DPPH法测定树上虾丙酮部位自由基清除能力
清除DPPH自由基能力检测方法
清除DPPH自由基能力检测方法清除DPPH自由基能力是用来评价化合物在体外是否具有抗氧化活性的一种常用方法。
DPPH自由基是一种常用的自由基模型，其具有紫色，可通过其吸收峰的变化来反映清除能力。
以下是常用的几种用于检测清除DPPH自由基能力的方法：1.分光光度法分光光度法是一种常用的检测方法，基本原理是通过测量化合物与DPPH反应后的溶液吸光度的变化来评估清除DPPH自由基能力。
实验过程如下：1）准备1mM的DPPH乙醇溶液。
2）将待测化合物按一定浓度体系添加到相应的试管中。
3）将相同体积的DPPH溶液加入到每个试管中，混匀。
4）放置在室温下，静置反应30分钟。
5）使用紫外可见分光光度计测量反应体系的吸光度，计算清除率。
2.电子顺磁共振法（EPR）电子顺磁共振法是另一种常用的方法，通过测量化合物对DPPH自由基的清除能力，进而评估其抗氧化活性。
实验过程如下：1）准备含有DPPH和待测化合物的溶液。
2）使用电子顺磁共振仪测量样品的EPR信号，同时测量含有DPPH和不含DPPH的样品作为参比。
3）通过比较样品与参比的EPR信号来计算清除率。
3.原子力显微镜方法（AFM）原子力显微镜方法是一种非常灵敏的方法，可以用于直接观察化合物对DPPH自由基的清除作用。
实验过程如下：1）制备DPPH自由基薄膜。
2）将待测化合物沉积到DPPH自由基薄膜上。
3）使用原子力显微镜观察样品的表面形态变化。
4）通过观察DPPH颜色的变化和表面形态的变化来评估清除率。
4.荧光法荧光法是一种快速、灵敏且简便的检测方法，利用化合物与DPPH反应后荧光上转换的变化来评估清除DPPH自由基能力。
实验过程如下：1）制备DPPH乙醇溶液。
2）将待测化合物与DPPH溶液混合。
3）使用荧光光谱仪测量样品的荧光强度的变化。
4）通过荧光强度的变化来计算清除率。
总结：以上所述是几种常用于检测清除DPPH自由基能力的方法，分别基于吸光度、EPR、AFM和荧光等原理。
DPPH法分析测定生地和熟地清除自由基的能力_桂语歌
辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 9 期
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超声提取 2 次，提取时间为 30min，过滤，合并滤液，减 压回收溶剂至干，用 4mL 甲醇溶解，得样品。 1. 2. 2 不同提取方法 精密称取生地和熟地药材粉 末 4 份，每份约 2g，80% 乙醇 50mL 为提取溶剂，分别 采用回流、常温超声，冷浸 3 种提取方法提取 2 次，提 取时 间 为 30min，过 滤，合 并 滤 液； 另 一 份 样 品 采 用 ASE 快速溶剂萃取方法提取，以 80% 乙醇作为提取溶 剂，提取温度 40℃ ，提取时间 5min，静态提取 2 次，过 滤，合并滤液。将过滤后的样品减压回收溶剂至干，分 别用 4mL 甲醇溶解，得样品。 1. 3 样品总多酚含量测定
生地和熟地药材购于长春仁德医药； Folin － Ciocalteu 试剂，没食子酸标准品，2，2 － diphenyl － 1 － picrylhydrazyl （ DPPH ·） 试 剂 购 自 Sigma Chemical Co. 公司 （ St. Louis，Mo） ； 实验所用试剂均为分析纯，购于 北京北化精细化学品有限责任公司； 水为超纯水 18. 2 ΩPa。 1. 2 样品制备 1. 2. 1 不同溶剂提取 精密称取生地和熟地药材粉 末 5 份，每份约 2g，置于具塞锥形瓶中，分别加入乙酸 乙酯、正丁醇、丙酮、无水乙醇、80% 乙醇 50mL，常温下
氮自由基(DPPH)清除能力测试试剂盒 (A001-96T 分光光度计法)
氮自由基（DPPH）清除能力测试试剂盒（A001-96T 分光光度计法）一、测定原理DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，有一个单电子，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对，其吸收会消失褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比。
即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。
二、试剂组成试剂一：DPPH试剂1mL×1瓶试剂二：100μg/mL 维生素C标准溶液 20mL×1瓶三、储存条件及有效期试剂盒-20℃可保存6个月。
四、试剂的配制试剂一：37℃平衡20min以上，待试剂融化后，在试剂瓶中加入100ml 95%乙醇或无水乙醇，剧烈震荡使试剂充分溶解。
