自动生化分析仪的校准
自动生化分析仪的使用、校准和维护
自动生化分析仪的使用、校准和维护卫生部检验中心张传宝第一节概述临床实验室检验操作经历了手工操作、半自动分析和自动分析过程。
目前，自动生化分析仪以高新技术为基础，以高准确性、精密度、灵活性和高效率为特点，在现代临床实验室中承担大部分的常规工作，成为实验室特别是大、中型实验室必备的检验仪器。
一自动生化分析仪的基本结构及工作原理按照反映装臵的结构，自动生化分析仪主要分为流动式、分立式、袋式及干化学自动生化分析仪。
其中，分立式自动生化分析仪应用最广，参加卫生部临床检验中心全国临床化学室间质量评价的实验室，绝大多数都使用该类自动生化分析仪。
干化学自动生化分析仪由于其方便快捷的优点，目前多用于急诊生化项目的检测。
二典型分立式自动生化分析仪的基本结构（一）样品系统样本包括校准品、质控品和病人样品。
系统一般由样品装载、输送和分配等装臵组成。
样品装载和输送的常见类型有：1 品盘式进样样品放臵在圆形的样本盘中，样本盘为单圈或者多圈，在运行中与分配机械臂配合转动，完成样本分配。
样本盘可以是整体，如日立7170型自动生化分析仪的样本盘。
有的采用更换式样品盘，分工作和待命区，其中放臵多个弧形样本架座转载台，仪器在测定中自动纺织更换，如贝克曼CX9型自动生化分析仪。
有的样品盘与试剂转盘甚至反应转盘相套和，部分小型自动生化分析仪采用该模式。
2传动带式或轨道式进样样本架为单排，通常每个可以容纳10个样品。
通过传送带，将样本架依次送到取样位臵，再由样品分配臂采样。
如奥林帕斯Au 640型自动生化分析仪。
3链式进样试管固定排列在循环的传动链上，水平转动到采样位臵，有的仪器可随后清洗试管。
目前多数仪器对质控品和校准品设臵了独立冷藏舱，有助于保持它们的稳定。
分配加样装臵大都由注射器、步进马达或者传动泵、加样臂和样品探针等组成。
一般加样系统能准确到0.1ul的体积。
（二）试剂系统一般由试剂储放和分配加液装臵组成。
试剂舱常与试剂转盘结合在一起。
生化分析的校准及结果溯源性要求
生化分析的校准及结果溯源性要求生化分析的校准是检验实验室必不可少的一项工作，其重要性不言而喻。
从检验工作者到临床医生，从患者到家属，生化分析都是非常重要的数据。
而生化检测的体系经常受到很多因素的影响，有时会严重影响结果的准确性，因此按照规定时间校准就显得非常重要了。
一、校准校准是操作过程中相当重要的环节，是测试和调整检验系统（如仪器设备、试剂、方法学参数）的一个过程。
校准对于保证实验室检验结果的准确性和可靠性是非常重要的。
原则上讲所有的测定都要做校准，除非在专业的特定要求中注明可以不作校准外，所有用于检验、校准、取样的设备，包括对检验结果准确性有影响的辅助设备（如实验环境测量设备和实验材料）都应进行校准，以保证最终结果的准确性二、仪器校准校准可以分两方面，一方面是仪器校准，另一方面是检验项目校准。
对于仪器校准实验室应该制定相应的程序来规定仪器的校准的方法。
因为仪器设备大多数是使用分光光度计，它的波长，透光率、还有基线，检测限的稳定性等都要进行校准。
另外使用什么样的校准品来校准，以及这些校准品的种类、来源和数量，以及校准的时间间隔等都需要进行规定，对于校准以后的设备应该加添相应的标志，表明其已经经过校准，校准的状态是通过校准还是没通过校准，以及它的是否已经正常工作。
另外校准的有效期，要注明下次校准的时间。
仪器校准还包括，要求实验室制定的校准程序，应该能保证结果的可溯源性。
这一点主要是通过校准品的可溯源性来体现的。
同时要求实验室应该具有并应用评定测量不确定度的程序，测量不确定度也主要是校准品本身来体现出来。
应用校准整个过程的全部数据应该都有记录，不管是如何校准，校准了几次，校准的频度与校准的结果都应该做记录。
三、校准的意义仪器的校准是测量结果准确性的基本保证，校准包括校准程序和校准间隔，这两个都是很重要的。
仪器的校准，比如生化分析仪常用的波长、温度，（反应温度很多要求在 37 ℃，温度是否准确）；加样量，因为生化的加样都是非常微小的，经常是两三微升，加样精度要求很高；另外空白吸光度，空白吸光度影响基线的稳定性，基线的稳定性也是非常重要的。
卫健委临检中心 全自动生化分析仪年度校准 柯培锋 广东省中医院
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2016年6月
温度准确度与波动度
温度准确度与波动度
37.0 37.0 36.9 37.0 37.0 37.0 37.0 37.0 37.0 37.0
