试剂盒使用说明书
一步法RT-PCR试剂盒使用说明书
一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装保存条件-20℃产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。
本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。
经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。
该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。
SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。
PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。
独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。
使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
2. 耐热性及稳定性强。
3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。
4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。
使用方法1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30s。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。
AxyPrep PCR 清洁试剂盒说明书
AxyPrep PCR清洁试剂盒本试剂盒适合从PCR、酶促反应、测序反应的反应液中提取多至8 μg DNA（大于75bp），回收率为70-90%。
纯化的DNA不含引物、酶蛋白及单核苷酸。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Cat. No. AP-PCR-4 AP-PCR-50 AP-PCR-250制备次数 4 preps 50 preps 250 prepsPCR制备管 4 50 2501.5 ml离心管 4 50 2502 ml离心管 4 50 250Buffer PCR-A 2 ml 20 ml 100 mlBuffer W2 concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 mlEluent 1 ml 5 ml 25 ml说明书 1 1 1Buffer PCR-A：DNA结合溶液。
室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%无水乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH8.5，室温密闭贮存。
二、注意事项1. Buffer PCR-A含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
2. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH8.5洗脱液中保存。
三、实验准备1. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
2. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
3. 使用前，检查Buffer PCR-A是否出现沉淀，若出现沉淀，应于65°C温浴加热至沉淀完全溶解并冷却至室温后再使用。
4. 将Eluent或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
四、操作步骤用户可以选择负压法或离心法。
爱德基游离DNA提取试剂盒使用说明书
游离DNA提取试剂盒使用说明书【产品名称】通用名称：游离DNA提取试剂盒英文名称：Cell Free DNA Extraction Kit【包装规格】24人份/盒、48人份/盒、96人份/盒【预期用途】用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。
其处理后的产物用于临床体外检测使用。
【实验原理】本试剂盒采用具有分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，在特定的盐离子浓度和pH值条件下，磁珠特异的吸附小片段的游离DNA，不吸附基因组DNA。
能够更好的适用于产前无创诊断和癌症基因分析诊断。
【主要组成成分】另需要准备的试剂及注意事项无水乙醇（分析纯）、超纯水或去离子水。
【储存条件及有效期】试剂盒储存在常温，有效期12个月。
【适用仪器】高速冷冻离心机、真空负压装置及真空泵【样品要求】1用装有EDTA抗凝剂的采血管取病人或孕妇（孕12-24周）5 mL全血，上下颠倒混匀，4℃运输。
2 在离心机中3000 rpm 的转速下，离心10min 分离血清。
按2mL/支收集血清,直接进入下一步实验或-20℃储存。
●使用前用无水乙醇稀释漂洗液，做好标记√。
●现配制80%乙醇：取20mL超纯水，加入80mL的无水乙醇，上下颠倒混匀。
【实验步骤】1. 血清/血浆样本预处理取1mL血清/血浆12000rpm 离心10 min，收集上清，用于游离核酸的提取。
注意:也可将血清/血浆样本在6000×g下离心30min以去除剩余的血细胞和细胞碎片。
2.蛋白酶K处理2.1 按照下表指示顺序，添加试剂到15mL离心管：试剂体积血浆/血清体积1mL 2mL 4mL 10ml蛋白酶K(20mg/mL) 20μL 40μL 80μL 200µL20%SDS 130μL 260μL 520μL 1040µLtotal 1.15mL 2.30mL 4.60mL 11.24 ml注意：不要将SDS直接加到蛋白酶K中，以避免蛋白酶K失去活性。
试剂盒使用说明书
人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)水平。
用纯化的人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)，再与HRP标记的G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
新冠抗原检测试剂盒使用说明书
新冠抗原检测试剂盒使用说明书全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：新冠抗原检测试剂盒使用说明书一、检测试剂盒概述新冠抗原检测试剂盒是用于快速检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗原的一种便携式医疗设备。
该检测试剂盒采用免疫层析法，通过检测样本中的SARS-CoV-2抗原来判断被检测者是否感染新冠病毒。
该检测试剂盒具有快速、准确、便捷的特点，可广泛应用于各类医疗机构、边防口岸、社区防疫等场所，为防控疫情提供重要支持。
二、检测步骤1.准备工作- 打开检测试剂盒包装，取出所有需要的试剂盒、吸管、吸头和样本采集棒等物品。
