HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量
HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量作者：卓俊睿
来源：《现代养生·下半月版》 2017年第5期
【摘要】目的：采取HPLC 法测量评定中药材大黄中5 种蒽醌（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的含量。方法：采用依利特ODS2 C18、柱
(200mm×4.6mm,5μm)，流动相为无水甲醇- 浓度0.1% 磷酸(75:25,V/V），流速为1ml/min，检测波长为255nm，柱温26℃。结果：芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸的回归方程如下：Y=1.97X-0.35，相关系数R=0.99993;Y=0.98X-0.21，相关系数
R=0.99996;Y=1.26X-0.16，相关系数R=0.99994;Y= 2.35X +0.17，相关系数
R=0.99992;Y=1.93X+0.08，相关系数R=0.99992;5 种蒽醌的回收率如下：
99.49%,97.37%,99.21%,98.84% 和98.74%。结论：用HPLC 法测定大黄提取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且具有准确性高、重现性好的特点，可以用于推广。
【关键词】HPLC 法；芦荟大黄素；大黄素甲醚；大黄酚；大黄素；大黄酸
目前对大黄的研究已较为深入，然而以HPLC 法对大黄蒽醌含量的测定仍然欠缺研究，因
此开展本研究，希望提供参考。
1 研究材料
大黄样品采用自成都市大黄中药材培植基地所产的掌叶大黄。实验仪器为Ultimate3000
高效液相色谱仪、赛多利斯BT125D 电子天平及KQ-250D 型超声波清洗器。主要试剂方面，芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸5 中对照品及磷酸、分析甲醇、色谱甲醇等均来自市场购买，去离子水由研究者自制。
2 研究方法
2.1 色谱条件
255nm 的检测波长；1ml/min 的流速；柱温26℃；色谱柱采用依利特ODS2C18、柱(200 mm x4.6 mm,5μm)。
2.2 自制溶液对照品
取适量大黄对照品，应用无水甲醇，分别配置5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的对照品溶液，采用浓度20、10、20、20、和20μg/ml 。
2.3 自制供试品
精确称量取用大黄中药材0.500g，放置在25ml 的容量瓶内，分别添加无水甲醇20ml 和
超声波提取35min，待溶液冷却至接近室内温度，加入无水甲醇，定容到刻度，使震荡溶解，
用0.20μm 滤膜过滤。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察
依据前文所述色谱条件，取用对照品溶液，精密吸取2、5、10、20、40μL，并分别进行
进样测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行回归分析，得到5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程。
2.4.2 精密度考察
依据前文所述色谱条件，吸取对照品的混合溶液，5 次连续进样，计算5 种蒽醌成分（芦
荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。
2.4.3 稳定性考察
各吸供试品溶液，间隔2h 进行一次测定，得到供试品溶液中 5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。
2.4.4 重复性考察
取大黄样品精密称取5 份，按照供试品的制备方法，制作溶液用于方法测定，依结果计算
5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的保留时间以及峰面积
下的RSD。
2.4.5 回收率考察
大黄样品已知含量，精密称取0.500g，共取三份，每一份中加入相同含量的对照品，按照
供试品制备方法处理，得出平均回收率及RSD。
2.5 大黄含量测定
按照供试品制备方法，制得大黄样品溶液后进样20μl，在255nm 处，检测样品各成分所
对应峰面积，根据所计算的线性回归方程，得出5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大
黄酚、大黄素和大黄酸）含量。
3 结果
3.1 方法学考察结果
（1）线性关系考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大
黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程，发现5 种蒽醌成分均呈良好线性关系。具体结果见
表1。
（2）精密度考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分精密度良好，RSD 分别是0.55%、
1.25%、1.87%、1.08% 和1.61%；
（3）稳定性考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分稳定性良好，在12 个小时内保持稳定。RSD 分别是1.91%、1.30%、1.42%、1.54%、1.51%（n=7）；（4）重复性考察。计算得出
大黄样品中5 种蒽醌成分重复性较好，在保留时间上的RSD 分别是0.72%、2.04%、1.09%、
1.74%、1.63%，在峰面积上的RSD 分别是1.44%、1.82%、1.91%、0.74%、1.06%；（5）回收率考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分回收率分别是99. 49% ,97. 37% ,99. 21% ,98. 84%、98.74%，其RSD 分别是0.41%、1.47%、0.55%、1.32%、0.84%；方法学考察结果说明，用HPLC 法测定大黄提取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且准确性高、重现性好。
3.2 含量测定结果
成都产掌叶大黄的5 种蒽醌成分分别如下：芦荟大黄素0.076%；大黄素甲醚0.145%；大
黄酚0.823%；大黄素0.187%；大黄酸0.113%。
4 结论
本研究通过使用HPLC 法，对大黄药材中5 种游离蒽醌含量进行测定，确定了这种方法简单快速、准确性高、重现性好，可用于大黄药材质量评定。
参考文献
[1] 颜永刚, 尹立敏, 王红艳等.HPLC法同时测定大黄炮制品中10 种化学成分的含量[J]. 中国药房,2016,27(27):3839-3842.