37.0 37.0 37.0 37.0 37.0 36.9 37.0 37.0 37.0 37.0
样品携带污染率
样品携带污染率：UDR法
培训、授 权内容是 否与服务 项目一致？
校准报告的签收审核
3、主要仪器厂商仪器年度保养介绍
4、仪器年度校准中的关键技术要求及范例
2、杂散光；3、吸光度线性范围； 4、吸光度准确度；5、吸光度的稳定性； 6、吸光度的重复性；7、温度准确度与波动度； 8、样品携带污染率；9、加样准确度与重复性；
吸光度准确性：Photometer Check法
5 0. 8765 1.8876 0. 987
2 0. 7654 1.2345 0. 487
吸光度的稳定性
吸光度稳定性：UDR法
s pm n
WDX
0.2060 0.2010
吸光度的重复性
全自动生化分析仪年度校准
柯培锋广东省中医院广东省中医药科学院广州中医药大学第二临床医学院
主要内容
1、仪器年度校准的执行标准
三甲医院评审要求：
1、仪器年度校准的执行标准
1、仪器年度校准的执行标准
2、实验室在年度校准中的工作流程
制定合适的年度校准计划
审核厂家校准程序的适用性
审核厂家校准人员资质
2
0.671
3.03
吸光度线性范围
吸光度线性范围
吸光度线性范围：Photometer Check法
31
0.4527 1.2788
全自动生化分析仪校准规范
全自动生化分析仪校准规范全自动生化分析仪校准规范(湿式)全自动生化分析仪是临床诊断的重要手段之一 ,其检测结果是否准确对临床疾病的诊断和治疗监测有直接的影响。
在仪器检测结果精密度良好的前提下，仪器校准是保证检测结果准确的关键步骤，为此结合国内的相关标准的基础上，就全自动生化分析仪校准的基本要求提出如下建议。
1杂散光的试验方法1.1设定两个单试剂项目，波长设为340nm;1.2设定上述项目的试剂位，分别以蒸馏水和亚硝酸钠标称溶液(50g/L)为试剂和样本，每个项目重复测定5测试;1.3查看反应曲线或反应数据，以最后一点的吸光度作为所测定溶液的吸光度，共得到5个蒸馏水和5个亚硝酸钠标称溶液的吸光度;1.4计算最小的亚硝酸钠溶液吸光度与最大的蒸馏水溶液的吸光度的差值，为杂散光。
1.5应符合标准的要求;当测定波长为340nm时，杂散光应不大于0.5%(或吸光度不小于2.3)。
2吸光度线性范围的试验方法2.1以340nm吸光度不低于2.0(以蒸馏水为空白)的重铬酸钾溶液为原液，用蒸馏水稀释出相对浓度分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9和10(原液)的系列溶液;2.2设定一个单试剂项目，波长为340nm，试剂和样本均为待测溶液;通过反应曲线或反应数据查找试剂空白段的吸光度;2.3按照浓度由低到高的顺序，每个浓度重复测定2次;2.4以相对浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，画出散点图;2.5用最小二乘法对所有数据进行线性拟合，按照公式(1)、(2)和(3)计算每一个点的相对偏倚;相对偏倚=100*(A-(a+b*C))/(a+b*C) (1)式中:A为实际测定的吸光度，a为线性拟合的截距，b为线性拟合的斜率。
22b=(nΣA*C-ΣAΣC)/( nΣC-(ΣC)) (2)a=(ΣA/n)-b*(ΣC)/n (3)式中:A为吸光度，C为相对浓度，n为总的测定点数。
2.6应符合标准的要求:线性范围不小于2.0，各测定值的相对偏移不大于?5,。
使用质控品建立全自动生化分析仪的校准方案
使用质控品建立全自动生化分析仪的校准方案王鹏江苏省计量科学研究院随着医学科学技术的进步，生化分析仪已经成为医院检验科室不可缺少的检验设备之一。
全世界各大医疗器械生产厂商也都不断开发、更新自己的生化类产品提供给医院使用，目前生化分析仪的生产厂很多，规格型号也很多,因此正确评价与合理选用这些仪器十分重要，我国在1996年就发布了JJG464-1996《生化分析仪检定规程》，为生化分析仪的计量检测以及性能评价提供了科学的检测方法和合理的技术要求。
对一台生化分析仪来说，自动化程度越高，说明仪器功能越强。
仪器的自动化程度高低取决于仪器所使用微处理机的功能大小，根据仪器计算机功能的不同，自动化分析仪一般可分为全自动和半自动两种。
半自动生化分析仪可以直接判读样品的吸光度，而全自动生化分析仪一般要进入工程师模式对工作方式进行修改才能对比色杯中的样品进行吸光度判读，因此使用JJG464-1996中的吸光度标准物质对全自动生化分析仪进行校准工作存在一定的难度。
