胃泌素对胃癌细胞粘着斑激酶酪氨酸磷酸化的影响
《STC1通过激活PI3K-AKT通路驱动糖代谢重编程促进胃癌细胞增殖》
《STC1通过激活PI3K-AKT通路驱动糖代谢重编程促进胃癌细胞增殖》摘要：本文研究了STC1（Short Chain Fatty Acid Receptor 1）如何通过激活PI3K-AKT信号通路驱动糖代谢重编程，从而促进胃癌细胞的增殖。
实验结果表明，STC1在胃癌细胞中发挥关键作用，为胃癌的治疗提供了新的靶点。
一、引言胃癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。
近年来，随着对胃癌发病机制的深入研究，发现了许多与胃癌发生、发展密切相关的分子和信号通路。
其中，短链脂肪酸受体（Short Chain Fatty Acid Receptor，STC1）和PI3K-AKT信号通路在胃癌细胞中发挥着重要作用。
本文旨在探讨STC1如何通过激活PI3K-AKT通路驱动糖代谢重编程，进而促进胃癌细胞的增殖。
二、材料与方法1. 材料：胃癌细胞系、STC1激动剂、抑制剂、相关抗体等。
2. 方法：（1）细胞培养与处理：培养胃癌细胞系，分别用STC1激动剂和抑制剂处理细胞。
（2）Western Blot：检测PI3K-AKT信号通路相关蛋白的表达情况。
（3）荧光定量PCR：检测STC1和PI3K-AKT相关基因的表达水平。
（4）糖代谢实验：测定细胞内糖原含量及糖代谢相关酶活性。
（5）细胞增殖实验：通过MTT法检测细胞增殖情况。
三、结果1. STC1对PI3K-AKT信号通路的影响：实验结果显示，STC1激活后，PI3K-AKT信号通路被激活，相关蛋白的表达量增加。
2. STC1对糖代谢的影响：STC1激活后，胃癌细胞内糖原含量增加，糖代谢相关酶活性增强，表明STC1通过激活PI3K-AKT通路驱动了糖代谢重编程。
3. STC1对胃癌细胞增殖的影响：STC1激活后，胃癌细胞的增殖能力增强。
这一现象在STC1抑制剂存在的情况下得到抑制。
4. 基因表达分析：荧光定量PCR结果显示，STC1和PI3K-AKT相关基因的表达水平在胃癌细胞中显著增加。
胃癌中β-catenin、ki67与Her-2-Neu的关系及临床意义
胃癌中β-catenin、ki67与Her-2-Neu的关系及临床意义摘要：胃癌是全球范围内最常见的一种恶性肿瘤，其发病率和死亡率一直居高不下。
β-catenin、ki67与Her-2/Neu作为目前研究相对较多的胃癌相关标志物，其在胃癌的发生、发展过程中具有重要的作用。
本文对β-catenin、ki67与Her-2/Neu在胃癌中的表达情况、相互关系及临床意义进行详细综述，以期为胃癌临床诊治及预后评估提供参考。
关键词：胃癌；β-catenin；ki67；Her-2/Neu；临床意义正文：一、β-catenin在胃癌中的表达及作用β-catenin是一种细胞间粘附蛋白，参与调节胃癌细胞生长、转移和转化等过程。
目前研究表明，β-catenin在胃癌的发生、发展中发挥着重要作用。
β-catenin与胃癌的关系：大量研究表明，β-catenin在正常胃黏膜中的表达很低，但在胃癌组织中常常出现明显升高。
在胃癌的发生过程中，前癌病变阶段的细胞中β-catenin表达也常常出现异常。
在胃癌组织中，β-catenin参与了某些信号转导途径的激活，促进了肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。
β-catenin的作用机制：β-catenin参与胃癌的发生、发展主要通过两个途径发挥作用。
一是参与Wnt/β-catenin信号途径，当Wnt/β-catenin途径被激活时，β-catenin进入胞核与转录因子结合形成复合物，激活多种靶基因，在胃癌细胞中发挥作用。
二是参与胞间连接的调节，β-catenin能够将细胞连接蛋白E-cadherin与α-catenin连接起来，进而形成细胞连接结构，维护正常的组织结构。
二、ki67在胃癌中的表达及作用ki67是一种核质共存蛋白，在细胞增殖活动中起到重要作用。
它广泛存在于许多肿瘤和正常组织中，是一种较为敏感的细胞增殖标志物。
ki67与胃癌的关系：ki67在胃癌的发生、发展过程中表达升高，与胃癌的分级、浸润度和预后具有相关性。
血清胃蛋白酶原、胃泌素对于诊断早期胃癌有什么意义？晋城博润微创外科医院来告诉你。
血清胃蛋白酶原、胃泌素对于诊断早期胃癌有什么意义？晋城博润微创外科医院来告诉你。