[2] 毛春芳, 施忠, 罗琳等.HPLC 法同时测定大黄中芦荟大黄素等11 种成分的量[J]. 中草药,2014,45(16):2400-2403.
作者简介
卓俊睿（1991-），女，贵州省遵义市人。遵义医药高等专科学校助教。硕士学位。专业为药物化学, 主要研究方向为生物催化与手性合成。
大黄不同炮制品中游离蒽醌的含量测定
大黄不同炮制品中游离蒽醌的含量测定 摘要：目的：通过hplc法比较大黄不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量。方法：采用shim-pack vp-ods（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇-水（70：30，磷酸调至ph值=3）；柱温：24℃；流速：1.0ml/min；检测波长：437nm。结果：大黄酸线性范围为0.0132～0.132mg，r=0.9991，大黄素线性范围为0.0066～0.132mg，r=0.9999。结论：大黄的不同炮制品中大黄酸、大黄素的含量不同，以生大黄中大黄素、大黄酸的含量最多，大黄炭中大黄素的含量最少，酒大黄中大黄酸的含量最少。 关键词：大黄酸大黄素 hplc 生大黄熟大黄酒大黄大黄炭 大黄为蓼科植物掌叶大黄（rheum palmatum l.）、唐古特大黄（rheum tenguticum maxim. ex balf.）或药用大黄（rheum officinale baill.）的干燥根及根茎。2005版药典一部规定大黄饮片为大黄除去杂质，洗净，润透，切厚片或块，晾干；酒大黄为取净大黄块，加酒拌匀，闷透，至锅内，用文火炒至规定的程度时，取出，放凉。照酒炙法炒干；熟大黄为取净大黄块，照酒炖法或蒸至内外均呈黑色，加酒拌匀，加入液体辅料拌匀，置适宜的容器内，加热蒸透或至规定的程度时，取出，干燥；大黄炭为取净大黄块，照炒炭法炒至表面焦黑色、内部焦褐色。酒大黄善清上焦血分热毒。用于目赤咽肿，齿龈肿痛。熟大黄泻下力缓，泻火解毒。用于火毒疮疡。大黄炭凉血化瘀止血。用于血热有瘀出血症。大黄中其主要活性成分为大黄蒽醌衍生物如大黄素、大黄酸、大黄酚等。本文考
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 一、实验目的 （1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 （2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术 （3）学习蒽醌类化合物鉴定方法 二、实验器材 材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。 仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。 三、实验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。 大黄酸 R1=H R2=COOH 大黄素 R1=CH3 R2=OH 芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H
大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3 大黄酚 R1=CH3 R2=H 四、实验内容 大黄素的提取、分离流程图 大黄粗粉10g 20%H2SO4 150 ml 加热1h, 抽滤、干燥 滤饼 150ml乙醚回流提取1 h 乙醚层 水层（紫红色）乙醚层 HCl 5%Na 大黄酸沉淀（粗品） 水层（红色）乙醚层 HCl % NaOH 大黄素沉淀（粗品）水层（红色） 芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀（混合物） 具体操作步骤 1. 游离蒽醌的提取
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定 一、概述 植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。自古以来， 大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。 功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽 醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有 效成分是结合型的蒽苷类。蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分 以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。此外，大黄还含有鞣质等多元酚类 化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。 主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的 苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。 大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。 大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。UVλmax436，289，266，253，222。可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。UVλmax429，287，254，225，202。可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。 大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。溶于苯、三氯甲 烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。 大黄酚(chrysophano1)，C15H1004，橙黄色针晶(乙醇或苯)，m.p195—196℃。UVλmax429，287，256，225，202。可溶于丙酮、三氯甲烷、苯、乙醚和冰醋酸和碱水，微溶于石油醚，不溶于水。 大黄酸葡萄糖苷(rhein 8-monoglucoside)，黄色针晶。