APEl／Ref-1基因结构及功能的研究进展

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APE1在氧化应激介导肺血管内皮细胞损伤中的调控作用的开题报告

APE1在氧化应激介导肺血管内皮细胞损伤中的调控
作用的开题报告
背景和意义：
氧化应激是肺血管内皮细胞损伤的重要原因之一，具有重要的生理
和病理生理学意义。

在氧化应激损伤中，核酸、蛋白质和脂质等多种生
物分子受到氧化损伤，从而引起细胞死亡和炎症反应，因此氧化应激介
导的肺血管内皮细胞损伤已成为临床治疗上的研究热点。

APE1是一个重要的DNA修复基因，它在氧化应激损伤过程中发挥着一定的保护作用，
但其具体机制尚不清楚。

研究内容：
本文将探讨APE1在氧化应激介导的肺血管内皮细胞损伤中的调控作用。

首先，通过体外细胞实验，评估APE1在H2O2引起的肺血管内皮细胞氧化应激中的表达变化，并考察其对内皮细胞活力和凋亡情况的影响；接着，使用APE1敲入和敲出模型小鼠，通过肺内置管注入H2O2诱导氧化应激，观察APE1的表达水平和肺微血管损伤程度的变化，以及炎症反应的变化情况；最后，通过Western blot和免疫荧光染色技术，分析
APE1对ROS和DNA修复相关蛋白的调控作用。

研究意义：
本研究可以为解析APE1在氧化应激中的生理作用及相关机制提供实验基础，并为深入探讨氧化应激介导的肺病发生发展提供理论指导和实
验依据。

同时，本研究也可以为氧化应激相关疾病的治疗提供新的思路
和目标。

APE1小分子抑制剂的筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究

APE1小分子抑制剂的筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究APE1是一种多功能蛋白酶，具有DNA碱基切除修复、氧化还原生物等功能，是大分子功能复合体的一个范例。

它在DNA损伤修复和氧化还原信号调控等多个重要的生物学过程中发挥着主要作用。

APE1在大多数恶性肿瘤中高表达或胞浆异位表达，被认为是恶性肿瘤的重要标志物。

抑制APE1可显著杀伤肿瘤细胞，同时极大地提高细胞对DNA损伤的敏感性。

因此，APE1极有可能是增强肿瘤细胞对化疗敏感性的有效作用靶点。

最新研究发现，APE1氧化还原抑制剂可以被用作一个药物单独使用，也可作为一种具有潜在抗增殖或细胞毒性药物与现有治疗手段联合使用，具有重要的临床转化应用价值。

已发现大量的APE1小分子抑制剂，但这些化合物的研究都处于初级阶段。

本研究通过对中药天然小分子化合物库进行虚拟筛选并结合体外活性筛选，以其获得APE1特异的小分子抑制剂，为以APE1为靶点的分子靶向治疗提供实验基础。

目的：筛选鉴定APE1的特异性小分子抑制剂，并研究其抗肿瘤活性。

方法：1.基于APE1蛋白结构，运用计算机虚拟筛选从中药天然小分子化合物库中发掘APE1的候选小分子抑制剂；2.通过电泳迁移率实验对98种小分子化合物分子进行活性筛选及鉴定；3. AP内切酶实验鉴定候选化合物对APE1损伤修复的抑制作用；4.双偏振极化干涉分析系统检测APE1与候选抑制剂的相互作用；5. CCK-8、荷瘤裸鼠实验研究棉酚抗肿瘤及协同顺铂化疗作用。

结果：1.通过虚拟筛选，发现61个对APE1功能具有潜在抑制活性的小分子化和物，其中5个针对APE1的损伤修复功能，56个针对氧化还原功能。

2.通过电泳迁移率实验、AP内切酶实验、双偏振极化干涉分析，发现丹参酮ⅡA、棉酚、依布硒通过与APE1直接相互作用显著抑制其氧化还原功能，其中棉酚还可显著抑制APE1修复功能。