根据JJG464-1996的技术要求和检测方法，结合我们日常的计量工作经验，介绍一套使用生化分析仪配套质控物可以方便进行校准的工作方案。
一、校准前准备1、检查灯泡的使用时间，必要时进行更换；2、检查比色杯的清洁及磨损情况，必要时进行更换；3、检查管路的老化、破损情况，必要时进行更换，并用清洁液冲洗管道，有必要时泡洗管道；4、运行生化分析仪自检程序，并且能够通过；5、以正常质控品为100%浓度，用生理盐水（K+用去离子水）稀释成浓度20%、40%、60%、80%共五种稀释度的待用样品。
二、校准项目的选择在JJG464-1996《生化分析仪检定规程》中主要是针对340nm波长条件下测量吸光度准确性、重复性，以及在510nm波长条件下测量线性误差、交叉污染率。
我们举例选择生化分析仪的葡萄糖、谷丙转氨酶两个项目分别针对340nm、510nm两个波长条件的滤光片性能进行检测，有些生化分析仪还具备电极法的电解质测量，也可以同时参照这个方法进行校准。
生化检验项目校准
冰冻产品的处理步骤：从-70℃或-20℃冰箱中取出 样本，置室温（18-25）℃下平衡，使之完全融化 ，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室 温（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，轻 拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小 心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确 加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温 下使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。
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校准后的验证
•校准后用校准品当样本进行测试，看其值与定值 之间的差异 •测定室内质控，看结果是否在控。 •参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。
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•记录每次校准结果，与之前的校正结果进行比较。
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生化检验项目校准
泸州市人民医院
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校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或 测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考 物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量 值之间关系的一组操作。
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仪器的性能验证：
• • • • • • • • • 零点漂移 波长准确度及重复性 杂散光 吸光度正确度 吸光度重复性 吸光度线性误差 交叉污染率 温度正确度 比色杯间差距
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三、处理： 1. 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍 稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 2. 把参数中校准品个数修改为：5； 3. 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 4. 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准 顺利通过，结果如下：
生化分析仪的校准
72
4.18
29.8 -2.68
63
0
42
1.79
ALB
T 偏差%
29
0
24
2.08
34.8 -5.17
33.7 -5.04
40.8 3.88
26.9 5.98
46.7 -4.18
29.8 -2.76
39
1.28
27
0
UREA
T
