人补体因子D(CFD)ELISA试剂盒利用说明书
人维生素D(VD)试剂盒(ELISA)
人维生素D（VD）试剂盒（ELISA）使用说明书●本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人维生素D（VD）的含量。
●有效期：6个月●保存条件：2-8℃●本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被人维生素D（VD）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人维生素D（VD）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本处理1. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
人组织因子(TF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人组织因子（TF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：78pg/ml-5000pg/ml最低检测限：19.5pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人TF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中TF含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述TF是一个分子量为47kD，由263个氨基酸残基组成的单链跨膜糖蛋白，其基因定位于染色体1p21～1p22，由6个外显子和5个内含子组成。
TF按细胞表面抗原命名为CD142，属Ⅱ类细胞因子超家族成员，具有信号转导功能。
TF由胞外区、跨膜区和胞浆区三个结构域构成：（1）胞外区由219个氨基酸残基所组成，包括2个二硫键及4个结合FⅦ/FⅦa的关键氨基酸残基，后者是启动外源性凝血级联反应的关键部位。
（2）跨膜区是一个由23个氨基酸残基组成的疏水结构，与磷脂紧密结合，功能尚未明确。
（3）胞内区由21个氨基酸残基组成，其中存在3个与TF功能活性关系密切的丝氨酸残基，能被活化的蛋白激酶C （PKC）磷酸化而激活。
TF又称因子Ⅲ，是丝氨酸蛋白酶凝血因子FⅦ/FⅦa的膜受体，与FⅦ结合促使其转化为FⅦa，并形成TF/Ⅶa复合体。
TF/FⅦa复合体进一步将无活性的FⅩ水解为有活性的FⅩa，FⅩa与FⅤa相结合并在活化血小板磷脂膜表面将凝血酶原酶解为凝血酶而启动外源性凝血过程。
表达TF的单核细胞微粒通过其P选择素糖蛋白配体（PSGL-1）与血小板P选择素（P-selectin）相互作用而与活化血小板结合，在血栓形成过程中起重要作用。
人ELISA试剂盒,第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书
人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书产品规格：96T/48T供应商：上海樊克生物有限公司本产品只用于科研实验人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书，(LR/Ob-R)ELISA试剂盒，苗条素受体elisakit elisa试剂盒上海樊克生物供应！人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书Reagent preparationThe kit is removed from the cold storage environment and can be used at room temperature.1 standard solution: the kit provides 6 tube standard, each tube has been calibrated concentration, and freeze dry. Before the experiment in each standard tube added 0.5ml sample dilution and cover after standing for 10 minutes or more, then repeatedly reversed / rubbing its dissolution, restore the complex for each standard tube body labeling concentration.2.20 * washing buffer dilution: distilled water diluted by 1:20, that is, 20 copies of 1 x wash buffer plus 19 copies of distilled water.Kit performance:1 sample linear regression and the expected concentration correlation coefficient R value is above 0.990.The 2 batch and the batch should be less than 9% and 11% respectively.人ELISA试剂盒，第八因子相关抗原ELISA试剂盒说明书ELIAS试剂盒的实验条件:1. 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
补体的检测——ELISA法
项目三补体的检测——ELISA法【申请单】请完成申请单所要求项目×××市人民医院检验申请单姓名性别年龄门诊号住院号诊断或症状检验标本检验目的送检科室医师送检日期年月日【方法选择】表3-1 补体C3、C4的检测方法速率散射比浊法速率透射比浊法ELISA法单向环状免疫扩散法本次检查选择√【材料准备】1.C3、C4检测试剂盒（ELISA法）。
2.待检者空腹静脉血2ml，不抗凝。
3.半自动酶标仪、洗板机。
4.离心机【操作方法】1.标本处理，3 500rpm离心l0min，分离血清。
2.根据试剂盒说明书要求进行样品测定：①加样，温育；②洗涤，拍干；③加酶结合物，温育；④加酶底物，显色；⑤加终止液，终止反应。
⑥放入酶标仪中，参照说明书设定参数，编号，测读。
【观察结果】查看检测指标并打印结果。
正常参考值：C3：0. 8～1. 55g／L；C4：0. 12～0. 36g／L。
【注意事项】1.补体易失活、降解待测血清在室温（20～25o C）放置不得超过6小时，2～8o C不得超过24小时，故抽血后应及时分离血清并尽快测定。
否则于-20 o C保存标本，但因避免反复冻融标本。
2.试剂盒从冷藏环境中取出时应置室温环境中平衡。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
3.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
（4）不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
利用生物信息分析筛选脂代谢相关候选基因
第３８卷第８期学报Ｎｏ ８Ｖｏｌ ３８２０２３年８月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＬｅｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｕｇ ꎬ２０２３əＤＯＩ:１０.１６０６９/ｊ.ｃｎｋｉ.５１－１６１０/ｇ４.２０２３.０８.００４利用生物信息分析筛选脂代谢相关候选基因喻世刚１ꎬ王钢１җꎬ廖娟１ꎬ沈雪梅１ꎬ肖成２[１.川南地方品种鸡产业化四川省高等学校工程研究中心(乐山师范学院)ꎬ四川乐山６１４０００ꎻ２.吉林省农科业学院ꎬ吉林公主岭１３６１００]摘㊀要:通过公共数据平台提供的多种转录组测序数据筛选与脂代谢相关的候选基因ꎮＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ网站的ＧＥＯ数据库中筛选与小鼠３Ｔ３－Ｌ１脂肪细胞相关的三个测序数据ꎬ取每组数据前２５０个差异表达基因作为本次实验数据集ꎬ根据实验目的ꎬ对两两组差异表达基因进行合并ꎬ寻找共有基因得到脂代谢调控相关的候选基因ꎬ并通过ｑＰＣＲ实验进行验证ꎮ通过ＮＣＢＩ网站提供的数据库ꎬ找到了三个与小鼠３Ｔ３－Ｌ１脂肪细胞分化相关的公共数据ꎬ分别为ＧＥＳ６７９４㊁ＧＥＳ１２９２９㊁ＧＥＳ４９１７６ꎮ生物信息学合并分析发现ꎬ大量基因参与ＰＰＡＲγ通路调控脂肪细胞分化ꎬ其中ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔｆａｃｔｏｒＤ基因参与３Ｔ３－Ｌ１㊁胚胎干细胞分化ꎬ同时在内脏脂肪组织中也有所表达ꎮＣａｒｂｏｎｙｌｒｅｄｕｃｔａｓｅ２基因在３Ｔ３－Ｌ１㊁成纤维细胞以及胚胎干细胞分化过程中均有表达ꎮＧｐｄ１㊁Ｃｉｄｅｃ㊁Ａｃｓｌ１㊁Ａｄｉｐｏｑ㊁Ｇ０ｓ２㊁Ｐｐｐ１ｒ１ａ㊁Ｓｔ３ｇａｌ５㊁Ｈｓｄ１１ｂ１㊁Ｓｕｒｆ４等基因在３Ｔ３－Ｌ１脂肪细胞整个分化过程中差异表达ꎮｑＰＣＲ结果显示ꎬ上述基因在脂肪细胞分化过程中呈现显著变化ꎬ可能作为调控脂肪代谢的候选基因ꎮ本研究为探索脂代谢提供新的候选基因ꎬ同时也为了解人类肥胖㊁脂肪积累以及增加动物肌肉内脂肪含量提升肉质性状提供新的研究方向ꎮ关键词:３Ｔ３－Ｌ１ꎻ脂肪细胞ꎻ肥胖ꎻ测序数据ꎻ脂代谢ꎻ候选基因中图分类号:Ｑ５０３㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀文章编号:１００９－８６６６(２０２３)０８－００１５－０６收稿日期:２０２２－０３－１７基金项目:四川省科技计划资助项目 沐川乌骨鸡肌内脂肪沉积功能基因的筛选与鉴定及分子遗传标记开发(２０２２ＹＦＮ００３９)ꎻ乐山市科技局项目 沐川乌骨黑鸡肌内脂肪沉积相关候选基因的筛选与鉴定 (２０ＮＺＤ００５)ꎻ乐山师范学院校级项目 ｍｉＲ－２０４/２１１激活ＥＲＫ信号通路影响乌骨鸡体内黑色素沉积的机制研究 (ＬＺＤ００８)ꎻ乐山师范学院校级项目 沐川乌骨黑鸡肌内脂肪沉积分子遗传调控机制的研究 (ＤＧＺＺ２０２００２)作者简介:喻世刚(１９８５ )ꎬ男ꎬ重庆永川人ꎬ乐山师范学院生命科学学院副教授ꎬ博士ꎬ研究方向:家禽遗传育种与繁殖ꎮҗ通信作者:王钢(１９７９ )ꎬ男ꎬ重庆綦江人ꎬ教授ꎬ硕士ꎬ研究方向:动物疫病监测与防控㊁养殖业废弃物处理与利用ꎮＥ－Ｍａｉｌ:Ｌｓｗａｎｇｇａｎｇ＠１６３.