合成胸腺肽_1的分离与纯化
重组人干扰素α2b和胸腺肽α1融合蛋白的分离纯化

1 2 试 剂与 仪器 .
胰蛋 白胨 、 母 提 取 物 , od公 司 ; 组 肠 激 酵 Ox i 重
功构 建过 人干扰 素 O b 腺 肽 a 的 融合 蛋 白, 无  ̄- 2胸 . 还 在 E.oi中表 达并 分离 纯化 此融 合蛋 白的报 道 。 cl
本文 考察 了 E.oi 达 的重 组 人干 扰 素 ah cl 表 和 胸腺 肽 a 的融合 蛋 白的分离 纯 化条 件 , l 为进 ~ 步研 究重 组融 合 蛋 白的 分离纯 化提 供理论 指 导 。
终 目的 融 合 蛋 白 产 量达 6 mgg干 菌 体 。 8 / 关 键 词 :人干 扰 素 ab ;胸腺 肽 a; 合蛋 白 ; 属 螯 合 层 析 2 l融 金 中 图分 类号 :Q 1 . 527
干 扰 素 (F 是 一 类 重 要 的抗 病 毒 、 肿 瘤 的 IN) 抗 治 疗 药 物 , 抗 病 毒 活 性 最 为 公 认 … 胸 腺 肽 其 1。
分 离 纯 化 过 程 。 实 验 结 果 表 明 : 涵 体 经 7 lL盐 酸 胍 , 0 包 / mo 1 l T 变 性 ; 1L尿 素 , IL还 原 型 谷 mmo L D T / 1 / mo 2 mm。 / 胱 甘 肽 , . mm lL氧 化 型 谷 胱 甘 肽 脉 冲 加 样 稀 释 复 性 ; 属 螯 合 层 析 收 集 0 3m l 咪 唑 洗 脱 峰 , 干 后 经 重 组 0 2 o/ 金 . o/ L 冷 肠 激 酶 3 ℃ 酶 切 2 、 ehdxG 5 0 4 Sp ae -0柱 纯 化 , 得到 纯 度 达 9 % 的 重 组 人 干 扰 素 2 胸 腺 肽 a 融 合 蛋 白 , 最 h 可 0 b 和 l 且
胸腺肽的提取分离操作流程

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临床上常用的胸腺肽是从小牛胸腺发现并提纯的有非特异性免疫效应的小分子多肽。
胸腺肽研究进展_杨玲媛

动物医学进展,2008,29(10):57-60Pr ogress in Veterinary Medicine胸腺肽研究进展*杨玲媛,谢青梅*,毕英佐(华南农业大学动物科学学院,广东广州510642)摘要:胸腺肽是由胸腺的组织上皮细胞分泌的一组小分子活性肽,能通过影响淋巴细胞以及IL-2和NK细胞等因子的活性来调节机体的免疫功能。
胸腺肽的有效组分主要包括胸腺素A1、胸腺生成素、胸腺体液因子和血清胸腺因子,其在机体内的分泌及活性随年龄、光照、激素和微量元素水平的变化而发生改变。
人工合成胸腺肽已广泛地应用于各种免疫性疾病以及感染性疾病的临床治疗,取得了明显的疗效;但由于价格昂贵,其在兽医上的应用受到了限制。
科研工作者在研究其作用机理及治疗效果外,也在不断探索基因工程胸腺肽在临床应用方面的新途径,以改善和提高临床治疗效果。
关键词:胸腺肽;免疫调节剂;生物学功能;临床应用中图分类号:Q574文献标识码:A文章编号:1007-5038(2008)10-0057-04胸腺肽(thymic peptide)是由胸腺的组织上皮细胞分泌的一类多肽激素,可促进T细胞的成熟,同时参与神经内分泌系统和免疫系统的交互作用,激活细胞免疫[1]。
自1949年Ro berts等首次用小牛胸腺组织制备胸腺肽粗提液以来,国内外诸多学者致力于这方面研究工作,在提取分离、理化性质、结构功能、药理临床等方面均取得极大进展[2]。
近年来,胸腺肽作为一种免疫调节剂,广泛用于医学临床,在兽医临床的防治试验中也取得了满意的效果,为病毒性和肿瘤性疾病的治疗带来了新的希望。
1胸腺肽的有效组分胸腺肽组分是在温度80e下稳定的多肽混合物。
目前常用的胸腺肽主要有以下几种。
1.1胸腺素A1胸腺素A1(thym osin A1,T A1)系Goldstein A L 等最早从牛胸腺素组分5(TF5)中分离出来的一种酸性多肽,由28个氨基酸残基组成,分子质量为3.108ku,等电点为4.2,无二硫键和糖基,惟一的修饰是N端乙酰化[3]。
