1.凝集实验
实验1.直接凝集实验
5分
2.实验器材（仪器、试剂） 10分
3.实验原理 10分
4.实验方法
20分
5.实验结果及计算
20分6.ຫໍສະໝຸດ 论（对结果的分析、自己的体会和收获、对教学的
建议）30分
7.卷面
5分
实验一 直接凝集实验
目的和原理
颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下发生反 应，出现肉眼可见的凝集小块。常见的操作 方法有玻片（纸板）法和试管法
一 玻片法：梅毒甲苯胺红不加热血清试验
（tolulized red unheated serum test TRUST）
原理: 梅毒患者血清中存在着能与VDRL（心磷脂、卵磷脂 和胆固醇）抗原发生凝集反应的反应素，本试剂采用 VDRL抗原重悬于特制的甲苯胺红溶液中，当待测血 清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼 可见的粉红色凝块。
实验室规则
6.实验室所有实验器材，未经处理一律不得带出实验室。 7.尽量保持安静，注意安全。不要随意调动实验室仪器。 8.自己的实验器材(试管、平皿等)注明日期、姓名、组. 9.离开实验室前，必须洗手。怀疑污染，应及时用消毒液泡手。 10.每次实验后，用消毒液擦拭实验台，拖地等。
实验报告书写
1.实验名称及实验目的
实验数据记录表格式
检测结果 样本号
原倍血清 1：2稀释 1：4稀释 1：8稀释 1：16稀释
注意事项：
1.试验应在室温23—29℃条件下进行。 2.TRUST抗原在使用前必须充分摇匀。 3.做定量试验，可将待测血清用在生理盐水做倍比系
列稀释，然后按上述定性方法进行试验，以呈现明 显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。 4.本试验为梅毒非特异反应素试验，对阳性者应结合 临床及特异性密螺旋体试验再做判断。
实验1 细胞凝集反应
实验1 细胞凝集反应（赵海泉主编基础生物学实验指导细胞生物学分册中国农业大学出版社2008.8.）一、实验目的与原理1．目的学习植物凝集素的提取方法，观察红细胞凝集现象。
2．原理细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。
目前认为细胞间的联系和识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。
凝集素（1ectin）是一类含糖并能与糖专一结合的蛋白质（少数例外），它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
二、实验用品1．材料土豆块茎，兔血。
2．试剂0.9 % NaCl溶液，PBS缓冲液（称取7.2 g NaCl、1.48 g Na2HPO4、0.43 g KH2PO4。
加蒸馏水定容至1 000 mI，pH 7.2）。
3．器材离心机，显微镜，天平，注射器，6号针头，载玻片，容量瓶，滴管，离心管等。
三、实验内容与操作（一）提取凝集素称取土豆去皮块茎20 g，加100 ml PBS缓液，浸泡2 h，将浸出的粗提液过滤，即为可溶性土豆凝集素提取液。
（二）制备2%的红细胞悬液以无菌方法抽取兔静脉血液（加抗凝剂）2 mI。
加8 mL 0.9 % NaCl溶液，以2 000 r/min离心5 min，去掉上清液，再加0.9 % NaCl溶液至10 ml，反复洗涤5次。
最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。
（三）凝集反应用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各1滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min后于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。
四、注意事项1．若沉淀压积的红细胞暂时不用，应将其4℃保存。
下次使用前，先洗涤再用生理盐水配成2%红细胞悬液。
2．以PBS液加2%血细胞液作对照实验。
五、作业与思考题1记录血细胞凝集情况。
2实验课程感想或感受。
红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验(HI)
红细胞凝集试验（HA）与红细胞凝集抑制试验（HI）河南省乘风动物保健技术研究所使用疫苗对鸡只进行免疫以预防传染病的流行和传播已成为现代化养鸡疫病控制的主要途径，这种观点已被广大养殖户接受并引起足够重视。
但鸡群免疫抗体的产生及维持时间受到鸡群免疫应答能力、所用疫苗种类、免疫方法、免疫次数、疫病流行状况、环境污染性况、饲料营养水平、饲养管理方法等方面的影响较多，良好的免疫接种不等于鸡群能够产生良好的保护力。
因而通过对鸡群进行抗体监测，及时检查鸡群的免疫状态、疫苗使用效果，为制定合理的免疫程序提供依据就显得非常重要。