- 将样本采集棒插入患者鼻腔或咽喉进行采样，确保采集到足够的样本。
2.操作步骤- 打开试剂盒，将样本采集棒放入样本溶解液中，反复挤压样本采集棒，确保样本完全溶解。
- 使用吸管吸取样本溶解液，滴入试剂盒中指定的孔里。
- 等待约15-20分钟，观察结果。
阳性结果为对应的孔出现两道线，阴性结果为仅出现一道线，无效结果为未出现任何线。
三、注意事项1.操作过程中需穿戴好口罩、手套等防护用具，避免交叉感染。
2.操作过程中要避免在不洁净的环境下进行，确保操作台面清洁。
3.请勿将试剂盒暴露在高温、潮湿、阳光直射等条件下，以免影响检测结果准确性。
4.请勿重复使用试剂盒或混用不同品牌的试剂盒，以免造成检测结果错误。
5.请按照操作说明进行操作，避免操作失误导致检测结果不准确。
四、结果解读1.阳性结果：指试剂盒检测出样本中存在SARS-CoV-2抗原，即被检测者可能已感染新冠病毒，应立即报告相关部门进行隔离治疗。
2.阴性结果：指试剂盒未检测出样本中存在SARS-CoV-2抗原，即被检测者目前未感染新冠病毒，但可能存在假阴性情况，需谨慎对待。
3.无效结果：指试剂盒未显示出任何结果，可能是操作失误或试剂盒受损导致，需重新进行检测。
五、贮存与运输1.试剂盒应存放在阴凉干燥处，避免高温、潮湿、日光直射等条件。
2.试剂盒在运输过程中需轻拿轻放，避免碰撞损坏。
甲型乙型抗原检测试剂盒使用说明书
甲型乙型抗原检测试剂盒使用说明书甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒是一种用于检测甲型和乙型流感病毒抗原的体外诊断试剂。
以下是该试剂盒的使用说明书：一、产品名称甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）二、适用范围本试剂盒用于体外定性检测人鼻咽拭子或唾液样本中甲型和乙型流感病毒抗原。
三、使用方法1. 打开试剂盒，取出采样拭子，伸入鼻腔或口腔采集样本，并放入配套的洗脱液中旋转混合均匀。
2. 取出检测卡，将混合好的洗脱液滴入检测卡的加样孔中，注意不要超过MAX线。
3. 等待15分钟，观察检测卡的反应结果。
4. 根据结果判断是否感染甲型或乙型流感病毒。
四、结果解释若检测卡上仅C线显示红色，表示未感染甲型或乙型流感病毒；若C线和T 线均显示红色，表示感染甲型或乙型流感病毒。
本试剂盒灵敏度高，可有效检出甲型和乙型流感病毒抗原。
但请注意，该试剂盒仅用于体外诊断，不能替代专业医疗机构的诊断结果。
如有疑虑，请及时就医。
五、注意事项1. 本试剂盒仅供一次性使用，用后请销毁。
2. 采样时应避免污染，以免影响检测结果。
3. 试剂盒应存放在2～30℃干燥处，避免阳光直射和潮湿环境。
4. 本试剂盒为体外诊断试剂，不能替代专业医疗机构的诊断结果。
如有疑虑，请及时就医。
5. 不同批次的产品可能存在差异，请按照产品说明书的指引正确使用。
6. 如有任何疑问或需要技术支持，请联系我们的客户服务部门。
以上为甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒的使用说明书，供您参考。
如有任何疑问或需要更多信息，请咨询专业医疗人员或查看产品附带的使用说明书。
新冠试剂盒说明书
新冠试剂盒说明书随着新冠肺炎疫情的爆发，新冠病毒检测已成为重要的防控手段之一。
新冠试剂盒是一种用于检测新冠病毒的工具，是目前新冠病毒检测的重要装备之一。
本文将详细介绍新冠试剂盒的说明书。
一、产品概述试剂盒类型：一次性新冠病毒抗体快速检测试剂盒产品规格：25T/盒试剂盒订货号：XXX 保质期：18个月呈现方式：抗体/抗原检测试纸条二、试剂盒原理试剂盒采用免疫层析法，检测人体血清中的新冠病毒抗体。
检测原理：通过血清中的新冠病毒抗体与试剂盒中特定抗原发生反应，产生特定的颜色反应。
其中，IgM抗体为本次感染时出现的抗体，IgG抗体则是在感染后逐渐生成的抗体。
三、试剂盒使用方法1、采集血样：抽取手指端的血，利用外科消毒棉球在手指处消毒。
然后使用专用采血针（如抽血针）采集足够的血液，并用小吸管吸收1滴血液，并直接滴在检测试纸上。
2、滴加检验液：将小瓶检验液中的滴头压在检测试纸的样品孔上方，挤出1-2滴液体进行检测。
3、等待时间：在摆正的检测试纸表面上密封1滴清水样品，开始进行反应观察。
阅读时间参考如下：IgM+IgG: 10分钟 IgM: 15分钟 IgG: 15分钟四、试剂盒结果分析1、病毒抗体检测结果解释（1）阴性：样品中没有检测到新冠病毒抗体（2）弱阳性：仅检测到IgM阳性，IgG 阴性（3）阳性：样品中检测到IgM和/或IgG阳性2、病毒抗体检测故障及解决方案（1）无检测线（T线）出现：检测试纸没有模板反应解决方案：重新进行检测，更换试剂盒（2）无控制线（C线）出现：检测出错解决方案：重新进行检测，更换试剂盒（3）C线出现，T线没有出现：样品中没有检测到病毒抗体解决方案：重新进行检测，注意血液搜集（4）IgM线出现，IgG线没有出现：样品中有新冠病毒抗体IgM解决方案：如果已经确诊新冠病毒感染，则无需进一步检查；如果没有确诊，隔离检查（5）IgM和IgG线同时出现：样品中有新冠病毒抗体IgM和IgG解决方案：如果已经确诊新冠病毒感染，则无需进一步检查；如果没有确诊，隔离检查。
DNF-900 35-500bp试剂盒说明书
似的 PCR 板，但是质量比较差的 PCR 板可能会对毛细管造成损伤。
DNF-900 使用说明书
重要！如果即将使用不同的供应商提供的 PCR 板，或不同类型的 PCR 板，联系 AATI 确认
这种 PCR 板是否适用。使用上述提到的不同尺寸的 PCR 板可能会对毛细管阵列的毛细管头
造成损伤。
35bp/50bp Marker 准备
图 2.Prime/Purge 菜单
Inlet Buffer 准备 1.将 5X 930 双链 DNA Inlet Buffer 储存在 4℃。不要冰冻。 2.在混合使用之前，使 5X 930 双链 DNA Inlet Buffer 的温度达到室温。 3.在一个干净的容器里，每 80ml 次微米过滤水加入 20ml 5X 930 双链 DNA Inlet Buffer。摇 动混匀。如果需要的话，可以把整个瓶子的 5X 930 双链 DNA Inlet Buffer 混合成 1X 的浓度 并储存在 4℃。
毛细管清洗液准备：
DNF-900 使用说明书
1.5X 毛细管清洗液储存温度是室温。不要冷冻或冷藏。
2.在一个干净的容器里（比如 50 或 250ml 圆锥形离心管），每 80ml 次微米过滤水加入 20ml
5X 毛细管清洗液。摇动混匀。如果需要的话，可以把整个瓶子的 5X 毛细管清洗液稀释至
1X，储存在室温条件下。
注意：胶和染料配制好 2 周之后，检测灵敏度降低。为了达到最大的检测灵敏度，胶和染料
混合物最好一天一配。不建议使用超过 2 周的胶和染料的混合物。
5. 这个试剂盒提供了 2 种不同的毛细管清洗方法，Full Conditioning 和 Gel Prime Only（图
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人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)水平。