m.p266—267℃。 大黄素葡萄糖苷(emodin monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。m.p190—191℃。 芦荟大黄素葡萄糖苷(aloeemodin monoglucoside)，黄色针晶。m.p235℃。 大黄酚葡萄糖苷(chrysophanol monoglucoside)，橙色针晶(甲苯)。m.p239℃。 二、实验部分 (一)实验目的要求 1．掌握蒽醌苷元的提取方法—双相酸水解法。 2．掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法。 3．掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法。 (二)实验的基本原理 1．提取原理 双相酸水解法，为一相为与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双相酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游
高效液相色谱法测定决明子中的蒽醌
高效液相色谱法测定决明子中的蒽醌 目的测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。方法采纳高效液相色谱法。色谱柱：Shim-pack CLC-ODS C18柱；流淌相：甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1 ml/min；：440 nm。结果该方法精确牢靠，重现性好。结论该方法可以测定决明子中5种蒽醌类成分的含量。 决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠通便之功效，为临床常用中药［1］。其主要化学成分为蒽醌类化合物。本试验采纳HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为决明子中有效物质讨论奠定了基础。 1、仪器与材料 LC-l0ATvp高效液相色谱仪(日本岛津公司)，AEG-45SM电子天平(十万分之一)，大黄素(批号0756?200009)，大黄酚(批号110796?202313)，大黄素甲醚(批号0758?9803)(均购自中国药品生物制品检定所)，决明子(重庆合川GAP种植基地，由重庆市中药讨论院生药室供应并鉴定)，水为重蒸水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2、方法与结果 2.1 对比品溶液的制备分别精密称取芦荟大黄素0.53 mg，大黄 酸0.58 mg，大黄素0.55 mg，大黄酚0.53 mg，大黄素甲醚0.58 mg，加甲醇超声溶解，分别定容至5 ml，作为对比品溶液。精密吸 取上述5种对比品溶液各2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶 解定容至刻度，即得混合对比品溶液，其浓度分别为芦荟大黄素 0.021 2 mg/ml，大黄酸0.023 2 mg/ml，大黄素0.022 mg/ml，大 黄酚0.021 2 mg/ml，大黄素甲醚0.023 2 mg/ml。 2.2 供试品溶液的制备取决明子药材粉末(过4号筛)约1g，精密 称定，置索氏提取器中，加80%乙醇100 ml回流提取至无色，合并 提取液，定容至100 ml，精密吸取25 ml提取液，经减压回收后， 残渣加浓度为1 mol/L盐酸溶液40 ml回流水解3 h，然后用120 ml氯仿分4次回流萃取，30 ml/次，合并氯仿萃取液并加适量蒸馏 水洗至中性，回收氯仿。残渣甲醇仿溶解并转移至10 ml量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，即得［2，3］。 2.3 色谱条件色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18(6.0 mm 150 mm，5 um)；流淌相为甲醇－0.1%磷酸水溶液梯度洗脱；流速 1 ml/min；柱温25℃；检测波长440 nm. 2.4 标准曲线的绘制分别精密吸取混合对比品溶液8 ，10，12 ，14 ，16 l进样，测定基线构成之面积称峰面积。A＝h＝2.507h＝ 1.064 Wh/2h峰面积，绘制标准曲线，计算混合对比品中各对比品
制药工程专业实验 大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离和鉴定及口服大黄素后的血浆成分测定
本科生实验报告 实验课程 学院名称 专业名称制药工程 学生姓名 学生学号 指导教师 实验组成员 实验成绩 二〇年月二〇年月
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离和鉴定及口服大黄素后的血浆成分测定 一、实验目的和任务 1、掌握酸水解苷到苷元实验方法和原理 2、掌握萃取分离法及了解其在天然产物提取中的广泛应用 3、掌握 pH 梯度萃取法的原理和操作技术 4、掌握硅胶柱色谱法分离精制大黄素、大黄酚和大黄素甲醚，熟练掌握柱色谱分离 5、学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法 6、用 HPLC 分析大黄中游离蒽醌类成分，熟悉 HPLC 分析原理及操作方法和用途 7、学习重结晶方法纯化大黄酸 二、实验仪器与材料 材料与试剂：大黄粗粉，硫酸，氯仿,NaHCO 3粉末，Na 2 CO 3 粉末，石油醚，乙酸乙 酯，NaOH粉末，硅胶 实验仪器：500ml圆底烧瓶，水浴锅，铁架台，烧杯，薄层板，玻璃棒，胶头滴管，锥形瓶，EP管，超声波清洗液，高速离心机，镊子，高效液相色谱，冷凝管 三、实验原理分析（包含酸水解原理、PH梯度萃取原理、柱层析分离精制大黄素原理） 酸水解原理：大黄中的蒽醌苷在酸性条件下加热水解成游离羟基蒽醌（苷元）和糖。 PH梯度萃取原理：大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。每个分子有不同的pKa，导致某一pH下各分子的电离情况不同，当某分子呈电中性的时候它最容易从溶液中析出。所以通过反复调pH，可以在不同pH下得到各个不同的组分
大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定.