通过对广大养殖户的大量调查发现，由于缺乏有效的监测手段，养殖户普遍存在盲目免疫的现象。
因此，建立合理的抗体监测制度，开展免疫抗体监测工作，已经成为我们当前养鸡生产中急需开展的一项重要工作。
红细胞凝集试验（HA）与红细胞凝集抑制试验（HI）由于方法简单，结果稳定而被广泛应用，下面将抗体监测所需设备及监测过程向大家做一说明。
一、实验用设备：1、离心机1台*（3000转离心红细胞）2、冰箱1台*（存放抗原）3、振荡器1台*（振荡96孔V型板）4、抗原新城疫（ND）、减蛋（EDS）、流感（AI）抗原，从正规厂家进。
5、96孔V型板稀释血清清洗后可重复使用6、移液器1把（5-50微升稀释血清）7、吸头和移液器配套使用，不可重复使用8、小烧瓶配制4个单位抗原及盛放生理盐水加样用9、输液管采血用，用是剪成6-8cm长的短管10、注射器2ml，采血用11、红细胞非免疫鸡心脏或翅静脉采血或免疫鸡也可，但需离心5次后使用。
12、柠檬酸钠配制3.8％抗凝剂用13、重铬酸钾配制清洁液用14、硫酸配制清洁液用15、吸管1毫升、10毫升16、吸耳球和吸管配套使用17、针头9*13（采雏鸡）、9*25（采大鸡）18、蒸馏水当地买。
清洗96孔V型板、吸头用19、离心管离心红细胞用，可用10ml带刻度的玻璃或塑料离心管20、生理盐水做血清稀释液用、配制4单位抗原二、实验前的准备：1.抗原：从指定厂家购买稳定浓缩抗原。
凝集实验报告范文
凝集实验报告范文实验名称：凝集实验实验目的：1.通过观察和探究凝集现象，了解凝集现象的产生机制；2.探究影响凝集的因素，如溶液浓度、温度、pH等。
实验原理：凝集是指溶液中的微粒聚集形成较大的团簇或沉淀的过程。
凝集的产生与溶质的浓度、温度、溶液pH、溶质的电荷等因素有关。
实验材料：1.十二烷基硫酸钠（SDS）溶液；2.五个不同浓度的SDS溶液；3.盐酸（HCl）和氨水（NH3·H2O）溶液；4.剪刀；5.显微镜；6.盖玻片。
实验步骤：1.准备五个不同浓度的SDS溶液，浓度递增，分别为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%和1.0%。
2.在五个试管中分别加入相应浓度的SDS溶液，每个试管加入相同体积的溶液。
3.使用剪刀将五张盖玻片剪成小片，每张盖玻片在一定高度处弯折，并将弯折处添加到五个试管中的溶液中。
4.在每个试管中观察和记录显微镜下的凝聚现象，包括聚集团簇的形状、大小等。
5.在一定时间间隔内观察记录凝聚现象的变化。
实验结果：使用不同浓度的SDS溶液进行凝集实验后，我们观察到如下结果：1.SDS溶液浓度越高，凝聚团簇的大小越大，聚集得越快；2.添加盖玻片后，溶液中的SDS微粒开始聚集形成团簇，并逐渐增大；3.高浓度SDS溶液下的凝聚团簇形状更为规则，而低浓度SDS溶液下的凝聚团簇形状较为不规则。
实验分析：凝聚现象的形成与溶液中SDS微粒之间相互作用有关。
SDS为带有负电荷的表面活性剂，其负电荷会导致微粒之间的静电斥力，维持微粒的分散态。
当浓度较高或pH等因素改变时，SDS微粒之间的静电斥力减弱，从而促使微粒聚集形成团簇。
根据实验结果，可以推测以下几点：1.浓度较高的SDS溶液中，微粒间的静电斥力减弱，微粒之间更容易聚集，形成较大的凝聚团簇；2.SDS溶液浓度越高，凝聚团簇的大小越大，聚集得越快；3.低浓度SDS溶液中，微粒间的静电斥力较强，微粒的分散态相对稳定，凝聚团簇形状较为不规则。
实验结论：凝集是溶液中微粒聚集形成团簇的过程，其形成受到溶液浓度、温度、pH等因素的影响。
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集反应)(1)
凝集反应实验原理和方法（直接凝集反应和间接凝集反应）(1)凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集现象。
一、直接凝集反应颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）直接与相应特异性抗体结合，在适量电解质存在条件下，出现肉眼可见的凝集现象，称直接凝集反应。
参加凝集反应的抗原称为凝集原，而抗体则称为凝集素。
直接凝集反应有玻片法和试管法两类。
（一）玻片凝集反应在玻片上进行的直接凝集反应,主要用于抗原的定性分析,数分钟之内便可观察结果,快速、简便。
常用于细菌的分型鉴定,也用于ABO血型的测定。
【实验材料】（ 1）抗原：受检菌液或受检者的血细胞盐水悬液。
（ 2）抗体：用于细菌鉴定的1：20稀释诊断血清。
血型检测的A及B诊断血清。
（ 3）生理盐水、玻片、吸管、接种环。
【实验方法】（ 1）于洁净玻片的一端加诊断血清1滴，另一端加生理盐水1滴作阴性对照。
（ 2）用接种环取待检菌液或血细胞悬液分别涂于诊断血清和生理盐水，混匀。
（ 3）轻摇玻片，静置数分钟，观察结果。
【结果分析】玻片上抗原凝集成肉眼可见的小团块状或絮状凝集物，其周围液体澄清，为阳性反应。
阴性反应和生理盐水对照均不发生凝集，为均匀混浊的乳状液。
