天然药物化学试验指导试验室注意事项￣
实验指导
天然药物化学实验指导一、前言天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
其主要目的是：通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。
通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：提取分离方面要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液-固提取法（浸渍、渗漉、回流提取等）、液-液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分布法）、重结晶法等。
掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱等）的原理和基本操作。
鉴定方面化学方法①掌握一般定性反应在鉴定中的用②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及应用。
光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然物结构测定中的应用。
目前要求学员能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱、蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱特征。
二、天然药物化学实验须知在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
但只要加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。
实验规则试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。
随时记录试验应记的项目，以作正式报告。
试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。
试验时不准做无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪器有否漏气，破裂等。
药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原处。
不可调错瓶塞，以免污染，仪器要洗刷干净。
操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或一端封死的毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。
天然药物化学实验指导书
天然药物化学实验指导书前言天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
其目的主要是：1．通过实验检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。
2．通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
3．通过设计性实验，培养学生独立从事科研工作的基本能力。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：（一）提取分离方面1．要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液—固提取法（浸渍、渗漉、煎煮、回流提取）、液—液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法）、重结晶法等。
要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。
２．掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱）、薄层色谱的原理及基本操作。
以后要创造条件，使学生能逐步地学到气相色谱、高效薄层及高压液相的基本操作。
（二）鉴定方面１．化学方法①掌握一般定性反应在结构鉴定中的应用。
②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及其在结构鉴定中的应用。
（芦丁的酸水解）２．光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然产物结构鉴定中的应用。