3.体内外实验表明棉酚可显著抑制宫颈癌肿瘤生长并可增强顺铂化疗敏感性。

ERAP1结构与功能研究进展

ERAP1结构与功能研究进展郭爱华;徐沪济【摘要】Endoplasmic reticulum aminopeptidase 1 (ERAP1) is a multifunctional enzyme belonging to the M1 family of aminopeptidases with roles in the regulation of blood pressure, angiogenesis, ectodomain shedding of several cytokine receptors, and processing of antigenic peptides presented to MHC class I molecules. Allelic variants of ERAP1 have been linked to a number of human diseases, including the autoimmune disease ankylosing spondylitis (AS), diabetes, some forms of cervical cancer, and hypertension.% 内质网氨基肽酶1(endoplasmic reticulum aminopeptidase 1,ERAP1)是氨基肽酶 M1家族中的一个多功能的酶,在血压调节、血管发生、细胞因子受体的胞外区脱落,以及对递呈至 I 型主要组织相容性抗原复合物(major histocompatibility complex class I,MHC I)的抗原肽的加工中发挥作用.ERAP1等位基因变异体与多种人类疾病相关,包括自身免疫性强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)、糖尿病、子宫颈癌以及高血压等.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2013(000)002【总页数】6页(P128-133)【关键词】内质网氨基肽酶 1;I型主要组织相容性抗原复合物;免疫反应;抗原加工【作者】郭爱华;徐沪济【作者单位】第二军医大学长征医院风湿免疫科，上海 200433; 中国航天员科研训练中心航天医学基础与应用国家重点实验室，北京 100094;第二军医大学长征医院风湿免疫科，上海 200433【正文语种】中文MHC I型分子对与之高亲和力结合的肽配基长度有严格要求，典型的肽配基长度为8~10个氨基酸残基，因此，被MHC I型分子递呈的肽必须在装载前进行精细剪切[1]。

APE1在非小细胞肺癌的表达及其与铂类化疗敏感性的关系的开题报告

APE1在非小细胞肺癌的表达及其与铂类化疗敏感性的关系的开题报告研究背景APE1（apurinic/apyrimidinic endonuclease 1）是细胞体内一种重要的底物结构特异性核酸内切酶，与修复基因、转录因子结合并影响其功能。

APE1广泛存在于人体各种组织细胞中，存在于胞浆和细胞核中，参与DNA修复、转录因子的调节以及基因表达等重要生物学过程。

此外，APE1与肿瘤发生、发展也有密切关系，高表达的APE1与肿瘤的放化疗敏感性下降、预后差等相关性密切。

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）是临床上最常见的癌症之一，目前，铂类化疗是NSCLC的标准治疗方案之一。

