肠道病毒等检测临床意义
实时荧光RT-PCR快速检测肠道病毒RNA及其临床意义
所有数据 使用 Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ １ ５统 计 软 件 进 行
分析 ， 部采用 Ｙ 全 检 验 分 析 ， Ｐ＜ ０ ０ 以 ． ５为 差 异 具 有 统 计 学
检 测 ， 手 足 口病 的早 期 诊 断 、 疗 和 预 后 观 察 显 得 尤 为 重 要 。 对 治 本 文 应 用 实 时 荧 光 逆 转 录一 合 酶 链 反 应 （ Ｔ Ｐ Ｒ） 测 了 聚 Ｒ Ｃ 检 ２ ６份 手 足 口 病 患 儿 粪 便 、 脊 液 标 本 ． 别 测 定 肠 道 病 毒 ３ 脑 分 （ Ｖ） 用 型 （ 下 简 称 Ｅ 、 萨 奇 病 毒 Ａ 组 １ （ Ａ１ ） Ｅ 通 以 Ｖ） 柯 ６ Ｃ ６ 和
地 区手 足 口病 患 儿 中 Ｃ ６和 Ｅ １均 有 感 染 ， 以 Ｅ １为 Ａ１ Ｖ７ 但 Ｖ７
１ １ 标本 来源 ．
检测标本均来 自 ２ １ ０ ０年 ５ ～８月本院手足 口
主 。其 中有 ４例 标 本 同时 检 出 Ｅ １和 Ｃ ６ 表 明存 在 这 两 Ｖ７ Ａ１ ，
病住 院患儿 ， 集 粪便 及 脑脊 液 标 本 ２ ６份 ， 采 集 标 本 ３ 采 ３ 所 ｏ
３ ， 时满足两个条件 ， 实验有效 ， 则需重新检测 。 Ｏ同 则 否 １３５ 统 计学方法 ．．
意义 。
２ 结 果
习 ， 在 一 定 程 度 上 给 社 会 造 成 不 稳 定 的 因 素 。 特 别 是 ２ ０ 且 ０８ 年 ３ 在 安 徽 阜 阳 爆 发 的 手 足 口病 疫 情 ， 现 了部 分 死 亡 病 月 出
为 ９． ５ ； Ａｌ １ ４ Ｃ ６阳 性 ５ ６例 ， 阳性 率 为 ２ ． Ｏ ； Ｖ７ ３ ５ Ｅ １阳性 ８ ７例 ， 性 率 ３ ． ７ ， 中有 ４例 同 时检 出 Ｃ ６和 阳 ７ １ 其 Ａ１
IQ TM5多重实时荧光定量PCR仪快速检测肠道病毒RNA及其临床意义
田 中华 内科杂志 ，９９ ３ （ ： — ７ １９ ，８１ １ １． ）４
【］ ａ ａ ｍ Ｗ ａａＳ Ｋｕ ａＹ， ｔａ ｒｒｃａｉｌ ｏｐｅ ａ ｅ ａ ｅ ｎｒｃ ７Ｋ ｎｍａ Ｋ， ｇ ， ｇ ｅ ｌ ａｔｒｎａ ｄ ｐ ｌｒ ￣ ｍ ６ ｒｉｔ — Ｔ ｓ ｐ ａ
ｄ ｂ ｔｓ］Ｍｕ ｌ Ｎｅ ｅ １ ８ ， １２ — ３ ｉ ｅｃ［ ａ ｉ Ｊ ｓ ｅ ｒ ， ８ １ ：１ ２ ｃ ｖ ９ 【 Ｋ ｓ ａ Ａ ， ｎ ｎ Ｐ Ｋ ｓ ｐ Ｓ ｅ ａ Ｐ ｔ ｈｒ ｅ ｒｐｔ 【 ． ａｃｔ ５ ａ ｙ ｐ Ｓ Ａ ａｄ Ｋ ， ａ ］ ｈ ａ ， ｔ １ ｅ ｐ ｅ ｌ ｕｏ ａ ｙ Ｉ Ｌｎ ｅ， ． ｉ ａｎ ｈ ］
医学信息 ２ １ 年 ｌ ０１ ２月第 ２ ４卷第 １ ２期 Ｍｅｉａ Ｉｆｒ ｔ ｎ Ｄ ｃ ２ １． ｏ． ４ Ｎ ． ２ ｄｃｌ ｎｏ ｉ ． ｅ． ０ １ Ｖ １２ ． ｏ １ ｍａ ｏ
血管壁 。 毛细血管基底膜增厚 、 变性 ， 内皮细胞的肥大和增生 。 内脂肪 血管 管壁 及糖蛋 白沉积 ， 管腔狭 窄， 从而导致微循 环障碍。缺 血、 缺氧 ， 使依据 ， 并对手足 口病 患儿的病情分析 、 治疗及预后观 察起 到指导作 用。 关 键 词 ：手 足 口病 ； 时 荧 光定 量 Ｐ 实 ＣＲ： 道 病 毒 肠