目前要求学生能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱，蒽醌的IR、NMR谱特征。
通过设计性实验逐步培养学生独立进行实验的能力。
对某些实验内容，要求学生有一定的设计能力，为今后从事科研工作打下必要的基础。
本实验指导书主要是供理科基地班天然药物化学实验的参考书。
天然药物化学实验须知在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，实验操作又经常在加温、加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
但只要加强责任心和防患意识，提高警惕、消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。
天然药物化学实验讲义
《天然药物化学实验讲义》实验须知天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验须知：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。
实验过程应养成及时记录的习惯。
凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。
3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。
节约用水、用电、药用试剂。
严格药品用量。
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
实验一薄层板的制备、活度测定及应用一、目的要求1．掌握硅胶薄层板的制备及薄层层析的操作方法2．掌握硅胶薄层活度的测定方法3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分二、实验材料薄层层析用硅胶G，硅胶F，羧甲基纤维素钠，0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene），苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline），苯，微量点样管，10×20cm玻璃板20块，碾钵7套。
第一部分药物化学实验要求及实验室基本知识
第一部分药物化学实验要求及实验室基本知识第一部分药物化学实验要求及实验室基本知识一、实验目的1、通过实验，加深对药物化学基本知识和基本理论的理解，使学生对药物合成过程中的有关技术和方法有一定的了解。
2、培养学生严格认真的科学态度和良好的工作习惯，以及分析问题和解决问题的能力。
二、实验要求1、实验课前应认真预习实验内容，了解本次实验的目的要求，学习和理解实验原理和反应方程式，熟悉有关实验步骤、实验装置和注意事项，写出实验提纲。
2、进入实验室应穿实验工作服，不得穿拖鞋。
3、实验开始时，先清点仪器，如发现缺损应立即补领或更换。
4、应严格按照实验步骤、仪器规格和试剂用量进行操作。
取出的试剂不可再倒回原瓶中，以免带入杂质。
取用完毕，应立即盖上瓶塞，归还原处。
5、实验时应精神集中，认真操作，细致观察，积极思考，如实记录。
保持实验室安静，不得擅自离开实验场所。
6、要保持实验室整洁。
实验台上尽量不放与实验无关的物品。
为防止杂物堵塞下水道或水槽，火柴梗、废纸和沸石等固体物应投到废物缸中。
7、遵从教师指导，注意安全，发生意外事故，立即报告教师。
8、实验完毕，将仪器洗净并归还，保持桌面整洁，指导教师检查后可离开实验室，不得在实验室逗留。
9、值日生负责打扫实验室，把废物容器倒净。
离开实验室前要关水、关电、关窗，指导教师检查后方能离开实验室。
三、实验室安全知识(一)、药物化学实验室安全守则药物化学实验室经常使用易燃易爆有毒的试剂如:乙醚、乙醇、丙酮、氢气、苯，或强酸强碱等腐蚀性的试剂;也常使用玻璃仪器、电器设备。
当使用不当时，就有可能发生着火、爆炸、烧伤、中毒等事故，因此在实验中应严格遵守下面的有关规章制度，就能有效地防止事故的发生。
1、熟悉安全用具如灭火器材、砂箱等的放置地点和使用方法，并妥善保管，不准挪为它用。
2、在实验室或实验大楼内禁止吸烟。
3、不用开口容器盛放易燃溶剂，而且应将其放置在远离火源处。
4、金属钠贮存于煤油或石蜡中，残渣不准乱丢。
天然药物化学试验
残渣
滤液
在60—70℃下用浓盐酸调 pH4—5, 静置1小时, 抽滤
芦丁精品
注: ①加石灰乳时pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出； ②加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH8—9； ③pH ④可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，