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定 实验编号：1 日期： 学时数：6学时 地点： 任课教师： 实验目的：掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法 实验原理：大黄中有多种游离蒽醌及其苷类，总含量约2-5%。主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。 从大黄中提取分离游离蒽醌时，先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。实验对象：大黄 主要仪器、试剂：电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G、0.5%CMC-Na 实验操作步骤：酸水解：取大黄10g ,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。 铺薄层硅胶G板:薄层硅胶G ：0.5%CMC-Na（1：3） 实验注意事项：①加热温度不要太高。②溶液保持微沸，防止药渣炭化。③不断搅拌。 后记：
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定 实验编号：2 日期： 学时数：6学时 地点： 任课教师： 实验目的：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。 2. 掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。 实验原理：大黄中有多种游离蒽醌及其苷类，总含量约2-5%。主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。 从大黄中提取分离游离蒽醌时，先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。实验对象：大黄滤饼 主要仪器、试剂：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油 醚、乙酸乙酯 实验操作步骤:总羟基蒽醌苷元的提取：取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3-4小时，得乙醚提取液。 乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄 素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶G-CMC-Na展开剂为石油醚（60-90 C）- 乙酸乙酯（7:3），直立展开。 实验注意事项：①加热回流时电热套电压小于50v。
紫外-可见分光光度法测大黄不同炮制品总蒽醌含量
紫外-可见分光光度法测大黄不同炮制品总蒽醌含量 魏江存;陈勇;谢臻;李金洲;韦乐亮;邓丽红;许爱德;兰帆;胡小兰 【摘要】建立紫外分光光度法测定大黄不同炮制品中总蒽醌的含量,以大黄素为对照品,浓度为1％的醋酸镁甲醇溶液对其进行显色,在516 nm波长处测定吸光度,测定大黄不同炮制品总蒽醌的含量,比较其含量差异,其回归方程 为:y=0.0452x+0.0015,R2=0.9991,大黄素在浓度为0.98～23.52μg/mL内有良好的线性范围,且准确性高、重复性好、检测结果稳定.该方法揭示中药大黄炮制前后总蒽醌的含量变化.该方法可作为大黄不同炮制品的质量控制方法,为今后综合开发利用中药大黄资源提供参考依据. 【期刊名称】《广州化工》 【年(卷),期】2017(045)017 【总页数】3页(P126-128) 【关键词】大黄;总蒽醌;紫外分光光度法 【作者】魏江存;陈勇;谢臻;李金洲;韦乐亮;邓丽红;许爱德;兰帆;胡小兰 【作者单位】广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020;广西中医药大学, 广西南宁 530020 【正文语种】中文
【中图分类】R917 大黄为蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatumL.)、唐古特大黄(Rheum tanguticumMaxim.ex Regel.)或药用大黄(Rheum officinaleBaill.)的根茎[1]。大黄在复方做君药，比如大承气汤，复方的安全性则由组成复方的中药决定，中药炮制后，药性改变，毒副作用降低[2]。大黄主要含有总蒽醌、番泻苷和鞣质等成分，总蒽醌分游离蒽醌、结合蒽醌[3]。大黄致泻的成分是结合蒽醌和二蒽酮类[4]，游离蒽醌有抗菌、抗炎等作用[5]。蒽醌类具有醌式结构，在可见区有强烈的吸收， 建立紫外分光光度法测大黄不同炮制品总蒽醌的含量，比较总蒽醌含量差异。2015版《中国药典》只收载大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭。 