Q：主任，什么是血清胃蛋白酶原和血清胃泌素检查？它们对于诊断早期胃癌有什么意义吗？
它是在胃内起到促进胃的分泌功能的一种物质。
我们知道胃内的情况是很复杂的，因为无论是对食物机械性地粉碎、搅拌这些功能，还是胃内加入消化液，主要是胃酸这类的消化液，充分地把消化液跟食物再去混合，混合以后再去排入到肠子，再去消化这么一个过程。
而胃泌素这些东西是干什么的？是促进胃内分泌一些黏液蛋白，对胃起到一定的保护作用。
所以它的缺乏，容易带来胃的损伤。
现在认为很经典的胃癌发生的原因，可能还是牵扯到一些机械性的损伤，炎症、修复，有突变这么一个过程。
所以它是在这个过程中保护机能在局部有缺失的一种情况，所以认为它可能会导致后面不利的一些情况出来。
所以认为它还是对胃癌诊断有一定的参考意义。
胃泌素及其受体拮抗剂对原代培养胃癌细胞的作用研究
胃泌素及其受体拮抗剂对原代培养胃癌细胞的作用研究王和明;曹秀峰;李义生;黄水清;袁爱华;张群华;张延龄【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2004(31)11【摘要】目的研究胃泌素及其受体拮抗剂对原代培养胃癌细胞的作用,探讨胃癌患者非细胞毒内分泌治疗的可行性。
方法从新鲜胃癌切除标本中分离胃癌细胞进行体外培养,应用MTT比色分析法和流式细胞仪观察胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺对细胞增殖、周期分布的影响。
结果胃泌素可明显促进部分胃癌细胞的增殖,使细胞从G0/G1期向S期和G2/M期转化,与对照组比较有显著差异(P<0.01),丙谷胺可阻断胃泌素的作用。
对胃泌素敏感的胃癌原发部位多在胃体部(13/34)和贲门部(15/34),胃窦部较少(6/34);以低分化或未分化腺癌为主(77.1%),多为中晚期。
结论胃泌素可促进部分胃癌患者肿瘤细胞的增殖和细胞内DNA合成,以胃体、贲门癌为著,胃泌素受体拮抗剂可望成为胃癌非细胞毒内分泌治疗新途径。
【总页数】3页(P677-679)【关键词】胃泌素;受体拮抗剂;胃癌;原代培养【作者】王和明;曹秀峰;李义生;黄水清;袁爱华;张群华;张延龄【作者单位】南京医科大学附属南京第一医院肿瘤中心;上海复旦大学华山医院外科【正文语种】中文【中图分类】R73-362;R735.2【相关文献】1.胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对原代培养大肠癌细胞作用的研究 [J], 何双梧;谢尚奎2.胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株生长的抑制作用 [J], 李哲夫;王德昭3.胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺与胃癌BGC-823细胞系P16、P21蛋白的表达研究 [J], 孙鹏;李鸿彦;胡鹏;许瑞环4.胃泌素及其受体拮抗剂作用下胃癌细胞DNMT-1与MMP-2E-Cadherin甲基化相关性研究 [J], 张宇晴;徐优慧;黎文婷;邹学森;罗达亚;蔡定浩5.胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株MKN_(45)裸鼠移植瘤生长的抑制作用 [J], 黄广建;张延龄;乐竹琴;余枫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胃泌素是由胃窦部G细胞分泌
讨 论 胃泌素是由胃窦部G细胞分泌,可以促进胃酸分泌。
检测其含量变化能反映胃粘膜的分泌功能。
近年来,有学者认为在胃癌发生和发展过程中有胃泌素的参与,胃泌素不仅能促进正常胃肠道粘膜的生长,而且对癌细胞的生长及细胞恶性转化细胞产生影响[1]。
Thorburn等[2]发现内源性胃泌素在胃癌发生、发展中起重要作用。
本研究显示,胃癌患者胃泌素水平明显升高,并与肿瘤发生的部位及病程分期有关,经手术切除后,血清胃泌素明显下降。
与文献报道相符[3]。
说明胃泌素在胃癌发生、发展起重要作用,对胃癌的诊断、病情程度、治疗效果和预后判断有一定的临床意义。
胃泌素可能通过其受体介导细胞内信号传导,使细胞由G0/G1,向S、G2/M期转化,促进细胞的增殖,抑制细胞的凋亡。
它不仅通过其受体介导细胞内信号传导,亦参与了细胞遗传信号的改变而促进细胞的增殖[4]。
因此,阻断胃泌素对肿瘤的促增殖作用,可能为胃癌病人开辟治疗新途径。
CEA是一种具有多种抗原决定簇的大分子糖蛋白,对消化道肿瘤的诊断有重要意义,但特异性不强。
