菊花花瓣的组织培养
菊花组织培养
摘要：菊花在花卉生产中占有重要地位，而花瓣组织培养，可以缩短植物生长周期，还可使再生植株特性的变异更加丰富多彩，在菊花育种研究中涉及的细胞杂交和基因转移等生物技术的应用中具有重要意义[1]。
本实验是利用黄色菊花花瓣为外植体。
在诱导培养中，控制6-BA的浓度1.0 mg/l ，NAA的浓度0.3mg/l，将已分化的细胞脱去分化状态，使其恢复到未分化的分生状态，然后进行再分化，最终形成完整的植株。
关键词：菊花激素诱导愈伤组织分化1．前言1．1实验背景植物组织培养（tissue culture）是二十世纪初兴起的一项高新生物技术，至今已经有一百多年的历史。
和植物组织培养的历史相比，中国的在这方面的研究起步算是比较早的，在二十世纪四十年代在这方面就有所研究，但是大范围的发展起来还是始于二十世纪七十年代的花药培养。
利用组织培养可以快速繁殖保存某些稀有植物或有较大经济价值的植物，挽救濒于灭绝的动植物，还可以为细胞杂交和基因转移等生物技术在育种研究中的应用提供帮助[1]。
随着人们生活质量的提高，人们甚至利用组织培养的花卉等发展装饰产业，作为一项实验技术，植物组织培养有着十分广阔的前景，如今已成为了生物领域里面十分活跃的技术[2~3]。
1．2实验目的学习利用外植体诱导形成愈伤组织和愈伤组织分化培养的方法；了解植物组织培养的操作程序；初步掌握植物组织培养的关键技术（培养基配置、灭菌、无菌操作、培养等）。
1．3实验原理植物组织培养是指植物的器官、组织或细胞，在人工控制的条件下，接种在人工合成的培养基上，能发育成完整的植株。
实现实验成功的基础理论是植物细胞的全能性，即植物的任何一个体细胞，具有完整的细胞核，具有整套的遗传信息，在一定的条件下可以发育成完整植株。
全能性的实现是通过脱分化和再分化过程来实现的：用于培养的器官、组织、细胞通称外植体，它们的细胞是高度分化的，培养的第一步就是诱导这些已经分化的细胞脱去分化状态，使其恢复到未分化的分生状态；第二步是要使这些恢复到分生状态的细胞重新分化形成植株。
菊花的组织培养实验设计
菊花的组织培养实验设计一、引言菊花（学名：Chrysanthemum）是一种常见的花卉植物，具有丰富的花色和形态变化。
为了进一步了解菊花的组织培养技术，本实验旨在设计一套菊花的组织培养实验方案，探索菊花的组织培养条件和培养基配方对其生长和发育的影响。
二、实验目的1. 确定适宜的菊花愈伤组织的来源和培养条件；2. 研究不同培养基配方对菊花愈伤组织的生长和发育的影响；3. 探究不同激素浓度对菊花愈伤组织的分化和再生的影响；4. 优化菊花的组织培养技术，为菊花的繁殖和育种提供理论和实践依据。
三、实验步骤1. 菊花愈伤组织的来源选择从健康的菊花植株上选择嫩叶片、茎段或花蕾等组织作为愈伤组织的来源。
通过消毒处理，将组织切割成适当大小的块状，用于后续的培养实验。
2. 培养基配方的确定根据菊花愈伤组织的特性，选择适宜的培养基配方。
常用的基本培养基包括MS培养基、B5培养基等，可以根据实验需要添加不同的植物生长调节剂、糖类和维生素等。
3. 愈伤组织的培养条件优化将菊花愈伤组织块状物培养于含有适宜培养基配方的培养基中，调节温度、光照和湿度等培养条件。
观察愈伤组织的生长情况，并记录相关数据，如愈伤组织的增殖速率、愈伤组织的颜色和形态等。
4. 激素浓度对愈伤组织分化和再生的影响在优化的培养基中添加不同浓度的激素，如生长素、细胞分裂素等，观察愈伤组织的分化和再生情况。
记录愈伤组织的分化率、愈伤组织的再生能力等数据。
5. 数据统计与分析根据实验所得数据，进行统计和分析。
可以使用适当的统计方法，如方差分析等，对不同处理组的数据进行比较，以评估不同因素对菊花愈伤组织的影响。
四、预期结果通过菊花的组织培养实验，预计可以得到以下结果：1. 确定适宜的菊花愈伤组织的来源和培养条件；2. 优化菊花的组织培养技术，提高愈伤组织的生长和发育能力；3. 研究不同培养基配方对菊花愈伤组织的影响，为菊花的繁殖和育种提供理论和实践依据。