注意：溶解一定要充分，如有条件可采用超声波助溶。
试剂二应用液：根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。
1. 如仅需要将维生素C作为质控品，可取100μL 试剂二，加入900μL样品稀释液，充分混匀；2. 如需测定维生素C的IC50，可分别移取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0mL 试剂二于空离心管中，再依次加入10.0，9.5，9.0，8.5，8，7.5，7.0，6.0，5.0ml样品稀释液，充分混匀。
配制成0，5，10，15，20，25，30，40，50 μg/mL 维生素C样品。
五、操作步骤1空白管很重要，建议做3个以上平行；2如样品颜色较浅可不做对照管；3如无0.5cm比色皿，可将样品和试剂体积均按1.5ml加样，使总体积为3ml，则可使用1cm标准比色皿。
六、计算公式氮(DPPH)自由基清除能力(%)=(空白孔吸光值-(测定孔吸光值-对照孔吸光值))/空白孔吸光值*100注：1 如未做对照孔，可以将其视作为0；2 质控孔求值时将其视作测定孔进行计算即可。
七、注意事项1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；2. 如不确定样品的氮自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。
清除DPPH自由基能力检测方法
DPPH自由基清除法[文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.[原理] DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。
分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。
N22当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。
DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。
[实验步骤]1.1 DPPH测试液的配制取DPPH 1mg溶于约20mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。
取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。
该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。
1.2 样品液的配制样品用合适的溶剂溶解，为便于计算，可配成1mg/mL浓度。
溶剂根据样品的极性进行选择，首选95乙醇或无水乙醇，如不溶可用DMSO。
1.3 预试取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。
此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。
【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则100μL为该样品液的最大用量。
其用量梯度宜设为40、80、120 、160、200μL。
1.4测量A0值的测量：取DPPH溶液2 mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，加95乙醇（或无水乙醇）1mL，充分混合，测A值（519nm），此A值为A0（A0多在0.7-0.9之间）。
树上虾丙酮提取物抗氧化活性和还原能力研究
实验用仪器为紫外可见分光光度计（ＵＶ１９０１型，北京普析 电子科技有限公司 ）［８－１０］。 树 上 虾 植 物 来 源 于 广 西 百 色，芦 丁 标准品购于百灵威试剂公司（北京）。
２ 方法 ２．１ 树上虾丙酮提取物制备
将树上虾晒干磨粉后，将 ２０ｇ树上虾粉末放入圆底烧瓶 中，加入 ２００ｍＬ丙酮（９５％）浸泡 ３ｄ。将溶液倒出后，重新加 入新的丙酮（９５％）２００ｍＬ进行冷浸操作，总共加入 ３次丙酮 （９５％），合并提取液。将所得溶液用旋转蒸发仪除去溶剂得到 树上虾丙酮提取物。
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山 东 化 工 ＳＨＡＮＤＯＮＧＣＨＥＭＩＣＡＬＩＮＤＵＳＴＲＹ ２０１９年第 ４８卷
树上虾丙酮提取物抗氧化活性和还原能力研究
李培源１ ，霍丽妮１，贾智若１，卢澄生１，莫媛媛２，黄晓东１
（１．广西中医药大学药学院，广西 南宁 ５３０００１； ２．广西南宁市第五十六中学，广西 南宁 ５３０００１）