欧阳艳等[5]报道,CEA对胃癌的阳性检出率为46.7%。
刘里等[6]报道为46%。
本组CEA对胃癌阳性检出率为47.92%,和文献基本相符。
研究证明,肿瘤标志物联合检测可优势互补,提高标志物的应用价值。
本组CEA和胃泌素联合检测对胃癌阳性检出率明显高于单项检测,阳性率达60.87%,提示两者联合检测对胃癌早期筛选具有一定的临床价值。
手术彻底,预后良好的患者,CEA、胃泌素可下降至正常水平,残余肿瘤的患者两项指标依然持续高水平或不能下降至正常水平,术后复发的患者,CEA、胃泌素重新又异常升高,说明CEA、胃泌素是判断胃癌手术预后和早期复发的一个指标。
参考文献[1]程兆明,李 龙,陈林娜,等.血清胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ与胃泌素联合检测对胃癌的诊断价值[J].中华消化内镜杂志,2002,19(1):32. [2]Thorburn CM,Friedman GD,Dickinson C J,et al.Gastrin andcolorectal cancer:a prospective study[J].Gastroenterology,1998, 115:275-280.[3]谢维钊,麦茂华.胃癌患者血清胃泌素水平的测定和临床意义[J].广东医学院学报,2001,19(4):278.[4]王和明,曹秀峰,张群华,等.胃泌素及其受体拮抗剂对胃癌细胞PCNA、P53基因表达的影响[J].中华实验外科杂志,2004,21(5):546.[5]欧阳艳,冯新利,王淑霞.CEA、A FP、CA19-9联检对消化道系统恶性肿瘤的诊断价值[J].放射免疫学杂志,2004,17(4):303.[6]刘 里,侯媛媛.胃癌联合检测肿瘤标志物CA50、CA199、CEA、A FP的临床应用价值[J].河北医学,2004,10(11):1056.(收稿日期:2005-01-10 修回日期:2005-04-26)(编辑:潘明志)4365例孕产妇艾滋病和梅毒监测结果分析陈建霞,黄衍锋,邹焕荣,罗美娟,袁 丹(广东省深圳市龙岗中心医院,广东深圳518116) 【摘要】 目的 了解孕产妇艾滋病和梅毒感染在本地区的现状及其感染的相关因素。
胃肠道激素名词解释
胃肠道激素名词解释
胃肠道激素是指由胃肠道内分泌细胞产生的一类化学物质，通过血液循环系统作用于胃肠道及其他器官，调节胃肠道的运动和分泌，影响食欲和能量代谢。
以下是几种常见的胃肠道激素的名词解释：
1. 去甲肾上腺素：也称为胃动素，是一种由胃黏膜细胞分泌的激素，能够促进胃肠道平滑肌运动，增加胃肠蠕动和排空，从而促进食物的消化和吸收。
2. 胃泌素：由胃窦部分泌细胞产生的激素，可促进胃酸和蛋白酶的分泌，提高胃肠道的消化和吸收能力。
3. 胰高血糖素：由小肠上皮细胞产生的激素，可以抑制胰岛素分泌和增加胰腺中葡萄糖生成激素，使血糖水平升高。
同时，它还能促进胃肠道蠕动和减慢胃排空，提高餐后血糖的吸收率。
4. 胃抑素：也称作胃抑制素，是由十二指肠黏膜产生的激素。
它能够抑制胃泌素和去甲肾上腺素的分泌，从而降低胃酸和胃肠蠕动，起到减缓胃肠蠕动和饱腹感的作用。
5. 胃酪氨酸：由胃肠道上皮细胞分泌的一种激素，主要调节蛋白质的摄取和消化。
它能够提高食欲和促进胃酸和胰蛋白酶的分泌，增加胃肠道的消化能力。
6. 胃抗生素素：胃黏膜细胞分泌的激素，能够抑制胃肠蠕动，减少胃酸分泌和胃肠道的收缩，起到抗生素的效果，对胃肠道
的炎症和溃疡有一定的缓解作用。
7. 胃抑癌素：是一种由胃黏膜细胞产生的激素，它具有抗肿瘤的作用，能够抑制肿瘤细胞的生长和扩散，起到胃肠道的保护作用。
总之，胃肠道激素在调节胃肠道的运动、分泌和能量代谢过程中发挥着重要的作用，对维持身体健康和正常消化吸收具有重要意义。
胃癌患者血清胃泌素水平的变化及其作用
胃癌患者血清胃泌素水平的变化及其作用
黄广建;余枫;王德昭
【期刊名称】《上海医学》
【年(卷),期】1999(22)1
【摘要】目的明确胃癌患者血清胃泌素（Ｇｓ）水平变化的原因及其作用。
方法测定了１６４例胃癌患者及２７例正常人血清Ｇｓ含量，分析其与胃癌部位、分期及预后之间的关系。
结果胃底贲门癌患者血清Ｇｓ水平明显升高，而胃窦癌、胃体癌患者血清Ｇｓ水平与正常人接近。
血清Ｇｓ水平随着胃癌临床病理分期的进展而逐步升高。
４１例不能切除的胃癌中，生存期超过１年者血清Ｇｓ水平与生存期不超过１年者接近。
结论胃底贲门癌患者血清Ｇｓ水平的升高是一种继发性改变，血清Ｇｓ的水平与胃癌患者的预后无关，血清Ｇｓ并不参与胃癌的生长过程。