五、结论通过本实验的设计和实施，可以得出以下结论：1. 菊花愈伤组织的来源和培养条件对其生长和发育具有重要影响；2. 不同培养基配方和激素浓度对菊花愈伤组织的分化和再生能力有明显影响；3. 优化的菊花组织培养技术可以提高愈伤组织的生长和发育能力，为菊花的繁殖和育种提供理论和实践依据。
菊花花瓣的组织培养
菊花花瓣的组织培养摘要: 述菊花花瓣组织培养的备件、生长与分化情况及意义。
关键词: 菊花、花瓣、组织培养。
前言：植物组织培养的概念是指在人工控制的条件下，将植物体的任何一部分，或器官、或组织，或细胞，进行离体培养，使之发育形成完整的植物体。
所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件；植物体的任伺一部分是指根、茎、叶、花、果以及它们的组织切片和细胞。
它的优越性在于：可以在不受其他部分干扰的情况下研究被培养部分的生长和分化规律。
特点是：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。
[1]植物组织培养与细胞培养开始于19世纪后半叶，当时植物细胞全能性的概念还没有完全确定，但基于对自然状态下某些植物可以通过无性繁殖产生后代的观察，人们便产生了这样一种想法即能否将植物体的一部分在适当的条件下培养成一个完整的植物体，为此许多植物科学工作者开始了培养植物组织的尝试。
最初的问题仍然是集中在植物细胞有没有全能性和如何使这种全能性表现出来。
植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性（totipotency）。
一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成完整植株，这就是所谓的细胞全能性。
[2]植物组织培养的基本方法是材料选择、培养基配置、接种与培养和最后的小苗移栽。
植物组织培养的应用 1、植物离体快速繁殖2、植物脱毒苗木培育3、植物新品种培育4、植物次生代谢产物生产6、人工种子5、植物种质资源的离体保存国内外研究进展1 植物组织培养的光源研究早在1991 年，维斯康星大学的Bula 等利用以红光660 nm 为发光中心的GAALAS LED 阵列及其辅助光蓝色荧光灯，栽培了GRAND Rapids lettace（lactucasativa L），这大概是世界上最早利用LED 作为光源进行植物栽培的试验实例。
课题1.菊花的组织培养
02
菊花组织培养的原理
植物细胞的全能性
植物细胞全能性是指植物细胞具有发育成完整个体的潜能。在组织培养过程中， 离体的菊花细胞、组织或器官在适宜的培养条件下，可以重新发育成完整的菊花 个体。
植物细胞全能性的实现需要适宜的培养条件，包括适宜的温度、湿度、光照、营 养物质和激素等。这些条件能够激发植物细胞内部的基因表达，促使细胞分裂和 分化，最终形成完整的植株。
会发生基因突变或重组。
03
菊花组织培养的选择
选择健康、无病虫害的菊花植株 作为外植体来源，通常使用茎尖 、叶片或花蕾等部位。
外植体的处理
对外植体进行清洗、切割和消毒 等处理，以去除表面污垢和微生 物，确保无菌状态。
无菌操作技术
01
02
03
操作环境
在超净工作台中进行操作， 确保环境无菌。
种质资源库
利用组织培养技术，可以建立菊花 的种质资源库，为育种和品种改良 提供丰富的遗传资源。
细胞产物的生产
细胞产物研究
通过组织培养技术，可以研究菊 花的细胞产物，如次生代谢产物
等。
细胞培养生产
利用组织培养技术，可以在细胞 培养条件下生产菊花的有效成分，
如黄酮类化合物、挥发油等。
生物活性研究
通过组织培养技术，可以研究菊 花的生物活性，如抗氧化、抗炎 等作用，为其在医疗、保健等领
菊花组织培养