按芦丁在热水中1: 200溶解度加蒸馏水进行重结晶。
实验原理
利用乙醇为提取溶剂, 可把不同类型性质互异的蒽醌类成分 提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度, 故回收乙醇后得总提 取物可用乙醚提取总苷元；
根据蒽醌衍生物的酸性强弱, 用不同的碱液进行萃取, 最后 得到不同的蒽醌苷元。
实验方法
1.大黄中总蒽醌成分的提取分离
大黄粗粉100g
置1000ml 圆底烧瓶中, 加入95%乙醇250ml, 回流提取2hr, 趁热抽滤
醇液
醇液
药渣
加入95%乙醇200ml, 回流提取1.5hr, 趁热抽滤
药渣
乙醇提取液
静置冷却, 抽滤
滤液
减压回收乙醇至糖浆状, 将浓缩物转移至250ml三
角瓶中 乙醇总提物
放冷, 加入乙醚60ml冷浸, 振摇20′将乙 醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
2.芦丁的鉴定
（1）芦丁的定性反应:
取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使溶解，分成三份做下述试验。
① 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察 颜色变化情况。
② 取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记 录
颜色变化情况。 ③ 取上述溶液1~2ml， 加等体积的10%α—萘酚乙醇溶液，摇匀，
天然药物化学实验讲义
《天然药物化学实验讲义》实验须知天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。
养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。
为此，提出下列实验须知：1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。
实验过程应养成及时记录的习惯。
凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。
3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。
节约用水、用电、药用试剂。
严格药品用量。
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
实验一薄层板的制备、活度测定及应用一、目的要求1．掌握硅胶薄层板的制备及薄层层析的操作方法2．掌握硅胶薄层活度的测定方法3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分二、实验材料薄层层析用硅胶G，硅胶F，羧甲基纤维素钠，0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene），苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline），苯，微量点样管，10×20cm玻璃板20块，碾钵7套。
天然药物化学实验意见与建议
天然药物化学实验意见与建议一、构建实验教学体系，强化技能训练，培养学生分析、解决问题的能力。
精心设计实验教学环节，逐渐形成与理论教学紧密联系、相辅相成、双向循环的实验教学体系，通过改革实验考核评价体系，不断提高学生的综合素质、创新精神和实践能力。
构建实验教学体系、强化技能训练的做法如下。
1.以传统的经典实验为基础，培养学生扎实的基本功。
在实验内容方面，有目的地选择一些代表性天然药物，如芦丁、大黄、粉防己，分别采用水、亲脂性有机溶剂、亲水性有机溶剂三种不同类型溶剂进行提取，在实验过程中学生真正体验到了三类不同溶剂的优缺点。
将实验纸层析、薄层层析及柱层析等基本操作导入到各个实验环节中，让学生在掌握天然药物化学中重要的三类化合物（黄酮、蒽醌、生物碱）的理化性质的同时，巩固实验的基本操作技术。
在培养基本功基础上，我们还重视培养学生的主动学习能力、独立思考能力，如：对于大黄的提取分离，先在理论课上进行“关于缓冲纸色谱在天然药物应用”的讲解，然后要求学生通过初步查阅有关资料，根据自己所做的缓冲纸色谱的实验结果，设计分离各个化合物所选溶剂的pH值、萃取次数、萃取溶剂的最佳体积等实验参数。
通过此实验，改变了过去学生依赖实验讲义，依样画葫芦做实验的现象，培养了学生独立思考问题的能力，调动了学生学习的积极性，激发了学生对科学研究的兴趣。