然而，铂类化疗耐药性的发生率较高，严重影响疗效和预后。

因此，寻找铂类化疗敏感性相关的尺标因素具有重要的临床意义。

研究目的本研究旨在探讨APE1在NSCLC组织中的表达情况及其与铂类化疗敏感性的相关性，为NSCLC患者的治疗提供新的理论基础。

研究方法1. 实验对象本研究将收集40例NSCLC患者的癌组织标本以及相应的癌旁组织标本作为对照。

2. 检测APE1 mRNA和蛋白表达水平使用qRT-PCR和免疫组化法检测NSCLC组织和癌旁组织中APE1 mRNA和蛋白表达水平，并比较其差异。

3. 检测细胞毒性通过MTT法检测顺铂对NSCLC细胞株A549的细胞毒性，并采用流式细胞术检测顺铂对A549细胞的细胞周期的影响。

4. 克隆形成实验利用克隆形成实验检测不同APE1表达的NSCLC细胞株处理顺铂后的克隆形成能力，并比较其差异。

研究意义本研究可以探究APE1在NSCLC中的表达及其对铂类化疗敏感性的影响，为NSCLC患者的诊断和治疗提供新的理论基础，为临床转化提供新的思路。

同时，本研究也可为其他癌症治疗提供借鉴和参考，推进个性化医疗的发展。

人胰岛素样生长因子-1基因克隆及其真核表达载体的构建

Ｋｏａｅｕｎｅｗａｂａｎｄｂｍｐｉｃｔｎａｄｔｅｐ — ｅ／ｌ－ｕａｙｔｘｒｓｉｎｖｃｏｓｓｃｅｓｕｌｏ — ｚｋｓｑｅｃｓｏｔｉｅｙａｌｉａｉｎｈＣＩｏｈＧＦ１ｅｋｒｏｉｅｐｅｓｏｅｔｒｗａｕｃｓｆｌｃｎ＿ｆｏ — ｎｃｙ
胰岛素样生长因子一（ｎｕｉｌｅｇｏｈｆｃｒ１ｉｓｌｉｒｗｔａｔ一ｎｋｏ
１Ｉ一）有促进生长发育、质代谢和细胞分化与，ＧＦ１具物
增殖等功能ｌ。近年来研究显示，尿病患者血清１］糖ＩＦＩＧ－水平降低，与血糖的控制水平呈明显负相关。并
最近一项研究ｌ表明，２］低浓度的ＩＦ１４Ｇ一在～５年间增
参考基因Ｂｎ登录的ＩＦ１ＤａｋＧ－ｅＮＡ序列（９４．）Ｍ２６４１进行设计，由上海生物工程有限公司合成。其序列如下：游引物序列为：５＿ＧＡＡＴＣＣ上，ＧＴＣＡＣＣＴＣＴＡＧＡＡＧＡＡＴＧ３，游引物序列为：５＿ＣＧ－下ｆＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＣＣＣＣＴＡＣＡＣＡＣＡＡＴＣＡＧ－分别３在上游引物５端、游引物３端引入Ｅｏ工和Ｘｂ下ｃＲａＩ的酶切位点（划线碱基）框内所示为Ｋｏａ列，下，ｚｋ序
（承德医学院基础医学研究所，承德０７０）６００

APETALA1基因启动子的克隆与功能分析

蒋瑶，戚晓利，赵树堂，卢孟柱
（１．中国林业科学研究院林业研究所，林木遗传育种国家重点实验室，北京２．中南林业科技大学，经济林育种与栽培国家林业局重点实验室，湖南长沙３．佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯１５４００７）１０００９１；４１０００２
ｓｉｏｎｏｆｔｈｅＡＰ１ｄｅｃｒｅａｓｅｓｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅＡｂｎｏｒｍａｌＦ１ｏｗｅｒＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＬｉｎｅｆＡＦＤＬ）ｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ．ＡＦＤＬｉＳ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡＰＥ
ｌｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔＭＡＤＳｂｏｘｇｅｎｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐａｔｈｗａｙｏｆｌｏｆｗｅｒｉｎｇ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓ —
林业科学研究
ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ
２０１３，２６（５）：５７８～５８７
文章编号：１００１ — １４９８（２０１３）０５－０５７８－０１０
ＡＰＥＴＡＬＡ１基因启动子的克隆与功能分析
（１．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒｅｅＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｙ，ｒＢｅｉｊｉｎｇ１０００９１，Ｃｈｉｎａ

APE1fRef-1基因结构及功能的研究进展

ｒａｄｉ．
海市卫生局科研项目资助（２００９１１３）；上海市科委基金资助项目
（０６ＤＺｌ９５０５，１１４１１９９７５００）；上海市重点学科建设项目（Ｂ９０５）作者单位：２００４３３上海，第二军医大学附属长海医院肿瘤科
通讯作者：王雅杰，博士生导师，教授，电子信箱：ｙａｊｉｅｗａ０４５９＠
１６３．ｃｏｒｎ
万方数据
综述与进展
三、展
望
８ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｉｎ
ＪＭｅｄＲｅｓ，Ｍａｒ２０１３，Ｖ０１．４２Ｎｏ．３
ａｓｂｅｓｔｏｓ—ｔｒｅａｔｅｄ
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ［Ｊ］．Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ，
肿瘤的多功能治疗是未来治疗新的趋势所在，即ＤＮＡ损伤的药物（如烷化剂，离子放射拟辐射治疗）结合抑制ＤＮＡ修复酶活动联合治疗肿瘤。因此，充分了解ＤＮＡ修复酶中分子调节机制是发现新的肿瘤治疗策略的基础。目前研究表明ＡＰＥｌ在细胞内表达、分布和转运是受到高度调控的过程，对ＡＰＥｌ的研究要从从单一研究分子转移到这个高度协同的分子过程。我们相信对ＡＰＥｌ转录后修饰和各种功能间协同作用的机制的研究可能为我们最终理解这个独特的生物大分子解开未解之谜。ＡＰＥｌ是影响真核生物基因表达和氧化还原活性相关碱基修复和多功能蛋白的关键酶。对ＡＰＥｌ变异体进行深入的分子生物学及遗传流行病学研究将会有助于阐明该基因多态性的病因学意义。在肿瘤靶向治疗中ＡＰＥｌ是一个非常重要的靶标，它对于细胞的存活及放化疗后细胞效应都极为重要，如果能够特异性的调控肿瘤组织中的ＡＰＥｌ的表达，将能有效杀伤肿瘤细胞并改善肿瘤放化疗敏感性。了解ＡＰＥｌ分子基础有利于开发新的针对ＡＰＥｌ分子靶向药物，联合目前治疗手段为肿瘤治疗提供新的思路。
ｃａｌ），体内产生的活性氧在某种程度上不能很好地对