离子交换色谱法分离纯化胸腺肽α_1的工艺研究

填料 高度 5 0 a m, 进样 浓度 8 mg / m L条件下 , 胸腺肽 O / . , 纯化效果理想 , 经H P L C测定 , 得到纯度达 2 4 . 5 9 6 6 m g / m L的胸
腺 肽 . , 质量分数达 1 2 . 0 3 %, 比市 场上 销 售 的 胸腺 肽 中 T 0 【 含量( 质 量 分数 0 . 6 %~ 1 . 0 %) 高 出近 1 O 倍。
( 1 . D e p a r t m e n t o f F o o d S c i e n c e , H L J B a y i A g r i c u h u r e U n i v e r s i t y , D a q i n g 1 6 3 3 1 9 , H e i l o n g j i a n g , C h i n a ;
a d s o r p t i o n e x p e ime r n t t h r o u g h t h e a n i o n e x c h a n g e c h r o ma t o g r a p h y i n o r d e r t o d e t e r mi n e t h e o p t i mu m i o n e x c h a n g e me di a; Th e o p t i ma l e x p e r i me n t c o n d i t i o n s o f t h e e l u e n t , e l u t i n g s t y l e, lo f w r a t e,h e i g h t o f me d i a a r e s t u d i e d a n d
关键 词 : 胸腺肽0 【 , 离子 交换 色谱 , 分 离纯化
一种注射用胸腺法新及其制备方法[发明专利]
![一种注射用胸腺法新及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1e6efc3f854769eae009581b6bd97f192279bfa0.png)
(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201410167965.X(22)申请日 2014.04.24A61K 47/02(2006.01)A61K 38/22(2006.01)A61K 9/19(2006.01)(71)申请人山东新时代药业有限公司地址273400 山东省临沂市费县北外环路1号(72)发明人赵志全 冯中 张丽萍(54)发明名称一种注射用胸腺法新及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种注射用胸腺法新及其制备方法。
该制剂由胸腺法新、甘露醇和磷酸缓冲盐组成,通过多步梯度冻干而成。
本发明所述产品处方简便易行,所用辅料种类和用量小,提升了产品安全性;产品pH 值稳定在6.8左右,稳定性更高。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书5页CN 105012954 A 2015.11.04C N 105012954A1/1页1.一种注射用胸腺法新,其特征在于由胸腺法新、甘露醇和磷酸缓冲盐组成。
2.如权利要求1所述的一种注射用胸腺法新,其特征在于,所述磷酸缓冲盐为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
3.如权利要求2所述的一种注射用胸腺法新,其特征在于,单位处方中含1.6mg 胸腺法新、50mg 甘露醇、1.42mg 磷酸氢二钠和1.38mg 磷酸二氢钠。