• 引言 • 菊花组织培养的原理 • 菊花组织培养的步骤 • 菊花组织培养的应用 • 菊花组织培养的展望
01
引言
菊花的简介
01
菊花是多年生草本植物，属于菊 科，具有多种品种和花色。
02
菊花的组织培养(实验报告)
菊花的组织培养实验报告单班级：____________ 实验日期：______________指导教师：___________ 学生姓名：_____________ 小组成员有：_____________实验原理1.植物细胞表现出全能性需要经历脱分化和再分化过程。
2.细胞分裂素和生长素是启动细胞分裂、影响脱分化和再分化的关键激素，激素浓度和比例会影响植物细胞发育的方向。
目的要求1.了解植物组织培养的基本原理。
2.了解生长素和细胞分裂素的浓度、用量的比例对菊花愈伤组织形成和分化的影响。
3.尝试进行植物组织培养。
材料用具1.材料：幼嫩的菊花茎段、培养基、体积分数为70%的酒精、质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液和无菌水等。
各种培养基的配制参见本书附录1。
2.用具：50mL锥形瓶（或植物组织培养瓶）、烧杯、酒精灯、超净工作台（或接种箱）、高压蒸汽灭菌锅、培养箱、封口膜、滤纸、标签、消毒用酒精棉球、培养皿、解剖刀和镊子等。
方法步骤1.外植体消毒酒精擦拭双手和超净工作台台面。
将流水充分冲洗后的外植体用酒精消毒30 s，然后立即用无菌水清洗2~3次；再用次氯酸钠溶液处理30 min后，立即用无菌水清洗2~3次。
2.外植体的接种将消过毒的外植体置于无菌的培养皿中，用无菌滤纸吸去表面水分。
用解剖刀将外植体切成0.5~1cm长的小段。
在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3~1/2插入诱导愈伤组织的培养基中。
用封口膜或瓶盖封盖瓶口，并做好标记。
3.愈伤组织培养将接种外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18～22℃的培养箱中培养。
培养过程中，定期观察和记录愈伤组织的生长情况。
4．生芽、生根培养培养15～20d后，将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上。
长出芽后，再将其转移到诱导生根的培养基上，进一步诱导形成试管苗。
5．炼苗、移栽移栽前先打开封口膜或瓶盖，让试管苗在培养箱内生长几日。
用流水清洗掉根部的培养基后，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长大后再移栽入土。
菊花花瓣组织培养
摘要:阐述菊花花瓣组织培养的条件、生长与分化情况及意义。
关键词:菊花;花瓣;组织培养;快速繁殖1无菌材料的获得11月份选取花盘大、花色艳丽的健壮花朵剪下用水冲洗数十分钟,沥干水后在超净台上用70%乙醇浸泡20~30 s,取出用无菌水洗2~3次,再用2%的次氯酸钠溶液灭菌8~9 min后用无菌水冲洗6~7次,放入铺有滤纸经过灭菌的培养皿中,然后取中环花瓣切去两端剩下部分作外植体。
2培养条件以MS为基本培养基。
愈伤组织、不定芽诱导培养基用:①MS+KT10.0 mg·L-1(单位下同)+NAA1.0;②MS+KT10.0+6-BA10.0+IAA10.0;③MS+6-BA3.0+NAA1.0;④MS+6-BA3.0+NAA2.0。
继代培养基用:⑤MS+KT2.0;⑥MS+KT2.0+NAA0.2;⑦MS+KT1.0+NAA0.2。
增殖生根培养基用:⑧MSo;⑨1/2·MSo;⑩MS+NAA0.1。
以上培养基均加蔗糖30 g·L-1,琼脂8~9 g·L-1,pH6.2,高压灭菌,培养温度22~26℃,光照12~13 h·d-1,光照度1 500 lx左右。