ｃｏｍꎮ０㊀引言随着人民生活水平的提高ꎬ食品物质极大丰富ꎬ城镇居民摄入大量消化不掉的热量ꎬ导致肥胖逐年增加ꎬ过度肥胖显著增加患有二型糖尿病的风险[１]ꎮ已有大量研究表明过多的脂肪积累将会引起代谢综合征以及并发症ꎬ如胰岛素抵抗㊁高血压㊁高血脂㊁心脏病以及神经性疾病等[２]ꎮ因此ꎬ了解脂肪积累机制对于降低肥胖导致的疾病非常重要ꎮ在畜牧领域ꎬ提高肌肉内脂肪含量能够显著提升肉质[３]ꎮ在我国ꎬ地方动物品种(牛㊁羊㊁猪以及家禽)的产肉性能以及肉质性状与国外优秀品种还存在一定差距ꎮ我国每年需要大量进口高品质肉类来满足国内市场消费需求ꎬ因此ꎬ提高本地品种肉质性状㊁发展高品质畜牧业具有重要的意义ꎮ２０２１年中央一号文件就明确提出 打好种业翻身仗 的任务要求ꎬ这给地方动物品种资源开发利用带来了契机ꎮ了解动物脂代谢过程㊁探索肌肉内脂肪积累调节机制ꎬ对于培育具有知识产权的优秀产肉畜禽品种至关重要ꎮ近年来ꎬ测序技术不断发展与普及ꎬ公共数据库存在大量有用信息ꎮ由于试验目的与分析角度不同ꎬ不同测序数据能够挖掘出相应有价值的信息资源ꎮ本文利用公共数据库筛选与３Ｔ３－Ｌ１脂肪细胞分化相关的测序数据ꎬ利用生物信息学与实验相结合方法ꎬ寻找参与脂肪细胞分化调控的候选基因ꎬ以期为后续动物肌内脂肪调控机制研究提供理论基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料３Ｔ３－Ｌ１细胞购自中国细胞库ꎮ脂肪细胞分化诱导剂㊁ＤＭＳＯ㊁油红Ｏ染液来自Ｓｉｇｍａ公司ꎬＤＭＥＭ－Ｆ１２培养基㊁双抗㊁ＰＢＳ缓冲液㊁胰蛋白酶㊁冻存液均来自Ｇｉｂｃｏ公司ꎻ胎牛血清来自Ｇｅｍｉｎｉ生物公司ꎻ无菌细胞培养板来自Ｃｏｒｎｉｎｇ公司ꎻＴＲＩｚｏｌ来自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司ꎻ异丙醇㊁氯仿来自北京化工厂ꎻ双蒸水来自上海生工ꎻ反转录试剂盒㊁ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ购自ＴＡＫＡＲＡ生物有限公司ꎻｑＰＣＲ引物由苏州金唯智生物科技有限公司提供ꎻＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０ＳＹＢＲＧｒｅｅｎⅠＭａｓｔｅｒ由罗氏(中国)公司提供ꎮ１.２㊀试验方法１.２.１㊀测序数据筛选ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ网站(ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ)选择与３Ｔ３－Ｌ１脂肪细胞分化相关的测序数据ꎮ筛选原则:ａ)测序数据应自带分析程序(ＧＥＯ２Ｒ)的数据优先ꎬ这样可以降低处理数据的时间成本ꎻｂ)根据简介选择与脂肪细胞分化以及ＰＰＡＲγ基因相关的测序数据ꎬ这样能够确保所选择数据与本试验目的相关ꎮｃ)分析测序数据库中样本分组情况ꎬ选择符合自身试验需求以及具有一定科学合理性的分组形式ꎬ确保获得的数据满足后续试验要求ꎮ获得目的数据库后ꎬ选择前２５０个差异表达基因ꎬ然后根据试验分组进行数据合并ꎬ寻找具有潜力的候选基因ꎮ１.２.２㊀３Ｔ３－Ｌ１脂肪细胞培养及分化将购买的细胞从液氮拿出ꎬ室温缓慢解冻ꎬ避免细胞破裂ꎮ待含有细胞的冻存液充分溶化后ꎬ离心机１５００ｒｐｍ离心５ｍｉｎꎬ超净台中无菌移除冻存液ꎬ１ｍＬ３７ħ预热的完全培养液(含有１０％胎牛血清ꎬ１％双抗的ＤＭＥＭ－Ｆ１２培养基)重悬细胞ꎬ移液器充分吹散细胞后转移到６０ｍｍ培养皿中进培养ꎮ培养箱温度为３７ħꎬ５％ＣＯ２浓度ꎬ每４８小时换完全培养液一次ꎮ待细胞长满培养皿后ꎬ采用鸡尾酒法诱导细胞分化ꎮ胰岛素ꎬ地塞米松以及ＩＢＭＸ混合培养液作为诱导Ⅰ液诱导细胞ꎬ４８小时换诱导Ⅱ液(含胰岛素的完全培养基)ꎬ４８小时后换完全培养基ꎮ显微镜下观察细胞内部出现圆形脂滴后进行油红Ｏ染色ꎬ用来验证成熟的脂肪细胞ꎮ油红Ｏ染色试验步骤按照说明书进行ꎮ１.２.３㊀脂肪细胞分化过程不同时期ＲＮＡ提取３Ｔ３－Ｌ１细胞为前体脂肪细胞ꎬ可以在体外通过诱导分化成为成熟的脂肪细胞ꎮ因此ꎬ采用ＴＲ￣Ｉｚｏｌ法提取前体脂肪细胞以及成熟脂肪细胞ＲＮＡꎬ用来检测候选基因的表达差异ꎮ获得的细胞总ＲＮＡ通过紫外分光光度计检测浓度ꎬ琼脂糖凝胶电泳检测完整性ꎬ然后采用反转录酶体外合成ｃＤＮＡꎬ反转录体系:ＴｏｔａｌＲＮＡ５００ｎｇꎬ５ˑＭａｓｔｅｒＭｉｘ２ＬꎬＲＮａｓｅＦｒｅｅｄｄＨ２Ｏｕｐｔｏ１０Ｌꎮ反应条件:３７ħ１５ｍｉｎꎬ８５ħ５ｓｅｃꎬ４ħ保存ꎮ双蒸水将ｃＤＮＡ稀释１０倍ꎬ用于实时荧光定量ＰＣＲ检测ꎮ１.２.４㊀引物设计根据Ｇｅｎｂａｎｋ数据库提供的小鼠基因组序列ꎬ对候选基因进行定量引物设计ꎬＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔｆａｃｔｏｒＤ(ＣＦＤ)㊁Ｇｌｙｃｅｒｏｌ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ１(Ｇｐｄ１)㊁Ｃｅｌｌｄｅａｔｈ－ｉｎｄｕｃｉｎｇＤＦＦＡ－ｌｉｋｅｅｆｆｅｃｔｏｒｃ(Ｃｉｄｅｃ)㊁Ａｃｙｌ－ＣｏＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｌｏｎｇ－ｃｈａｉｎｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒ１(Ａｃｓｌ１)㊁ＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎꎬＣ１Ｑａｎｄｃｏｌｌａｇｅｎｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ(Ａｄｉｐｏｑ)㊁Ｇ０/Ｇ１ｓｗｉｔｃｈｇｅｎｅ２(Ｇ０ｓ２)㊁Ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ１ꎬｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ(ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ)ｓｕｂｕｎｉｔ１Ａ(Ｐｐｐ１ｒ１ａ)㊁ＳＴ３ｂｅｔａ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅａｌｐｈａ－２ꎬ３－ｓｉａｌｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ５(Ｓｔ３ｇａｌ５)㊁Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ１１－ｂｅｔａｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ１(Ｈｓｄ１１ｂ１)㊁Ｓｕｒｆｅｉｔｇｅｎｅ４(Ｓｕｒｆ４)㊁Ｃａｒｂｏｎｙｌｒｅｄｕｃｔａｓｅ２(ＣＢＲ２)以及内参基因ＧＡＰＤＨꎬ利用Ｐｒｉｍｅｒ５软件设计实时荧光定量ＲＣＲ(ｑＰＣＲ)引物序列(见表１)ꎮｑＰＣＲ体系为２０Ｌ:ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０ＳＹＢＲＧｒｅｅｎⅠＭａｓｔｅｒ(２ˑ)１０Ｌ㊁ｄｄＨ２Ｏ８Ｌ㊁ｃＤＮＡ１Ｌ㊁上下游引物各０.５Ｌꎮ反应程序:９５ħ５ｍｉｎꎬ９５ħ１０ｓꎬ６０ħ１５ｓꎬ７２ħ２０ｓ共４０个循环ꎬ９５ħ５ｓꎬ６５ħ１ｍｉｎꎬ４０ħ１０ｓꎬ每组试验重复３次ꎮＲｏｃｈｅＬｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ４８０软件进行数据分析ꎮ１.３㊀数据分析每组试验重复３次ꎬ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬ采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ软件作图ꎬ利用ＳＰＳＳ１７.０软件对数据进行ｔ检验或单因素方差分析ꎬ显著性水平定为Ｐ<０.０５ꎬ极显著水平定为Ｐ<０.