4.如权利要求1-3任一权利要求所述的一种注射用胸腺法新的制备方法,其特征在于,通过以下措施实现:1)称取处方量的胸腺法新、甘露醇和磷酸缓冲盐,缓慢加入注射用水中,搅拌溶解;2)将活性炭加入到上述溶液中,搅拌吸附;脱炭后,用0.22μm 滤器除菌过滤,取样,测定胸腺法新含量;3)根据胸腺法新检测结果将药液灌装于西林瓶中,使得西林瓶中含有胸腺法新的量为1.6mg ,半加塞;4)将上述灌装好半加塞的西林瓶送入冻干箱内,预冻至-25~-50℃,保持1~3h ;以5-10℃/h 升温至-10℃,保持6~15h ;以5-8℃/h 升温至30℃,保温2~6h ,压塞出箱,轧盖包装即得;其中,冻干前药液中胸腺法新的浓度为1.06-3.2mg/ml 。
高纯胸腺肽α1的制备

பைடு நூலகம்
第 7期
化
工 学 报
Vo 1 . 6 4 NO. 7
2 0 1 3年 7月
CI ESC J o u r n a 1
J u l y 2 Ol 3
高 纯胸 腺肽 I ] ‘ 1的 制备
刘 标 ,汤 斌
( 安 徽 工 程 大 学 生 物 与 化 学 工 程 学 院 ,安 徽 芜 湖 2 4 1 0 0 0 )
摘 要 :为 了获 得 高 纯 产 品 ,在 制 备 胸 腺 肽 a 1( Tn 1 )工 艺 中分 别 对 合 成 、纯 化 两 步 骤 进 行 控 制 。在 固 相 多 肽 合成 过程 中,以 T B T U/ HOB t / DI E A体 系作 为缩 合试 剂 ,在 易形 成 n螺 旋 和 p转 角 的 肽 序位 置 ,通 过 采 用 HOB t / D I C 补 投 的方 法 促 使 偶 联 反 应 完 全 。在 分 离 纯 化 阶段 ,结 合 反 相 色 谱 和 离 子 色 谱 的 优 势 , 以 反 相 离 子 对 液 相 色 谱 法
为 主要 分 离 手 段 ,通 过 多步 分 离 实 现 纯 化 。获 得 的粗 肽 纯 度 为 6 7 . 2 ,胸 腺 肽 a 1产 品 纯 度达 9 9 . 5 以上 ,总 收
率为 1 7 . 2 。此 法 可 作 为制 备 高纯 多肽 药物 的有 效手 段 。 关键 词 :胸 腺 肽 1 ; 固相 多 肽 合 成 ;反 相 离 子 对 液 相 色 谱
Pr e pa r a t i o n o f hi g h pu r i t y t hy mo s i n al
LI U Bi a o, TANG Bi n
胸腺肽纯化工艺的改进

胸腺肽纯化工艺的改进
李光谱;迟春萍;张秀霞;关晓峰;王志武;盛军;郭岩
【期刊名称】《中国生物制品学杂志》
【年(卷),期】2003(16)3
【摘要】目的建立高效、快速、简便的纯化胸腺肽方法,以便提高胸腺素α1含量及活性,减少过敏反应。
方法采用 DEAE Sepharose FF、CM-Sephrose两种串联柱层析纯化。
结果纯化后的胸腺肽电泳结果出现明显的胸腺素α1带、玫瑰花结率可达33%(绝对值)以上,相对分子质量明显在3 100左右,无过敏反应。
结论建立了高效、规模化的胸腺肽纯化方法,提高了胸腺肽质量。
【总页数】2页(P177-177)
【关键词】胸腺肽;纯化工艺;胸腺素α1;活性;过敏反应
【作者】李光谱;迟春萍;张秀霞;关晓峰;王志武;盛军;郭岩
【作者单位】长春生物制品研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TQ464.7
【相关文献】
1.离子交换色谱法分离纯化胸腺肽α1的工艺研究 [J], 刘妍妍;刘茗飞;高薇;张丽萍
2.小牛胸腺肽生产工艺的改进及制剂的分析 [J], 蔡红杰
3.胸腺肽注射液生产工艺的改进 [J], 蒋遐芝
4.胸腺肽β4分离与纯化工艺的研究 [J], 吴绵斌;徐银君;孙明
5.化学合成胸腺肽α1的分离与纯化工艺研究 [J], 韩香;顾军;苑庆兰;雷鹏森;甘一如
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胸腺肽α1对乳腺癌的治疗作用综述

胸腺肽α1对乳腺癌的治疗作用综述目前,乳腺癌已经成为病死率仅次于肺癌的第二大健康杀手,占据女性恶性肿瘤的首位,严重影响着女性的生命安全以及生活质量。
与此同时,乳腺癌还在迅速发展,发病率呈现逐年上升的趋势。