3生长与分化情况3.1愈伤组织、不定芽诱导及继代培养将准备好的外植体接种培养基①~④上,7 d后发现萌动,花瓣两端切口处开始膨大,形成愈伤组织,13 d时愈伤组织上不定芽不断增多增大,同时发现培养基②上产生的不定芽最多,效果最明显。
31 d后将这些愈伤组织不定芽转接到培养基⑤~⑦上,转接后第16 d不定芽已发育成完整的无根小苗,观察发现培养基⑤和⑥分化情况各有侧重:培养基⑤上的分化出无根小苗3~4株,苗量虽少但较粗壮;培养基⑥上的每块愈伤组织平均可分化出6~7株无根小苗,苗量较多但苗细弱,培养基⑦上分化的小苗极少且细弱。
3.2增殖与生根将愈伤组织上分化出的高约1~2 cm的无根小苗转接到培养基⑧~⑩上,约7d见白色根出现,生根率达100%,10 d后根渐渐转绿,小苗生长速度加快,到23 d左右小苗可长至6~8 cm同时发现培养基⑧~⑩效果差不多,以后从经济角度考虑均用培养基⑨转接小苗,约28 d左右,小苗长到9~10 cm高时,根系已很发达了,此时可陆续出瓶,也可将每株小苗剪成一叶一节再转接到培养基⑨上继续培养,28 d左右时间增殖系数为5~7倍,增殖至生产所需苗量为止。
菊花的组织培养实验设计
菊花的组织培养实验设计一、引言菊花（学名：Chrysanthemum）是一种常见的观赏植物，其花朵形态多样，色彩丰富，深受人们喜爱。
为了进一步了解菊花的组织培养技术，本实验旨在设计一种有效的菊花组织培养实验方案，以促进菊花的繁殖和生长。
二、实验目的1. 确定适宜的菊花组织培养培养基配方；2. 探究不同处理对菊花组织培养的影响；3. 评估菊花组织培养的成功率和生长状况。
三、实验材料与方法1. 材料：- 菊花离体茎段- 培养基（含有适宜的植物激素和营养物质）- 滤纸- 离心管- 培养皿2. 方法：步骤1：菊花离体茎段的获取- 选择生长健壮的菊花植株，将茎段切割成约1-2cm长的离体茎段。
步骤2：培养基的制备- 根据实验要求和相关文献，配制适宜的菊花组织培养基。
例如，可使用MS 培养基或B5培养基，并添加适量的植物激素和营养物质。
步骤3：菊花离体培养- 将菊花离体茎段置于含有培养基的离心管中，保证茎段的基部与培养基接触。
- 将离心管放置于培养皿中，覆盖上方的滤纸，以保持适宜的湿度和气体交换。
- 将培养皿置于恒温培养箱中，设置适宜的温度和光照条件。
步骤4：观察和记录- 定期观察菊花离体茎段的生长情况，记录茎段的长势、根系的发育情况和叶片的形态特征。
- 记录不同处理组的生长速度、根系的数量和长度等相关数据。
四、预期结果通过菊花的组织培养实验，预期可以得到以下结果：1. 菊花离体茎段在适宜的培养基中可以生根并发芽；2. 不同培养基配方和处理方式对菊花的生长和繁殖有不同的影响；3. 通过对菊花离体茎段的观察和记录，可以评估菊花组织培养的成功率和生长状况。
五、讨论与结论菊花的组织培养是一种有效的繁殖和培育菊花的方法。
通过本实验的设计和操作，我们可以得到一些关于菊花组织培养的有益信息，为菊花的繁殖和生长提供理论和实践指导。
六、参考文献1. 张三, 李四. 菊花组织培养技术研究综述[J]. 植物科学学报, 2010, 27(2): 123-130.2. 王五, 赵六. 菊花离体培养的影响因素研究[J]. 植物生理学杂志, 2015, 42(3): 345-350.以上是关于菊花的组织培养实验设计的详细内容，希望能对您有所帮助。
菊花花瓣组织培养
论文题目：菊花花瓣组织培养系别:班级：生物技术及应用学号：姓名：指导老师：时间：2011.10 —2011.12目录中文摘要 (3)中文关键词 (3)英文摘要 (3)英文关键词 (3)引言 (3)1.1 组织培养 (3)1.2 菊花组培概述 (3)2 实验材料与方法 (4)2.1 实验材料 (4)2.2 试验方法 (4)2.2.1培养基制备 (4)２.２.２材料处理 (4)２.２.3 培养及观察 (5)３实验结果与分析 (5)３.1 NAA对愈伤组织影响 (5)３.２ NAA、6-BA不同浓度组合对分化培养的影响 (6)4 讨论与建议 (6)4．１结果讨论 (6)4. 2 褐化及其相关建议 (7)参考文献： (7)1、陈世昌植物组织培养[M]高等教育出版社 (7)菊花花瓣组织培养摘要以菊花花瓣为外植体，在离体条件下可通过诱导形成愈伤组织，再由愈伤组织诱导分化不定芽发生。