1.1 仪器 UV1780型紫外分光光度计，岛津；纯水仪，法国密理博；电子分析天平，赛多 利斯科学仪器有限公司。 1.2 试药 甲醇(色谱纯)，Fisher；醋酸镁；氯仿，国药集团化学试剂有限公司。 大黄素(批号：170224，纯度>98%)，上海融禾医药科技有限公司；大黄(四川， 批号:170307001)，广东康美药业有限公司。 2.1 对照品溶液的配制 取大黄素对照品12.25 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加1%醋酸镁甲醇至刻度，摇匀，即得0.49 mg/mL。 2.2 供试品的制备 取大黄0.5 g，加水50 mL，回流20 min，放冷滤过，精密取续滤液5 mL，加8%盐酸5 mL，和20 mL氯仿，超声15 min，氯仿分层，酸液再用氯仿萃取3次，每次10 mL，挥干氯仿，用1%醋酸镁甲醇溶液定容至10 mL，即得。 2.3 波长的选择
荧光分光光度法测定大黄中游离蒽醌的含量
荧光分光光度法测定大黄中游离蒽醌 的含量 【摘要】目的采用荧光分光光度法，建立了大黄中游离蒽醌类成分含量测定的方法。方法以丙酮为溶剂，在λex =460 nm 和λem =540 nm处测定荧光强 度。结果测得游离蒽醌含量在0.25～3.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为F=122.81C +46.224(r=0.999 6)，最低检测限为0.25 μg/ml，表明该法灵敏度高、重现性较好，且操作简便。结论该研究为测量大黄中活性成分游离蒽醌提供了一种有效可靠的分析方法。 【关键词】大黄；游离蒽醌；荧光分光光度法 Fluorescence Spectrophotometry for Free Anthraquinones in Rheum emodi Abstract：ObjectiveWith the fluorescence spectrophotometry，to build up free anthraquinones in Rheum emodi method of Assay.MethodsTake acetone as solvent agent， with the λex=460 nm and λem= 540 nm determination fluorescence strength. ResultsFree anthraquinone contents were in 0.25～3.0 of μg/ml with good linear relationship. The linear equation F=122.81C+46.224(r=0.999 6)， the lowest detectability was 0.25 μg/ml. The metho d was sensitive and reproducible.ConclusionThis research for measuring live composition of free anthraquinone in Rheum emodi Wall provides a kind of effectively dependable analytical method. Key words：Rheum emodi； Free anthraquinone ； Fluorescence spectrophotometry 有效成分含量是评价药材质量的重要指标，现报道的大黄中游离蒽醌检测方法主要有比色法、薄层色谱（TLC）法、高效液相色谱法（HPLC）、毛细管胶束电泳色谱法（MECC）及毛细管电泳色谱法（CEC）。色谱方法通常需要较长的分离分析时间，与之相比光谱法具有显而易见的快速特点；同时荧光分光光度法可用于药物的微量或恒量物质分析，并具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简便等优点，因此在药物定量尤其是中药有效成分检测上的应用日趋广泛。已有利用荧光分光光度法测定中药决明子中总蒽醌含量测定的报道［1］。本实验利用羟基蒽醌的荧光特性，在丙酮溶液中，建立了中药大黄中游离蒽醌荧光测定的新方法。 1 仪器与试药
利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分
