脂质体包裹人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒的构建

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脂质体的介绍

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– 被动（天然）靶向性：天然靶向性是脂质体静脉给药是的基本特征。是由于脂质体被巨噬细胞作为体外异物吞噬而产生的体内分布特征。脂质体的这种特征被广泛应用于肝肿瘤等的治疗和防止淋巴系统肿瘤等的扩散和转移。
– 隔室靶向性：隔室靶向性指的是脂质体通过不同给药方式进入人体之后可以对不同部位具有靶向性。
– 物理靶向性：在脂质体的设计过程中，利用作用部位的物理因素或化学因素的改变而改变脂膜的通透性，引起脂质体选择性释放药物，从而达到靶向给药之目的。这种物理或化学的因素包括局部pH变化，病变部位温度变化，磁场的变化等。目前物理靶向脂质体设计最为成功的例子是温度敏感脂质体。
•.
脂质体在应用中存在的问题
• 脂质体作为药物载体的应用虽然具备了许多优点和特点，但就目前来看，也还存在一定的局限性，首先表现在其制备技术给工业化生产带来了一定难度；此外对于某些水溶性药物包封率较低，药物易从脂质体中渗漏；稳定性差亦是脂质体商品化过程急需解决的问题，目前的冻干方法可能是延长脂质体的贮存期的有效途径。
从而延长药物作用时间。 • 减低药物毒性 • 脂质体能选择性地分布于某些组织和器官,药物,能使之选择性地杀伤癌细胞或抑制癌细胞,对正常组织、细胞的毒性明显降低或无损害作用。对脂质体表面性质进行改变,如粒径大小、表面电荷、组织特异性抗体等,可提高药物对靶区的选择性,从而也降低了毒性,减少了不良反应。 • 提高药物稳定性 • 将一些不稳定的易氧化的药物制成脂质体之后，由于药物包封在脂质体中，受到类脂双分子层膜的保护，可以显著提高其稳定性。同时在进入体内之后，由于脂质体膜的保护，药物可以免受机体酶系统和免疫系统的降解。
脂质体的定义
磷脂在水溶液中形成脂质体 • 脂质体（英语：Liposome）也称为微脂粒，是一种具有

