201410植物组织石蜡切片的制作
石蜡切片的主要步骤
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作试验药品和仪器试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油、石碳酸、中性树胶。
试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱。
试验方法1 叶片组织结构的观察对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法。
具体操作步骤如下：1. 取材。
选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2mm x 5mm 的小段。
2. 固定。
将切取的植物材料立即放入FAA 固定液中（材料与固定液比例1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰），固定时间48h以上。
FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按18:1:1的比例配置。
3. 冲洗。
材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h,并在70%酒精中过夜。
4. 脱水。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行：70%酒精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精，每级酒精中放2h，无水酒精分2次，一次2h。
5. 透明。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。
材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1〜2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红染色，以便透明后找到材料）一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒精一二甲苯一二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放1h。
材料进入无水的透明剂中后，若透明剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到前面一级无水的脱水剂中再次脱水。
6. 浸蜡。
夏季采用熔点较高的石蜡（56-58）,冬季宜选用熔点较低的石蜡（52-54）。
新蜡应溶一次，增加密度，反复溶的旧蜡包埋效果更好。
在溶蜡箱中进行55-60C，恒温。
怎样制作石蜡切片
怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。
以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。
-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。
确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。
-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。
-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。
2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。
-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。
-等待石蜡冷却和凝固。
你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。
3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。
-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。
你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。
4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。
-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。
5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。
-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。
6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。
- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。
-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。
制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。
在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。
植物组织石蜡切片制作
植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。
2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。
3．学会植物内部结构的比较研究方法。
二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。
它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。
凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。
全都过程如下：1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。
良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。