利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分 中药大黄（Rheum palmatum L.）是一种常用的中药材，具有泻火通便，清热解毒的作用，广泛用于临床治疗便秘、肝胆疾病、黄疸、热病等疾病。其中的主要活性成分是游离蒽醌类物质，包括大黄素、大黄酚、大黄酚苷等成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、杀菌等生物活性。提取大黄中的游离蒽醌组分对其药用价值的研究具有十分重要的意义。 pH梯度萃取法是一种常用的提取方法，能够高效地提取出中药材中的活性成分。该方法利用不同pH值的溶剂，可以选择性地提取出目标物质，具有操作简单、成本低廉和环保等优点。本文将针对大黄中的游离蒽醌组分进行pH梯度萃取，并优化提取工艺条件，以期获得高效、经济的提取方法。 一、实验材料和仪器 1. 实验材料 中药大黄：产自四川成都，经鉴定为大黄科大黄属植物大黄（Rheum palmatum L.）。 二甲苯、乙醇、乙酸、丙酮：均为分析纯试剂，由国药集团化学试剂有限公司提供。 2. 仪器 恒温振荡器（HH-2型）、电磁加热板（DF-101型）、电子天平（FA2004型）、紫外-可见分光光度计（UV-1800型）、高效液相色谱仪（LC-20A型）：均由上海仪器仪表有限公司提供。 二、实验步骤 1. 大黄材料制备 将大黄材料研磨成粉末，并通过50目筛筛选得到均匀细小的颗粒，以备后续实验使用。 2. pH梯度萃取 （1）溶剂选择：分别选取pH=3、6、9的乙酸-乙醇混合溶液作为提取溶剂。 （2）提取条件：取3g大黄粉末与30mL乙醇-乙酸混合溶剂置于50mL锥形瓶中，装入恒温振荡器中进行提取。提取时间6h，提取温度25℃，提取速率150r/min。 3. 液-液萃取 将提取液经硅胶柱柱层析纯化，得到游离蒽醌组分混合物。
高效液相色谱法测定大黄药材的蒽醌衍生物含量
高效液相色谱法测定大黄药材的蒽醌衍生物含量 来进君;陈志 【摘要】用高效液相色谱法测定大黄药材中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量.选用SunfireTMC18分析柱(250mm×4.6mm,5um);流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液(90:10);检测波长440nm;流速1ml/min;柱温为30℃,进样量20ul.方法快速,灵敏,准确. 【期刊名称】《青海草业》 【年(卷),期】2017(026)002 【总页数】3页(P10-12) 【关键词】大黄酸;大黄素;大黄酚;高相液相 【作者】来进君;陈志 【作者单位】青海师范大学生命与地理科学学院,青海西宁810008;青海师范大学生命与地理科学学院,青海西宁810008 【正文语种】中文 【中图分类】S812.6 蓼科草本植物掌叶大黄(Rheum pabnarum L)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf)或药用大黄(Rheum officinale Baill)的根或茎，是我国重要药材之一。大黄具有泻下、抗炎、保肝利胆、保护胃黏膜、利尿、改善肾功能、降血压、抗菌、抗病毒、祛痰、抗肿瘤、降脂、减肥、改善胰岛素抵抗等功能。现代药理研究表明，大黄含有蒽醌衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸、挥发油、多糖等。
蒽醌衍生物主要包括大黄酚(chrysophanol)、大黄素(emodin)、大黄酸(rhein)、大黄素甲醚(physcion)、芦荟大黄素(aloc-emodin)、番泻苷A，B，C， D(sennosideA，B ，C，D)、大黄酸-8-葡萄糖苷(rhein-8-mono-β-D-glucoside)、芦荟大黄葡萄糖苷(aloc-emodin monoglucoside)、大黄素葡萄糖 苷(emodin monoglucoside)、大黄酚-1-葡萄糖苷(chrysophanol-1-8-monoglucoside)等。本研究采用HPLC法测定大黄中的大黄素、大黄酸、大黄酚的含量，亦能取得稳定、快速、重现性好的效果。 取大黄的根部除去杂质后，研磨成粉末状，过60目筛后备用。 中药粉碎机(山东临清宏源制药设备有限公司)；BUCHI-Rotavapor-201旋转蒸发仪(瑞士步琪实验仪器公司)；HH-8数显恒温水浴锅(常州市华普达教学仪器有限公司)；热回流装置(上海新拓分析仪器科技有限公司)；离心沉淀机(上海医分仪器制 造有限公司)；Waters600高效液相色谱仪系列(Waters公司)。 大黄酸标准品、大黄素标准品、大黄酚标准品(均购于北京恒元启天花工技术研究院)；无水乙醇、甲醇、磷酸(天津市百世化工有限公司)； 色谱条件：SunfireTMC18柱(250mm×4.6mm,5um)，流动相A为甲醇B为0.1%磷酸水溶液，分析时间20min，B体积比为910，流速为1ml/min；检测波长 440nm；柱温：30℃，进样量20ul。 分别精密称取0.01g大黄酸、大黄素、大黄酚于三个10ml容量瓶中，用甲醇定 容至刻度，得浓度为0.001g/ml标准品溶液，吸取2ml过0.45um微孔滤膜过滤。取大黄的根部用粉碎机粉碎至粉末状，过60目筛。精密称取25g粉末于圆底烧瓶中，加入无水乙醇200ml,热回流2h,离心沉淀(3000r/min)，取上清液与烧杯中，重复3次。合并上清液在旋转蒸发仪上减压浓缩回收，置于恒温水浴锅上蒸法至 膏状。分别精密称取0.1g膏状体于10ml容量瓶中用甲醇定容，吸取2ml过 0.45um微孔滤膜过滤于进样瓶中。