【总页数】2页(P36-37)
【关键词】胃泌素;胃肿瘤;血清
【作者】黄广建;余枫;王德昭
【作者单位】上海医科大学华山医院外科
【正文语种】中文
【中图分类】R735.702
【相关文献】
1.大肠癌患者血清CA—50,CEA和胃泌青水平变化及胃泌素受体的临… [J], 刘国华;房献平
2.胃癌患者血清survivin抗体和胃泌素水平变化及意义 [J], 胡华;金建军
3.胃大部分切除术后胃癌患者血清胃泌素、血浆胃动素和胃动力变化 [J], 张群;于健春;康维明;柯美云;钱家鸣
4.早期胃癌患者内镜黏膜下剥离术前后血清胃泌素-17、糖类抗原-125及胃蛋白酶原水平的变化和意义 [J], 董曲文; 陈晓; 丁纪元
5.胃癌患者血清膜联蛋白A1、糖类抗原72-4、胃蛋白酶原Ⅰ及胃泌素-17水平变化及意义分析 [J], 夏永欣;田春阳;郭洁;张萌
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胃泌素与肿瘤发生、发展的关系
素基 因的表达 ， 并于其相应 的细胞表 面发现 胃泌素 受体 。胃癌的发 生发展 机 制至今 尚不 清楚 ， 导致 治疗措施 不
能尽如人意 。胃癌的 生长分化受许 多因素调 控 ， 胃癌 细胞 的增 殖转 移与相 关 胃肠激 素密切相 关 。 目前研 究提
示， 胃癌密切相 关的 胃肠激素有 胃泌素 、 与 生长抑素、 铃蟾肽 、 皮生 长 因子和胰 岛素 样生长 因子 等。现就 胃泌 表
Ａｂ ｔ ａｃ ： ｉ ｄ ａ ｃ ｍｅ ｔｏ ｕ ｒｍｏｅ ｕｌｒｂ ｏｏ ｙ，ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｇ ｓｒｎ ｇ ｎｅ ａ ｅ ｆｕ ｓ ｒ ｔ Ｗ ｔ ａ ｖ ｎ ｅ ｎ ｆｔ ｍｏ ｌ ｃ ａ ｉｌ ｇ ｈ ｘ ｒ ｓｉｎ ｏ ａ ｔｉ ｅ ｒ ｏ ｎｄ ｈ ｉ ｎ ｒｍａ ｙ ｔ ｍｏ ｓａ ｄ ｔ ｍｏ ｎ ｍａ ｙ ｐ ｉ ｒ ｕ ｒ ｎ ｕ ｒ—ｄ ｒｖ ｄ ｃ ｌ ｉ ｓ，ｓ ｃ ｓｇ ｓｒｃ ｃ ｎ ｅ ，ｐ ｎ ｒ ａ ｃ ｃ ｎ ｅ ｎｄ ｅ ｅ ｅｌｌ ｉ ｎｅ ｕ ｈ ａ ａ ｔｉ ａ ｃ ｒ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｃ ｒ ａ ｉ ｃ ｌｒ ｃａ ａ ｅ，ｓ ｌ ｏｏ ｅ ｔ ｌｃ ｎｃ ｍａｌ—ｃ ｌ ｕ ｇ ｃ ｒ ｉ ｏ ｎｄ ａ ｓ ａ ｏ ｎ ａ ｔｉ ｅ ｅ ｔｒ ｎ ｔ ｅｓ ｒａ ｅ ｏ ｅ． ｅｌｌ ｎ ａ ｃｎ ｍａ ａ ｌｏ ｈ ｓｆ ｕ ｄ ｇ ｓｒｎ ｒｃ ｐｏ ｓｏ ｕ ｆｃ ｆｒ １ ｈ 一 ｅ ａ ｔｃ ｌｓ． ｏ ｄ ｔ ｔ ｅ ｐ ｔ ｏ ｅ ｉ ｃ ａ ｉｍ ａ ｔｉ ａ ｃ ｒｉ ｏ ｌａ ， ａ ｓｎｇ ｍｅ ｓ ｒ ｓｏ ｈ ｒ ｖ ｎ ｅ Ｔ ａｅ， ａ ｇ ｎ ｃ ｍｅ ｈ ｎ ｓ ｏ ｇ ｓｒｃ ｃ ｎ ｅ ｓｎ ｔｃ ｅ ｒ ｃ ｕ ｉ ａ ｕ ｅ ｆｔ ｅ — ｈ ｈ ｆ ａ ｙ ｕ ｓ ｔ ｆ ｃｏ ．Ｇｒ ｗｔ ｎ ｉ ｅ ｅ ｉ ｔｏ ｆ ｇ ｓｒｃ ｃ ｎｃ ｒ ａ ｅ ｒ ｇ ｌ ｔｄ ｂ ｎ ａ ｔｒ ．Ｒｅ ａｅ ｐ ｎ ａｉ ａ ｔｒ ｓ ｙ ｏ ｈ ａ ｄ ｄ ｆ ｒ ｎｔ ｉ ｎ ｏ ａ ｔ ａ ｅ ｒ ｅ ｕ ａｅ ｙ ｍａ ｙ ｆｃ ｏ ｓ ａ ｉ ｌｔ ｄ ｇ ｓｒ ｅ ｔｒｃ ｈ ｒ ｎ ｓｈ ｖ ｌ ｓ ｅ ａ ｏ ｏ ｐ ｏ ｉｅ ａｉｎ ａ ｔ ｓａ ｉ ａ ｔ ｃ ｃ ｎ ｅ ． ｒ ｓ ｎ ａ ｔｏ ｎ ｅｉ ｏ ｍｏ ｅ ａ ｅ ａｃ ｏ ｅ ｒ ｌｔ ｎ ｔ ｒ ｌｆｒ ｔｏ ｎｄ ｍｅａ ｔｓｓｏ ｇ ｓｒ ａ ｃ ｒ ｉ ｆ ｉ ．Ａｔｐ ｅ ｅ ｔ ｒ ｓ ａ ｃ ｕ ｇ ｓｅ ｔ ａ ｇ ｓｒｎ， ｓ ｍａ ｓａｉ ｅ ｅ ｒ ｈ ｓ ｇ ｅ ｔｄ， ｈ ｔ ａ ｔｉ ｏ ｔ ｔｔｎ，ｂｏ ｏ ｍｂｅ ｉ ｅ ｉ ｅ ａ ｏ ｈ ｆｃｏ ｎ ｎ ｕ ｉ — ｌｋ ｓｎ， ｐ ｄ ｒ ｌｇｒｗｔ ａ ｔｒ ａ ｄ ｉ ｓ ｌｎ ｉ ｅ ｍ ｇ ｏ ｈ ｆｃ ｏ ，ｔｅ ｅ ｒ ｌ ｔｄ ｇ ｓｒ ｅ ｔｒｃｈｏ ｏ ｓ ｈ ｖ ｌ ｓ ｅ ａ ｏ ｏ ｇ ｓｒｃ ｃ ｃ ｒ ｒ ｗｔ ａ ｔｒ ｈ ｓ ｅａｅ ａ ｔｏ ｎ ｅｉ ｒ ｎｅ ａ ｅ ａ ｃｏ ｅ ｒ ｌｔ ｎ ｔ ａ ｔ ａ ｅ ．Ｔｈ ｓａ ｔｃｅ ｍ ｉ ｉ ｎ ｉ ｒｉｌ ｒ ｖ ｅ ｂ ｕ ａ ｔｉ ｅ ｉｗｓａ ｏ ｔｇ ｓｒｎ．