基于生物大分子的新型包裹药物设计及应用研究

基于生物大分子的新型包裹药物设计及应用研究在医药领域中，药物设计是一项非常重要的研究工作。

传统的药物设计多是基于化学药物的研究，而现在随着生物大分子研究的不断深入，基于生物大分子的新型包裹药物设计也越来越受到人们的重视。

生物大分子作为一种重要的药物载体，在药物设计中具有广阔的应用前景。

其中最具代表性的应用就是脂质体。

脂质体是一种由脂质分子构成的微小球形结构，具有良好的生物相容性和组织选择性。

由于脂质体能够包裹多种药物，如水溶性药物、蛋白质药物等，因此被广泛应用于药物输送、靶向治疗等领域。

在基于生物大分子的新型包裹药物设计中，还有一种很有前景的研究方向，那就是蛋白质药物的包裹。

蛋白质药物是一类重要的生物制品，但其分子量较大，容易被人体代谢降解。

因此，如何提高蛋白质药物的稳定性和生物利用度，一直都是药物研发领域的研究热点。

在这个领域中，基于生物大分子的包裹技术成为许多研究者所关注的方向。

近年来，基于生物大分子的包裹技术不断发展。

例如，基于蛋白质的包裹技术已经实现了对多肽、蛋白质药物的高效载体，从而提高了药物在体内的生物利用度。

同时，在基于蛋白质的包裹技术的应用中，通过掌握蛋白质的物理化学性质及其相互作用规律，研究者们可以进一步改善蛋白质药物的药效和剂型。

除了蛋白质药物包裹技术之外，一些研究者还在尝试使用基于多肽的包裹技术，来实现对一些难以治疗的疾病的有效治疗。

例如，在某些肿瘤治疗中，细胞信号通路的异常会导致肿瘤细胞的生长和扩散。

因此，可以利用该通路上的多肽类似物作为新型药物靶点，以实现对肿瘤的有效治疗。

同时，通过将多肽类似物包裹在生物大分子载体中，可以提高多肽类似物的生物利用度，进一步提高治疗效果。

总之，基于生物大分子的包裹药物设计已经成为药物研发中一个重要的研究方向。

脂质体、蛋白质质与多肽类似物等生物大分子都可以作为药物载体，在药物输送、靶向治疗等领域中发挥重要作用。

此外，结合物理化学性质和相互作用规律，通过优化包裹技术，可以进一步提高药物的药效和剂型，成为新型的药物开发手段，在未来的医药行业中必将发挥越来越大的作用。

脂质体转染mrna细胞原理

脂质体转染mrna细胞原理
脂质体转染mRNA细胞的原理是利用脂质体作为载体，将目的mRNA包裹在其内部，然后通过与细胞膜融合让mRNA进入细胞质，最终达到将目的mRNA表达出来的目的。

脂质体是由磷脂和胆固醇等组成的微小囊泡结构，与细胞膜结构相似。

其内部的疏水层可以容纳水溶性的物质，包括mRNA分子。

脂质体转染mRNA的步骤如下：
1. 准备目的mRNA：目的mRNA是指需要转染到细胞内进行表达的mRNA，可以是外源的mRNA，也可以是经过In vitro 转录合成的人工合成mRNA。

这些mRNA一般会在实验室中事先准备好。

2. 制备脂质体：将脂质体粉末或液体悬浮液溶解在适当的缓冲液中，形成脂质体溶液。

脂质体通过磷脂的双层结构来包裹mRNA，形成稳定的脂质体-mRNA复合物。

3. 混合脂质体与mRNA：将目的mRNA与脂质体溶液混合，并进行充分的混合和搅拌。

这样就可以使mRNA和脂质体发生相互作用，形成脂质体-mRNA复合物。

4. 转染细胞：将脂质体-mRNA复合物加入到需要转染的细胞培养液中，使其与细胞接触。

脂质体复合物会与细胞膜融合，从而使脂质体内的mRNA进入细胞质。

5. mRAN转录和表达：在细胞质中，脂质体释放的mRNA会
被细胞的核糖体识别，进而进行mRNA转录和翻译，最终使
该mRNA编码的蛋白质在细胞内得到表达。

脂质体作为转染载体具有一定的优势，如制备简单、生物相容性好等。

但是，脂质体转染也存在一些问题，如转染效率较低、引起细胞毒性等。

因此，在实际应用中需对转染条件进行优化，以提高转染效率和减少毒性。

人 RANKL 胞外结构域原核表达载体的构建及表达条件优化

细胞核因子ＫＢ受体活化因子配体（ＲｅｃｅｐｔｏｒＡｃｔｉｖａｔｏｒｏｆＮｕｃｌｅａｒＦａｃｔｏｒ —ＫＢＬｉｇａｎｄ，ＲＡＮＫＬ），是
肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）受体超家族成员之一，源于滑膜组织－ｌ卫，主要表达于破骨细胞前体细胞的表面，在淋巴组织（淋巴结、胸腺、脾、胎肝）及骨组织（骨骼、骨髓）中含量高，而在心、胎盘、骨骼肌、胃和甲状腺等非淋巴样组织中仅有低度表达 ’ ４］。成骨细胞、骨髓基质细胞、软骨基质周围的原始间
收稿日期：２０ｌ３ —ｏ４ —２８
作者简介：张琴（１９８７一
・
），女，湖北十堰人，硕士，研究方向为蛋白质结构与功能
４８・
１．１质粒与菌株原核表达载体ｐＥＴ一２１ｂ、克隆菌株ＤＨ５ａ、表达菌种Ｒｏｓｅｔｔａ由实验室保存。
３１７个氨基酸的区别仅在于具有较短的胞内结构域［。第三种亚型只含有２４３个氨基酸，没有跨膜
结构域和胞内结构域，而是一种可溶性蛋白，称为ｓＲＡＮＫＬ＿７ｊ。每一种亚型只有当他们各自聚合成
同源三聚体以后才具有生物活性［９ ’ 加］。ＲＡＮＫＬ与其受体ＲＡＮＫ以六聚体的形式结合并将信号传递
Ｒｏｓｅｔｔａ中，诱导使其表达目的蛋白。通过诱导时机、诱导温度、ＩＰＴＧ浓度、诱导时间、甘油浓度等五个影响因子对重组人ＲＡＮＫＬ胞外结构域的菌株进行可溶性表达及条件优化，旨在为该蛋白进一步的分离纯化、功能鉴定和配体筛选奠定基础Ｑ７