相关研究表明,在机体抗肿瘤免疫应答中细胞免疫至关重要,而胸腺肽α1作为生物应答调节剂不仅可以对机体的免疫系统进行调节,使其发挥抗肿瘤的作用,还可以诱导细胞凋亡抑制其生长。
然而,胸腺肽α1对乳腺癌的治疗作用还未见相关的文献进行报道。
故本文对胸腺肽α1对乳腺癌的治疗作用进行探究,以期对乳腺癌的治疗提供一些参考,减轻患者的痛苦。
乳腺癌嚴重威胁着女性生命健康与生活质量,研究发现乳腺癌的发生发展与机体细胞免疫有直接关联。
正常情况下,机体通过细胞免疫可直接或间接杀伤肿瘤细胞,达到抗肿瘤免疫的作用。
参与细胞免疫的主要是T淋巴细胞和巨噬细胞。
免疫功能低下为肿瘤细胞增殖提供了方便。
作为抗肿瘤免疫主力军的细胞免疫,一旦发生功能低下就很容易被乳腺癌细胞攻破防线。
细胞免疫对肿瘤细胞发挥着重要作用,在对肿瘤患者化疗期间提高机体免疫力使其对肿瘤细胞发挥免疫监视功能十分必要。
提高机体免疫力方式众多,将胸腺肽α1应用到抗肿瘤治疗中就是其中一种。
1 乳腺癌的现状乳腺癌已经成为威胁女性健康的最严重的疾病,并且近年来呈现年轻化[1],据肿瘤登记年报显示,我国乳腺癌发病率位居恶性肿瘤的第一位[2],高达23/100 000,发病率为17.1%,我国每年新发乳腺癌病例达21万例,而死亡率更是达到了7.88%,并且以每年3%的速率在持续增长[3],乳腺癌不仅使女性的生活质量受到影响,还使其生命健康受到了严重的威胁,控制乳腺癌的发生发展势在必行。
2 胸腺肽α12.1 胸腺肽α1的来源胸腺肽α1是从胸腺素组分5(TF5)分离纯化得到的一种小分子生物活性多肽[5],由28个氨基酸组成[6],是由机体内的胸腺素原α酶解产生[7]。
它具有较高的生物学活性、免疫增强作用及调节和增强机体免疫功能。
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药 物 生 物 技 术Pharmaceutical Biotechnology 2001,8(4):207~209合成胸腺肽α1的分离与纯化①黄臻辉(上海第一生化药业公司科研所,上海200040) 摘 要 胸腺肽α1(Tα1)的合成粗肽,经DEAE2Sephadex A50离子交换层析和PepMap C18介质纯化后,使合成的Tα1经HPLC鉴定纯度达到9815%以上。
电泳呈一条带,总收率为20%,该工艺操作简便、容易放大,适应产业化生产。
关键词 胸腺肽α1;纯化;纯度中图分类号:Q516 文献标识码:A 文章编号:100528915(2001)0420207203 胸腺肽α1(Tα1)是70年代后期发现的胸腺肽提取物第五组份(TF5)中的一种成份[1,2],其为由28个氨基酸组成的多肽化合物,Tα1的主要作用能促使T细胞的分化和成熟,提高机体的免疫功能,临床上主要用于治疗乙肝、丙肝、癌症及免疫缺陷等疾病[3,4]。
由于Tα1在提取的胸腺肽中含量极低,仅为0156%~110%之间,故目前Tα1的产品大多采用多肽合成和基因工程的方法来进行制备。
近年来,我们应用固相多肽合成技术,已摸索出一条简便的化学合成路线[5],并通过二步纯化方法,使合成Tα1的纯度达到9815%以上。
现将实验结果报告如下:1 材 料111 试 剂合成Tα1粗肽含量在20%左右(自制);合成Tα1标准品(S2Tα1)(比利时的UCB公司提供); DEAE2Sephadex A50(瑞典Pharmacia公司); PepMap C18介质(美国PE公司)112 仪 器核酸蛋白检测仪(Beckman公司);高压液相色谱仪(Beckman公司);低压电泳仪(中科院上海生化所);紫外2可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)2 方 法211 离子交换层析称取合成Tα1粗肽200mg溶解在0102mol/ L Tris2HCl(p H712)缓冲液中,上DEAE2Sephadex A50凝胶柱(118cm×100cm),进行盐梯度层析,流速为012ml/min,检测波长为A230nm,收集主峰,经Sephadex G215脱盐,流速为2ml/min,检测波长为A230nm,收集主峰,冷冻干燥后得产品11102mg。