【注意事项】细菌鉴定时，特别是肠道菌种的沙门菌属或志贺菌属，原则上先用多价诊断血清检测，如为阳性，再用单价诊断血清进行分群或定型。
血型测定时，室温需保持在 20oC左右，若低于10oC，易出现冷凝集现象而造成假阳性的错误诊断。
（二）试管凝集反应是用定量的颗粒性抗原悬液与一系列倍比稀释的待检血清在试管中进行的凝集反应，根据试验结果判定待检血清中有无相应抗体及其效价，对血清中抗体进行半定量分析。
此法目前仍常用于某些病原微生物感染的免疫学诊断，例如，诊断伤寒和副伤寒的肥达氏（ Widal test）反应，诊断斑疹伤寒的外—裴氏反应（weil-felix test）。
实验一 细胞凝集反应
实验一细胞凝集反应1.实验目的1.1了解细胞膜的表面结构。
1.2掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
1.3学习研究细胞凝集反应的方法。
1.4掌握耳缘静脉兔子取血的方法。
2．实验原理凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，特能提的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。
常用的为植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。
在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。
凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞膜结构间形成“桥”，从而引起细胞凝集。
凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合，加入域凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素能与不同的糖蛋白特异性结合，加入与凝集素互补的的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder(1983)提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。
凝集素使细胞凝集与血小板凝血的原理不同。
当人体受伤流血时，血小板就迅速向血管破裂处大量聚集。
它们首先释放肾上腺素、5－羟色胺等具有收缩血管作用的物质，使受损血管不同程度地紧闭，减少血流量。
然后血小板一旦与非血管内膜表面接触，便会迅速扩展，颗粒向中央集中，并伸出多个伪足，转变成树突型血小板，大部分颗粒随即释放，血小板之间融合，成为粘性变形血小板。
粘性变形血小板在伤口大量堆积粘附形成血栓，堵住伤口，制止流血。
如果伤口很大那还要与纤维蛋白一起封堵。
血小板凝血是一个生理反应，要注意与凝集素使细胞凝集相区分。
3.实验用品3.1材料家兔3.2试剂 PBS缓冲液土豆凝集素4.实验步骤4.1取土豆去皮块茎2克，加10mlPBS缓冲液，浸泡24小时，浸出的粗体液中即含有可溶性土豆凝集素。
4-1 凝集反应
凝集反应(agglutination)
是一种经典的血清学反应，它是指颗粒性抗原例 如红细胞、细菌等与相应的抗体在适量的电解质存在 的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集物。 参加反应的颗粒性抗原称为凝集原(agglutinogen)， 抗体称为凝集素(agglutinin)。
根据凝集反应中抗原的性质，反应的方式又分为直 接凝集反应(direct agglutination)和间接凝集反应 (indirect agglutination)。 直接凝集反应有玻片法和试管法之分，而间接凝集 反应则分为间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验和协 同凝集反应。 由于抗原、抗体结合具有高度的特异性，所以常利 用凝集反应协助传染病的诊断、流行病学调查以及微生 物分类、遗传研究等诸多方面。
特
点：
1.特异性，抗原1.特异性，抗原-抗体的结合是特异性结合 特异性 2.可逆性， 2.可逆性，抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合 可逆性 3.阶段性，抗原抗体反应可分为两个阶段： 3.阶段性，抗原抗体反应可分为两个阶段：1）特异 阶段性 性结合阶段； 性结合阶段；2）可见的反应阶段 4.比例性， 4.比例性，抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象 比例性 与两者的分子比例密切相关
凝集反应
• 定义: 定义:
+
颗粒性抗原 相应抗体
可见的凝集团块
• 分类: 分类:
直接凝集反应: 直接凝集反应: 间接凝集反应 玻nation
• 细菌、螺旋体或红细胞等颗粒性抗原，在适当电解 质存在的条件下，可直接与相应的特异性抗体结合， 出现凝集的现象，称为直接凝集反应（direct agglutination）。 • 有玻片法和试管法之分.