２．３ ห้องสมุดไป่ตู้原能力测定［５］
在锥形瓶中加入 ０．２ｍＬ树上虾丙酮部位提取物溶液，２．５ ｍＬｐＨ值 ＝７．４的 ＰＢＳ溶液以及 ２．５ｍＬ浓度为 １％ 的 ＫＦｅ （ＣＮ）４溶液，混合均匀后放于 ５０℃水浴 ２０ｍｉｎ，加入 ２．５ｍＬ浓 度为 １０％的三氯乙酸溶液，离心 １０ｍｉｎ。取上清液和蒸馏水各 ２．５ｍＬ，加入 ０．５ｍＬ浓度为 １％的 ＦｅＣｌ３，将溶液混合后在 ７００ ｎｍ处测定吸光度。
２．２ ＡＢＴＳ· ＋自由基清除能力测定［６－１０］
在锥形瓶中加入 ５０ｍＬ浓度为 ２ｍｍｏｌ／Ｌ的 ２，２＇－联氨 －
双（３－乙基苯并噻唑啉 －６－磺酸）二胺盐（ＡＢＴＳ）水溶液，和 ２００ｍＬ浓度为 ７０ｍｍｏｌ／Ｌ的 Ｋ２Ｓ２Ｏ８水溶液，混合均匀，盖上塞 子避光放置 １２～１６ｈ，再加入磷酸盐缓冲液至溶液在 Ａｂｓ＝７３４ ｎｍ处吸光度为 ０．７０±０．０２得到 ＡＢＴＳ· ＋溶液。取一定量不 同浓度提取物药液，加入一定量 ＡＢＴＳ· ＋溶液混匀，在不同时 间测其吸光度，并以吸光度变化计算其对 ＡＢＴＳ· ＋自由基的清 除率。
DPPH自由基清除测定
DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。
DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。
向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。
实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：N N+O2NO2NNO2H+N NHO2NO2NNO2 DPPH与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇；仪器：分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3．5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol／L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。
2.试液的制备(只作参考)准确称取5.2mg干燥的黄酮提取物（32.75%）,用无水乙醇溶解，并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol／L 试液。
3.DPPH·清除率的测定在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。
dpph自由基清除原理
dpph自由基清除原理
DPPH自由基清除原理是一种常用的方法，用于评估物质的抗
氧化能力。
DPPH（2,2-二苯基-1-苦味酮肼）是一种紫色自由基，具有不配对电子，可吸收紫外-可见光谱范围内的光线，
发生颜色褪变。
在清除DPPH自由基的过程中，如果物质具
有清除能力，会导致DPPH的颜色变浅，光吸收减弱。
DPPH自由基清除实验可通过光度计来测定。
在实验中，首先
将DPPH固体溶解在适当溶剂中，形成浓度适中的溶液。
随后，向DPPH溶液中加入测试物质。
当测试物质呈现清除DPPH自由基的能力时，DPPH的颜色由紫色逐渐变浅，光吸
收度下降。
DPPH自由基能被多种物质清除，包括天然产物如多酚类和类
黄酮等化合物，以及合成抗氧化剂（例如BHA和BHT）。
这
些物质中含有高的氢供体能力，能将自己的氢原子转移给DPPH自由基，从而中和DPPH的不配对电子。
DPPH自由基清除实验可以定量测定物质的抗氧化能力，常用
抗氧化指标包括DPPH清除率和半数清除浓度（IC50）。
DPPH清除率表示物质清除DPPH自由基的能力，清除率越高，抗氧化能力越强。
IC50值表示使DPPH清除率达到50%所需
的物质浓度，值越低，抗氧化能力越强。
总之，DPPH自由基清除实验是一种简便、快速、可靠的评估
物质抗氧化能力的方法，可用于筛选和比较不同物质的抗氧化活性。
DPPH和ABTS、PTIO自由基清除实验-疑难解答-李熙灿-Xican-Li
