋白质和其他污染物，得到了纯净的RNA样本。
为了进一步确认RNA的完整性，我们进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
将提取得到的RNA样本与RNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，经过电泳后，用紫外灯照射，可以观察到RNA分子的带状图谱。
酵母rna的提取与鉴定实验报告
4. RNA含量的测定
- 使用紫外分光光度计测定RNA在260nm处的吸光度- 根据标准曲线计算RNA浓度
- OD260值：- 标准曲线方程：- RNA浓度（μg/ml）：
- 测定结果的准确性和可靠性- 与标准RNA液的浓度对比
- 酵母粉质量：- 沸水浴时间：- 离心转速和时间：- 乙醇体积和洗涤次数：
- 提取的RNA沉淀量（通过观察或称重）- 提取过程中可能的损失和干扰因素
3. RNA的纯化
- 使用特定试剂（如异硫氰酸胍-苯酚-氯仿）进行抽提- 或根据RNA在等电点的pH环境下溶解度最小进行纯化
- 纯化试剂的种类和用量：- pH调节范围和纯化时间：
- 分析实验结果的可靠性和准确性- 讨论可能的误差来源和改进措施
7. 结论与展望
- 总结实验过程和结果，得出实验结论- 提出改进方法和未来研究方向
- 实验结论：- 改进建议：- 未来研究方向：
- 对实验结果的全面评价- 对未来研究的展望和建议
5. RNA的鉴定
- 进行磷酸的检测、核糖的显色反应以及嘌呤碱基的检测等化学反应- 观察颜色变化或生成物
- 磷酸检测结果：- 核糖显色反应结果：- 嘌呤碱基检测结果：
- 鉴定结果的准确性和可靠性- RNA组分的完整性和稳定性
6. 数据整理与分析
- 整理实验数据，计算RNA的纯度、提取率和产率等
- RNA纯度（%）：- RNA提取率（%）：- 总制品重量和产率：
rna的提取与鉴定实验报告
实验步骤
操作细节与试剂
数据记录
结果与分析
1. 实验准备
- 仪器：紫外分光光度计、离心机、水浴锅等- 试剂：酵母粉、NaCl、HCl、乙醇、氨水、RNA沉淀剂等
dna与rna鉴定实验报告
dna与rna鉴定实验报告DNA与RNA鉴定实验报告一、引言DNA和RNA是生物体内的核酸分子，它们在遗传信息的传递和蛋白质合成中起着重要的作用。
本实验旨在通过鉴定DNA和RNA的特征，探索其在生物学研究和法医学领域中的应用。
二、材料与方法1. 实验材料：- DNA样本：从人体细胞中提取的DNA- RNA样本：从细菌中提取的RNA2. 实验步骤：- DNA鉴定：a. 提取DNA样本：采用传统的酚/氯仿提取法，将DNA从细胞中提取出来。
b. PCR扩增：通过聚合酶链式反应（PCR），扩增DNA样本中的特定区域。
c. 凝胶电泳：将PCR产物进行凝胶电泳，根据DNA片段的大小分析样本中的DNA特征。
- RNA鉴定：a. 提取RNA样本：采用酚/氯仿提取法，将RNA从细菌中提取出来。
b. 逆转录：使用逆转录酶将RNA转录成cDNA。
c. PCR扩增：将cDNA进行PCR扩增，以检测目标基因的表达水平。
d. 凝胶电泳：将PCR产物进行凝胶电泳，分析RNA样本的特征。
三、结果与讨论1. DNA鉴定结果：经过PCR扩增和凝胶电泳，我们成功地从DNA样本中放大了目标区域，并观察到了预期大小的DNA片段。
这表明DNA提取和PCR扩增的方法都是有效的。
通过凝胶电泳图谱，我们可以分辨出不同样本之间的DNA差异，从而进行DNA的鉴定。
2. RNA鉴定结果：逆转录和PCR扩增后，我们观察到了目标基因在RNA样本中的表达。
凝胶电泳结果显示出预期大小的PCR产物，证明RNA提取、逆转录和PCR扩增的步骤都成功。
通过比较不同样本的PCR产物带位置和强度，我们可以分析RNA样本之间的差异。
DNA和RNA鉴定在生物学研究和法医学领域中有着广泛的应用。
在生物学研究中，通过DNA和RNA鉴定，我们可以了解基因的表达和调控机制，揭示生物体的遗传特征和进化历程。
在法医学中，DNA鉴定可以用于刑事案件的犯罪嫌疑人辨认和亲子关系鉴定，而RNA鉴定则可以用于检测病原体的感染和疾病的诊断。
rna鉴定实验报告
rna鉴定实验报告RNA鉴定实验报告一、引言RNA（核糖核酸）是一种重要的生物分子，它在细胞内起着传递遗传信息和蛋白质合成的关键作用。
RNA鉴定实验是一种常用的实验方法，通过分析RNA 的组成和结构，可以了解生物体内的基因表达和调控情况。
本实验旨在通过RNA鉴定技术，对样本中的RNA进行分析和鉴定，以便更好地理解生物体的遗传信息和功能。