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
《癌症》Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，２００８，２７（１）：４１—４５ ４ｌ 胃泌素对胃癌细胞粘着斑激酶酪氨酸磷酸化的影响‘基础研究・
李 丹 ， 丁 健 ， 王小众 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｉｎ ｏｎ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｃａｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｋｉｎａｓｅ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇａｓｔｒｉｃ Ｃａｎｃｅｒ ＣｅｌＩ Ｌｉｎｅ ＳＧＣ７９０１ ＬＩ Ｄａｎ’，ＤＩ ＮＧ Ｊｉａｎ ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ—Ｚｈｏｎｇ’
１．福建医科大学附属协和医院 消化研究室． 福建福州３５ｏｏｏ１ ２，福建医科大学附属第一医院 消化内科． 福建福州３５ｏｏｏ１
Ｊ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒａｌｏｇｙ， Ｕｎｉｏｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉ￣，３５０００１， Ｐ ．Ｃｈｉｎａ ２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ， Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉ￣，３５０００１， Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
通讯作者：李丹 Ｃｏ￣ｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｔｏ：ＬＩ Ｄａｎ Ｔｅｌ：８６—５９１—８８７９６６８６ Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｄａｎ２００６＠ｈｏｔｍａｉｌ，ｃｏｒｎ
基金项目：福建省卫生厅青年科 研课题基金（Ｎｏ．２００６—１—１０）； 福建省科技厅青年创新基金 （Ｎｏ，２００６Ｆ３０５０）
Ｇｒａｎｔｓ：Ｙｏｕｔｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅａｈｈ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（Ｎｏ．２００６—１—１０）； Ｙｏｕｔｈ Ｃｒｅａｔｉｏｎ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｃｉ—Ｔｅｃｈ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ （Ｎｏ．２００６Ｆ３０５０）
收稿日期：２００７—０１—２５ 修回日期：２００７—０８—２４
［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ＆ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ： Ｇａｓｔｒｉｎ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｎ ｏｎ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ（ＦＡＫ）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ Ｉｉｎｅ ＳＧＣ７９０１．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ ｖｅｃｔｏｒ ｐＣＲ３．１／ＧＲ．．ｔｈａｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｓ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＲ）ｓｔａｂｌｙ，ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ（ＳＧＣ７９０１一 ＧＲ）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＲ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）．ＳＧＣ７９０１一ＧＲ ａｎｄ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｌ一３６５２６０。 ａｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ＧＲ． ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｎ ａｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ＩｅｖｅＩ ｏｆ ＦＡＫ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ． ＲＥＳＵＬＴＳ： Ｗｈｅｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃＯｎｃｅｎｔｒａｔｉＯｎｓ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｎ ｆｏｒ １ ｍｉｎ．ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＦＡＫ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ＳＧＣ７９０１一ＧＲ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｎ ｉｎ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ（０．６４±０．０６ ｖｓ．０．４０±０．０５ ａｔ ０．１ ｎｍＯＩ／Ｌ．０．９１±０．１０ ｖｓ．０．５２±０．０７ ａｔ １ ｎｍＯｉ／Ｌ．ａｎｄ １．００±０．１０ ｖｓ．０．６２±０ ０６ ａｔ １０ ｎｍＯＩ／Ｌ．Ｐ＜ ０．０１）． Ｗｈｅｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １ ０ ｎｍＯＩ／Ｌ ｇａｓｔｒｉｎ ｆｏｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｔｊｍｅ．ｔｈｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＦＡＫ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ＳＧＣ７９０１一ＧＲ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｎ ｉｎ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ（０ ７２±０．０８ ｖｓ ０．５９±０．０５ ａｔ １ ｍｉｎ．０．８３±０．０５ ｖｓ．０ ６５±０．０７ ａｔ ５ ｍｉｎ．０．８８±０．０６ ｖｓ．０．５８±０．０３ ａｔ １０ ｍｉｎ．ａｎｄ １．００±０．０８ ｖｓ．０．４７±０．１０ ａｔ ２０ ｍｉｎ．Ｐ＜０．０５）．Ｌ一３６５２６０ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｔｙ ｒｏｓｉｎｅ ｐｈＯｓｐｈＯｒｙＩａｔｉＯｎ Ｉｅｖｅｌｓ ｏｆ ＦＡＫ ｆｒＯｍ １ ００±０．０７ ｔＯ ０．７２±０．０７ ｉｎ ＳＧＣ７９０１一ＧＲ ｃｅｌｌｓ （Ｐ＜０．０１）。 ａｎｄ ｆｒＯｍ ０ ６２±０．０６ ｔｏ ０．４５±０．０５ ｊｎ ＳＧＣ７９０１ ｃｅｌｌｓ （Ｐ＜ ０．０１ Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｅｖｅｌｓ ｏｆ ＦＡＫ ｊｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｓ ｒｅｍａｉｎｅｄ ｕｎｃｈａｎｇｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅｓｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ （Ｐ＞０．