DPPH•和ABTS+•自由基清除实验（含PTIO•自由基清除实验)：疑难解答与实验指导李熙灿（广州中医药大学中药学院, 2019.7）（以下内容系来源于实验经验及三个参考文献[1] Li, X.C., 2-Phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl 3-Oxid e (PTIO•) Radical Scavenging: A New and Simpl e Antioxidant Assay In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2017. 65,6288-6297 [2]Li, X.; Ouyang, X.; Cai, R.; Chen, D. 3’,8”-Dimerization Enhances the Antioxidant Capacity of Flavonoids: Evid ence from Acacetin and Isoginkgetin. 2019, Mol ecul es. 24, 2039. [3] Li, X., Comparative Study of1,1-Diphenyl-2-picryl-hyd razyl Radical (DPPH•) Scavenging Capacity of the Antioxidant Xanthones Family. Chemistrysel ect, 2018. 3,13081-13086.第一部分疑难解答问：自由基清除实验为什么选择DPPH和ABTS?答：因为二者都简单易行，所以，一直沿用。
但是，如果结合PTIO自由基清除，则更合理。
问：FRAP法与DPPH和ABTS的区别何在？答：FRAP是Ferric ion reducing antioxidant power之缩写。
该检测法是基于铁离子（Fe3+）还原为亚铁离子（Fe2+）的还原反应，而设计的。
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李培源，等：ＤＰＰＨ法测定树上虾丙酮部位自由基清除能力
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ＤＰＰＨ法测定树上虾丙酮部位自由基清除能力
李培源１，霍丽妮１，彭炳华２，莫媛媛３，秦一兰２，黄晓东１
（１．广西中医药大学 药学院，广西 南宁 ５３０００１；２．广西师范学院 化学与材料学院，广西 南宁 ５３０００１； ３．广西南宁市第五十六中学，广西 南宁 ５３０００１）
摘要：本论文以丙酮为溶剂，采用冷浸的方式，得到树上虾丙酮提取物。采用 ＤＰＰＨ法测定该提取物的自由基清除能力，并测定了该提取 物的总黄酮含量。树上虾丙酮提取物的 ＤＰＰＨ自由基清除能力与药液浓度和作用时间有关，树上虾丙酮提取物与 ＤＰＰＨ自由基的作用 迅速，对 ＤＰＰＨ清除率最高可达到 ８４．９％。此外，本论文通过羟自由基法同时研究提取物对其他类型自由基的清除能力，发现该提取物 也具有良好的羟自由基清除效果。 关键词：树上虾；ＤＰＰＨ；清除能力；总黄酮含量 中图分类号：Ｏ６５７．３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０１９）０１－００７３－０２
将芦丁标准溶液换为固定浓度提取物溶液，同上操作测定 吸光度，多次测量求平均值。根据标准曲线计算总黄酮的芦丁 当量，总黄酮含量以每克干物质的芦丁当量（ｍｇ）表示，并计算 提取得率。
２．３ 二苯基苦味肼基自由基（ＤＰＰＨ）体系［４］
取不同浓度树上虾丙酮提取物提取物溶液（０．２、０．５、０．８、 １．２、１．５、１．８和 ２．０ｍｇ／ｍＬ）加入 ８ｍＬＤＰＰＨ（０．００４％）溶液 中。在最大波长处（５１７ｎｍ）测吸光度，直到平衡为止。清除率 计算公式如下：Ｓ％ ＝（１－Ａ样品 ）／Ａ空白 ×１００％。其中，Ａ空白 为未 加 药 液 的 ＤＰＰＨ 溶 液 的 吸 光 度，Ａ样 品 为 加 入 药 液 的 ＤＰＰＨ溶液的吸光度。
ＲａｄｉｃａｌＣｌｅａｒａｎｃｅＡｂｉｌｉｔｙｏｆＡｃｅｔｏｎｅＥｘｔｒａｃｔｏｆＰｈｏｌｉｄｏｔａＣａｎｔｏｎｅｎｓｉｓＲｏｌｆｅ ＵｓｉｎｇＤＰＰＨ ＡｓｓｎｇＢｉｎｇｈｕａ２，ＭｏＹｕａｎｙｕａｎ３，ＱｉｎＹｉｌａｎ２，ＨｕａｎｇＸｉａｏｄｏｎｇ１
１ 材料与仪器
ＵＶ１９０１型紫外可见 分 光 光 度 计 （北 京 普 析 电 子 科 技 有 限 公司）；树上虾药材购于广西百色；芦丁标准品购于百灵威试剂 公司（北京）。所有试剂均为分析纯。
２ 方法 ２．１ 树上虾丙酮提取物制备
称取 ２０ｇ树上虾粉末，加入 ２００ｍＬ丙酮（９５％），冷浸 ７２ ｈ。重复上述操作 ３次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到 树上虾丙酮提取物。