二、实验材料与方法2.1 实验材料- RNA样本：从细胞或组织中提取的RNA样本。
- RNA提取试剂盒：用于提取RNA样本的试剂盒。
- 反转录酶：用于将RNA转录成cDNA。
- PCR试剂盒：用于扩增cDNA。
- 电泳仪：用于检测PCR产物。
- 琼脂糖凝胶：用于电泳分离PCR产物。
2.2 实验方法1. 提取RNA样本：按照RNA提取试剂盒的说明书进行操作，从细胞或组织中提取RNA样本。
2. 反转录：将提取得到的RNA样本转录成cDNA，反转录酶的反应条件为37°C 反应30分钟。
3. PCR扩增：将反转录得到的cDNA进行PCR扩增，PCR反应体系和条件根据PCR试剂盒的说明书进行设置。
4. 电泳检测：将PCR产物与DNA分子量标记物一同加入琼脂糖凝胶孔中，进行电泳分离，电泳条件根据琼脂糖凝胶的说明进行设置。
5. 结果分析：观察琼脂糖凝胶电泳结果，根据PCR产物的大小和形状，判断RNA样本的组成和结构。
三、实验结果与讨论通过RNA鉴定实验，我们得到了琼脂糖凝胶电泳的结果。
根据电泳结果，我们可以看到PCR产物在琼脂糖凝胶上呈现出不同的带状图案。
这些带状图案代表了不同大小的PCR产物，反映了样本中RNA的组成和结构。
通过对电泳结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 样本中存在多个PCR产物带，说明样本中存在多个不同长度的RNA分子。
这可能意味着样本中存在多个基因的表达或转录变异。
2. 某些PCR产物带的强度较弱，说明这些RNA分子在样本中的丰度较低。
这可能与基因表达水平的差异或RNA降解的程度有关。
rna实验报告
rna实验报告RNA 实验报告一、实验目的本次 RNA 实验旨在提取和分析细胞中的 RNA，以了解 RNA 的特性、结构和功能，并掌握相关实验技术和方法。
二、实验原理RNA 是一种重要的生物大分子，在基因表达和调控中起着关键作用。
RNA 提取的基本原理是利用细胞裂解液破坏细胞膜和核膜，使RNA 释放出来，然后通过酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等步骤将 RNA 从其他细胞成分中分离出来。
RNA 的质量和纯度可以通过紫外分光光度计测定吸光度比值（A260/A280 和 A260/A230）来评估，完整性可以通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。
三、实验材料与设备1、材料细胞样本（如培养的细胞系或组织样本）液氮无水乙醇氯仿异丙醇RNA 提取试剂盒DEPC 处理水2、设备冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳系统四、实验步骤1、细胞裂解将细胞样本收集到离心管中，加入适量的裂解液，充分混匀，使细胞完全裂解。
2、抽提加入等体积的酚/氯仿，剧烈振荡混匀，室温静置 5 分钟，然后在 4℃下以 12000 rpm 离心 15 分钟。
3、沉淀 RNA将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，室温静置 10 分钟，然后在 4℃下以 12000 rpm 离心 10 分钟。
4、洗涤 RNA弃上清液，加入 75%的乙醇，轻轻混悬沉淀，在 4℃下以 7500 rpm 离心 5 分钟。
5、溶解 RNA弃上清液，晾干沉淀，然后用适量的 DEPC 处理水溶解 RNA。
6、 RNA 质量和纯度检测使用紫外分光光度计测定 RNA 溶液在 260nm、280nm 和 230nm 处的吸光度，计算A260/A280 和A260/A230 的比值，评估RNA 的纯度。
7、 RNA 完整性检测配制 1%的琼脂糖凝胶，将 RNA 样品与上样缓冲液混合后进行电泳，观察 28S、18S 和 5S RNA 条带的清晰度和完整性。
五、实验结果1、 RNA 质量和纯度检测结果测定的 A260/A280 比值在 18 20 之间，A260/A230 比值大于 20，表明提取的 RNA 纯度较高，无蛋白质和有机溶剂等杂质污染。
总RNA提取和电泳实验
总RNA的提取和电泳一、实验目的和原理完整的RNA提取和纯化是进行RNA方面的研究工作的前提（Northern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR等）。