实验原理
发热？关节疼？一个不可忽视的疾病———布病
发热？关节疼？一个不可忽视的疾病———布病河南省洛阳市疾控中心2022年前七个月发现432例布病患者，患病的羊、牛等疫畜是布病的主要传染源，同时，我省多地已经开始开展布病防控等有关工作。
而我院作为豫东地区指定检查机构，送检布病标本量自然不会少。
那么，什么是布病、什么是布鲁氏菌、布鲁氏菌的毒性和传染性如何？下面我将对这些问题进行梳理，希望对临床诊疗和防控工作有所帮助。
1.概述布病，即布鲁氏菌病，能引起动物和人类发生人兽共患病，属于我国法定乙类传染病，与新冠、结核、艾滋等为同一类型传染病，传染性不容小觑。
人类感染后临床上主要表现为发热、菌血症、关节痛、全身乏力、肝脾肿大等。
以上感染人类致病菌的主要包括羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌、猪布鲁氏菌和犬布鲁氏菌，在我国流行的主要是羊布鲁氏菌。
2.临床表现及分期潜伏期一般为l-3周，平均为2周。
部分病例潜伏期更长。
有上述症状病程在6个月以上为急性期，病程超过6个月仍未痊愈为慢性期。
（一）临床表现1.发热：典型病例表现为波状热，常伴有寒战、头痛等症状，可见于各期患者。
部分病例可表现为低热和不规则热型，且多发生在午后或夜间。
2.多汗：急性期病例出汗尤重，可湿透衣裤、被褥。
3.肌肉和关节疼痛：为全身肌肉和多发性、游走性大关节疼痛。
部分慢性期病例还可有脊柱（腰椎为主）受累，表现为疼痛、畸形和功能障碍等。
4.乏力：几乎全部病例都有此表现。
5.肝、脾及淋巴结肿大：多见于急性期病例。
6.其他：男性病例可伴有睾丸炎，女性病例可见卵巢炎；少数病例可有心、肾及神经系统受累表现。
3.生物学特性布鲁氏菌为革兰阴性小球杆菌（大小约0.5~0.7×0.6~1.5um），无鞭毛，无芽胞，常成散在或小团状排列。
专性需氧菌，营养要求比较高，可以在普通培养基上生长，但在普通培养基生长缓慢，37℃培养48h后可见微小（2-3um）、透明、光滑的灰白色菌落。
抵抗力较强，在土壤、毛皮、感染后动物的脏器和分泌物、肉及乳制品中可存活数月；对常用消毒剂敏感，在日光直照下20分钟可死亡，在湿热60℃20分钟下可死亡（即巴氏消毒法可杀灭该菌）。
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1、材料
已知Ab:标准血清：抗A和抗B血清
待测Ag:RBC血型抗原
2、方法
(1)取血(无名指尖或耳垂)——NS试管—— 2-5%RBC悬液；
(2)准备一张载波片； (3)加血清各1滴； (4)加RBC各1滴； (5)牙签搅和并摇晃混匀；
(6)结果判断(10-15min后)。
在白背景 上观察
A凝集、B不凝集——A型血 A不凝集、B凝集——B型血 A凝集、B凝集——AB型血 A不凝集、B不凝集——O型血
实验一
凝集实验
一、实验内容
1、直接凝集实验(玻片法)——血型鉴定
每人做
2、间接凝集实验——类风湿因子检测 小组做
二、目的要求
1、掌握血清学反应概念、特点、影响条件 及类型； 2、了解凝集反应的原理、类型及其用途；
3、熟悉常用凝集反应的实验方法及结果判 定。
三、免疫实验需注意的问题
(一)免疫实验室注意事项：
1、验证所学理论知识；
2、训练基本操作技术，培养独立工作能力。
(三)要求：
1、严肃认真；
2、多想、多看、多做；
3、书写实验报告。
实验报告书写格式
实验题目
一、实验内容，如血型检查； 1、主要材料； 2、实验步聚； 3、实验结果； 4、结论；
5、讨论。
二、…… 1、……