０１ꎮ表１㊀定量基因引物序列基因引物序列片段大小(ｂｐ)退火温度(ħ)用途ＧＰＤ１Ｆ:ＧＧＡＣＣＴＧＧＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧ１７７５９.６ｑＰＣＲＲ:ＡＣＣＡＴＣＴＧＧＧＡＴＡＣＣＴＧＡＡＡＣＡＣＧＡＰＤＨＦ:ＡＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＡＧＡＣ１４５６０.５ｑＰＣＲＲ:ＣＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧＡＣＣＣＴＴＴＴＧＧＣＢＲ２Ｆ:ＡＣＣＴＧＧＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣ１７８５９.９ｑＰＣＲＲ:ＧＣＴＡＣＣＡＴＣＴＧＧＧＡＴＡＣＣＴＧＡＡＡＣＳＵＲＦ４Ｆ:ＧＣＴＧＴＧＧＣＴＡＣＣＴＧＴＴＧＧＣ２０５５９.６ｑＰＣＲＲ:ＡＧＣＡＡＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＡＡＧＣＣＨＳＤ１１Ｂ１Ｆ:ＣＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＣＴＡＣＡＴＴＧ１６５５５.９ｑＰＣＲＲ:ＴＴＣＧＣＡＣＡＧＡＧＴＧＧＡＴＧＴＣＧＳＴ３ＧＡＬ５Ｆ:ＧＣＡＣＴＡＴＧＴＧＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧ１０１６２.４ｑＰＣＲＲ:ＧＡＧＣＣＡＴＡＧＣＣＧＴＣＴＴＣＧＣＰＰＰ１Ｒ１ＡＦ:ＡＡＴＧＴＣＴＣＣＡＣＧＧＣＡＡＣＧＧ１００６１.３ｑＰＣＲＲ:ＣＣＣＴＴＧＣＴＴＣＴＧＴＴＧＣＣＣＴＡＧ０Ｓ２Ｆ:ＧＡＡＧＡＡＣＧＣＣＡＡＡＧＣＣＡＧＴＣ１９７５９.８ｑＰＣＲＲ:ＣＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＴＡＧＣＴＴＣＡＣＴＡＧＡＤＩＰＯＱＦ:ＧＣＡＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣ１１６６０.６ｑＰＣＲＲ:ＴＣＡＣＣＣＴＴＡＧＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＡＣＳＬ１Ｆ:ＣＣＴＴＣＣＡＡＣＣＡＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴ１２８６１.１ｑＰＣＲＲ:ＴＡＣＣＣＧＣＴＡＴＴＴＣＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＩＤＥＣＦ:ＡＡＧＧＴＴＣＧＣＡＡＡＧＧＣＡＴＣＡＴ２４８５９.７ｑＰＣＲＲ:ＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＴＡＣＦＤＦ:ＡＴＧＧＡＴＧＧＡＧＴＧＡＣＧＧＡＴＧＡＣ１８６５９.１ｑＰＣＲＲ:ＧＧＧＡＣＣＣＡＡＣＧＡＧＧＣＡＴＴ２㊀结果２.１㊀确定测序数据筛选候选基因根据试验方法描述的筛选原则ꎬ筛选了ＧＥＳ６７９４㊁ＧＥＳ１２９２９和ＧＥＳ４９１７６三组不同的测序数据ꎬ三组数据均与脂肪细胞分化及脂代谢相关ꎮ取三组数据前２５０差异表达基因作为数据集进行候选基因筛选ꎮ第一组数据进行韦恩图(ＶｅｎｎＤｉａｇｒａｍ)合并发现９个基因在３Ｔ３－Ｌ１细胞分化过程中与ＰＰＡＲγ基因相关ꎬ全程参与脂肪细胞分化(图１)ꎮ它们分别为:Ｇｐｄ１㊁Ｃｉｄｅｃ㊁Ａｃｓｌ１㊁Ａｄｉｐｏｑ㊁Ｇ０ｓ２㊁Ｐｐｐ１ｒ１ａ㊁Ｓｔ３ｇａｌ５㊁Ｈｓｄ１１ｂ１㊁Ｓｕｒｆ４ꎮ三组数据共有的差异表达基因为Ｃｆｄ以及Ｃｂｒ２基因ꎮ从数据分析上看ꎬＣｆｄ基因参与ＰＰＡＲγ信号通路调节３Ｔ３－Ｌ１细胞以及胚胎干细胞分化为脂肪细胞ꎬ同时也在内脏脂肪组织中表达ꎮＣｂｒ２基因在３Ｔ３－Ｌ１细胞㊁胚胎干细胞㊁成纤维细胞分化过程中表达ꎮ图１㊀差异表达基因韦恩(ＶｅｎｎＤｉａｇｒａｍ)图分析２.２㊀脂肪细胞培养与诱导为了检测候选基因在细胞中的表达情况ꎬ对３Ｔ３－Ｌ１细胞进行了体外诱导ꎬ并采用油红Ｏ染色鉴定脂肪细胞是否诱导成功ꎮ如图２所示ꎬ当细胞分化为成熟的脂肪细胞后ꎬ细胞内部出现脂滴ꎬ脂滴能够在油红Ｏ染色剂的作用下颜色变红ꎬ而其他物质不受染色剂影响ꎮ因此ꎬ本研究将３Ｔ３－Ｌ１细胞成功诱导ꎮ㊀㊀㊀㊀图２㊀３Ｔ３－Ｌ１细胞油红Ｏ染色注:图中红色点均为细胞内脂滴ꎬ说明细胞分化成功ꎮ２.３㊀候选基因定量验证候选基因筛选是基于测序数据由计算机构建的模型计算出来ꎬ具有一定的指导意义ꎮ但具体的基因表达变化仍需要通过细胞试验进行验证ꎮ因此ꎬ本试验采用ｑＰＣＲ检测了１１个候选基因在脂肪细胞分化前后的基因相对表达量ꎮ试验结果表明ꎬ１１个候选基因在脂肪细胞分化过程中均出现显著差异表达(Ｐɤ０.０５)ꎬ表明筛选的候选基因与小鼠的脂肪细胞形成和分化密切相关(图３)ꎮ图３㊀候选基因在细胞分化前后的定量检测３㊀讨论利用公共数据库筛选自己需要的数据集是进入一个相关研究领域较为快速的方法ꎮ探索脂代谢机制对于研究人类肥胖㊁提高家畜肉质性状等科学问题尤为重要ꎮ目前ꎬ３Ｔ３－Ｌ１细胞测序数据最多ꎬ能够最大限度满足研究人员的需求ꎮ研究选择３Ｔ３－Ｌ１细胞测序结果作为数据集ꎬ筛选相关候选基因ꎬ可以在其他物种上进行验证ꎮ虽然物种间存在差异ꎬ但仍是一种快速㊁节省成本的方法ꎮ作者在本研究发现了多个可作为脂代谢相关的候选基因ꎬ可为相关领域进一步研究提供一定参考ꎮ补体因子Ｄ(Ｃｆｄ)是一种脂肪酶ꎬ目前相关研究表明Ｃｆｄ基因与视网膜疾病ꎬ哮喘疾病相关[４－５]ꎮ一些研究表明该基因与肥胖有关ꎬ其中高脂肪饮食会触发Ｃｆｄ基因表达[６－７]ꎮＣｆｄ基因能够促进羊脂肪的分解[８]ꎬ但其具体调控机制以及表达规律仍然不清楚ꎮ甘油－３－磷酸脱氢酶１(Ｇｐｄ１)是连接碳水化合物和脂质代谢的关键酶[９]ꎮ有研究发现ꎬＧｐｄ１缺失能够增强脂肪氧化ꎬ有助于减少体重增加[１０]ꎮＧｐｄ１与高甘油三酯血症相关ꎬ是影响脂肪积累的重要基因[１１]ꎮ细胞死亡诱导ＤＮＡ断裂因子－α样效应因子Ｃ(Ｃｉｄｅｃ)是一种脂滴相关蛋白ꎬ促进细胞内三酰甘油的积累[１２]ꎬ与胰岛素抵抗㊁酒精肝形成相关[１３－１４]ꎮＣｉｄｅｃ蛋白在白色脂肪组织中表达ꎬ并促进脂肪滴的形成[１５]ꎮ酰基辅酶Ａ合成酶长链家族成员１(Ａｃｓｌ１)是将长链脂肪酸转化为酰基辅酶ａ的主要酶[１６]ꎮ它可以通过ＰＰＡＲγ途径减少脂肪酸β氧化ꎬ从而增加甘油三酯水平[１７]ꎮ脂联素(Ａｄｉｐｏｑ)是脂肪细胞分泌的最重要的脂肪细胞因子之一ꎬ较低的脂联素水平与代谢综合征㊁Ⅱ型糖尿病㊁胰岛素抵抗㊁心血管疾病和高血压有关[１８]ꎮ脂联素及其受体与肥胖程度呈负相关ꎬ已被确定为治疗肥胖的潜在治疗靶点ꎮＧ０/Ｇ１开关基因２(Ｇ０ｓ２)最初是在诱导细胞周期的血单个核细胞中发现的ꎬＧ０Ｓ２最广为人知的功能是其对限速脂解酶脂肪甘油三酯脂肪酶(ＡＴＧＬ)的直接抑制能力[１９－２０]ꎮ目前ꎬ对该基因分子功能的相关研究较少ꎬ具有较大研究潜力ꎮ蛋白磷酸酶１抑制剂蛋白１Ａ(Ｐｐｐ１ｒ１ａ)是一种有效的蛋白磷酸酶１(ＰＰ１)抑制剂ꎬ与肿瘤有关[２１]ꎮ该基因在β细胞中表达ꎬ与脂肪生成有关[２２]ꎮ研究指出Ⅱ型糖尿病患者胰岛中ＰＰＰ１Ｒ１ＡｍＲＮＡ水平降低[２３]ꎮ乳糖神经酰胺－α－２ꎬ３－唾液酸转移酶５(Ｓｔ３ｇａｌ５)与癌症发生有关ꎮ有研究发现ꎬＳｔ３ｇａｌ５在脂肪血管细胞中表达ꎬ肥胖㊁胰岛素抵抗患者的大网膜脂肪组织中Ｓｔ３ｇａｌ５酶的增加[２４]ꎮ羟类固醇１１β脱氢酶１(Ｈｓｄ１１ｂ１)与高脂饮食和衰老相关ꎬ高脂饮食通过增加Ｈｓｄ１１ｂ１的肝脏ｍＲＮＡ水平ꎬ增加胰岛素分泌和促进肝脏脂质积聚ꎬ加速小鼠肝脏的衰老[２５]ꎮ另外ꎬ研究表明该基因在腹部脂肪组织中高表达ꎬ与机体糖代谢异常和体脂分布相关[２６]ꎮ过量基因４(Ｓｕｒｆ４)与内质网运输相关[２７－２８]ꎮ羰基还原酶２(ＣＢＲ２)是一种短链脱氢酶/还原酶家族的酶ꎬ在酮和醛的药物代谢中起着关键作用[２９]ꎮ上述Ｓｕｒｆ４和ＣＢＲ２基因未有研究表明与脂肪代谢相关ꎬ但在本研究细胞试验中发现其表达与脂肪细胞分化有关ꎬ相关功能需要进一步验证ꎮ本文提供了与脂代谢相关的候选基因ꎬ包括Ｃｆｄ㊁Ｃｂｒ２㊁Ｇｐｄ１㊁Ｃｉｄｅｃ㊁Ａｃｓｌ１㊁Ａｄｉｐｏｑ㊁Ｇ０ｓ２㊁Ｐｐｐ１ｒ１ａ㊁Ｓｔ３ｇａｌ５㊁Ｈｓｄ１１ｂ１㊁Ｓｕｒｆ４ꎮ其中一些基因在脂代谢领域已有研究报道ꎮ例如ꎬＣｆｄ基因参与ＰＰＡＲγ信号通路调节３Ｔ３－Ｌ１细胞以及胚胎干细胞分化为脂肪细胞ꎬ同时也在内脏脂肪组织中表达ꎮＣｂｒ２基因在３Ｔ３－Ｌ１细胞㊁胚胎干细胞㊁成纤维细胞分化过程中具有表达差异ꎮ然而ꎬ这些基因具体的分子调控机制仍不清楚ꎻ另外一些基因(Ｓｕｒｆ４和ＣＢＲ２)在脂代谢领域未见报道ꎬ这些候选基因仍有潜力继续挖掘其分子生物功能ꎮ本研究挖掘的脂代谢候选基因为探究脂代谢调控的分子机制提供了新的研究方向ꎮ参考文献:[１]㊀ＰＩＣＨÉＭＥꎬＴＣＨＥＲＮＯＦＡꎬＤＥＳＰＲÉＳＪＰ.Ｏｂｅｓｉｔｙｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓꎬｄｉａｂｅｔｅｓꎬａｎｄｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＣｉｒｃｕｌａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０２０ꎬ１２６(１１):１４７７－５００.[２]㊀ＸＩＡＯＹꎬＧＯＮＧＸꎬＤＥＮＧＲꎬｅｔａｌ.