2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。
常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。
酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内。
高浓度酒精有使材料收缩的作用。
70％的酒精可作保存液。
配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。
酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。
酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。
B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。
固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。
不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。
经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。
中学生物实验技能实验报告——石蜡切片的制作
东北师范大学生命科学学院中学生物实验技能实验报告
名称：石蜡切片的制作
姓名：路路
学院：生命科学学院
专业：生物科学（师范）
年级：10级
学号：1241410044
【实验名称】石蜡切片的制作
【实验目的】了解石蜡切片的用途，并掌握其制作过程和方法。
石蜡切片（paraffin section），组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
例如在医学上，常常用石蜡切片做病例分析和诊断。
【实验步骤及原理】石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
以下即为石蜡标本制作的流程图：。
石蜡切片的制作过程
石蜡切片的制作过程（一）花药切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．脱水：经70％乙醇、85%乙醇，每级3~4h，含1%伊红的95％乙醇中3~4h（可以过夜），无水乙醇2次，每次1~2h。
4．透明、加蜡：5级氯仿透明，每级3~4h，纯氯仿2次，每次2h，加碎蜡，然后置36℃温箱中1~2d5．浸渗、包埋：50%、70%蜡各3h，再经纯蜡A、纯蜡B、纯蜡C三杯，每杯1h，包埋。
6．修蜡块、切片：粘蜡块时组织块直立于台木上，并用单面刀片切除先端石蜡，浸水软化后放在切片机上坐横切片，切片厚12μm。
7．展片、粘片、烘片：蜡片先镜检，每张载玻片上放2个蜡片，展片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃温箱中烘干。
8．脱蜡、透明：二甲苯脱蜡、透明各1次。
9．染色（番红-固绿双重染色）：在已脱蜡的材料上滴注无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水各4~5s，苯胺番红染色5~10min，用蒸馏水洗去浮色。
10．脱水、透明：各级乙醇脱水（30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇），苯胺固绿复染30~40s，再经95%乙醇，无水乙醇，1/2无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯2次，各约4~5s，最后置二甲苯缸中。
11．封片、烘片：加拿大树胶封片。
封片后将材料平放在摊片盘上，放置36℃左右的温箱内烤数天即可烤干。
最后，将干燥好的切片上的浮色擦净，并在玻片的左端粘上标签，注明组织切片的名称、染色方法、固定方法、年月日。
制片日程（二）花芽纵切片制片法1．取材2．固定：FAA液中固定24h，并保存在其中。
3．整染：经70％乙醇、50%乙醇各2~4h，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木精原液1份，加入50%乙醇及乙醇各半的混合液1份）中整染2~3d。
4．水洗、反蓝：蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换1~2次水，至样品由紫色变深蓝色为止，共需时约1d。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。
一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。
（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。
组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。
如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定 以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。
材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
固定的时间长短依据材料大小而定。
固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。
有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。
（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。
植物组织切片制作以及注意事项
植物组织石蜡切片的制作
1 植物组织石蜡切片的制作方法
⑴固定：用50%或70% FAA固定液,置于4℃固定24 h。
⑵脱水：倒去固定液，蒸馏水洗，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，
室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。
次日继续脱水酒精浓度梯度和时间依次为：50%2h，80% 乙醇2h、95% 乙醇4h、无水乙醇3h。
⑶透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h纯二甲苯2h。