APE1REF-1和P2RY2基因多态性与中国汉族人群缺血性脑卒中的相关性研究

APE1/REF-1和P2RY2基因多态性与中国汉族人群缺血性脑卒中的相关性研究目的:缺血性卒中(ischemic stroke,IS)是一种急性神经疾病事件,可导致神经组织的死亡。

由于高血压的更好控制和吸烟水平下降使近年来在发达国家中IS的发生率有所下降。

随着人口老龄化,很多国家IS患者的绝对数量仍在继续增加。

我们对于IS的传统风险因素已经了解了很多。

但是IS的遗传病学体系,仍然很大程度上是未确定的。

近年来,专家们使用基因多态性关联分析方法,已经证实了一些新的与IS有关的易感性基因,但这些试验结果尚未在不同地区、不同种族中得到重复以及肯定。

作为IS的高发地区的主要人群,在中国北方汉族人群中进行IS易感基因的病例对照研究有十分重要的意义。

在IS的病理生理基础中,动脉粥样硬化的形成以及发展是至关重要的。

而在动脉粥样硬化的形成及发展过程中最重要的就是炎症反应。

因此本研究选取了两个与炎症相关的基因,P2RY2基因和APE1/REF-1基因,采用回顾性分析及病例对照研究方法,分析了P2RY2基因(rs4944831,rs1783596,rs4944832)和APE1/REF-1基因(rs1760944,rs3136817,rs1130409)的基因型、等位基因和单倍型在IS组、IS 亚组及对照组之间的频率分布差异。

然后,通过探讨在中国北方汉族人群中APE1/REF-1和P2RY2基因多态性和IS的相关性,为进一步研究IS发病潜在的遗传机制,不断积累分子遗传学依据。

研究方法:病例组(IS组)选自2010年9月至2011年5月就诊于中国医科大学附属第一医院神经内科和辽宁医学院附属第一医院神经内科的缺血性脑卒中患者,均为北方汉族人,确认均无亲缘关系。

共纳入378例,其中男性患者227例,女性患者151例,年龄45-80岁。

按照TOAST分型标准,将IS组分为2个亚组:大动脉粥样硬化性脑梗死组(Large-artery atherosclerosis,简称LAA组)和小动脉闭塞性脑梗死组(Small-artery occlusion,简称SAO组)。