手足 口病（ ａｄｆ ｔａｄｍ ｕ ｉａｅ是由肠道病毒引起 的传 染病 ， Ｈ ｎ— ｏ ｎ— ｏｔｄｓ ｓ） ｏ— ｈ ｅ 多 发生于 ３ 以下儿童ｌ 可引起手 、 、 岁 】 】 ， 足 口腔等部位的疱疹 ， 少数患儿可引起心 肌炎 、 肺水肿 、 菌性脑膜脑炎等并发症 。个别重症 患Ｊ￣果病情发展快 ， 无 ＬＩ １ 会 导致死亡 。引发手足 口病的肠道病毒有 ２ 多种（ ， 萨奇病毒 Ａ组的 ｌ、 ０ 型）柯 ６ ４ ５ ９ １ ， 的 ２ ５型 ， 、 、 、０型 Ｂ组 、 以及肠道病 毒 ７ 型均为手 足 口病较常见的病原 ｌ 体， 其中以柯萨奇病毒 Ａ ６ （ ｏ １ ） １ 型 Ｃ ｘＡ ６ 和肠道病毒 ７ 型（ Ｖ １ 最为常见 １ Ｅ７） 。 手足 口病近年来呈爆发趋势 ， 严重影响婴幼儿的生活和学习 ， 且在一定程度上 给社会造成不稳定的因素 。如何对手足 口病的病原学进行快速检测 ， 对手足 口病 的早期诊断 、治疗和预后观察 显得尤为重要 。本文应 用实时荧 光定量 Ｐ Ｒ检测 了 ３２份手足 口病患儿粪便 、 子标本 。分别测定肠道病毒 （Ｖ） Ｃ ３ 咽拭 Ｅ 通用型（ 以下简称 Ｅ 、 Ｖ）柯萨奇病毒 Ａ组 １ （ Ａ ６ 和 Ｅ ７ 型核酸 ， ６Ｃ １） Ｖ １ 现报道如
免疫球蛋白及补体检测在感染肠道病毒71手足口病患儿中的临床意义
Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｓ ｃ ａ ｔ ｔ ｅ ｉｎ ｒ ｇ ｔ ｕ ｒ ｂ ｉ ｄ ｉ ｍｅ ｔ ｒ ｉ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ５ ０ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｏ ｆ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｉ ｆ ｏ ｎ Ｅ Ｖ ７１ ｂ ｒ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｓ ｍｏ ｕ ｔ ｈ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ
齐齐哈尔医学院学报 ２ ０ １ ３年 第 ３ ４卷 第 ３期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｑ ｉ ｑ ｉ ｈ ａ ｒ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， ２ ０ １ ３． Ｖ ０ １ ． ３ ４， Ｎ ｏ ． ３
・ ３ ２ ９・
ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｗ ａ ｓ ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ（ Ｐ ＜０ ． ０ ５） ：Ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｆ Ｉ ｇ Ｍ ｉ Ｓ ｏ ｂ ｖ ｉ ｏ ｕ ｓ ｌ ｙ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ａ ｌ ｔ ｈ
ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ５ Ｏ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｏ ｆ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｙ ｃ ｈ ｉ ｌ ｄ ｒ ｅ ｎ ｏ ｆ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｇ ｌ ｏ ｂ ｕ ｌ ｉ ｎ Ｉ ｇ Ｇ．Ｉ ｇ Ａ ａ ｎ ｄ Ｉ ｇ Ｍ ａ ｎ ｄ Ｃ ３，Ｃ ４．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｅ Ｖ７ １ ｂ ｒ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｓ ｍｏ ｕ ｔ ｈ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ Ｉ ｇ Ｇ，Ｉ ｇ Ａ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｗａ ｓ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ｌ ｏ ｗｅ ｒ ｔ ｈ ａ ｎ ｔ ｈ ｅ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｙ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ，ｔ ｈ ｅ
临床常见病毒 肠道病毒
（三）微生物学检验
1.标本
1.生物学特性 ➢ 具有典型肠道病毒特征，球形，无包膜，+ss RNA
2.分类
根据对乳鼠的致病特点的不同，可分成A、B两组
➢ A组
23个血清型（A1～A22、A24）
➢ B组
6个血清型（Bl～B6）
所致疾病 神经系统疾病
无菌性脑膜炎 无菌性脑炎 麻痹症 心脏与肌肉疾病 心肌炎、心包炎 流行性胸痛 呼吸及消化系统疾病 普通感冒
肺炎 腹泻 皮肤与黏膜疾病 手足口病 疱疹性咽峡炎 急性出血性结膜炎 其他 糖尿病
A 组 柯萨奇病毒
多数型别 2、5～7、9
7、9
4、16 9
21、24
18、20～22、24
5、9、10、16 2～6、8、10 2～6、8、10
B 组 柯萨奇病毒 所有型别 1～5 2～5 1～5 1～5 1～5 4、5
麻痹型
病变轻微
0.1%病变严重
暂时性肢体麻痹 弛缓性麻痹
极少数 延髓麻痹
呼衰、心衰、死亡
➢ 90％的感染为隐性感染 ➢ 约5％出现顿挫感染 ➢ 1％～2％为非麻痹性脊髓灰质炎或无菌性脑膜炎 ➢ 仅约0.1%出现永久性弛缓性肢体麻痹 ➢ 极少数发展为延髓麻痹
Байду номын сангаас
（三）微生物学检验
1.标本 ➢ 病人发病早期咽洗液、粪便、血液、脑脊液等
肠道病毒的共同特征
肠道病毒
肠道病毒（enterovirus）1.肠道病毒：（1）属于小RNA病毒科中的肠道病毒属成员，由粪-口途径传播。
（2）虽然感染胃肠道，但却很少引起胃肠道疾病，其靶器官以神经系统、肌肉和其他系统为主，引起脊髓灰质炎、脑膜炎、脑膜脑炎、心肌炎、心周炎、手足口病等疾病。
（3）一种病毒血清型可引起几种不同的疾病综合征，而几种不同的血清型又可引起同一种疾病。