⑷浸蜡：一蜡缸1h，二蜡缸2h，三蜡缸2h。
⑸包埋：按照所要求的面进行包埋。
⑹切片：修整蜡块，用Thermo切片机切片，厚度8-10 μm。
⑺贴片: 在防脱载玻片将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，烤片1小时。
⑻脱蜡及染色：
①番红-固绿双染
1、脱蜡：二甲苯（1）10min，二甲苯（2）10 min、二甲苯（3）10 min ，无
水乙醇8 min、、95%乙醇8 min、80%乙醇8 min、70%乙醇8min，蒸馏水洗。
2、番红固绿染色：
苯胺番红约10分钟，95%酒精去浮色，苯胺固绿约2－3分钟，再经95%酒精、无水酒精、1/2无水酒精+1/2二甲苯、二甲苯（两次）各约4—5秒钟。
（9）封片中性树胶封片
结果：厚壁组织、导管、细胞核红色，其余部分为绿色。
植物组织切片制作以及注意事项(精)
植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定:用50%或70% FAA固定液(50%或70%酒精:甲醛:冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA;老的材料用70%的FAA,置于4℃固定24 h。
⑵脱水:将固定液倒去,加入50%乙醇,室温静置30 min;重复一次,室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制,室温脱水染色过夜。
次日继续脱水,酒精浓度梯度和时间依次为:80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min(2次。
⑶透明:1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h,纯二甲苯1h、40 min(2次。
最后加入少量二甲苯(浸没材料即可和碎蜡,放入38℃温箱中过夜。
⑷浸蜡:将温箱温度调至56℃,计时1h;换成二级蜡1h;三级蜡(3次各1h、1h、40min(从温度上升到56℃开始计时。
⑸包埋:将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中,迅速放入冰水中使蜡凝固,防止气泡产生,以及凝蜡不匀。
⑹切片:修整蜡块,用Lica RM2126切片机切片,厚度5-10 μm。
⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂,将切好的蜡带放入温水中,捞至载玻片上,最后置于37℃恒温箱过夜烤片。
⑻脱蜡及染色:①番红-固绿对染ⅰ脱蜡:二甲苯60min,二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。
ⅱ染色:80%乙醇5 min,1%固绿(用95%酒精配制迅速蘸一下,大约10s,直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min(2次。
②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡:二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。
石蜡切片制作基本程序
石蜡切片制作基本程序石蜡切片制作是科学研究和医学领域中常见的技术，用于制作组织学切片以便进行显微镜下的观察和分析。
下面是一个石蜡切片制作的基本程序。
首先，需要准备一些基本的材料和设备，包括石蜡块、切片机、石蜡模具、刀片、显微镜玻片和染色试剂等。
确保这些材料和设备都是清洁的，并且切片机是调整好的。
接下来，将要制作切片的组织材料固定在一块石蜡模具上。
通常，组织样本需要经过一系列的处理步骤，包括固定、去水合和脱脂等，以确保最佳的切片质量。
固定的方法可以根据具体的实验目的选择，常见的方法包括福尔马林固定和乙醇固定等。
然后，将石蜡块加热至融化状态，并将融化的石蜡倒入石蜡模具中。
在倒入石蜡之前，可以根据需要在模具底部放置一块显微镜玻片，以便后续切片时将切片直接放置在玻片上。
接着，将固定在石蜡模具上的组织样本放置在石蜡中，确保它完全浸泡在石蜡中。
然后，将石蜡模具放置在冷却平台上，让石蜡逐渐冷却和固化。
固化过程中，可以在模具顶部放置一个金属夹片，以确保石蜡块的平整度。
当石蜡完全固化后，将石蜡块从模具中取出，并将其固定在切片机上。
然后，使用切片机的切片刀片将石蜡块切割成薄片。
切片时，需要调整刀片的切割速度和厚度，以获得所需的切片质量。
最后，将切割好的石蜡切片放置在显微镜玻片上，并进行必要的染色处理。
染色可以增强切片的对比度和可见度，使得组织结构更加清晰可辨。
总的来说，石蜡切片制作的基本程序包括固定组织样本、石蜡浸渍和固化、切片以及染色等步骤。
这些步骤的顺序和具体方法可以根据不同的实验需求进行调整和改变。
石蜡切片制作是一项需要细心和耐心的工作，但它为科学研究和医学诊断提供了重要的技术支持。
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植物组织石蜡切片的制作
一、器具
石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片、切片架等。
二、试剂
酒精、二甲苯、甲醛、冰乙酸、番红、固绿、明胶、中性树胶、蒸馏水等
三、全都过程
1．固定2．脱水3．脱酒精4．浸蜡和封埋5．切片
6．粘片7．脱蜡8．染色9．胶封10. 拍照
四、操作步骤：
1、固定和保存（Fixation）
FAA固定液(事先冷却)固定24 h以上，然后转移到70%酒精中保存。
固定时，真空抽滤2-3次，以促使固定更充分。
2．脱水与硬化（Dehydration）
3．脱酒精（透明）
Dehydration in a series of ethanol
Day 1
85% Ethanol 1 Hr on ice
95% Ethanol + 0.1% Eosin OVERNIGHT 4°C
Day 2
100% Ethanol 30 min room temp
100% Ethanol 30 min room temp
100% Ethanol 1 Hr room temp
100% Ethanol 1 Hr room temp
25% Xylene+75% Ethanol 1 Hr room temp
50% Xylene+50% Ethanol 1 Hr room temp
75% Xylene+25% Ethanol 1 Hr room temp
