菊花的组织培养技术

2.外植体的处理、接种与初代培养 花梗腋芽的培养：剪取整枝花梗，清水冲洗30 min，
将花梗剪成长约2～3 cm带腋芽的切段，用无菌吸水纸 或纱布吸干水分，带入无菌操作室按无菌操作程序进 行接种。先用70%的酒精溶液浸泡30 s，再用0.1%的升汞 溶液浸泡8～10 min，用无菌水反复冲洗5～8次，接种 在MS+BA 3 mg/L的培养基上，可使腋芽萌发为丛生芽。
将从以上外植体诱导分 化出的单芽或丛生芽，分切 成数段或数块放入增殖培养 基中继代培养。开始分化率 和分化苗的数量都较小，随 继代次数增加，分生苗很快 就能够增多起来。
增殖方法还有：用产 生的嫩茎为材料，培养其长 到一定高度时，将嫩梢剪成 一节带一叶的茎段，然后插 入MS或MS+NAA0.1 mg/L的 培养基中培养，4～5周后， 腋芽即生长成小植株，再照 上述方法切剪茎段，重复培 养，从而达到快繁的目的。
在24～26℃，每天12～16 h，光强 1 000～4 000 Lx条件下， 外植体经培养后，一般10～20 d茎尖处可分生出新芽，茎段 的叶腋处也会萌发出新芽。而花蕾外植体经过15～20 d的培 养，会形成愈伤组织；再经过20～30 d的培养，愈伤组织就 会分化出较多的丛生芽 。
4.增殖与继代培养
5.驯化移植 将试管苗带瓶移出培养间，放置于温室中炼苗，
15 d后打开瓶盖，每天早、中、晚各喷水一次，保证 足够的湿度。3 d以后，用镊子将小苗轻轻夹出培养 瓶，洗净根部培养基。可先用1 500倍的多菌灵药液 浸泡5～10 min，然后以水草包裹蝴蝶兰根部，将其 定植于穴盘中。
定植前依叶子长度及根的生长状况进行分级，将 大小近似的苗栽植在同一规格的穴盘中，以便日后管 理。环境温度保持25～28℃，保持湿度85%左右，防 止阳光直射。当新叶长出、新根伸长时，每周1次叶 面喷施0.3%～0.5%KH2PO4溶液追肥，成苗率可达95% 以上。
2.外植体的清洗、消毒与接种
材料初步切割后，用洗衣粉水漂洗，再用自来 水冲净后，在超净工作台上将其放入70%~75%的酒 精中浸润30 s，转入2%次氯酸钠溶液中消毒8～15 min，并不时摇动，最后于无菌水中漂洗3～5次后 待用。
茎段从两端切去一小段；花蕾须剥去花被，用 中部花瓣或花序轴接种。
3.初代培养
菊花的组织培养技术
二、培养程序
1.外植体的选择与处理 2.外植体的清洗、消毒与接种 3.初代培养 4.增殖与继代培养 5.生根和移栽
1.外植体的选择与处理
以花序轴为外植体时，选取具有该品种典型特 征的，饱满壮实的花蕾，最好是将要开放而没有开 放的花蕾，这时花瓣外好象有一层薄膜包围着，里 面仍是无菌的，采回实验室后做表面消毒，便于无 菌条件下剥离出花序轴。
二、培养程序（二）培养程序
1.外植体的选择 2.外植体的处理、接种与初代培养 3.增殖与继代培养 4.壮苗与生根培养 5.驯化移植
1.外植体选择
蝴蝶兰的组织培养外植体有茎尖、茎段、叶片、花 梗腋芽、花梗节间、根尖等，各部位都能诱导成功， 只是难易程度不一。
用花梗腋芽或花梗节间作外植体，容易诱导，外 植体表面灭菌成功率高，是最合适的外植体取样部位。
分化芽
二、蝴蝶兰的组织培养技术
（一）培养意义
蝴蝶兰属于兰科、蝴蝶兰属，为多年生热带花卉， 是世界上栽培最广泛、最受喜爱的洋兰之一。
蝴蝶兰的繁殖大多采用分株的方法，得到种 苗量少，不能满足栽培的需求。通过组织培养技术繁 育蝴蝶兰种苗，实现“兰花工业”是目前繁殖率最高、 种苗质量最优秀的方法。
3.增殖与继代培养
原球茎的增殖培养基以MS+BA 5 mg/L +NAA 0.1 mg/L的增殖效果最好。在不含或只含低浓度BA 0.1～0.5 mg/L的KC或MS培养基上培养约40 d后，原 球茎表面分化一些绒毛状物，进而分化出芽。大约3 个月就可以发育形成完整小植株。
花梗腋芽诱导出丛生芽后，接种于继代培养基 1／3MS+NAA 0.5 mg/L+ BA1～10 mg/L (pH5.6左右)，每40～50 d继代1次，增殖倍数2～3 倍。
（2）无根嫩茎直接插植到 基质中生根。剪取2～3 cm无根 苗，插植到珍珠岩或蛭石的基 质中，基质事先用生根激素溶 液浸透，l0d后生根率可达95 ％～100％。
6.出瓶苗的过渡管理
菊花的有根苗移栽成 活容易，将有根的植株从 瓶中用镊子轻轻夹出，洗 净根部黏附的琼脂，栽入 蛭石基质中。然后加设小 拱棚以保湿，随着幼苗的 生长，逐渐降低空气湿度 和基质含水量，转为正常 苗的管理阶段。移栽前期 将空气湿度保持在75%～ 85%之间，遮光率为40%， 环境温度控制在20～26℃， 就可使试管苗在20d左右 移栽成活，并长出新根新 叶。
4.壮苗与生根培养
将分化形成的完整小植株移入壮苗培养基 MS(KC)+NAA 0.1 mg/L+10%香蕉汁中。培养1个月后， 平均每株有4条根、4片叶片，植株生长健壮。当小苗 高达3～4 cm时，转接到1/2MS+IBA0.5 mg/L的培养基 上进行生根培养，约3个月转移一次新鲜的培养基，生 根率可达100%。当试管苗具有3～4条粗壮的根、株高 达到7～8 cm时，可以移栽。
Байду номын сангаас
花梗节间的培养：
取生长期在45 d以内的蝴蝶兰花梗，经无菌操作消 毒后，（消毒方法同花梗腋芽）斜切成1～1.5 mm厚的薄 片，平放在固体培养基上。培养温度24～28℃，光照强 度500 Lx，每天光照16 h培养。培养基用1.2倍的V&W无 机盐配方，加肌醇100 mg/L，维生素B1、B6和烟酸各0.5 mg/L，BA1 mg/L，蔗糖2%。形成原球茎快而多。
5.生根和移栽
菊花无根苗生根一般较容易， 通常在增殖培养时久不转瓶， 即可生根，但这种根的根毛较 少或无，不利于将来移栽和生 长，所以常用下列方法处理：
（1）无根苗的试管生根， 切取3 cm左右无根嫩茎，转插 到1／2MS+NAA(或IBA)0.05 mg/L的培养基中，经10 d左右 即可生根，然后移栽驯化。