2. 肠道病毒种类与分型（1）脊髓灰质炎病毒(poliovirus)：分1、2、3三型（2）柯萨奇病毒(coxsackie virus) ：分A、B两组；（A组：包括A1~A22、A24型；B组：包括B1~B6型；）（3）埃可病毒(ECHO virus)：包括1~9、11~27、29~33型（4）新型肠道病毒：包括68、69、70、71型3. 脊髓灰质炎病毒：①是引起脊髓灰质炎的病原体；②脊髓灰质炎又称为小儿麻痹症，是一种危害中枢神经系统的传染病。
（1）临床意义：①传播途径：经粪-口途径感染，潜伏期2~10天②传染源：患者及无症状隐性感染者③临床表现：无症状感染、顿挫型脊髓灰质炎、无麻痹性脊髓灰质炎、麻痹型脊髓灰质炎1~2%（2）致病机制：（3）生物学特性：①病毒近似球形，直径27～30nm，核心为单正链RNA，约7.2～8.5kb，核衣壳呈20面体立体对称，无包膜。
②衣壳含4种蛋白（VP1～VP4），VP1、VP2和VP3暴露在病毒体表面，是抗体结合位点；VP4在核心内部与RNA结合。
（4）培养特性：①细胞：人胚肾、人胚肺、猴肾细胞、Hela、HEp-2、Vero等②最适温度：36～37℃CPE：培养3～5天出现③抵抗力较强（5）微生物学检验：1.标本采集与处理标本：粪便、发病早期的咽部分泌物等2.病毒分离与鉴定：人或猴肾原代细胞、Hela、V ero等细胞24～48小时可出现典型CPE3.抗原检测：ELISA法4.核酸检测：用RT-PCR等方法5.抗体检测：单份血清检测IgM，双份血清检测抗体效价升高4倍（6）减毒活疫苗：①剂型：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型；②用法：口服（温水）；③机理：产生分泌型IgA，阻止病毒入血；4. 柯萨奇病毒（Coxsackievirus）：柯萨奇病毒是1948年在美国纽约州柯萨奇镇，从一名疑似脊髓灰质炎患者粪便中用接种乳鼠的方法首次分离出的，因而得名。
临床分析中的生化标志物对炎症性肠病的诊断与治疗的意义
临床分析中的生化标志物对炎症性肠病的诊断与治疗的意义炎症性肠病（IBD）是一组由复杂的免疫介导性炎症引起的慢性疾病，包括克罗恩病（CD）和溃疡性结肠炎（UC）。
在临床实践中，准确诊断IBD并确定其严重程度对于制定个性化治疗方案至关重要。
生化标志物作为一种重要的辅助检查手段，在IBD的诊断、治疗和监测中发挥着关键作用。
一、诊断意义通过检测血清中的生化标志物，可以辅助医生判断炎症性肠病的发展情况，对于初步筛查、鉴别诊断和评估疾病活动度具有很大的帮助。
1.1 C反应蛋白（CRP）CRP是人体一种常见的急性反应蛋白，其水平与组织发炎程度密切相关。
血清CRP水平的升高往往提示炎性病变存在，对于判断IBD的活动程度和疾病的恶化具有很高的敏感性和特异性。
因此，CRP是诊断和评估炎症性肠病的重要指标之一。
1.2 血小板计数IBD患者往往伴随有血小板增多的情况，特别是在疾病活动期。
血小板增多与炎症介质的释放和细胞内外的炎症反应相关，因此测定血小板计数对于判断炎症性肠病的活动程度和指导治疗具有一定的参考价值。
1.3 粪便标志物通过分析粪便中的生化标志物，如白细胞、隐血、粪便血清蛋白等，可以更直接地了解炎症性肠病的状况。
特别是在UC的诊断中，粪便镜检是重要的实验室检查手段之一，可发现潜在的炎症病变。
二、治疗意义生化标志物在炎症性肠病的治疗中有着重要的临床意义。
通过监测这些标志物的变化，可以评估治疗效果，调整治疗方案以达到最佳的疾病控制。
2.1 C反应蛋白（CRP）治疗后CRP水平的下降反映了疾病的好转，可作为治疗效果的指标之一。