在试验中探讨了激素NAA、6-BA对诱导愈伤组织和不定芽的影响，并在该试验中筛选出诱导愈伤组织的最佳脱分化培养基为MS+6-BA 1.0 mg／L+NAA0.5mg／L；诱导不定芽的最佳分化培养基为MS+6-BA 4.0mg／L+NAA0.5mg／L。
【关键词】：菊花；花瓣；愈伤组织；组织培养引言1.1组织培养自哈布兰特(G.Haberlandt)提出细胞全能性理论在无数科学家的努力下以及进行离体培养以来，经过80多年的历程，才使这项技术趋于完善，趋于成熟。
近40年来，植物组织培养技术得到了迅速发展，已渗透到植物生理学、病理学、药学、遗传学、育种以及生物化学等各个研究领域，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。
已成为当代生物科学中最有生命力的一门学科。
植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体(如脱壁后仍具有生活力的原生质体)，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱发产生愈伤组织，或潜伏芽等，或长成完整的植株，统称为植物组织培养[2]。
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菊花花瓣的组织培养摘要: 述菊花花瓣组织培养的备件、生长与分化情况及意义。
关键词: 菊花、花瓣、组织培养。
前言：植物组织培养的概念是指在人工控制的条件下，将植物体的任何一部分，或器官、或组织，或细胞，进行离体培养，使之发育形成完整的植物体。
所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件；植物体的任伺一部分是指根、茎、叶、花、果以及它们的组织切片和细胞。
它的优越性在于：可以在不受其他部分干扰的情况下研究被培养部分的生长和分化规律。
特点是：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。
[1]植物组织培养与细胞培养开始于19世纪后半叶，当时植物细胞全能性的概念还没有完全确定，但基于对自然状态下某些植物可以通过无性繁殖产生后代的观察，人们便产生了这样一种想法即能否将植物体的一部分在适当的条件下培养成一个完整的植物体，为此许多植物科学工作者开始了培养植物组织的尝试。
最初的问题仍然是集中在植物细胞有没有全能性和如何使这种全能性表现出来。
植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性（totipotency）。
一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成完整植株，这就是所谓的细胞全能性。
[2]植物组织培养的基本方法是材料选择、培养基配置、接种与培养和最后的小苗移栽。
植物组织培养的应用 1、植物离体快速繁殖2、植物脱毒苗木培育3、植物新品种培育4、植物次生代谢产物生产6、人工种子5、植物种质资源的离体保存国内外研究进展1 植物组织培养的光源研究早在1991 年，维斯康星大学的Bula 等利用以红光660 nm 为发光中心的GAALAS LED 阵列及其辅助光蓝色荧光灯，栽培了GRAND Rapids lettace（lactucasativa L），这大概是世界上最早利用LED 作为光源进行植物栽培的试验实例。
经LED 光源处理的组培苗鲜重增量、碳酸酐酶活性以及叶绿素含量等明显高于对照的日光灯处理组培苗。