脂质体在基因治疗中的应用

脂质体在基因治疗中的应用基因治疗是一种治疗遗传性疾病的新型方法，它通过将具有治疗效果的基因传递给患者，从而修复或替代存在缺陷的基因。

然而，基因传递的主要难题之一是如何将治疗基因有效地传送到特定细胞内部。

这就需要使用适当的载体来保护和运输基因，而脂质体就是一种被广泛研究和应用的载体。

脂质体是由磷脂双分子层组成的微细颗粒，具有与细胞膜相似的结构，因此可以与细胞融合并释放载体内的基因。

脂质体在基因治疗中的应用可以通过以下几个方面来阐述。

首先，脂质体通过包裹基因形成脂质体基因复合物，能够有效地保护基因免受降解。

我们知道，DNA或RNA在体内容易被特定酶降解，使得其传递效果大打折扣。

而脂质体可以形成稳定的复合物，保护基因不受酶的攻击，从而提高基因的稳定性和生物活性。

其次，脂质体具有良好的细胞内摄取能力。

脂质体与细胞膜融合后，可以释放内部的基因，并将其引入到细胞内部。

这种细胞摄取的方式可以大大提高基因的传递效率，从而实现基因治疗的效果。

此外，脂质体还可以通过表面修饰来提高基因传递的特异性。

一种常见的方法是通过在脂质体表面引入特异性受体配体，使脂质体能够选择性地与特定细胞结合。

这种特异性的基因传递可以减少对正常细胞的影响，提高基因治疗的安全性和有效性。

另外，脂质体还可以用于基因编辑技术中的载体。

目前，CRISPR/Cas9技术已经成为基因编辑领域的热点研究方向。

而脂质体可以作为CRISPR/Cas9复合物的有效载体，将其传递到需要编辑的细胞中，从而实现精确的基因编辑。

最后，脂质体还可以通过改变其内部结构来实现对基因治疗的调控。

例如，可以在脂质体内部加入释放基因的刺激响应元素，使得脂质体只在特定条件下释放基因。

这种刺激响应性的脂质体可以提高基因传递的精确性，降低对非目标组织的影响。

综上所述，脂质体作为一种有效的基因传递载体，在基因治疗中发挥着重要的作用。

它能够保护并有效传递基因，提高基因的稳定性和生物活性。

同时，脂质体还能够通过改变其表面特性和内部结构，实现对基因传递的调控。

脂质体主动载药技术研究进展

脂质体主动载药技术研究进展一、概述随着医药科技的飞速发展，药物传递系统作为连接药物研发与临床应用的关键桥梁，其重要性日益凸显。

在众多药物传递系统中，脂质体作为一种生物相容性好、毒性低、能够有效保护药物并提高药物靶向性的载体，受到了广泛关注。

脂质体主动载药技术，作为脂质体研究领域的热点之一，通过主动调控脂质体的组成、结构和功能，实现药物的高效、精准输送，为提高药物疗效、降低副作用、提升患者生活质量提供了有力支持。