０５） ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＳ： ＦＡＫ ｉｓ ａ ｐｉｖｏｔａｌ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ｉｎ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｎ ｗｉｔｈ ＧＲ．Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｉｓ ｔｈｅ ｓｙｍｂｏＩ ｏｆ ＦＡＫ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ． ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｇａｓｔｒｉｎ；Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ；Ｇａｓｔｒｉｃ ｎｅｏｐｌａｓｍ；Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ
【摘要】 背景与目的：胃泌素能够刺激胃癌细胞的生长和增殖，这一作用同酪 氨酸激酶有关。本研究旨在阐明胃泌素对人胃癌细胞内粘着斑激酶（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ，ＦＡＫ）酪氨酸磷酸化的影响。方法：用人胃泌素受体（ｇａｓｔｒｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＲ）的真核表达载体ｐＣＲ３，１／ＧＲ，转染人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１，增强胃 泌素受体表达：用胃泌素受体拮抗剂Ｌ一３６５２６０，抑制胃泌素和其受体结合；以不同 浓度和作用时间的胃泌素刺激胃癌细胞，利用免疫沉淀和蛋白质印迹法检测上述 情况下．ＦＡＫ酪氨酸磷酸化的变化。结果：分别用０．１ ｎｍｏｌ／Ｌ、１ ｎｍｏｌ／Ｌ和１０ ｎｍｏｌ／Ｌ的胃泌素作用后．转染ｐＣＲ３．１／ＧＲ的ＳＧＣ７９０１细胞内ＦＡＫ酪氨酸磷酸化 表达量分别为０．６４±０，０６、０，９１±０．１０和１．００＋０，１０，高于ＳＧＣ７９０１细胞的０．４０ ０．０５、０．５２￣０，０７和０．６２￣０．０６（Ｐ＜０．０１）；转染ｐＣＲ３．１／ＧＲ的ＳＧＣ７９０１细胞内ＦＡＫ 酪氨酸磷酸化表达量分别为０．７２￣０．０８、０．８３￣０．０５、０．８８￣０．０６和１．００￣０．０８，高于
维普资讯 http://www.cqvip.com ４２ 李丹，等．胃泌素对胃癌细胞粘着斑激酶酪氯酸磷酸化的影响 ＳＧＣ７９０１细胞的０．５９±０．０５、０．６５±０．０７、０．５８±０．０３和０．４７± ０．１０（Ｐ＜Ｏ．０１或Ｐ＜Ｏ．０５）。胃泌素受体拮抗剂Ｌ．３６５２６０使转 染ｐＣＲ３．１／ＧＲ的ＳＧＣ７９０１细胞内ＦＡＫ酪氨酸磷酸化表达 量从１．００＋０．０７降至０．７２￣０．０７（Ｐ＜Ｏ．０１），使ＳＧＣ７９０１细胞 内表达量由０．６２￣０．０６降至０．４５￣０．０５（Ｐ＜Ｏ．０１）。在此过程 中，ＦＡＫ蛋白表达量差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。结论： ＦＡＫ是胃泌素和其受体结合后发挥效应的关键下游信号分 子，酪氨酸磷酸化是其活性形式。 关键词：胃泌素；粘着斑激酶；胃肿瘤；酪氨酸磷酸化 中图分类号：Ｒ７３５．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—４６７Ｘ（２００８）ｏｌ一００４１—０５