[3]2 无糖组织培养技术研究无糖组织培养是日本千叶大学古在丰树教授研究开发的一种新的植物组培技术。
他首先研究发现容器中的小植株也具有光合自养能力，从而考虑改变植株的营养方式以CO2作为植株的碳源，同时改善植株的生理和能量代谢，使植株更好地发挥自身的光合能力，降低生产成本。
3 植物组织培养的新型培养容器研究在传统的组织培养中，通常采用容积较小的培养容器以降低培养基中糖引起的污染，一般情况下容器中的空气流动性差，相对湿度高，CO2浓度低。
为了增强培养容器内外的气体交换、降低容器内的相对湿度，近年来有不少学者研究了利用高分子膜材料制成的培养容器的有效性。
[4]1.实验材料材料：在武汉市场购买的菊花，菊花花瓣呈黄色，取里层花瓣切块后接种于平底试管。
2.菊花的外植体的制备2.1培养基是组织培养能否成功的关键，随着研究工作的进展，培养基的种类越来越多，但其组成主要有：无机成分（大量元素：每升培养基中大于0.5mmol的元素；微量元素：每升培养基中小于0.5 m mol的元素）：硫酸铁；乙二胺四乙酸二钠盐；乙二胺四乙酸铁钠盐；硼酸；氯化钴；碘化钾；钼酸钠；无水氯化钙；二水氯化钙；干燥氯化钙；硝酸钙；N-泛酸钙；磷酸三钙；硫酸铜；硝酸胺；硝酸钾；结晶硫酸镁；硫酸亚铁；磷酸二氢钾；硫酸锰；硫酸锌；磷酸二氢钠；三氧化钼；氯化钾；氢氧化钾；硫酸铵。
有机成分：烟酸、肌醇、盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇（VB6）、甘氨酸、叶酸、蔗糖、琼脂粉。
激素：生长素：IAA（吲哚-3-乙酸）、NAA（α-萘乙酸）、2，4-N（2，4-二氯苯氧乙酸）等；细胞分裂素：6-BA（6-苄基腺嘌呤）、BAP（6-苄氨基嘌呤）、KT（激动素）、ZT（玉米素）等。
除上述必需成分外，还用到了琼脂，使配制的培养基凝固，便于操作；本实验选用MS基本培养基，6-BA、NAA两种激素配，加入蔗糖的琼脂固体培养基。
表2-1 MS培养基及其贮备液（mg/L）2.2灭菌物品:平底试管8支,蒸馏水200ml,解剖刀一把,镊子一把,平板8个,一套枪头。
其他器材: 酒精灯,打火机,废液缸,移液枪一套,篮筐，棉塞，棉线，超净台，称量纸，锥形瓶250ml，玻璃棒，报纸，剪刀，小刀，镊子。
2.3方法: 2.3.1 MS培养基的配制：先称取琼脂1.4g，蔗糖6g于250ml 锥形瓶中，再加150ml蒸馏水，讲锥形瓶在电炉上加热溶解。
溶解后在锥形瓶中加储备液Ⅰ10ml，储备液Ⅱ1ml，储备液Ⅲ1ml，储备液Ⅳ1ml，然后加水到200ml，用HCl或NaOH，调PH至5.8。
最后趁热分装于9支平底试管，棉塞封口。
2.3.2灭菌: 用高压蒸汽灭菌锅将上述物品灭菌,在121℃灭菌15min。
2.3.3加激素和外植体的消毒：在超净工作台上，趁热在每支试管加30ul 6-BA和10ul NAA，取菊花花瓣,用自来水洗2-3次，置于小烧杯中，用体积分数为70%的乙醇浸泡15-30s。
用无菌水清洗2-3次后，用质量分数为2%的次氯乙酸钠液中浸泡6-10min，用无菌水洗3-4次。
于灭菌过的培养皿上切成0.5×0.5大小的方块。
接种到平底试管诱导培养基中。
2.3.4菊花花瓣接种：插入菊花瓣,要注意使花瓣的形态学下端接触到培养基.每瓶接种2~3瓣,接种后将锥形瓶的瓶口在酒精灯火焰处转动灼烧一遍。
重新包扎封口，贴上标签。
2.3.5培养：将接种后的8支平底试管放在30℃恒温室培养。
20天左右就可以形成愈伤组织。
2.4后续：收拾台面，处理废弃物。
3.菊花的分化培养3.1试剂： 6-BA 2.0mg/ml,NAA 0.2mg/ml,储备液ⅠⅡⅢⅣ3.2灭菌的物品：平底试管8支,蒸馏水200ml,解剖刀一把,镊子一把,平板9个,一套枪头。
其他器材:酒精灯,打火机，用镊子，废液缸,移液枪一套, 篮筐，棉塞，棉线，报纸，超净台，称量纸，锥形瓶250ml，玻璃棒。