脂质体主动载药技术的基本原理在于利用脂质体的特殊结构和性质，通过主动靶向和或主动转运的方式，实现药物的高效、精准和可控释放。

脂质体是由磷脂双分子层构成的纳米级囊泡，其结构与生物细胞膜相似，因此具有良好的生物相容性和细胞膜融合能力。

这种结构特点使得脂质体能够包裹水溶性或脂溶性药物，并在体内运输过程中保持稳定。

主动载药技术的关键在于利用细胞膜上的转运蛋白或受体，通过配体受体相互作用或主动转运机制，将药物定向输送到病变组织或细胞。

本文旨在对脂质体主动载药技术的研究进展进行系统性梳理和总结，以期为相关领域的科研工作者和从业人员提供有益的参考和启示。

将对脂质体主动载药技术的基本概念、原理及其发展历程进行简要介绍，为后续研究内容的展开奠定基础。

随后，将重点围绕脂质体主动载药技术的关键要素，如脂质体的制备工艺、药物的装载与释放机制、靶向性的实现策略等进行深入探讨。

还将对脂质体主动载药技术在不同疾病治疗领域的应用案例进行分析，以展示其在实际应用中的潜力和优势。

将对脂质体主动载药技术面临的挑战和未来的发展趋势进行展望，以期为推动该技术的进一步发展提供有益的思考和建议。

1. 脂质体的定义与特性脂质体（Liposomes）是一种由磷脂双分子层构成的纳米级囊泡结构，其内部可以包裹水溶性药物，而双层之间则可以容纳脂溶性药物。

自上世纪60年代被发现以来，脂质体因其独特的药物传递特性，在医药领域受到了广泛关注。

生物相容性与生物可降解性：脂质体的磷脂成分与细胞膜结构相似，因此具有良好的生物相容性。

pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒的构建及其活性测定

pIRES2-EGFP-BMP-2真核表达质粒的构建及其活性测定詹玉林;白靖平;库热西·玉努斯;黄国虹【摘要】目的:构建pIRES2-绿色荧光蛋白(EGFP)-骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)真核表达质粒,并检测其表达活性.方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人骨肉瘤组织中扩增出人骨形态发生蛋白2 (hBMP-2)的基因片段,构建成pIRES2-EGFP-BMP-2重组质粒,经酶切、测序检测其构建的正确性,通过转染3T3细胞后分别采用RT-PCR、免疫组化及Western免疫印迹(Western blotting, WB)法检测其转录、表达活性.结果:构建的pIRES2-EGFP-BMP-2质粒经酶切、测序、RT-PCR、免疫组化、EGFP表达鉴定、WB等检验表明质粒构建成功并具有转录活性.结论:本实验成功构建了具有表达活性的hBMP-2真核表达质粒,为进一步研究用BMP-2基因转染的方法来促进实验动物骨折的愈合奠定了基础.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2008(031)005【总页数】4页(P524-527)【关键词】人类;pIRES2-EGFP;骨形成蛋白2;基因【作者】詹玉林;白靖平;库热西·玉努斯;黄国虹【作者单位】新疆医科大学第一附属医院骨科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学附属肿瘤医院,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院分子生物学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院分子生物学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R34骨形成蛋白2(Bone morphogenic proteins 2, BMP-2)被认为是骨形成蛋白(BMPs)家族中诱导成骨作用最强且能单独诱导成骨的细胞因子。

pIRES2绿色荧光蛋白(EGFP)是来源于心肌炎病毒的载体，经改建后，在其中加入了可表达增强绿色荧光蛋白的基因，是一种高效、简便的真核表达载体。

药剂学--脂质体介绍

4、电感应法（库尔特计数器）
5、光感应法（如粒度测定仪）
脂质体的质量研究（粒径和分布）
1、光学显微镜法将脂质体混悬液稀释（约5倍），取1滴放入载玻片上或滴入细胞计数板内，放上盖玻片，观察脂质体粒径大小和数目，然后按其大小分档计数，以视野见到的粒子总数，求出各档次百分数。仅适用于大的脂质体。 2、电子显微镜法用负染法和冰冻蚀刻法，用于分析小脂质体。负染法：用溶液悬浮脂质体，样品滴在有支持膜的铜网上，滤纸吸去多余的液体，再滴重金属染料，滤纸吸去多余液体，自然干燥30min，用电镜观察脂质体的结构和粒径分布。
脂质体的理化性质（相变温度）
Tc以下时，为“胶晶态”（脂肪链全反式，排列紧密，刚性和厚度增加）
Tc以上时，为 “液晶态”
（脂肪链伸缩、弯曲、外扭）
磷脂发生相变时， “胶晶态” “液晶态” “液态”共存，出现相分离，使膜的流动性增加，易导致内容物泄漏。
脂质体的理化性质（相变温度）
相变温度与脂质体膜稳定性
脂质体的理化性质
2、膜的通透性 (1)半通透性脂质体膜：不同离子穿膜和分子扩散过膜速率不同。 (2)膜两侧的渗透压：导致分子量较小的物质渗漏或磷脂膜破裂 (3)对于在水中和有机溶剂中溶解度都非常高的分子，磷脂膜是一种非常弱的屏障。
脂质体的理化性质
3.膜的流动性 Tc时膜的流动性增加：包裹在脂质体内的药物具有最大释放速率。胆固醇可调节膜的流动性： a.高于Tc时，减少膜的流动性 b.低于Tc时，增加膜的流动性 4、荷电性含酸性脂质的脂质体荷负电含碱基的脂质体荷正电不含离子的脂质体显电中性
脂质体材料
负电荷磷脂（酸性磷脂）
磷脂酸（PA）磷脂酰甘油（PG）磷脂酰肌醇 (PI) 磷脂酰丝氨酸(PS)