Fraction3is Tα1Fig1 DEAE2Sephadex A50column chromatography ofTα1derived from crude Tα1212 PepMap C18层析取上述冻干品10mg溶解在012mol/L乙腈溶液中,上PepMap C18柱(118cm×100cm),流速为20ml/h,检测波长为A230nm,进行磷酸梯度层析,收集主峰,冷冻干燥后得Tα1精品712mg。
213 聚丙烯胺凝胶电泳(PAEG)法按比例混合丙烯酰胺2甲叉双丙烯酰胺(30∶018)、电极缓冲液、储备液和水,水泵脱气,加入过硫酸铵和四甲基乙二胺轻轻混合。
先用1%702①收稿日期 2000-08-31作者简介:黄臻辉(1960年生),男,上海人,学士,上海第一生化药业公司研究所所长,主要从事生化药物方向的研究。
Fig 2 Elution pattern of T α1from Sephadex G 15Column Fig 3 Separation of T α1from PepMap C 18chromatographyAgarose 封底及边,再倒入分离胶,插入样品梳。
胶凝固后,向电泳槽注入电极缓冲液,上样。
电泳:电压110V ,电泳2h ,用考马斯亮兰G250,染色。
214 HPLC法色谱条件:Z orbaxSB 2C18(416mm ×150mm )柱,检测波长为A 214nm ,缓冲液:A ,011%三氟乙酸;B ,01089%三氟乙酸,60%乙腈;梯度:0~3min 20%B ,3~23min 20%~60%B ,23~24min 60%~100%B ,24~27min 100%B ,27~28min 100~20%B ;柱温:室温;进样20μl 。
3 结 果311 PA GE 将合成T α1粗肽、合成T α1DEAE 的纯化品、合成T α1的精品和ST α1进行PA GE 垂直板电泳(上样量为100μg ),结果见图4:合成T α1粗肽呈现2条带,合成T α1DEAE 的纯化品、合成T α1的精品和ST α1均呈现1条带。
1.Standard of UCB2.Purified T α1from PepMapC 18chromatography 3.Purified T α1from DEAE2Sephadex A50 4.Crude T α1 5.Crude T α1Fig 4 PA GE analysis of T α1Fig 5 Indentification of purif ;ed T α1from DEAE2Sephadex A50onHPLCFig 6 Indentification of Purified T α1from pepMapC 18chromatography on HPLC802药物生物技术第8卷第4期312 HPLC 经HPLC 鉴定合成T α1DEAE 的纯化品、合成T α1的精品和ST α1相比较,纯度分别达到85%、9815%(图5、图6)4 讨 论我们合成的T α1粗肽经二步纯化后产品的纯度达9815%以上,质量符合国际标准。
特别是我们在第二步纯化过程中,在常压的状态下采用PepMap C 18作为纯化介质,使纯化和脱盐合二为一,大大提高了产品的收率和质量。
和传统的FPLC 和HPLC 方法相比具有经济、实用适应于产品的产业化过程。
但在实验过程中,由于T α1在DEAE 2Sephadex A50的纯化收率偏低,影响了整个工艺的收率(20%),因此,进一步探索、改进工艺是我们今后工作的方向。