在治疗过程中，监测CRP水平的变化有助于及早调整用药方案，提高治疗的有效性。
2.2 白细胞计数随着治疗的进行，白细胞计数往往会逐渐恢复正常，说明炎症反应得到了控制。
因此，白细胞计数是治疗疾病活动性、评估治疗效果和预测复发的重要衡量指标之一。
2.3 粪便标志物在IBD治疗中，随着病情的好转，粪便中的白细胞、隐血等治疗前明显升高的标志物会逐渐减少或消失。
肠道屏障功能分析开展临床意义
肠道屏障功能分析开展临床意义郑佳扬（广州医科大）编著肠道是脏器中唯一腔道内有大量细菌滋生的器官,不仅是消化吸收器官，而且是集内分泌、免疫、屏障等功能为一体的重要器官。
生理条件下，肠道在消化、吸收各种营养物质的同时又能将细菌及其代谢产物抑制于肠道内，阻止细菌及毒素不侵入血液及组织中，不引起疾病，这有赖于肠道的屏障功能的完整。
当肠黏膜屏障损伤时，肠道中的微生物和内毒素等便可突破肠黏膜屏障，进入血液引起细菌内毒素移位，促进肠源性感染的发生，甚至发展为全身性炎症反应综合症或多器官功能衰竭。
因此Carrico（1986年）等人提出“肠道是多器官功能衰竭的启动器官”，Wilmore（1988年）也提出在创伤、手术后患者“肠道是应激的中心器官”。
近30年越来越多的基础和临床研究证实了以上观点，并明确了肠屏障损害在多脏器功能衰竭发生发展中的重要作用，与患者预后息息相关。
所以说“肠道是多器官功能衰竭的启动器官，而阻断肠源性感染是预防多脏器功能衰竭的重要途径“。
在美国，近年来平均每年由于肠屏障功能障碍引起的脓毒症和脓毒症相关的多脏器功能衰竭患者约为10万人，占多脏器功能衰竭总发生率的42%，在我国，2003～2006年平均每年由肠屏障功能障碍引起的多脏器功能衰竭占其总发生率的40.5%，病死率为67%（张淑文等;中国危重病急救医学2007; 19: 2-6.）。
2012年，我国合并多器官功能障碍的重症患者超过1000万，病死率是发达国家的1倍以上。
早在上世纪80年代，国外有学者提出肠道是多脏器功能衰竭的始动环节和核心器官。
现已明确，创伤、休克、大面积烧伤、严重感染等重大疾病可造成肠道缺血缺氧，导致肠道黏液、细菌、肠道淋巴液成分和肠粘膜紧密连接分子的改变，造成了肠道机械屏障、化学屏障、免疫屏障和生物屏障的损害，在此基础上，细菌和内毒素易位入血，造成过度的炎症反应和远隔脏器功能损害，其共同的病理生理路径为“肠屏障损害-过度炎症反应/肠源性感染-多脏器功能衰竭”。
肠道病毒
二、肠道病毒71型---手、足、口病
手足口病（HFMD）是婴儿和儿童的一
种常见疾病。手足口病症状表现为发热、
口腔溃疡和疱疹为特征。个别患者可引起
心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发
症。 病原体:以柯萨奇病毒A16型和新肠道病毒 71型最为常见
引起脊髓灰质炎、脑膜炎、脑膜脑炎、心肌炎、
心周炎、手足口病等疾病。
•
疾病。
一种病毒血清型可引起几种不同的疾病
综合征，而几种不同的血清型又可引起同一种
脊髓灰质炎病毒-Poliovirus （脊灰病毒）
脊灰病毒是引起人类脊髓灰质炎的病原体。 脊髓灰质炎是一种广泛流行，遍及全球的一种急性 传染病。 病变主要是脊髓前角灰质部分，故称“脊髓灰质 炎”。 主要表现为肢体肌肉驰缓性麻痹，因多发生于小儿， 故又称“小儿麻痹症”。 我国已于2001年10月宣布消灭了野生株感染的脊 髓灰质炎。
微生物学检查
分离病毒及血清学检查 预防尚无疫苗可用
第二节 柯萨奇病毒与埃可病毒
一、柯萨奇病毒
（Coxsackievirus）