Ｉｒｏｎｃｈｅｌａｔｉｏｎｒｅｍｉｔｓｍｅｍｏｒｙｄｅｆｉｃｉｔｓｃａｕｓｅｄｂｙｔｈｅｈｉｇｈ－ｆａｔｄｉｅｔｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓｄｉｓｅａｓｅꎬ２０２２ꎬ８７(１):１－１３.[３]㊀ＣＩＴＴＡＤＩＮＩＡꎬＳＡＲＲＩÉＳＭＶꎬＤＯＭÍＮＧＵＥＺＲꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔｏｆｂｒｅｅｄａｎｄｆｉｎｉｓｈｉｎｇｄｉｅｔｏｎｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｍｅａｔｆｒｏｍｂｕｒｇｕｅｔｅａｎｄｊａｃａｎａｖａｒｒａｆｏａｌｓ[Ｊ].Ａｎｉｍａｌｓ(Ｂａｓｅｌ)ꎬ２０２２ꎬ１２(５):５６８. [４]㊀ＫＡＳＳＡＥꎬＣＩＵＬＬＡＴＡꎬＨＵＳＳＡＩＮＲＭꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｙｉｎｒｅｔｉｎａｌｄｉｓｏｒｄｅｒｓ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎｉｏｎｏｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＴｈｅｒａｐｙꎬ２０１９ꎬ１９(４):３３５－３４２.[５]㊀ＫＯＬＢＬＥＫꎬＲＥＩＤＫ.Ｇｅｎｅｔｉｃｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｓｙｓｔｅｍａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｄｉｓｅａｓｅ－－ｅａｒｌｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＲｅｖｉｅｗｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ１０(１):１７－３６.[６]㊀ＧＯＶＩＮＤＳＡＭＹＡꎬＧＨＯＯＲＳꎬＣＥＲＦＭＥ.ＰｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｗｉｔｈｖａｒｙｉｎｇｄｉｅｔａｒｙｆａｔｃｏｎｔｅｎｔａｌｔｅｒｓｃａｒｄｉａｃｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒꎬＧｌｕｔ４ａｎｄＦｏｘＯ１ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｎｅｏｎａｔａｌｒａｔｓꎬｗｈｅｒｅａｓｈｉｇｈｆａｔｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇａｌｔｅｒｓｃｅｂｐａｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｎｅｏｎａｔａｌｆｅｍａｌｅｒａｔｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ(Ｌａｕｓａｎｎｅ)ꎬ２０２１ꎬ１２:７７２０９５.[７]㊀ＪＵＭＡＮＡＳꎬＭＵＮＡＡＭꎬＤＡＬＩＡＡＨ.Ｒｏｌｅｏｆｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｎｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｒｅｌａｔｅｄａｄｉｐｏｋｉｎｅｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｆａｔｓｔｏｒａｇｅ[Ｊ].ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２０１９ꎬ９(４):１４１１－１４２９.[８]㊀ＪＵＡＮＪＵＡＮＷꎬＭＥＮＧＳＩＸꎬＸＩＮＨＵＡＷꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｏｍｅａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｓｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｎｅｔｗｏｒｋｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｒｕｍｐｆａｔｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１８ꎬ１９(９):２５５６. [９]㊀ＧＵＩＮＤＡＬＩＮＩＣꎬＬＥＥＫＳꎬＡＮＤＥＲＳＥＮＭＬꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅｓｌｅｅｐａｐｎｅａｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｌｙｃｅｒｏｌ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ１ｇｅｎｅ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ＆Ｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０１０ꎬ２３５(１):５２－５６.[１０]㊀ＳＡＴＯＴꎬＳＡＹＡＭＡＮꎬＩＮＯＵＥＭꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｆａｔｏｘｉｄａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｅｐｈａｓｅａｎｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｇａｉｎｉｎｇｌｙｃｅｒｏｌ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ１ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｉｃｅ[Ｊ].ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０２０ꎬ８４(１１):２３６７－２３７３.[１１]㊀ＷＵＪＷꎬＹＡＮＧＨꎬＷＡＮＧＳＰꎬｅｔａｌ.Ｉｎｂｏｒｎｅｒｒｏｒｓｏｆｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｈｅｒｉｔｅｄＭｅｔａ￣ｂｏｌｉｃＤｉｓｅａｓｅꎬ２０１５ꎬ３８(１):８５－９８.[１２]㊀ＬＶＨꎬＭＥＮＧＱꎬＷＡＮＧＮꎬｅｔａｌ.Ｃｅｌｌｄｅａｔｈ－ｉｎｄｕｃｉｎｇＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ－α－ｌｉｋｅｅｆｆｅｃｔｏｒＣ(ＣＩＤＥＣ)ｒｅｇｕｌａｔｅｓａｃｅｔａｔｅ－ａｎｄβ－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｍｉｌｋｆａｔｓｙｎｔｈｅｓｉｓｂｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇＦＡＳＮｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍａｍｍａｒｙｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｄａｉｒｙｃｏｗｓ[Ｊ].Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｄａｉｒｙｓｃｉｅｎｃｅꎬ１０４(５):６２１２－６２２１.[１３]㊀ＴＡＮＸＲꎬＸＩＡＯＹＦ.ＲｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｏｎＣＩＤＥＣｉｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｒｎａｌｏｆｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙｐｅｄｉａｔｒｉｃｓꎬ２０１３ꎬ１５(１１):１０３３－１０３７.[１４]㊀ＬＩＡＮＧＰＵＮＳＡＫＵＬＳꎬＧＡＯＢ.Ａｌｃｏｈｏｌａｎｄｆａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ:ａｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｆｏｒｆａｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎ２７/ＣＩＤＥＣ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０１６ꎬ６４(６):１０７８－１０８１.[１５]㊀ＸＵＭＪꎬＹＡＮＣꎬＨＵＡＷꎬｅｔａｌ.Ｆａｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎ２７/ＣＩＤＥＣｐｒｏｍｏｔｅｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓｉｎｍｉｃｅａｎｄｈｕｍａｎｓ[Ｊ].Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙꎬ２０１５ꎬ１４９(４):１０３０－４１.ｅ６.[１６]㊀ＫＡＴＯＡꎬＩＴＯＭꎬＳＡＮＡＫＩＴꎬｅｔａｌ.Ａｃｓｌ１ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｓｋｉｎｂａｒｒｉｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｌｉｎｏｌｅｉｃａｃｉｄａｎｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆω－Ｏ－ａｃｙｌｃｅｒａｍｉｄｅｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔｂｉｏｐｈｙｓｉｃａａｃｔａＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄｃｅｌｌｂｉｏｌｏｇｙｏｆｌｉｐｉｄｓꎬ２０２２ꎬ１８６７(２):１５９０８５.[１７]㊀ＬＩＴꎬＬＩＸꎬＭＥＮＧＨꎬＣＨＥＮＬꎬＭＥＮＧＦ.ＡＣＳＬ１ａｆｆｅｃｔｓｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｌｅｖｅｌｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＰＰＡＲγｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ￣ａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０２０ꎬ２４ꎻ１７(６):７２０－７２７.[１８]㊀ＰＡＲＩＤＡＳꎬＳＩＤＤＨＡＲＴＨＳꎬＳＨＡＲＭＡＤ.Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎꎬｏｂｅｓｉｔｙꎬａｎｄｃａｎｃｅｒ:ｃｌａｓｈｏｆｔｈｅｂｉｇｗｉｇｓｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓꎬ２０１９ꎬ２０(１０):２５１９.[１９]㊀ＨＥＣＫＭＡＮＮＢＬꎬＺＨＡＮＧＸꎬＸＩＥＸꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＧ０/Ｇ１ｓｗｉｔｃｈｇｅｎｅ２(Ｇ０Ｓ２):ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｂｅｙｏｎｄ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａꎬ２０１３ꎬ１８３１(２):２７６－２８１.[２０]㊀ＺＨＡＮＧＸꎬＨＥＣＫＭＡＮＮＢＬꎬＣＡＭＰＢＥＬＬＬＥꎬｅｔａｌ.Ｇ０Ｓ２:Ａｓｍａｌｌｇｉａｎｔｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒｏｆｌｉｐｏｌｙｓｉｓａｎｄａｄｉｐｏｓｅ－ｌｉｖｅｒｆａｔｔｙａｃｉｄｆｌｕｘ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａＥｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ－ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙｏｆＬｉｐｉｄｓ.２０１７ꎬ１８６２(１０):１１４６－１１５４. [２１]㊀ＬＵＯＷꎬＸＵＣꎬＡＹＥＬＬＯＪꎬｅｔａｌ.Ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ１ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｓｕｂｕｎｉｔ１Ａｉｎｅｗｉｎｇｓａｒｃｏｍａｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｍｅｔａｓ￣ｔａｓｉｓ[Ｊ].Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２０１８ꎬ３７(６):７９８－８０９.[２２]㊀ＳＡＴＩＳＨＬꎬＫＲＩＬＬ－ＢＵＲＧＥＲＪＭꎬＧＡＬＬＯＰＨꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｓｔｅｍｃｅｌｌｓｄｕｒｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｔｏａｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｌｉｎｅａｇｅ[Ｊ].ＢＭＣＭｅｄｉｃａｌＧｅｎｏｍｉｃｓꎬ２０１５ꎬ２４(８):４１.[２３]㊀ＣＡＴＡＬＤＯＬＲꎬＶＩＳＨＮＵＮꎬＳＩＮＧＨＴꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＭａｆＡ－ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅＰＰＰ１Ｒ１ＡｒｅｇｕｌａｔｅｓＧＬＰ１Ｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｉｎｓｕｌｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎβ－ｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬ２０２１ꎬ１１８:１５４７３４.[２４]㊀ＷＥＮＴＷＯＲＴＨＪＭꎬＮＡＳＥＬＬＩＧꎬＮＧＵＩＫꎬｅｔａｌ.ＧＭ３ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅａｎｄｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｌｉｐｉｄｓａｒｅａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｍａｒｋｅｒｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｏｂｅｓｅｗｏｍｅｎ[Ｊ].Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌｏｆｏｂｅｓｉｔｙ(２００５)ꎬ２０１６ꎬ４０(４):７０６－７１３.[２５]㊀ＨＯＮＭＡＴꎬＳＨＩＮＯＨＡＲＡＮꎬＩＴＯＪꎬｅｔａｌ.Ｈｉｇｈ－ｆａｔｄｉｅｔｉｎｔａｋｅａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓａｇｉｎｇꎬｉｎｃｒｅａｓｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨｓｄ１１ｂ１ꎬａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｌｉｐｉｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｌｉｖｅｒｏｆＳＡＭＰ１０ｍｏｕｓｅ[Ｊ].Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙꎬ２０１２ꎬ１３(２):９３－１０３.[２６]㊀ＤＯＮＡＳＣＩＭＥＮＴＯＦＶꎬＰＩＣＣＯＬＩＶꎬＢＥＥＲＭＡꎬｅｔａｌ.ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＨＳＤ１１Ｂ１ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｖａｒｉａｎｔｓａｎｄａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅꎬｏｂｅｓｉｔｙａｎｄｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ:ａｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｙ＆ｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅꎬ２０１５ꎬ７:３８.[２７]㊀ＹＡＮＲꎬＣＨＥＮＫꎬＷＡＮＧＢꎬｅｔａｌ.ＳＵＲＦ４－ｉｎｄｕｃｅｄｔｕｂｕｌａｒＥＲＧＩＣｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｅｘｐｅｄｉｔｅｓＥＲ－ｔｏ－Ｇｏｌｇｉｔｒａｎｓｐｏｒｔ[Ｊ].ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＣｅｌｌꎬ２０２２ꎬ５７(４):５１２－５２５.[２８]㊀ＥＭＭＥＲＢＴꎬＬＡＳＣＵＮＡＰＪꎬＴＡＮＧＶＴꎬｅｔａｌ.ＭｕｒｉｎｅＳｕｒｆ４ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｅａｒｌｙｅｍｂｒｙｏｎｉｃｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０２０ꎬ１５(１):ｅ０２２７４５０.[２９]㊀ＳＨＩＳＭꎬＬＩＤ.Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｃａｒｂｏｎｙｌｒｅｄｕｃｔａｓｅ１ｉｎｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎｉｏｎｏｎＤｒｕｇＭｅｔａｂｏ￣ｌｉｓｍ＆Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ１３(８):８５９－８７０.(下转第２６页)ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＴｗｏＤｒｙｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｏｎＮｕｔｒｉｅｎｔＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＢｉｔｔｅｒＢａｍｂｏｏＳｈｏｏｔＰｏｗｄｅｒＨＵＱｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＷＡＮＧＹａｎｙｕｎ１ꎬ２ꎬＷＡＮＧＹａｎ１ꎬ２ꎬＷＵＷｅｉ３ꎬＸＩＡＮＧＬｅｘｉ３[１.ＢａｍｂｏｏＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＰｅｓｔｓＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＲｅｓｏｕｒｃｅｓＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ(ＬｅｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ)ꎬＬｅｓｈａｎＳｉｃｈｕａｎ６１４０００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅꎬＬｅｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬｅｓｈａｎＳｉｃｈｕａｎ６１４０００ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＬｅｓｈａｎＰｒｏｄｕｃｔＱｕａｌｉｔｙＳｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎａｎｄＴｅｓｔｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＬｅｓｈａｎＳｉｃｈｕａｎ６１４０００ꎬＣｈｉｎａ]Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｈｅｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｈｏｔ－ａｉｒｄｒｙｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｐｒｏｄｕｃｅｂｉｔｔｅｒｂａｍｂｏｏｓｈｏｏｔｐｏｗｄｅｒꎬａｎｄｔｈｅｎｕｔｒｉｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆｂｉｔｔｅｒｂａｍｂｏｏｓｈｏｏｔｐｏｗｄｅｒｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅｉｄｅａｓｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐ￣ｍｅｎｔｏｆｔｈｅｂｉｔｔｅｒｂａｍｂｏｏｓｈｏｏｔｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｉｎｄｕｓｔｒｙ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｏｔａｌｐｈｅｎｏｌｓ(２.８６％)ꎬｔｏｔａｌｆｌａ￣ｖｏｎｏｉｄｓ(１.４４％)ａｎｄＶｃ(３２１.３４ｍｇ)ｉｎｂｉｔｔｅｒｂａｍｂｏｏｓｈｏｏｔｐｏｗｄｅｒｂｙｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｂｙｈｏｔ－ａｉｒｄｒｙｉｎｇꎬｗｈｉｌｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｃｒｕｄｅｐｒｏｔｅｉｎꎬｃｒｕｄｅｆｉｂｅｒꎬｃｒｕｄｅｆａｔꎬｔｏｔａｌｓｕｇａｒａｎｄａｓｈｗｅｒｅｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｙｔｗｏｄｒｙｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ.Ｔｈｅｔｏｔａｌｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓ(８.９２ｇ/１００ｇ)ｂｙｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｂｙｈｏｔ－ａｉｒｄｒ￣ｙｉｎｇꎬａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ３９.１６％ｏｆｔｏｔａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓꎬｂｕｔｔｈｅｔｏｔａｌｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｆｏｒｃｈｉｌｄｒｅｎｗａｓｓｌｉｇｈｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｂｙｈｏｔ－ａｉｒｄｒｙｉｎｇ.Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｆｌａｖｏｒａｍｉｎｏａｃｉｄｓｂｙｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｂｙｈｏｔ－ａｉｒｄｒｙｉｎｇ.Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｐｏｔａｓｓｉｕｍ(５２８９０ꎬ５２２６０ｍｇ/ｋｇ)ꎬｃａｌｃｉｕｍ(９３０.８ꎬ１０８０ｍｇ/ｋｇ)ａｎｄｚｉｎｃ(８３.５１ꎬ８９.４５ｍｇ/ｋｇ)ｂｏｔｈｂｙｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇａｎｄｈｏｔ－ａｉｒｄｒｙｉｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒ.Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｓｏｄｉｕｍａｎｄｃｈｒｏｍｉｕｍｂｙｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｈｏｔ－ａｉｒｄｒｙｉｎｇ.Ｉｔｃａｎｂｅｓｅｅｎｔｈａｔｔｈｅｂｉｔｔｅｒｂａｍｂｏｏｓｈｏｏｔｐｏｗｄｅｒｔｒｅａｔｅｄｂｙｖａｃｕｕｍｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｓｈｏｗｅｄｃｅｒｔａｉｎａｄｖａｎｔａｇｅｓｉｎｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＢｉｔｔｅｒＢａｍｂｏｏＳｈｏｏｔＰｏｗｄｅｒꎻＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｌＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓꎻＨｏｔ－ＡｉｒＤｒｙｉｎｇꎻＶａｃｕｕｍＦｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇʌ责任编辑:王兴全ɔ(上接第２０页)ＡＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃＡｐｐｒｏａｃｈｔｏＦｉｎｄＣａｎｄｉｄａｔｅＧｅｎｅｓＲｅｌａｔｅｄｔｏＬｉｐｉｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍＹＵＳｈｉｇａｎｇ１ꎬＷＡＮＧＧａｎｇ１ꎬＬＩＡＯＪｕａｎ１ꎬＳＨＥＮＸｕｅｍｅｉ１ꎬＸＩＡＯＣｈｅｎｇ２(１.ＨｉｇｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＬｏｃａｌＣｈｉｃｋｅｎＢｒｅｅｄｓＩｎｄｕｓｔｒｉａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎＳｏｕｔｈｅｒｎＳｉｃｈｕａｎꎬＬｅｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬｅｓｈａｎＳｉｃｈｕａｎ㊀６１４０００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＪｉｌｉｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅꎬＧｏｎｇｚｈｕｌｉｎｇＪｉｌｉｎ１３６１００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｈｅｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｂｙｖａｒｉｏｕｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｄａｔａｐｒｏｖｉｄｅｄｂｙｐｕｂｌｉｃｄａｔａｐｌａｔｆｏｒｍｓ.Ｔｈｒｅｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｄａｔａｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｍｏｕｓｅ３Ｔ３－Ｌ１ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅＧＥＯｄａｔａｂａｓｅｏｆＮａ￣ｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｗｅｂｓｉｔｅꎬａｎｄｔｈｅｔｏｐ２５０ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｏｆｅａｃｈｄａｔａｓｅｔｗｅｒｅｔａｋｅｎａｓｔｈｅｄａｔａｓｅｔｏｆｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ.Ｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｗｅｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｐｕｒ￣ｐｏｓｅｔｏｆｉｎｄｔｈｅｃｏｍｍｏｎｇｅｎｅｓｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｒｅｇｕｌａｔｉｏｎꎬａｎｄｖａｌｉｄａｔｅｄｂｙｑＰＣＲｅｘｐｅｒｉ￣ｍｅｎｔｓ.ＴｈｒｏｕｇｈｔｈｅｄａｔａｂａｓｅｐｒｏｖｉｄｅｄｂｙＮＣＢＩｗｅｂｓｉｔｅꎬｔｈｒｅｅｐｕｂｌｉｃｄａｔａｒｅｌａｔｅｄｔｏ３Ｔ３－Ｌ１ａｄｉｐｏｃｙｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅｗｅｒｅｆｏｕｎｄꎬｎａｍｅｌｙＧＥＳ６７９４ꎬＧＥＳ１２９２９ａｎｄＧＥＳ４９１７６.Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｍｅｒｇｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔａｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｇｅｎｅｓａｒｅｉｎ￣ｖｏｌｖｅｄｉｎＰＰＡＲγｐａｔｈｗａｙｔｏｒｅｇｕｌａｔｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎꎬａｍｏｎｇｗｈｉｃｈｔｈｅｇｅｎｅＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔｆａｃｔｏｒＤｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎ３Ｔ３－Ｌ１ａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓꎬａｎｄｉｓａｌｓｏｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｖｉｓｃｅｒａｌａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅ.ＴｈｅｇｅｎｅＣａｒｂｏｎｙｌｒｅｄｕｃｔａｓｅ２ｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅ３Ｔ３－Ｌ１ꎬｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｄｕｒｉｎｇｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ.Ｇｐｄ１ꎬＣｉｄｅｃꎬＡｃｓｌ１ꎬＡｄｉｐｏｑꎬＧ０ｓ２ꎬＰｐｐ１ｒ１ａꎬＳｔ３ｇａｌ５ꎬＨｓｄ１１ｂ１ꎬａｎｄＳｕｒｆ４ｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆ３Ｔ３－Ｌ１ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ.ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｑＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓꎬｔｈｅａｂｏｖｅｇｅｎｅｓｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｈａｎｇｅｓｄｕｒｉｎｇａｄｉｐｏｃｙｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｍａｙｓｅｒｖｅａｓｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｆｏｒｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ.Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓｎｅｗｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｆｏｒｅｘｐｌｏｒｉｎｇｌｉｐｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍꎬａｎｄａｌｓｏｐｒｏｖｉｄｅｓｎｅｗｒｅｓｅａｒｃｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｆｏｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｈｕｍａｎｏｂｅｓｉｔｙａｎｄｆａｔａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｆａｔｃｏｎｔｅｎｔｉｎａｎｉｍａｌｍｕｓｃｌｅｔｏｅｎ￣ｈａｎｃｅｍｅａｔｑｕａｌｉｔｙｔｒａｉｔｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:３Ｔ３－Ｌ１ꎻＡｄｉｐｏｃｙｔｅꎻＯｂｅｓｉｔｙꎻＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＤａｔａꎻＬｉｐｉｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍꎻＣａｎｄｉｄａｔｅＧｅｎｅｓʌ责任编辑:王兴全ɔ。
人myodelisa试剂盒使用说明书
人试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人水平。
用纯化的人抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与标记的抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物显色。
在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的呈正相关。
用酶标仪在波长下测定吸光度（值），通过标准曲线计算样品中人浓度。
样本处理及要求：.血清：室温血液自然凝固分钟，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
.血浆：应根据标本的要求选择、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合分钟后，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
.尿液：用无菌管收集，离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到万左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的，。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持℃的温度。
加入一定量的（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心分钟左右（转分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔孔，在第一、第二孔中分别加标准品μ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液μ，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取μ分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液μ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取μ弃掉，再各取μ分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取μ分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液μ，混匀后从第七、第八孔中分别取μ加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液μ，混匀后从第九第十孔中各取μ弃掉。