在RNA制备过程中，必须注意控制RNA酶的活性，0.1%DEPC或者RNase Away TM试剂可以有效去除RNA酶，在实验过程中的实验器具和实验用水均需经过DEPC水处理。
二、试剂1)TRIzol试剂2)氯仿3)0.1% DEPC水：与5L蒸馏水中加入5 ml DEPC,充分混匀，置37℃过夜，然后高温高压灭菌，分装，4℃保存备用。
4)75%乙醇：需用DEPC处理水配制，75 ml 100%乙醇中加入DEPC水置总体积为100 ml。
5)PBS缓冲液:称量试剂NaCl 8g，KCl 0.2g ，Na2HPO4 1.42 g，KH2PO4 0.27g 至于1L烧杯中，向烧杯中加入800mL的去离子水，充分混匀，滴加HCl将PH调节至7.4，然后定容为1L，高温高压灭菌后，室温保存。
三、实验步骤（Trizol法提取总RNA）1.样品处理：1)单层贴壁细胞直接向直径为3.5cm的培养板中加入1mL TRIzol溶解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。
取1mL裂解物移至一个1.5mL离心管中，室温放置5min。
或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀，加入相应量的TRIzol。
2)动物组织对动物组织进行匀浆处理，在装有新鲜动物肝脏组织匀浆中加入相应体积的预冷Trizol，每50-100mg样品加1mlTrizol，充分混匀。
静置10min，12000rpm，4°C 离心15min。
2.加入1/5体积（200μL）的氯仿，剧烈颠倒混匀15-30s，勿剧烈涡旋震荡，室温静置2-3min可见分层，如此重复几次使液体充分分层。
12000 ×g，4℃离心15 min。
离心后，溶液分为有机相和水相，中间有一层蛋白质层，RNA 在上层水相层。
rna实验报告
rna实验报告RNA 实验报告一、实验目的本次 RNA 实验的主要目的是提取和分析特定生物样本中的 RNA，以了解其种类、含量和质量，为后续的分子生物学研究如基因表达分析、RNA 测序等提供高质量的 RNA 样品。
二、实验原理RNA 是一类由核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的大分子化合物，在细胞中承担着遗传信息传递和表达的重要功能。
由于 RNA 分子容易被 RNase（核糖核酸酶）降解，且在细胞内的含量相对较低，因此提取高质量的 RNA 需要采取一系列特殊的方法和措施。
本实验采用了 TRIzol 法提取 RNA，其原理是基于 TRIzol 试剂能够迅速破碎细胞并使核蛋白复合体解离，同时抑制 RNase 的活性，使RNA 得以稳定存在。
然后通过加入氯仿进行离心分离，将 RNA 分配到水相，再经过异丙醇沉淀和乙醇洗涤，最终获得纯净的 RNA 样品。
三、实验材料与试剂1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肾脏等）或培养的细胞。
液氮。
2、实验试剂TRIzol 试剂（Invitrogen 公司）。
氯仿（分析纯）。
异丙醇（分析纯）。
无水乙醇（分析纯）。
DEPC 处理水（焦碳酸二乙酯处理过的去离子水，用于抑制 RNase 活性）。
RNA 酶抑制剂。
3、实验仪器冷冻离心机。
移液器。
恒温水浴锅。
核酸蛋白检测仪。
电泳仪及电泳槽。
四、实验步骤1、样品处理动物组织：将新鲜的动物组织迅速放入液氮中冷冻，然后在研钵中加入液氮充分研磨至粉末状。
培养细胞：将培养的细胞用胰酶消化后收集，离心弃上清，用 PBS 洗涤细胞两次。
2、 RNA 提取向处理好的样品中加入适量的 TRIzol 试剂，充分混匀，室温静置 5 分钟，使细胞充分裂解。
加入氯仿，剧烈振荡 15 秒，室温静置 2 3 分钟，然后 4℃、12000 rpm 离心 15 分钟。
小心吸取上层水相，转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，室温静置 10 分钟，然后 4℃、12000 rpm 离心 10 分钟。
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总RNA的提取和检测实验报告
实验二总RNA的提取和检测
实验目的
1.掌握从动物组织细胞中提取总RNA的方法；
2.熟悉紫外吸收法检测RNA浓度与纯度的原理及测定方法；
3.掌握RNA琼脂糖凝胶电泳方法并分析总RNA的电泳图谱；