100% Xylene 1 Hr room temp
100% Xylene 1 Hr room temp
100% Xylene 1 Hr room temp
4．浸蜡和封埋（Embedding）
（1）从二甲苯逐步梯度更换纯石蜡，使组织渗透彻底。
（2）将材料移入纸盒中，依将所要切的方向，妥善排列，再以两手平持纸盒，移至冷水(about 18°C)中，用口在蜡面上吹气，促其凝结，待蜡面凝成簿层时(about 1 minute)，将纸盒全部沉入。
水冷凝后，将纸撕去，即获蜡块，至此埋蜡完成。
（1）Embedding tissues in paraffin blocks
25% melted wax (Paraplast)+75% Xylene overnight 45℃
50% melted wax (Paraplast)+50% Xylene 4h 53℃
75% melted wax (Paraplast)+ 25% Xylene 4h 53℃
100% melted wax (Paraplast) overnight60℃
100% melted wax (Paraplast) overnight60℃
5．切片
（1）用单面刀片修整蜡块，使上下面平行，下面略出，左右两边呈一定角度。
（2）安装切片刀，刀的斜度（around 7 degrees），非常重要，最好先切除的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合后，就不要随便变动，以免试刀麻烦。
（3）刀片斜度调好后，将刀片移近蜡块，使小蜡块的下边与刀锋平行，然后把它固定，再转下蜡块，呈矩形才行。
只有平整的蜡块，才能切出平整的蜡带。
（4）根据需要，调整控制切片厚度的机制（厚度10μm）。
调度后，把它固定下来。
上述四步骤完成后，就可进行切片，将切出的蜡带，平展于盒内以供粘片。
6．粘片
粘片时，以记号笔在载玻片上编号，滴加1或2滴1%明胶溶液（或直接用水），用胶头滴管将溶液涂匀，滴加1或2滴展开剂（2~4%的甲醛溶液），然后将切好的蜡带平整地放置在溶液上，置烤片机上的烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度，烤片温度为42℃。
1~2min 后用滤纸吸去多余液体，再放置于烘片台上烘烤1~2min。
放置于恒温环境35-40℃烘烤1-2d。
一般粘片后的材料需放置2~3天后方可脱蜡、染色。
7．脱蜡
将粘有材料的载玻片放入纯二甲苯中，然后逐级过渡到蒸馏水中。
Dewaxing:
100% Xylene 15 min room temp
100% Xylene 15 min room temp
50% Xylene+50% Ethanol 15 min room temp
100% Ethanol 15 min room temp
95% Ethanol 8 min room temp
85% Ethanol 8 min room temp
70% Ethanol 8 min room temp
50% Ethanol 8 min room temp
25% Ethanol 8 min room temp
Two rinse using distilled water
8．染色9．胶封
番红与固绿色法。
0.5% Safranin-O in 43% ethanol 1 h room temp
Two rinse using distilled water
50% Ethanol 8 min room temp
70% Ethanol 8 min room temp
85% Ethanol 8 min room temp
95% Ethanol 8 min room temp
0.5% (w/v) Fast Green (in 50% clove oil and 50% ethanol) 5–10 s room temp 100% ethanol quickly passed
Clove oil: ethanol : xylene (50:25:25) 10 min room temp
Clove oil: ethanol : xylene (50:25:25) 10 min room temp
50% Xylene+50% Ethanol 15 min room temp
100% Xylene 15 min room temp
100% Xylene 15 min room temp
Mounting with Permount (Fisher Scientific)
五、讨论和注意事项
(1) 用番红和固绿这个组合染成的切片，木化、栓化和角质的细胞壁，被番红染成鲜红色，纤维素的细胞璧，被固绿成绿色。
就维管束来讲，木质部染红，韧皮部染绿，区别极清楚。
(2) 在50％酒精中脱色，需经实践，如脱色不够，绿色难得染好，脱色太过分，做出来的切片，红色太淡，甚至于全是绿色，失掉了二色染法的用意。
(3) 染色时间，不是绝对的，常因材料种类，切片的厚簿而不同，在没有把握时，最好选用少数材料试染，试染成功后，再依次大批染色。
六、附录（药剂配方）
（1）F A A固定液的配方如下（100ml）：
50％或70%酒精90ml
冰醋酸5ml
福尔马林5ml
柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制。
（2）1%明胶液：50毫升纯水中，加明胶0.5克，加热搅拌溶解。
（3）展开剂（2~4%的甲醛溶液）：50ml纯净水中加入4ml甲醛。
（4）1%番红水溶液：100毫升纯水中加番红1克。
（5）0.5％固绿：用95％的酒精配制。
切片实验过程中不同浓度的酒精、二甲苯以及染色液等溶液能不能重复使用，如果能用可以用几次？
王英---可以。
前三步可以换勤点染100片左右可以换后面的看染色情况换；
染色用的酒精和二甲苯用的烧杯标明并分开使用染色前后也最好分开；
酒精易挥发，所以染色时要加盖。
徐沂春---染色10次左右对除染色液外都换；此外，开始的二甲苯、染色后的酒精大概5次。
我一般然500_1000片后换
我觉得要先加长透蜡时间，碎有可能是组织透蜡不充分，切得时候受到挤压，碎了。
第二个是略微增加切片厚度，在保证能观察的前提下。
第三个是切的时候要检查刀片，看刀片有没有缺口。
刀头有没有小碎物。
每次切都要清理一下
第四个是角度，这个我也调过，但不知道每个是不是一样的。
前提是能切就行，不能切的话，调整刀片要先竖直，在微调
第五个修蜡，我没看到你的。
关键是要修的平整，特别是夹的两面
第一步浸蜡能不能不过夜做好，让第二步开始过夜
把第3、4、5步在同一天做完，3、4步不少于4小时，第五步过夜。