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介导的ＮＦ—ＫＢ依赖的ＩＬ一８的表达，ＡＰＥ１在炎症
反应过程中发挥作用。ＡＰＥ１最主要的两个活动
断裂的低分子。ＢＥＲ损伤可能导致肿瘤的发生和神经退化紊乱，ＢＥＲ转化不同的碱基损伤为一常见的
碱基切除修复通路中脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶发挥
重要的作用。当受损的碱基去除后，ＡＰＥ１主要切断脱碱基位点以利于修复功能。另外，ＡＰＥ１还可发挥其他细胞功能，它可以作为氧化还原蛋白在一些转录因子参与促进ＤＮＡ连接活
形成３羟基重要的酶，３羟基是Ｐｏ１３重要的引物，１ＢＥＲ还参与很多非直接作用ＤＮＡ的蛋白的活动，如
ＡＰＥ１基因定位于１４号染色体长臂（１４ｑｌ１．２～
１２），基因长度约３．０ｋｂ，包含４个内含子和５个外显
中间体的脱嘌呤／嘧啶（ＡＰ）位点，然后ＡＰＥ１通过特
即氧化还原作用和碱基切除修复通路作用是相互独
立：Ｎ末端主要参与氧化还原介导的转录共刺激作用，Ｃ末端主要在脱碱基位点Ｈ３０９催化残端发挥内切酶的作用。本文主要从ＡＰＥ１的结构和功能进行
肿瘤细胞中、细胞质、细胞核内均有表达，可能与肿瘤
的侵袭能力和预后有关。
二、ＡＰＥ１的功能
ＮＦ—ＫＢ，早期生长反应蛋白一１（Ｅｇｒ一１）、Ｐ５３、ＨＩＦ
一
１、ＣＲＥＢ、ＡＰ一１、Ｐａｘ等［２３。ＡＰＥ１的这些功能主
・
综述与进展・
ＪＭｅｄＲｅｓ．Ｍａｒ２０１３．Ｖｏ１．４２Ｎｏ．３
ＡＰＥ１／Ｒｅｆ一１基因结构及功能的研究进展
刘传应明真王雅杰
ＡＰＥ１／Ｒｅｆ一１（又称ＡＰＥＸ１或Ｒｅｆ一１，本文统称ＡＰＥ１），是大肠杆菌Ｘｔｈ（ＥｘｏＩＩＩ）哺乳类同源物、细胞对氧化应激主要反应因子，ＤＮＡ在各种内源性或外源性物质包括化疗药物引起损伤后，ＡＰＥ１通过ＤＮＡ
子，其中第１个外显子为非编码区。开放阅读区有９５４ｂｐ组成，编码３ｌ８个氨基酸。主要包括３个功能域：第１个结构域位于３３～３５Ｎ末端组织片段，主要
参蛋白一蛋白连接，在蛋白的ＲＮＡ连接和调节脱
动影响肿瘤发生和发展，转录因子主要包括：核因子
链连接在疏水口袋远离中央８链。Ｃｙｓ６５不能和其他蛋白残基直接相连，此时ＡＰＥ１发生构型变化，暴
露Ｃｙｓ６５与不同转录因子形成连接，有待于以后研究进一步证实。ＡＰＥ１主要定位在细胞核内，然而在
Ｐｏ１３，１ＸＲＣＣ１发挥ＡＰＥ１核酸内切酶活性，或者结合棒状内切酶（ＦＥＮ１）直接发挥活性。综上所述，ＡＰＥ１可以被认为是ＤＮＡ“ 修复工厂 ” 中一个主要的
成员。
碱基ＤＮＡ催化活动中发挥重要的作用；第２个为氧化还原结构域，主要位于３５～１２７氨基酸；第３个为
１．ＡＰＥ１在ＤＮＡ碱基切除修复中的作用：碱基切
要发生在Ｃｙｓ６５残端。最近研究表明通过氧化还原
除修复（ＢＥＲ）是一个分子通路，主要清除那些小的、
非螺旋化的可能在复制过程中发生突变或导致单链
综述。
一
有的短补丁或长补丁ＤＮＡ修复通路发挥作用。
在哺乳动物细胞中，ＡＰＥ１水解ＡＰ位点５磷酸二脂酶键产生一个含有３羟基和５脱氧核糖磷酸末
、
ＡＰＥ１结构和结构域
端的单链ＤＮＡ中间体Ｅ７］。ＡＰＥ１是切除ＡＰ位点和
ＸＲＣＣ１、ＰＣＮＡ、ＰＡＲＰＩ，结合在切除的ＡＰ位点，促进
整个通路的进行。ＡＰＥ１可以直接或间接地结合
ＢＥＲ相关的酶和其他修复通路，还可以通过不同的糖基化酶，如ＯＧＧ～１、ＭＹＨ、ＭＰＧ等作用依次结合
氨基酸区域为独立的功能域。通过体外研究表明，Ｎ
一
末端４３～６５氨基酸残端为发挥氧化还原作用的必
须区域，诱导氧化反应蛋白乳Ｐ５３、ＡＰ—ｌ、Ｍｙｂ和Ｃｙｓ６５参与ＡＰＥ１氧化还原作用，定位在Ｂ１链上，侧