人组织因子（TF）ELISA分析检测试剂盒使用说明书
人组织因子（TF）ELISA分析检测试剂盒使用说明书人组织因子（TF）ELISA分析检测试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（TF）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人组织因子（TF）水平。
用纯化的转化生长因子（TF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（TF），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的转化生长因子（TF）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人组织因子（TF）浓度。
试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品：100ng/ml 1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗OT抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP 1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存自备材料：1. 蒸馏水。
(20111209)人维生素D(VD)ELISA检测试剂盒
结果判断:绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能:
1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无
标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无
样本稀释液6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL 无
底物B 6mL 3mL 无
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
人维生素D(VD)ELISA检测试剂盒说明书
拜力生物编辑整理：
人维生素D(VD)ELISA检测试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人维生素D(VD)ELISA检测试剂盒使用说明书
检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被维生素D(VD)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素D(VD)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
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人补体因子D(CFD)ELISA试剂盒利用说明书
本试剂仅供研究利用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人补体因子D(CFD)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人补体因子D(CFD)水平。
用纯化的人补体因子D(CFD)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入补体因子D(CFD)，再与HRP标记的补体因子D(CFD)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的补体因子D(CFD)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人补体因子D(CFD)含量。
试剂盒组成：
样本处置及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
认真搜集上
清，保留进程中如显现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应依照标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
认真搜集上清，保留进程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管搜集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
认真搜集上清，保留进程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参如实行。
4. 细胞培育上清：检测分泌性的成份时，用无菌管搜集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
认真搜集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右
（2000-3000转/分）。
认真搜集上清。
保留进程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入必然量的PBS，。
用液氮迅速冷冻保留备用。
标
本融化后仍然维持2-8℃的温度。
加入必然量的PBS（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
认真搜集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
假设不能马
上进行实验，可将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中别离加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl别离加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔别离加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl别离加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中别离加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中别离加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中别离取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔别离加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度别离为1800ng/ml，1200ng/ml ，600ng/ml，300ng/ml，150ng/ml）。
2.加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反映（现在蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟之内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30分钟后方可利用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。
3．各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。
一次加样时刻最好操纵在5分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量太高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必然倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。
6．底物请避光保留。
7．严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各类废弃物都应按传染物处置。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
在座标纸上绘出标准曲线，依照样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为以上。
2.批内与批见应别离小于9%和11%
检测范围：
100ng/ml -2000ng/ml
保留条件及有效期：
1.试剂盒保留：；2-8℃。
2．有效期：6个月。