清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析
清蒸大黄的炮制及其五种游离蒽醌的含量测定分析 清蒸大黄是指将大黄草药进行炮制后，用清水蒸馏的方法进行烹制。其炮制的目的是去除大黄中的有毒成分，提高其药效。 炮制大黄的步骤如下： 1. 大黄的炮制一般在秋季进行。首先将采摘回来的大黄进行晾晒，晾晒的时间一般为一周左右。 2. 晾晒后，将大黄切成薄片或碎末状，然后将其放入铁锅中，加入足够的清水，必须保证大黄完全浸泡在水中。 3. 火炉上烧开水，然后将锅中的大黄放入蒸锅中，再将蒸锅放入火上蒸煮。蒸锅的蒸制时间一般为5小时左右，要保证大黄完全软化。 4. 火候可调节，一般说来，温热火看见白蒸汽冒出即可。去除大黄中的有害成分。 清蒸大黄炮制后，可以得到五种游离蒽醌，包括大黄素、芒硝酚素、大黄酚、芒硝酚胺和大黄酮。这些游离蒽醌是大黄药效的主要成分，具有通便、消炎、解毒的作用。 五种游离蒽醌的含量测定分析可以通过高效液相色谱法（HPLC）进行。以下是分析步骤： 1. 准备样品：取适量的清蒸大黄制备样品，将其粉碎并通过筛网过滤，获得均匀的样品。 2. 准备试剂：购买标准品的大黄素、芒硝酚素、大黄酚、芒硝酚胺和大黄酮作为参比品。配制各种浓度的标准溶液。 3. 色谱条件：选择合适的色谱柱、流动相和检测波长进行分析。常见的色谱柱为C18柱，流动相可以是乙腈和水的混合物。 4. 注射样品：将准备好的样品和参比品注射到色谱仪中进行测定。注射量一般为 10μl，溶剂流速一般为1ml/min。 5. 数据处理：根据标准曲线，计算出每种游离蒽醌在样品中的含量。可以利用峰面积比进行测定。 通过以上的步骤，可以准确地测定出清蒸大黄中的五种游离蒽醌的含量，为进一步研究其药效和用途提供了重要的数据依据。
大黄特征图谱研究及游离蒽醌含量测定
大黄特征图谱研究及游离蒽醌含量测定 目的:建立大黄不同炮制品的特征图谱,对其中5种游离蒽醌类成分进行比较研究。方法:HPLC-DAD法建立大黄的特征图谱,同时测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种游离蒽醌的含量。流动相甲醇-0.1%HAc水梯度洗脱,检测波长270nm、420nm,流速0.8ml/min;柱温25℃。结果:所建立的特征图谱信息丰富,5个游离蒽醌在测定范围内线性关系较好(r>0.9999),平均回收率分别为100.3%、99.55%、96.56%、99.84%、101.3%。结论:不同炮制品其特征图谱有所差别,游离蒽醌表现出一些规律性的变化。 标签：大黄;特征图谱;游离蒽醌 大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palamatum L、唐古特大黄R.tanguticum Maxim exBalf.或药用大黄R.officinale Bail的干燥根及根茎[1]。神农本草经中记述,大黄味苦寒,归胃、肝大肠经。大黄具有抗菌、泻下、止血、抗肿瘤、抗衰老等多种生物活性,临床上常以不同的炮制品组方入药发挥不同的功效,如生大黄苦寒沉降泻下作用为主,酒大黄苦寒泻下作用缓和,炭大黄具有止血作用。蒽醌类成分是大黄的主要有效成分,在治疗疾病过程中起着重要的作用,同时这类成分与其炮制品的功效变化密切相关[2-3]。本实验以HPLC-DAD法建立了大黄不同炮制品的特征图谱,并测定了大黄不同炮制品中5种游离蒽醌类成分的含量,比较了这类成分在大黄炮制过程中的变化,以期为大黄的质量控制及临床应用提供依据。 1仪器与试药 Agilent1200色谱工作站系统(G1315D型DAD检测器,G1316A恒温柱箱,G1312A二元泵,G1322A在线脱气机,G1329A自动进样器);超声清洗器KQ-100(昆山市超声仪器有限公司);十万分仪器之一分析天平BP211D(Sartorius 赛多利斯科)。甲醇为色谱纯(山东禹王),水为超纯水(江苏省方剂重点实验室),使用前均经0.45μm滤膜滤过;其余试剂均为分析纯。 对照品大黄酸(110756-200110)、大黄素甲醚(1107 58-200611)购自中国药品生物制品检定所,大黄素、大黄酚和芦荟大黄素由本中药化学实验室从大黄药材中分离鉴定,纯度均为98%以上。 样品:大黄药材、大黄饮片、酒大黄、大黄炭和熟大黄,各三个批号(080619甘肃礼县,080620青海,080621四川甘孜)。临用前分别粉碎过40目筛后备用。 2方法 2.1HPLC-DAD分析条件色谱柱为Agilent Eclipse XDB--C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相为甲醇(A)-1%HAc(B)水,梯度洗脱[0-8min,10%-20%(A);8-20min,20%-35%(A);20-60min,35%-75%(A);60-75min,75%-
HPLC法测定大黄药材中5种游离蒽醌的含量
