药物鉴别试验授课幻灯总论

λ
max (nm)
1% E1cm
273 291 287 275 226；294 277
1098 691 975 1630 918 1001
R4 R5
N R1
由吡啶酮酸并联苯环、吡 啶环或嘧啶环等芳香环组 成的化合物
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(二) 一般鉴别试验（general identification test）
原理
本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化 铁试液生成配位化合物。
方法2：取供试品溶液，加稀盐 酸，即析出白色水杨酸沉淀； 分离，沉淀在醋酸铵试液中溶 解。
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（三）专属鉴别试验（specific identification test）

证实某一种药物的依据，它是根据每一种 药物化学结构的差异及其所引起的物理化 学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性 反应，来鉴别药物的真伪。
供试品
结构类似品 供试品混合结构类似品
比移值+颜色综合考虑一致性 实验中考虑：供试品/对照品； 薄层板；展开剂；显色剂
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2. HPLC和GC法

一般规定按供试品含量测定项下的色谱条
件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰
的保留时间应一致。
内标法时，要求药物与内标物峰的保留
时间比值也应相同。
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药品质量检验工作中的首项任务
COOH
COOH
OH
OCOCH3
含量测定方法相同，采用中性乙醇溶解供试品后， 用0.1mol/l的NLeabharlann OH进行滴定，酚酞为指示剂指 示终点。
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二、鉴别试验的项目

性状（Description) 一般鉴别试验 （general identification test） 专属鉴别试验 （specific identification test）

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例：复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂 鉴别项（TLC法）

两个主药，硝酸咪康唑/盐酸小檗碱 简单的角度：一个展开系统完成二者的鉴 别，一块薄层板上点样四个点


验证的专属性：结构类似物的分离
耐用性：展开剂比例的调整
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小结
鉴别的定义 鉴别试验的项目
c为每100ml中含有干燥品物质重量（g）
已知比旋度，如何求算物质含量？ 《药物分析实验指导》P170，葡萄糖含量 测定

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（一）性状
（3）吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等 条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度 时的吸收度称为吸收系数。
有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者 是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓 1% 度为1％（W/V)，厚度为l cm时的吸收度，用 E1cm 表示， 用于考查药品的质量，定量分析。
溶液 3ml ，溶解后转移至 500ml 量瓶中，用水稀释至刻 度，混匀。精密吸取5ml溶液置于内含pH 7磷酸盐缓冲 液12.5ml的250ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即
为供试品溶液。另配制相同浓度缓冲溶液的空白对照液。
于 2652nm 和 2952nm 波长处测定吸收度 A265 和 A295 ， 规定A265/A295的值应在1.50～1.56之间。 对比规定吸收波 长的吸收度比值
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（一）性状
（2）比旋度:在一定波长与温度下，偏振光透过长 1dm且每1 ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得 的旋光度称为比旋度。是反映手性药物特性及其 纯度的主要指标，用于鉴别药品、含量测定。
附录VIE 旋光度测定法
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l为光程长短（dm）；
t D
100 lc
[α]为比旋度；α为旋光度；
2. 紫外光谱法★

光谱简单，专属性差。 ★常用的方法有：
（1）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长； （2）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸 收度； （3）规定吸收波长和吸收系数法； （4）规定吸收波长和吸收度比值法； （5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特 性。
以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用， 以提高方法的专属性。
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例：葡萄糖的鉴别——呈色反应
取本品约0.2g，加水5ml 溶解后，缓缓滴入微温 的碱性酒石酸铜试液中， 即生成氧化亚铜的红色 沉淀
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（二）光谱鉴别法
1. 红外光谱法 专属性强、应用较广（固体、液体、气体 样品） 主要用于组分单一、结构明确的原料药， 特别适合于结构复杂、细微差别同类药物， 如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。 鉴别方法：中国药典和BP均采用标准图谱 对照法；USP采用对照品法。

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2.红外光谱法

试样制备方法
压片法、糊法、膜法、溶液法

应用光谱图对照时应注意的问题：
（1）固体药物晶型 （2）供试片制备条件
（ 3）
CO2和水汽等大气干扰 （4）仪器间分辨率及操作条件的影响 （5）多组分药物与多晶型现象 （6）制剂鉴别
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示例一 取色甘酸钠，加磷酸盐缓冲液 （ pH7.4 ）溶解并稀释成每 1ml 中约含 10μg 的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录IV A） 测定，在238nm与326nm波长处有最大吸收。
对比吸收光谱 特征参数
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示例二
取对氨基水杨酸钠 250mg ，加 1mol/L 氢氧化钠
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1.呈色反应鉴别法：