2.开设综合性实验，提高学生分析问题和解决问题的能力。
中共中央国务院关于深化教育改革全面推进素质教育的决定指出：“抓紧建立更新教学内容的机制，加强课程的综合性和实践性，重视实验课教学，培养学生实际操作能力。
”我们通过开设中药综合实验――绞股蓝口服液的制备，将生药学、天然药物化学、药物分析、药物制剂等方面的知识有机结合起来。
通过该实验，学生对作为天然药物代表的绞股蓝如何开发制成药物有了完整的认识，充分意识到中药的现代化离不开以中药物质为基础的研究强有力支持，从而确定天然药物化学在中药研究中的地位，激发主动学习的积极性。
最新天然药物化学实验指导
天然药物化学实验指导天然药物化学实验指导---兰州大学天然药物化学教研室天然药物化学实验须知一、每次实验以前，必须预习本实验内容，了解其操作程序和理论要点，切勿盲目进行实验，实验时须准备记录薄一本，随时正确记录每一实验应记的项目。
如原料用量，实验时发生的现象，反应结果，产品数量、熔点、沸点、产品纯度等，以作写正式报告的依据。
二、实验所得产品，如不供下一实验用，应交给指导老师，并注明品名、数量、组别、姓名、日期。
三、实验规则1．实验时不能阅读与本实验无关的书籍，不要高声谈笑，也不能擅自离开，严禁在实验室内吸烟及吃东西。
2．实验室要经常保持整齐清洁，桌上不要乱放无用的仪器与药品。
火柴杆、废纸等不要乱抛在地上、废酸、碱液应倒入污水缸中，易燃烧及易挥发的废液应倒入水槽中，并立即用水冲掉。
3．药品、仪器都是国家财产，须节约爱护使用，若有损坏，应填写仪器损坏单，报告指导教师，及时领取，并酌情赔偿。
4．试剂、药品、公用用具，使用后立即放回原处，不可乱放，并应注意不可盖错试剂瓶塞，以免污染试剂。
5．装有易燃性液体的瓶子，不得放在灯火近旁。
6．加热乙醇、乙醚、石油醚、苯等易挥发可燃的液体时，应使用装有冷凝管的烧瓶，在水浴上进行加热，加热前应放入沸石1—2粒，或一端封死的毛细管，防止爆沸冲击，若在加热时未放沸石则应冷却后再加，不可热时追加，添加溶剂时应离开火源，稍冷后再添，并应重新加入沸石。
7．实验过程中，万一遇见溶液着火，应立即用石棉布或其他物品把它盖上，使其隔绝空气而熄灭。
8．实验完毕后，应将用过的仪器洗刷洁净放好，并应指定值班人员将实验室打扫干净，污水缸的废液拿到室外适当地方处理埋掉，离开实验室时，应检查门、窗、水电是否关好。
9．严禁将实验室内的仪器、药品携带室外。
以上须知清严格遵照执行。
实验一薄层色谱(TLC) 实验二从三棵针中提取、分离小檗碱与小檗胺实验三从洋金花中提取分离东莨菪碱和莨菪碱实验四大黄中蒽醌类化合物的提取分离实验五芦丁的提取与鉴定实验六甘草酸的提取实验七烈香杜鹃挥发油的含量测定实验八丹皮酚的提取、分离和制剂鉴别实验九预试验附录一常用溶剂的物理性质附录二常用溶剂的回收及精制方法附录三常用干燥剂性能的说明仪器清单实验一簿层色谱(TLC)薄层色谱是色谱法中应用最普遍的方法之一，具有分离速度快，效率高等特点。
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天然药物化学实验指导目录实验室注意事项 (1)实验一芦丁的提取分离与鉴定 (2)实验二艾叶及丁香中挥发油的提取鉴定 (5)实验三从红辣椒中分离红色素 (7)实验四咖啡因的提取与分离 (8)自选实验薯蓣皂苷元的提取与分离 (10)自选实验甘草皂苷元的提取与分离 (10)自主设计实验 (15)实验室注意事项天然药物化学实验课具有实验周期长、使用有机溶剂品种多，用量较大等特点，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、实验操作经常在加温，减压下进行，需要使用各种热源和电器，再加上实验室较为拥挤，若操作不慎，易引起着火、触电、中毒、爆炸等事故，为确保实验安全顺利进行，特作如下要求。
一、实验前必须预习实验内容，了解实验原理和操作程序，检查仪器是否完整，装置是否正确，检查合格后方可开始实验。
二、实验室内要保持严肃、安静，不得大声说话打闹；室内严禁吸烟，实验进行时不得擅自离开，必要时委托专人看管。
三、未经教师允许不得擅自使用明火，需使用明火时，实验台周围不得放置易燃有机溶剂，如发生火情,应保持镇静，立即报告指导教师，同时切断火源，移走易燃品！用湿布闷盖或用灭火器进行灭火，切勿轻易用水，以免扩大火势。
四、实验时要做到整齐、清洁、用过的仪器要及时清洗并收人仪器柜内，保持水槽、仪器、桌面、地面四洁。
五、回流、蒸馏有机溶剂时，注意检查冷凝水是否通畅，装置不得密闭，接收有机溶剂时不得使用广口仪器，溶剂瓶不得敞口存放。
在进行减压操作时，必须使用安全瓶，弄清操作程序，以免造成回水等事故。
六、使用挥发性试剂或喷显色剂时，应在窗口或通风橱内操作，不慎溅在桌面上的化学药品必须立即清除。