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００１，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭａｔｅｒｉａｌｓＳｃｉｅｎｃｅ，ＧｕａｎｇｘｉＴｅａｃｈｅｒｓＥｄｕｃａｔｉｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００１，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｔｈｅ５６ｔｈＭｉｄｄｌｅＳｃｈｏｏｌ，Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｃｅｔｏｎｅｅｘｔｒａｃｔｏｆＰｈｏｌｉｄｏｔａｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓＲｏｌｆｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｕｓｉｎｇａｃｅｔｏｎｅｓｏｌｖｅｎｔａｎｄｃｏｌｄ－ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｒａｄｉｃａｌｃｌｅａｒａｎｃｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｉｓｅｘｔｒａｃｔｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｕｓｉｎｇＤＰＰＨａｓｓａｙ，ａｎｄｔｈｅｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｉｏｄｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅａｒｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｂｅｔｗｅｅｎｒａｄｉｃａｌｃｌｅａｒａｎｃｅａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ／ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．ＡｃｅｔｏｎｅｅｘｔｒａｃｔｏｆＰｈｏｌｉｄｏｔａｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓＲｏｌｆｅ ｓｈｏｗｓｑｕｉｃｋｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌｓ，ａｎｄｐｏｓｓｅｓｓｅｓｃｌｅａｒａｎｃｅｒａｔｅａｓｈｉｇｈａｓ８４．９％．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｈｅｃｌｅａｒａｎｃｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅ ａｃｅｔｏｎｅｅｘｔｒａｃｔｏｆＰｈｏｌｉｄｏｔａｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓＲｏｌｆｅａｇａｉｎｓｔｏｔｈｅｒｒａｄｉｃａｌｓｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｕｓｉｎｇｈｙｄｒｏｘｙｌｒａｄｉｃａｌｓ，ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔ ｅｘｈｉｂｉｔｓｇｏｏｄｃｌｅａｒａｎｃｅａｂｉｌｉｔｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｈｏｌｉｄｏｔａｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓｒｏｌｆｅ；ＤＰＰＨ；ｃｌｅａｒａｎｃｅａｂｉｌｉｔｙ；ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅ
２．２ 总黄酮含量测定
２．２．１ 标准曲线测定
精密吸取芦丁对照品溶液（ｌｍｇ／ｍＬ）于 １０ｍＬ量瓶中，分
别加 ５％亚硝酸钠 ０．４ｍＬ，静置 ６ｍｉｎ，加入 ５％硝酸铝 ０．４ｍＬ， 静置 ６ｍｉｎ。加 ５％氢氧化钠试液 ４．０ｍＬ，用 ９５％丙酮稀释至 刻度，摇匀。静置 １５ｍｉｎ，在 ５１０ｎｍ处测定吸收度。以吸收度 对溶液浓度进行回归分析，绘制标准曲线，推出回归方程。 ２．２．２ 树上虾丙酮提取物总黄酮含量测定
活性氧在许多疾病的发病机制中起着重要作用，如呼吸窘 迫综合征、类风湿 性 关 节 炎、局 部 或 全 身 炎 症 性 疾 病、糖 尿 病、 动脉粥样硬化、癌症和神经退行性疾病 。 ［１－３］ 活性氧（ＲＯＳ）在 正常氧化代谢过程中不断在人体内形成，并通过由具有抗氧化 活性的酶组成的内源性抗氧化防御系统清除。但外源性细胞 中活性氧由 外 源 源 形 成 或 未 被 充 分 去 除，则 可 能 发 生 氧 化 应 激。因此，抗氧化剂特别是天然抗氧化剂的清除作用受到广泛 关注［４－５］。本实验 通 过 冷 浸 法 得 到 树 上 虾 丙 酮 提 取 物，采 用 ＤＰＰＨ和羟自由基体系，评估其对自由基清除能力。