偏差%
5.0
4.5
19.3 -5.76
8.96
0.45
24
-6.77
7.67
现就生化分析仪的校准问题提 出个人看法。
一、校准的重要性和必要性 首先必须明确生化分析仪不论如何先进， 它还是一个比较器，它测试出来的标本 结果是随着标准限的设置不同而变化的。
二、确立仪器标准测定系统的概念
对于一个临床检测项目，测定系统包括测定原 理、试剂、仪器、校准品四要素。在全自动生 化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立 7170使用Roche的试剂和校准品（c.f.a.s），在 贝克曼CX-7生化分析仪上使用贝克曼的试剂和 校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系 统。对于校准品不能乱用，如：绝对不能用贝 克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用 宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。
表 日立7170、Roche试剂每天进行校准(n=81)K值变化
TG Chol Glu Ca CK GGT Mean 1172 1449 1744 592 3864 2603
SD 16.9 17.4 18.1 56.8 61.1 67.9 CV% 1.4 1.2 1.0 9.6 1.6 2.6
生化仪的检定、校准、质控与比对
12s 质控规则
+3s
+2s +1s
平均数
-1s -2s
-3s
12s 规则 违背
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
当质控血清中的测定值处于±2s～±3s界限内，为“警报”信号。
20
13s 质控规则
+3s
+2s +1s
平均数
-1s -2s
-3s
13s 规则 违背
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
• 校准校正
校准时机
更换试剂批号 质控失控 ISE每天定标 仪器大维护或更换重要配件 至少每6个月进行一次
校准注意事项
选择合适的校准品，校准品应可溯源 不可用定值质控血清代替校准品进行校准 应避免基质效应的影响，最好使用人血清基质校
准品
校准验证
校正验证的目的是确定现有的校正设定(信号与分析物浓度 关系) 是否保持稳定，以及判断可报告范围内的校正是否 保持持续稳定及测定结果的准确性的检查方法。
• 进样系统 • 样本吸样系统 • 反应比色杯 • 试剂仓 • 试剂吸样系统 • 冲洗系统 • 混匀系统 • 光路系统
AU2700工作流程
• 加试剂 • 加样本 • 混匀 • 加试剂（必要时） • 混匀 • 比色 • 计算结果 • 复查（必要时）
双波长的优势
在单位时间内有两条波长不同的光束λ1和λ2交替照射 同一个溶液，由检测器测出的吸收度是这两个波长下 吸收度的差值△A。
质量管理是实验室为保证检测结果准确、可靠、 及时所采取的所有措施和管理手段的总和。包括 实验室管理的方方面面。
医学实验室质量控制是一个统计过程，用于监视 与评价产生患者结果的分析过程。
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1.校准品 含有已知量的待测物，用以校准该测定方法的测量值。 作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差
2.质控品 只用于和待测标本同时测定，目的是为了控制标本的测 定误差，要求保存期间十分稳定
3.区别 前者是为了校准测量值（系统误差） ，后者是为了控制 分析误差（随机误差）
❖ 采用配套检测系统校准品校准 ❖ 采用非配套检测系统校准品校准 ❖ 采用新鲜人血清作为校准品校准
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自动生化分析仪的校准
一、校准和检定的概念
1.校准 在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值，或 实物量具或参考物质所代表的量值，与对应的由标准所复现的量值 之间关系的一组操作
2.检定 查明和确认计量器具是否符合法定要求的程序，包括检查、加 标记和（或）出具检定证书
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二 、校准品和质控品