胃泌素是一种肽类激素和营养因子。近年来． 胃泌素与胃癌的关系逐渐引起人们重视。许多研究 均表明胃泌素能够刺激胃癌细胞生长和增殖 。 此作用由胃泌素受体介导ｆ３］。胃泌素可以激活酪氨 酸激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ） ，现有的研究集中在酪氨 酸激酶激活所引起的一系列磷酸化反应上。粘着斑 激酶（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ，ＦＡＫ）是酪氨酸激酶催 化的底物之一。有报道证实使用胃泌素受体转染 小鼠成纤维细胞可以引起ＦＡＫ酪氨酸位点的磷 酸化［ ．但此结果在人类细胞株中尤其是胃癌细胞 株中尚未得到证实。本研究对胃泌素和受体结合 后，胃癌细胞内信号传导通路发生的变化进行实验 研究，观察其对ＦＡＫ酪氨酸磷酸化的影响，以期进 一步了解胃泌素促进人胃癌细胞生长和增殖的机 制 １材料与方法 １．１ 实验材料 胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１购自上海生物细胞研究 所。人胃泌素（ｇａｓｔｒｉｎ １７，Ｇ１７）、Ｔｒｉｚｏｌ试剂和新霉 素购自Ｓｉｇｍａ．公司。新霉素（Ｇ４１８）购自Ａｍｅｒｓｃｏ公 司。胃泌素受体拮抗剂Ｌ一３６５２６０购自Ｍｅｒｃｋ公司。 兔多克隆抗人ＦＡＫ抗体和兔抗人磷酸化位点抗体 （抗ＦＡＫ ｔｙｒ一３９７）购自Ｎｅｏｍａｋｅｒ公司。脂质体 Ｌｉｐｏｆａｍｉｎｅ２０００购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ＲＰＭＩ一１ ６４０和 胎牛血清购自Ｇｉｂｃｏ公司。胃泌素受体的引物由上 海生工生物公司合成。人胃泌素真核表达载体 ＤＣＲ３．１／ＧＲ由德国波鸿大学Ｓｔ—Ｊｏｓｅｆ医院分子消 化研究室馈赠。电化学发光试剂盒购自武汉博士德 公司。 １．２实验方法 １．２．１细胞培养使用ＲＰＭＩ一１６４０加１０％的小牛 血清培养液。置于３７ｃｃ、１００％湿度和５％ＣＯ 的培 养箱中培养 １．２．２质粒转染根据脂质体Ｌｉｐｏｆａｍｉｎｅ２０００的 说明书，将含有新霉素抗性基因的ｐＣＲ３．１／ＧＲ转 染至ＳＧＣ７９０１细胞中，细胞培养于９６孑Ｌ板中， 加入Ｇ４１８达浓度５００ ｌ￣ｇ／ｍＬ，进行加压筛选 将筛选出的具有Ｇ４１８抗性的细胞株命名为 ＳＧＣ７９０１一ＧＲ。 １．２．３逆转录ＰＣＲ检测胃泌素受体表达水平用 Ｔｒｉｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ抽提细胞总ＲＮＡ，使用ＭＭＬＶ （ｍｏｌｏｎｅｙ ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）进行逆转录，在２５ Ｌ逆转录体系中加入模板５ Ｌ，４１ｃ【＝反应１ ｈ 后，取５ Ｌ逆转录反应液为模板进行ＰＣＲ扩增。 使用如下引物：上游：５ 一ＧＴＧＡＣＡＧＣＧＡＣＡＧＣＣＡ ＡＡＧＣＡ一３ ：下游：５ 一ＣＧＡＧＧＣＧＴＡＧＴＣＣＡＧＣＡＡ ＧＴＧＡ一３ 。程序为９５ｃ【＝变性３０ Ｓ，５８ｏＣ退火４５ Ｓ， ７２ｃｃ延伸６０ Ｓ为１个循环，共扩增２０个循环，扩 增片段３８３ ｂｐ。以ｐ—ａｃｔｉｎ为内对照，使用如下引 物：上游：５ 一ＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＡＣＴＣＣＧＧＴ一３ ；下游： ５ 一ＧＧＡＡＧＧ ＡＡＧＧＣＴＧＧＡＡＧＡＧＴ．３ ，反应条件同 上，扩增片段３５０ ｂｐ。取ＰＣＲ产物经２％琼脂糖凝 胶电泳，紫外光检测仪上观察结果，检测吸光度 （Ａ）值，将胃泌素受体与ｐ．ａｃｔｉｎ Ａ值的比值作为 其ｍＲＮＡ水平的相对值。 １．２．４ Ｇ１７浓度对ＦＡＫ蛋白和ＦＡＫ ｔｙｒ一３９７磷酸 化表达的影响使用免疫沉淀和蛋白质印迹法。将 ＳＧＣ７９０１和ＳＧＣ７９０１．ＧＲ细胞置于３５ ｍｍ培养皿 中，无血清培养过夜。然后在培养体系中加入Ｇ１７， 培养体系中最终浓度分别为０、０．１、１、１０ ｎｍｏｌ／ Ｌ，１ ｍｉｎ之后将培养皿置于冰上，吸出培养液并加 入１ ｍＬ ＲＩＰＡ缓冲液溶解细胞。离心后上清液蛋 白定量。３组细胞各取等量蛋白加兔多克隆抗人 ＦＡＫ抗体或兔抗人ＦＡＫ ｔｙｒ一３９７抗体和琼脂糖交 联的蛋白Ａ沉淀蛋白质，振荡过夜后，离心取沉 淀。行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳，之后以电转印法将蛋白转 印到硝酸纤维素膜上，封闭后加兔多克隆抗人ＦＡＫ 抗体或兔抗人ＦＡＫ ｔｙｒ一３９７抗体，使用电化学发光 法试剂盒进行显影，每组实验重复４次。 １．２．５ Ｇ１７作用时间对ＦＡＫ蛋白和ＦＡＫ ｔｙｒ一３９７ 磷酸化表达的影响 向培养体系中加入１０ ｎｍｏｌ／Ｌ Ｇ１７，分别在０、１、５、１０、２０ ｒａｉｎ后完全吸除培养液， 其余方法同上，观察结果，每组实验重复４次。 １．２．６拮抗实验向细胞中加人特异性胃泌素受 体拮抗剂Ｌ一３６５２６０，终浓度为０．１ ｔｚｍｏｌ／Ｌ。３０ ｒａｉｎ 后，培养体系中加入浓度为１０ ｎｍｏｌ／Ｌ的Ｇ１７，作