柯萨奇病毒是1948年在美国纽约州柯萨奇
镇，从一名疑似脊髓灰质炎患者粪便中用接种
乳鼠的方法首次分离出的，因而得名。
临床意义
传染源：患者或无症状带毒者
传播途径：主要经粪一口途径，亦可由呼吸道传
生物学特性
ECHOV生物学特性与柯萨奇病毒相似
第三节 新型肠道病毒
1969年以后分离出的肠道病毒新血清 型，不再将其归属于柯萨奇病毒和ECHO 病毒，统称为新型肠道病毒。按抗原排列 顺序分别命名为肠道病毒68、69、70和71 型。
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肠道病毒71型/柯萨奇病毒A16型/
通用性肠道病毒RNA联合检测临床意义
手足口病是一种由数种肠道病毒引起的传染病，主要侵犯5岁以下的宝宝。
手足口病常常表现为: 患儿口腔内颊部、舌、软腭、硬腭、口唇内侧、手足心、肘、膝、臀部和前阴等部位，出现小米粒或绿豆大小、周围发红的灰白色小疱疹或红色丘疹。
疹子"四不像":不像蚊虫咬、不像药物疹、不像口唇牙龈疱疹、不像水痘。
口腔内的疱疹破溃后即出现溃疡，常常流口水，不能吃东西。
临床上不痒、不痛、不结痂、不结疤。
患儿尿黄。
重疹患儿可伴发热、流涕、咳嗽等症状。
手足口病一般一周内可康复，但如果此前疱疹破溃，极容易传染。
手足口病具有流行强度大、传染性很强、传播途径复杂特点。
病毒可以通过唾液飞沫或带有病毒之苍蝇叮爬过的食物，经鼻腔、口腔传染给健康儿童，也可因直接接触而传染。
手足口病是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道。
1957年新西兰首次报道该病。
1958年分离出柯萨奇病毒，1959年提出手足口病命名。
早期发现的手足口病的病原体主要为Cox A16型，1969年EV71在美国被首次确认。
此后EV71感染与Cox A16感染交替出现，成为手足口病的主要病原体。
20世纪70年代中期，保加利亚、匈牙利相继暴发以中枢神经系统为主要临床特征的EV71流行，1975年保加利亚报告病例750例，其中149人致瘫，44人死亡。
1994年英国发生一起由Cox A16引起的手足口病暴发，患者大多为1-4岁婴幼儿，大部分病人症状较轻。
英国1963年以来的流行病学数据显示，手足口病流行的间隔期为2-3年。
20世纪90年代后期，EV71开始东亚地区流行。
1997年马来西亚发生了主要由EV71引起的手足口病流行，4-8月共有2628人发病，4-6月有29例病人死亡。
日本是手足口病发病较多的国家，历史上有过多次大规模流行，1969~1970年的流行以CoxA16感染为主，1973和1978年的2次流行则由EV71引起，1997~2000年手足口病在日本再度活跃，EV71、CoxA16病毒均有分离。
20世纪90年代后期，EV71开始肆虐东亚地区。
1997年马来西亚发
生了主要由EV71引起的手足口病流行，4~8月共有2628例发病，仅4~6月就有29例病人死亡，死者平均年龄1.5岁。
1998年我国台湾省发生EV71引起的手足口病和疱疹性咽峡炎暴发流行，在6月和10月两波流行中，共监测到129106例，重症病人405例，死亡78例，死亡病例大多为5岁以下的儿童，并发症包括脑炎、无菌性脑膜炎、肺水肿或肺出血、急性软瘫和心肌炎等。
综上所述，肠道病毒71型/柯萨奇病毒A16型/通用型肠道病毒RNA联合检测，主要用于儿童手足口病临床分型及诊断，为治疗方案的确定和临床用药提供依据。