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脂质体包裹人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒的构
建
杨于力;罗清礼;吕红彬
【期刊名称】《国际眼科杂志》
【年(卷),期】2014(14)12
【摘要】AlM:To construct recombination eukaryotic expression plasmid of human thyrotropin receptor extracellular domain encapsulated with cationic liposomes. METHODS:We amplified the target gene of shuttle vector PHMCMVTSHR289, conjugated the target gene and eukaryotic expression plasmid pcDNA3. 1 +, and accredited whether pcDNA3. 1+/TSHR289 was connected or not by enzymatic digestion and sequencing. Cationic liposomes encapsulated the recombination plasmid pcDNA3. 1+/TSHR289. RESULTS: Recombination plasmid pcDNA3.
1+/TSHR289 digested with enzyme Hindlll and the fragment through 0. 8% gel electrophoresis showed 512bp strip. Recombination plasmid pcDNA3.
1+/TSHR289 were found synonymous mutation through forward ( AAC to AAT ) and reverse sequencing ( GCG to GCT) . The volume ratio of cationic liposomes and recombinant plasmid was 3:1. CONCLUSlON: lt is successful to construct the recombination plasmid pcDNA3. 1+/TSHR289
by accredit it through enzymatic digestion and sequencing.%目的：构建阳
离子脂质体包裹的人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒。

方法：PCR扩增穿梭质粒PHMCMVTSHR289目的基因并连接于真核表达质粒
pcDNA3.1+上,重组质粒pcDNA3.1+/TSHR289采用酶切及测序法鉴定。

阳离子脂质体包裹重组质粒pcDNA3.1+/TSHR289。

结果：重组质粒pcDNA3.1+/TSHR289用HindIII酶切后产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测显示出现512 bp条带。

正向测序发现AAC突变为AAT,为同义突变。

反向测序发现GCG突变为GCT,亦为同义突变。

阳离子脂质体与重组质粒的体积质量比例为3：1。

结论：酶切及测序鉴定重组质粒 pcDNA3.1+/TSHR289构建成功。

【总页数】4页(P2151-2154)
【作者】杨于力;罗清礼;吕红彬
【作者单位】400038 中国重庆市，第三军医大学西南医院西南眼科医院;610041 中国四川省成都市，四川大学华西医院眼科;646000 中国四川省泸州市，泸州医学院附属医院眼科
【正文语种】中文
【相关文献】
1.人TLR4胞外段真核表达质粒的构建及其在HEK293 细胞中的表达 [J], 陈伟;史忠
2.脂质体包裹的促甲状腺激素受体胞外段基因重组质粒免疫法构建小鼠甲状腺相关眼病动物模型的可行性 [J], 杨于力;罗清礼;吕红彬
3.脂质体包裹的促甲状腺激素受体胞外段基因重组质粒免疫法构建小鼠甲状腺相关眼病动物模型的可行性 [J], 杨于力;罗清礼;吕红彬;
4.人促甲状腺激素受体基因真核表达质粒的构建 [J], 康莉;黑砚;肖利华
5.人促甲状腺激素受体胞外段的体外重组、蛋白高效表达及其与构象功能的关系[J], 吴晓燕;雒文田;徐利;王琛;田竹芳
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