一氧化氮(Nitric oxide ,NO)含量测定试剂盒说明书
s0024总一氧化氮检测试剂盒
(弱)(P0013D)或Western及IP细胞裂解液(P0013)进行裂解。对于尿液样品，通常需要用水稀释10-50倍后检测。不宜使用肝
素抗凝的血浆，肝素抗凝的血浆在和Griess Reagent反应时会产生沉淀。
2. 稀释标准品：
用样品所使用的溶液把10mM KNO2稀释成2、5、10、20、50微摩尔/升。例如样品为细胞裂解液，则用该裂解液稀释标准 品；样品为细胞培养液，则用该培养液稀释标准品。如果样品为血清，则可以简单地使用PBS或生理盐水等适当溶液稀释
¾ 本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH depedent nitrate reductase)。高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消 除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法， 使检测结果更加准确。
(NO荧光探针)(S0019)。
包装清单：
产品编号 S0024-1 S0024-2 S0024-3 S0024-4 S0024-5 S0024-6 S0024-7 S0024-8 S0024-9
—
产品名称 样品稀释液
NADPH FAD
Nitrate Reductase LDH Buffer LDH
KNO2 (10mM) Griess Reagent I Griess Reagent II
¾ 对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-50微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。浓度过高的样品可以适当稀释后 再进行检测。
¾ 样品范围广，可以检测细胞、组织、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。酚红和10%血清对 测定无明显干扰。
¾ 样品需要量少。根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。 ¾ 检测速度快，仅需约45分钟即可完成检测。 ¾ 本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧. 样品处理： 含有高浓度蛋白的样品例如血清、含有高浓度血清的细胞培养液，在加入Griess Reagent I后可能会产生沉淀。可以取50微 升样品，加入50微升Greiss Reagent I进行测试，观察是否产生沉淀。如果产生沉淀，则可以把样品沸水浴加热5分钟，以 变性蛋白，然后12,000g离心5分钟，取上清用于后续的测定。对于细胞或组织样品可以用碧云天生产的RIPA裂解液
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
碧云天生物技术一氧化氮检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。
检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。
样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。
4ºC 避光保存，半年有效。
注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。
不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。
推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。
人一氧化氮NOELISA试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
一氧化氮安全技术说明书
操作注意事项：
严加密闭，提供充分的局部排风和全面通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴自吸过滤式防毒面具（半面罩），戴化学安全防护眼镜，穿透气型防毒服，戴防化学品手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。远离易燃、可燃物。防止气体泄漏到工作场所空气中。避免与卤素接触。搬运时轻装轻卸，防止钢瓶及附件破损。配备相应品种和数量的消防器材及泄漏应急处理设备。
第三部分 危险性概述
危险性类别：
第类 有毒气体
侵入途径：
吸入
健康危害：
本品不稳定，在空气中很快转变为二氧化氮产生刺激作用。氮氧化物主要损害呼吸道。吸入初期仅有轻微的眼及呼吸道刺激症状，如咽部不适、干咳等。常经数小时至十几小时或更长时间潜伏期后发生迟发性肺水肿、成人呼吸窘迫综合征，出现胸闷、呼吸窘迫、咳嗽、咯泡沫痰、紫绀等。可并发气胸及纵隔气肿。肺水肿消退后两周左右可出现迟发性阻塞性细支气管炎。一氧化氮浓度高可致高铁血红蛋白血症。慢性影响：主要表现为神经衰弱综合征及慢性呼吸道炎症。个别病例出现肺纤维化。可引起牙齿酸蚀症。
储存注意事项：
储存于阴凉、通风的有毒气体专用库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。应与易（可）燃物、卤素、食用化学品分开存放，切忌混储。储区应备有泄漏应急处理设备。
第八部分 接触控制/个体防护
mAC(mg/m3)：
-
PC-TWA(mg/m3)：
15
PC-STEL(mg/m3)：
30*
TLV-C(mg/m3)：
-93
临界压力(mPa)：
辛醇/水分配系数的对数值：
无资料
闪点(℃)：
无意义
引燃温度(℃)：
无意义
爆炸上限[％(V/V)]：
人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒
人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒人试剂盒说明书,人血清一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血清试验原理：NO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将NO和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中NO的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
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货号：QS1804 规格：50管/24样一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。
它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理：
NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO
2—，在酸性条件下，NO
2
—与重氮盐磺酸胺生成重氮化
合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理：
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
3.体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
NO含量计算：
标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986
1、组织样品：
NO含量定义：25℃时，每克样品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO
2
—，相当于1μmoL NO。
（1）按样本质量计算
第1页，共2页
NO含量（μmoL/g）=（A
+0.0103）÷0.016×V反总÷（V样÷V样总×W）×10-3
550
+0.0103）÷W
= 0.14×（A
550
（2）按样本蛋白浓度计算
+0.0103）÷0.016×V反总÷（V样×Cpr）×10-3
NO含量（μmoL/mg prot）=（A
550
+0.0103）÷Cpr
= 0.14×（A
550
2、其他样品：
—，相当于1μmoL NO。
NO含量定义：25℃时，每升样品15min生成1μmoL NO
2
NO含量（μmoL/L）=（A
+0.0103）÷0.016×V反总÷V样
550
+0.0103）
=140×（A
550
V反总：反应总体积，0.9mL；V样：反应中样品体积，0.4mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
1.试剂盒2-8℃保存。
2.尽量使用新鲜样品进行检测，试剂三有腐蚀性，操作时请做好防护措施。
3.若检测出得OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释，并在计算公式中除
以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。
4.最低检出限为0.65μmoL/L。
第2页，共2页。