实验原理
概述
1. 10-5 μg RNA/细胞含有rRNA 80-85%：28S 18S 5S tRNA, snRNA 10-15% mRNA 1-5%
2. mRNA 3’端存在20-250个多聚腺苷酸(polyA) 结构，可用oligo(dT)亲和层析柱分离mRNA。
分离的方法：异硫氰酸胍氯化铯超速离心法，盐酸胍-有机溶剂法，氯化锂-尿素法，蛋白酶K-细胞质RNA提取法、异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法等。
4.目前常用的是Trizol法。
Trizol的主要成分
是一种新型总RNA 抽提试剂，主要成分是异硫氰酸胍和苯酚。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，其主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白/核酸物质解聚得到释放。
2.酚虽可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA 酶活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
3.溶解组织细胞的混合物在氯仿作用下溶液分为水相和有机相，RNA在上层水相中。
4.取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA。
(三)总RNA的纯度检测原理：
不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。
RNA在260nm紫外光波长处有最大的吸收峰。
因此，可以用260nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40μg/mL 的单链RNA。
用PH= 的TE稀释RNA样品n倍并以TE为空白对照，根据此时读出的OD 260 值即可计算出样品稀释前的浓度: RNA (mg/mL) = 40×OD 260 读数×稀释倍数(n)/1000
实验步骤
样品处理与Trizol用量
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；
2.悬浮细胞先离心沉淀，每5-10×106个细胞加1mL Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。
3.培养贴壁细胞不须消化，可直接用Trizol进行消化、
裂解，Trizol体积按10cm2/mL比例加入。
(注意：匀浆一定要彻底，是提取高质量RNA的前提；细胞数量与Trizol的比例，细胞的数量不能过多。
) 操作步骤
1.细胞中加入1 mLTrizol用移液枪反复吹吸直无明显沉淀后，室温放置5min，使其充分裂解。
2.按200 μL氯仿/mL Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置2-3min。
(注意：此步一定要振荡混匀，使氯仿和Trizol不分层)
3. 4℃12,000g离心5-10min。
样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。
RNA主要在水相中，水相体积约为所用Trizol试剂的60％。
4.吸取上层水相，至另一新的离心管中。
一般400-450μL就足够了，千万不要贪多！
5.加入与水相等体积异丙醇后，上下颠倒混匀，4℃放置5 min。
℃12,000g离心10 min，弃上清，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。
8.加入1 mL 75%乙醇，盖紧盖子后，温和转离心管1周，充分润洗管壁。
℃12,000g离心5 min，尽量弃上清。
10..室温晾干或真空干燥5 min。
11.加入适量冰冷无RNase的PEPC水，充分震荡混匀，瞬时离心，备用。
检测步骤
1.将提取的RNA，按1：20加入TE进行稀释
2.稀释过后用分光光度仪进行检测，先使用TE行进校对，空白对照，所有样品要先润洗三次之后，再加入50μL 样液进行检测
3.可直接显示260nm下的OD值以及，260/280的对比结果
4.再将剩余未稀释的RNA提取液，进行琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性
结果与分析。