身体直接接触化学物品后应及时用肥皂及大量水冲洗，如碱性试剂可用l％HAc溶液冲洗，酸性试剂可用3％NaHCO3溶液冲洗。
不要用酒精、丙酮等洗涤皮肤上的有机物，以免增加皮肤对有毒物质的吸收，眼睛里溅入化学试剂后，应立即用大量水冲洗，及时到校医室就诊。
七、使用电器设备（如水浴锅、紫外灯、旋转蒸发仪、循环水泵等）一定要按操作规程进行，不得在烘箱内干燥带有易燃性有机溶剂的仪器或物品，仪器发生故障时及时报告指导教师，不得擅自拆卸。
八、每次实验结果后的产品，应妥善包装好，贴好标签，写明级别、产率等，放入干燥器内保存，不得随意丢失。
九、实验结束后，值日生应做好实验室清洁卫生工作，整理好公共仪器、药品，检查水、电、门窗，经教师检查后方可离去。
实验一 芦丁的提取分离与鉴定一、实验目的1、掌握碱－酸法提取黄酮类化合物的原理和操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检查等手段在苷类结构鉴定中的应用。
二、黄酮类化合物的结构与性质芦丁（Rutin ）广泛存在于植物界中，现已发现的含芦丁植物至少在70种以上，如烟叶，槐花米、荞麦和蒲公英中均含有，其中尤以槐花米（为植物Sophoru japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。
提取芦丁的方法很多，目前我国多采用碱提取－酸沉淀法，其提取原理是依据芦丁结构中含有酚羟基，能与碱反应，生成盐而溶于水中，向此盐溶液中加入酸．则芦丁游离析出，此外，还可采用水和醇提取法。
芦丁具有Vp 样作用，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性。
主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，多作口服，也可作注射用。
芦丁为淡黄色针晶，含三分子结晶水物的熔点174～178℃。
无水物熔点188～190℃，微溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等溶剂。
溶解度情况见下表：结构式如下：O O O OH OH CH 2O OH OH OH CH 3O O OH HO OHO O HO OH OHOHOH芦丁 槲皮素槲皮素为芦丁的苷元，含两分子结晶水物为黄色针晶（稀乙醇），于95～97℃失水，313～314℃分解，槲皮素可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。
三、芦丁的提取分离和纯化1、于500ml烧杯中加入水300ml，硼砂1g［1］加热至沸，投人槐花米粗粉20g，继续直火煮沸2～3分钟，在搅拌下小心加入石灰乳（1gCaO+10ml蒸馏水），调PH 至8.5－9［2］，保持微沸30分钟，趁热滤。
2、将滤液放冷至室温，在60～70℃下用浓盐酸调PH至4［3］，静置6小时以上，析出沉淀，抽滤，用蒸馏水洗沉淀1～2次至中性。
所得沉淀为芦丁粗品。
3、重结晶，将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，趁热抽滤。
滤液充分静置至不再析出沉淀，过滤，所得沉淀于60～70℃干燥，得芦丁精制品。
注：［1］加硼砂目的是因其能与芦丁结合，起保护邻二羟基不被氧化破坏的作用，实验证明提取时加入硼砂，产品质量要好些。
［2］加入石灰乳既可达到碱溶解提取芦丁的目的，又可除去槐花米中大量的多糖类粘液质，但pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出，煮沸时间不可过长，因其可导致芦丁的降解。
［3］pH过低会使芦丁形成烊盐而降低收率。
［4］利用芦丁冷热水中溶解度差异来达到结晶目的。
得到的沉淀要粗称一下，按照芦丁在热水中1∶200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。
四、芦丁的鉴定1、芦丁的定性反应：取芦丁3～4mg，加乙醇5～6ml使溶，分成3份，做下述试验：（1）取上述溶液1～2rn｜，加少许镁粉，再加2滴浓盐酸，注意观察颜色变化。
（2）取上述溶液1～2ml，滴加2%的ZrOCl2的乙醇溶液，注意观察颜色变化情况，再加2%柠檬酸乙醇溶液，详细记录颜色变化情况［5］。
（3）α一萘酚反应（Molish＇s Reaction）：取上述溶液1～2ml，然后加等体积的10％α一茶酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加硫酸，注意观察两液界面产生的颜色变化。