四、凝集反应相关知识
(一)血清学反应：
间接凝集抑制试验 ——妊娠试验
反向间接凝集试验 ——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。
协同凝集试验
——用于检测传染病早 期血液及分泌液中的微 量Ag。
五、实验内容
(一)血型鉴定(每人做)：
ABO血型
ABO A B AB O
RBC血型Ag 血清血型Ab
A 抗-B
B 抗-A
A、B 一
一 抗-A、B
2.类风湿因子检测方法：
A、取一乳胶凝集实验反应板； B、加待测血清、RF阳性血清和阴性血清各一滴；
C、各加一滴RF胶乳试剂；
D、牙鉴搅拌; E、5分钟后观察结果。
乳胶凝集如细沙状。 以黑背景观察为佳。
4、注意事项
(1)取血时注意无菌操作；
(2)RBC悬液不能太淡和太浓，2-5%； (3)搅和牙签在A和B不能混用； (4)在白色背景上观察效果好。
(二)类风湿因子检测
类风湿：
患 者 体 内
间接乳胶凝集试验
Ag: 变性IgG
Ab: 抗变性IgG(类风湿因子)
1. 材料
已知Ag:致敏乳胶(乳胶颗粒上有变性 IgG) 待测Ab:待检血清中的类风湿因子
Ag-Ab反应种类：
1、凝集反应；
2、沉淀反应；
3、补体结合反应；
4、中和反应； 5、免疫标记技术。
4大经典免疫实验
(二)凝集反应：
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在适当 的电解质条件下凝集成肉眼可见的小块，称为 凝集反应(agglutination)。
颗粒性Ag——凝集原； 相应Ab——凝集素。
(2)试管法：诊断伤寒病的肥达氏反应。 已知Ag,测Ab，为定量实验； 用途：诊断肠热症(Widal reaction) 诊断布氏菌病(Wright reaction)
2、间接凝集反应
RBC——间接血凝试验
用途：某些病毒感染和变态反应患者血清中 的相抗体量。
乳胶——间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。
即体外进行的Ag-Ab反应，由于机体绝大部分 抗体存在于血清中，故又叫血清学反应。
特点：
(1)高度特异性； (2)分子表面的可逆性结合；
(3)Ag、Ab比例合适才会出现肉眼可见的反应。
肉眼可见的 凝集物。
影响条件
1、电解质：0.85% NaCl； 2、酸碱度：pH6～9(7.0)； 3、温度：15～400C(370C )。
颗粒性抗原：
凝集反应
光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌、 RBC等。 可溶性抗原：
沉淀反应
光镜无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白 质、多糖抗原等。
凝集反应类型：
1、直接凝集反应
2、间接凝集反应
1、直接凝集反应
(1)玻片法：如检查血型的血细胞凝集现象；
已知Ab,测Ag，为定性实验；
用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。
1、必须穿白大衣进实验室； 2、实验中注意实验室秩序； 3、如发生意外如损坏玻璃器材等，要及时报告； 4、要节约实验药品；
5、实验后要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指 定陶瓷缸内；废纸及一次性用品弃于垃圾桶内。
6、实验完毕，清理完桌面，班长安排清洁，老师 检查后，做清洁同学方可离开。
(二)免疫实验课目的：