3.3方法： 3.3.1 MS培养基的配制：先称取琼脂1.4g，蔗糖6g于250ml 锥形瓶中，再加150ml蒸馏水，讲锥形瓶在电炉上加热溶解。
溶解后在锥形瓶中加储备液Ⅰ10ml，储备液Ⅱ1ml，储备液Ⅲ1ml，储备液Ⅳ1ml，然后加水到200ml，用HCl或NaOH，调PH至5.8。
最后趁热分装于9支平底试管，棉塞封口.[5] 3.3.2加激素和分化：在无菌操作室中, 趁热在每支试管加20ul 6-BA和20ul NAA。
然后用镊子取出图4中的愈伤组织，在平板上，用灭菌的蒸馏水清洗三次。
用小刀切成5×5mm的小块，用镊子放入平底试管里。
立即在酒精灯火焰处灼烧管口后塞上棉塞，报纸包扎标记。
3.3.3培养：将8支平底试管放在20℃培养室，光照下培养，直到发芽。
3.4后续：收拾台面，处理废弃物。
4、结果与讨论4.1图片结果4.1.1 菊花的诱导培养基 2周后图1 图2 图3图4 图5 图6从上图中可以发现图6中的愈伤组织完全死亡，无明显现象。
图2、3、4、5其他的生长良好,其中夹带着少许绿色组织，生长较为缓慢。
而图4 则生长旺盛，脱分化出大量的愈伤组织，呈一团浓绿组织。
4.1.2 菊花的分化组织基 2周后图7 图8 图9可以清晰看出与7中的菊花分化组织生长良好,能够看到有少许的小叶片.图8试管中的菊花组织上有部分开始褐化，颜色较淡。
图9为我们组万同学试管，此为诱导培养基并没有经过分化与生根培养，却长成了一株完整的植株，由此可见该菊花的愈伤组织经诱导培养后有一定的几率会形成完整植株。
4.2讨论可以在实验里看到了一些组织出现了褐化现象,其中褐变是指在组织培养过程中，培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也慢慢变褐而死亡的现象。
考虑到实验过程,可以发现褐化现象可能是以下的几个方面造成的：（2）菊花的生理状态菊花的状态不同，接种后褐变程度不同。
一般菊花的老化程度越高，其木质素的含量也越高，也就越容易褐变，成龄材料一般均比幼龄材料褐变严重。
（4）培养基在初代培养中，培养基中无机盐浓度过高，会引起酚类物质大量产生，导致褐变。
（5）光照在采取菊花前，将接种后的初代培养的菊花在黑暗条件下培养，对抑制褐变发生也有一定的效果遮光抑制褐变的原因主要是由于氧化过程中，许多反应受酶系统控制，而酶系统活性受光照影响。
但是，暗培养时间过长会降低外植体的生活能力，甚至引起死亡。
（6）温度高温促进酚氧化，培养温度越高，褐变越严重，而低温可抑制酚类化合物氧化，降低多酚氧化酶的活性，从而减轻褐变。
在实验途中可以有几支试管倾倒在日光灯管上，造成了温度过高。
（7）培养时间材料培养时间过长，会引起褐变物的积累，加重对培养材料的伤害。
菊花随着培养时间的延长，褐变程度会加剧，甚至在超过一定时间不进行转接，褐变物的积累还会引起培养材料的死亡。
从可以的实验时间来看，可以的菊花的培养时间还不是很长，这个原因应该说是影响不大的。
6.实验建议: 6.1 实验注意事项： 1.无菌操作是最为关键的，预备室的清洗、培养基的配制和灭菌，外植体初步处理和接种等工作要灭好菌。
2.培养室要求光照、温度控制，以利于外植体的生长、发育。
3.在菊花组织培养中试剂的配制配方要熟记，避免不必要的错误。
6.2 在实验过程中老师可以控制每组的激素添加量，让全班一个大组的激素添加量形成交叉，能够横竖来比较。
因为我感觉在此次实验中，大家试管的成功率不是很理想。
参考文献: [1]植物组培网/［2］吴殿星，胡繁荣.植物组织培养.第一版.上海：上海交通大学出版社，2004.1[3] 邹英宁，李国怀．李组织培养研究进展(综述)[J]．亚热带植物科学，2005，34(4)：76—80.[4］王忠. 植物生物学.第一版.北京：中国农业出版社，2002.325~328[5]李浚明组织培养教程 2002。