（3）茚三酮呈色反应：氨基酸及氨基糖 苷； （4）重氮化一偶合显色反应：一般都有 芳伯氨基或能产生芳伯氨基；

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2.沉淀生成反应鉴别法：

系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定 条件下进行反应，生成不同颜色和具有特殊形状 的沉淀。常用的沉淀反应有： （1）与重金属离子的沉淀反应：在一定条件下， 药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀； （2）与硫氰化铬胺（雷氏盐）的沉淀反应：这类 药物多为生物碱及其盐和具有芳香环的有机碱及 其盐；

呈色反应鉴别
沉淀生成反应鉴别 荧光反应鉴别 气体生成反应鉴别 使试剂褪色鉴别 测生成物熔点
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1.呈色反应鉴别法：

系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液， 在一定条件下进行反应，生成易于观测的 有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应 类型有：
（1）三氯化铁呈色反应：一般都含有酚 羟基或水解后产生酚羟基； （2）异羟酸铁反应：一般多为芳酸及其 脂类、酰胺类；
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几种常见喹诺酮类药物的紫外吸收特征
药物 诺氟沙星 司帕沙星 洛美沙星 吡哌酸 氧氟沙星 甲磺酸培氟沙星
R2 R3 X O COOH
介质 0.1 mol/L NaOH 0.025 mol/L NaOH 0.1 mol/L HCl 0.1 mol/L HCl 0.1 mol/L HCl 0.1 mol/L HCl
在水中微溶
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（一）性状
3. 物理常数: 不仅对药品具有鉴别意义，也反映了 该药品的纯杂程度。 药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔 点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化 值、羟值、碘值、吸收系数。
水杨酸 阿司匹林
熔点
158-161℃
135-138℃
（1）熔点：固体→液体的温度

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（一）性状
药物的性状（description）反映了药物特有的物 理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。 1. 外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、 味等性质。 2. 溶解度：药典采用“极易溶解、易溶、溶解、略 溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述 药品在不同溶剂中的溶解性能。
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（三）色谱鉴别法★
利用不同物质在不同色谱条件下，产生各 自的特征色谱行为（Rf值或保留时间）进 行鉴别试验。 采用与对照品（或经确证的已知药品）在 相同的条件下进行色谱分离，并进行比较 鉴别。

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1. 薄层色谱法

ChP2010中对TLC鉴别法的要求
对照品
供试品
对照品混合供试品

依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征， 通过化学反应来鉴别药物的真伪。 无机药物：药物中的阴离子和阳离子的特殊反应； 有机药物：典型的官能团反应。 一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证 实是哪一种药物。通常一般鉴别试验不适用于数 种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在时 鉴别。
阿司匹林和阿司匹林片
阿司匹林-原料药 鉴别：酚羟基显色/酯键水解/红外光谱

阿司匹林片-制剂 鉴别：

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（四）显微鉴别法 主要用于中药及其制剂的鉴别 综合药用植物学与生药学知识实现

（五）生物学法 主要用于抗生素、生化药物及中药的鉴别 利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴 定药物品质的一种方法
第二章 药物的鉴别试验
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一、鉴别的定义 Identification

中国药典2010年版定义 鉴别项下规定的试验方法，仅反映该药品 某些物理、化学或生物学等性质的特征， 不完全代表对该药品化学结构的确证。

★注意：鉴别试验方法仅证实贮藏在有标 签容器中的药物是否为其所标示的药物， 而非对未知物进行定性分析。

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水杨酸 外观 溶解度
白色细微的针状结晶或白色结 晶性粉末；无臭或几乎无臭 在乙醇或乙醚中易溶； 在沸水中溶解； 在三氯甲烷中略溶；
阿司匹林
白色结晶或结晶性粉末；无 臭或微带醋酸臭 在乙醇中易溶； 在三氯甲烷或乙醚中溶解； 在水或无水乙醚中微溶； 在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶 液中溶解，但同时分解