参考文献[1] G oldstein A L ,Slater F D ,White A.Preparation ,assay ,andpartial purification of a thymic lymphocyoietic factor (thymosin )[J ].J Proc N atl Acad Sci ,1996,56:1010.[2] Hooper J A ,McDaniel M C ,Thurman GB ,et al 1Purification anpropertise of bovine thymosin [J ].A nn N Y Acad Sci ,1975,249:125.[3] G oldstein A L ,Low T L ,McAdoo M ,et al .Thymosin α1:Isolation and sequence analysis of an immunologically active thymic polypeptide [J ].J Proc N atl Acad Sci ,1997,74:725.[4] Zata M M ,G oldstein A L.Thymosins ,lymphokines and theimmunology of aging [J ].Gerontology ,1985,31:263.[5] 俞超,邱秀娣,周国明,等.合成胸腺素α1的生物活性研究[J ].药物生物技术,1998,5(2):103.Isolation and Purif ication of Synthesis Thymosin α1HUAN G Zhen 2hui(S hanghai No 11 Biochemical &Pharm aceutical Co ,S hanghai 200040)Abstract Crude synthesis thymosin α1was isolated and purified to more than 9815%homogeneity through ion exchange chromatography on DEAE 2Sephadex A50and RepMapC18chromatography respectively 1The purified α1appeared as a single band on the PA GE and a single peak on the HPLC 1The total yield was 20%1The technology is simple ,and can be enlarged easily 1K ey w ords Thymosin α1,Purify ,Homogeneity全国生物工程药物天然药物研讨会暨《药物生物技术》第二届编委会会议全国生物工程药物天然药物研讨会暨《药物生物技术》第二届编委会于2001年7月10日至12日在深圳市举行。
到会代表164人(其中特邀代表22人,代表142人)。
研讨会收到论文97篇,其中专题报告10篇,综述文章10篇,研究论文77篇。
按专业内容分,生物工程61篇,天然药物30篇,其他内容6篇。
会议首先由深圳市副市长郭荣俊讲话,郭付市长重点就深圳市改革开放的大好形势及高新技术主要是生物技术产业发展情况作了重点介绍;中国药科大学张效联副校长对这次会议的意义作了阐述。
会上由中科院戚正武院士、田波院士以及宋后燕、张友尚、徐康森、卢大儒、郑珍贵、纪建国、吴梧桐等教授就生物工程及天然药物领域的广泛内容作了专题报告。
专题报告结束后,大会分成生物工程药物和天然药物两个组进行学术交流。
在两个分组会上共宣读了论文22篇,其余的论文采用了书面形式交流。
会议期间还在民主评议的基础上开展了评选优秀论文活动(特邀专题报告以及作者未参加会议者不在此列),会议共评出优秀论文10篇,其中一等奖1篇,二等奖2篇,并举行了颁奖仪式,优秀论文发给荣誉证书,一等奖除荣誉证书外,发给奖金800元,二等奖奖金500元,颁奖会上气氛热烈,10位获奖者无不笑颜绽开。
在学术研讨会的同时,《药物生物技术》第二届编委会同时召开,参加第二届编委会共25人。
在这次编委会上,总结了《药物生物技术》近几年的工作,提出了今后刊物向学术性、技术性和信息性发展的办刊方向。
第二届编委对《药物生物技术》刊物的组织建设,遴选外籍编委,提高稿源质量及加强对刊物的筹划及运作等重要问题进行了实质性讨论,为刊物向更高层次的发展起到了指导性的作用。
902黄臻辉:合成胸腺肽α1的分离与纯化。