注：［5］在样品溶液中加入2％ZrOCl2的乙醇溶液后，如溶液呈黄色示可能有C3-OH或C5-OH，如再加入2％柠檬酸乙醇溶液，黄色不褪示有C3-OH，如黄色褪去，加水稀释后转为无色，示无C3-OH，但有C5-OH。
（上述两种条件下生成的络合物对酸的稳定性不同，其中C3-OH、4一酮基络合物稳定性大于C5-OH、4一酮基络合物的稳定性）。
2、芦丁水解后苷元与糖的鉴定（1）芦丁水解：称取精制芦丁约1g，研细，加2％H2SO4100ml装人250ml锥形瓶中，加入沸石，直火沸腾后保持2小时，放冷后抽滤，滤液保留作糖的鉴定。
水洗沉淀后，粗品用95％乙醇约10rnl煮溶回流，趁热过滤，放置加水至50％左右浓度，得黄色针晶。
（2）苷元的鉴定1＞苷元的碱降解+ 槲皮素 间苯三酚原儿茶酸取苷元50mg ，加水和95％乙醇各5ml ，加氢氧化钾4g 在石棉网上直火加热回流5小时，反应后挥去乙醇，用稀盐酸调成酸性（pH 约为2），用乙醚振摇萃取，取醚层回收醚，残液进行缓冲纸层析，然后用Sulphanilic acid [6] 试剂显色，并与间本三酚和原儿茶酸标准品对照层析结果[7]。
注：[6] Sulphanilic acid 试剂组成：A 液：10％Na 2CO 3水溶液；B 液：0.5％sulphanilic acid ；C 液：0.5％NaNO 2水溶液。
先喷A 液，然后再喷B 和C 的等量混合液（B 与C 用时临时混合）。
2＞槲皮素五乙酰化物的制备：称取精制槲皮素0.2g ，置25ml 干燥的锥形瓶中，加6ml 醋酐和1滴浓硫酸，振摇使完全溶解，接上空气冷凝管，于水浴上加热30分钟，放冷，搅拌下倾入100ml冰水中，搅至油滴消失，得灰白色粉末状沉淀，放置，抽滤，洗涤，用95%乙醇将沉淀重结晶，无色针晶，为五乙酰化槲皮素,熔点192～194℃。
（3）芦丁和桷皮素的薄层层析鉴定吸附剂：青岛硅胶G （10～40u ）以0.3％CMC －Na 水溶液为粘合剂制板，105℃活化半小时。
展开剂：（任选一种）A 、氯仿一甲醇一甲酸（15：5：1）[7] .1、间苯三酚2、降解液3、原儿茶酸 O OHO OH OH OH OH OHHO OHOH OH COOH OH -加热B、氯仿一丁酮一甲酸（5：3：1）显色剂：1%三氯化铁和1%铁氰化钾水溶液，临用时等体积混合（4）糖的鉴定1＞纸层析鉴定：取水解溶液10ml，于水浴上加热，在搅拌下加BaCO3或Ba（OH）2细粉中和至中性，滤除生成的BaCO3沉淀，滤液小心浓缩至1～2rnl（水浴浓缩，注意防止炭化），得样品液以葡萄糖、鼠糖标准品作对照进行纸层析。
展开剂：正丁醇一冰醋酸一水（4：1：5上层）径向展开。
显色剂：邻苯二甲酸一苯胺试剂，喷于滤纸上，于105℃加热数分钟至斑点出现，观察结果并记录。
2＞脎的制备及鉴定余下的水解液小心用40％NaOH液中和，滤除棕红色沉淀，水浴上加热浓缩至约30ml，滤后加1g盐酸苯肼，2gNaAC，沸水浴上加热30～40分钟，析出黄色混合糖脎，停止加热，冷却后取结晶少许，于显微镜下观察，鼠李糖脎为簇状针晶，葡萄糖膝为扫帚状聚针晶。
滤取糖脎结晶，水洗，干燥后，溶于丙酮，滤除不溶物，滤液加水使成30％丙酮液即析出葡萄糖脎，抽滤后以少量丙酮重结晶一次，熔点209℃，母液加水稀释，析出鼠李糖脎，稀乙醇重结晶，熔点185℃。
五、芦丁、槲皮素的光谱鉴定1．UV光谱法：将适量分离得到的芦丁、槲皮素精制品溶解与适量甲醇中，在200~400nm测定紫外光谱；然后加入诊断试剂，再在200~600nm测定紫外光谱，分析数据，确定结构。
2．NMR法：将芦丁、槲皮素精制品溶解与DMSO-d6中，测定其1H-NMR13C-NMR 光谱，分析图谱，推断结构，指出峰归属。
附:实验二艾叶及丁香中挥发油的提取鉴定一、实验目的1、掌握挥发油的提取方法、原理；2、通过对比掌握两种挥发油提取器的构造和使用。
3、了解TLC法在鉴定挥发油成分中的应用。
二、实验材料艾叶50克，丁香30克，5％香草醛浓硫酸液，小标本缸1个，环已烷：乙酸乙酯（9：1）5ml，石油醚：乙酸乙酯（3：1）5ml，3克硅胶G，9ml蒸馏水，载玻片10片。
三、实验内容（一）艾叶中挥发油的提取、鉴定艾叶为菊科植物艾（Artemisia argyileve，et Vant）的干燥叶，其同属植物野艾（Artemisia Vulgaris L—）的干燥叶也可作艾叶用。
艾叶中挥发油的主要成分是水芹烯（Phellandrene），毕澄茄烯（Cadinene），侧柏醇（Thujyl alcohol）等。
艾叶油呈兰绿色。
辛辣气味，比重小于1。
1、提取取艾叶50克放入1000 ml圆底烧瓶中，接挥发油提取器（比重小于1），回流3小时后，取出油作TLC鉴定。
2、鉴定硅胶G硬板，105℃活化半小时，点样，用环己烷—乙酸乙酯（9：1）展开，5%香草醛浓硫酸液显色，观察班点颜色、个数，计算Rf值。