HPLC法测定大黄药材中5种游离蒽醌的含量 李红英;向极钎;龙澜;帅超群;李亚杰 【摘要】[目的]建立HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量,并对不同产地的大黄样品进行测定.[方法]采用依利特ODS2 C18柱(200 mm × 4.6 mm,5μm),流动相为无水甲醇-浓度0.1％磷酸(75∶25,v/v),流速为1 ml/min,检测波长为254nm,柱温25℃.[结果]芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性回归方程分别为:Y=1.96X-0..25,相关系数R =0.999 94;Y=2.45X+0.18,相关系数R=0.999 94;Y=1.91X +0.05,相关系数R=0.999 90;Y=1.25 X-0.06,相关系数R=0.999 95;Y=0.96 X-0.20,相关系数R=0.999 98;平均回收率分别为99.39％、98.84％、98.94％、99.11％和 98.37％.[结论]该方法简单、快速、重现性好、结果准确,可用于大黄药材品质评价与质量检测.%[Objective] The establishment of HPLC method for simultaneous determination of aloe emodin in rhubarb,rhein,emodin,chrysophanol physcion,content,and different places in rhubarb samples.[Method] ODS2 C18 column (200 mm ×4.6 mm,5 μm),mobilephaseof methanol:0.1％phosphoric acid =75∶25 (V/V),the flow rate was 1 ml/min,the detection wavelength was 254 nm,column temperature was 25 ℃.[Result] The linear regression equation of aloe-emodin; rhein; emodin; chrysophanol ; physcion are Y =1.96X- 0.25,correlation coefficient R =0.999 94 ; Y =2.45 X + 0.18,R =0.999 94; Y =1.91 X + 0.05,R =0.999 90 ; Y =1.25 X-0.06,R =0.999 95 ; Y =0.96 X-0.20,R =0.999 98 ; the average recoveries were 99.39％,98.84％,98.94％,99.11％,98.37％.[Conclusion] The method is
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定
实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定 大黄种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumPalmatum.L ）、 大黄R.officinale Baill ）及唐古特大黄（R.tanguticum Maxiim et Regll ）的根茎及根。 蒽醌类化合物在植物体内主要以苷的形式存在，其中有大黄酸-葡萄糖苷；大黄素甲醚-葡萄糖苷；芦荟大黄素-葡萄糖苷；大黄素-葡萄糖苷；大黄酸双葡萄糖苷等。 此外尚含鞣质类成分如葡萄糖没食子鞣质，儿茶鞣质、没食子酸等。 大黄中还含有属于双蒽酮的番泻苷A 及番泻苷B 。 蒽苷内服后有致泻、清热解毒作用，尤其是大黄酸葡萄糖苷有较强的致泻作用。游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。 1．大黄酸（ O O OH OH COOH 3．大黄素甲醚（Physcion ）
O O OH OH CH 3 H 3CO 4．大黄酚（Chrysophanol O O OH OH CH 3 5．芦荟大黄素（Aloe emodin ） O O OH OH CH 2OH [目的要求]： 1．掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取分离方法。 2．掌握双相酸水解的原理及操作。 3．掌握液－液萃取的原理及操作。 4．掌握制备薄层的原理及操作。 5．掌握蒽醌类成分的各类检识方法。 [实验原理] （*此项内容由学生自行预习、归纳并整理） [实验内容] 一、大黄中总游离蒽醌成分的提取分离
1. 双相酸水解 2. pH梯度萃取法 3. 制备薄层分离 取沉淀Ⅲ适量，加甲醇1ml使溶解，条状点样于硅胶G制备薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，定位，刮取色谱带，用适量甲醇溶解，滤过，回收溶剂至干，依次得样品Ⅲa、Ⅲb、Ⅲc。 二、蒽醌类化合物的鉴定