用纯化的人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)，再与HRP 标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)含量。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：18ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50µl，浓度分别为12ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml，1ng/ml）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%检测范围：0.3ng/ml-16ng/ml保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月Human Epithelial neutrophil activating peptide78(ENA-78)FOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name：Human ENA-78ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of ENA-78concentrations in Human serum,blood plasma,and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Human ENA-78level in the sample，use Purified Human ENA-78antibody to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody, then add ENA-78to wells,Combined antibody which With HRP labeled goat anti-Human become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm.The concentration of ENA-78in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitMaterials provided with the kit 48determinations96determinationsStorageUser manual11Closure platemembrane22Sealed bags11Microelisa stripplate112-8℃Standard：18ng/ml0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1bottle 1.5ml×1bottle2-8℃HRP-Conjugatereagent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen SolutionA3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen SolutionB3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃wash solution （20ml×20fold）×1bottle（20ml×30fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serum-coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-minat the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix10-20mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue asterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components, centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared,Centrifugal again.5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）,Rapidly frozen with liquid nitrogen,maintain samples at 2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to therelevant literature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t,specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRPactive.Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard:set10Standard wells on the ELISA plates coated,add Standard100µl to the first and the second well,then add Standard dilution50µl to the first and the second well,mix;take out100µl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately.then add Standard dilution50µl to the third and the forth well,mix;then take out50µl from the third and the forth well discard,add 50µl to the fifth and the sixth well,then add Standard dilution50µl to the fifth and the sixth well,mix;take out50µl from the fifth and the sixth well and addto the seventh and the eighth well,then add Standard dilution50µl to the seventh and the eighth well,mix;take out50µl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well,add Standard dilution50µl to the ninth and the tenth well,mix,take out50µl from the ninth and the tenth well discard(add Sample50µl to each well after Diluting,(density: 12ng/ml,8ng/ml,4ng/ml,2ng/ml,1ng/ml)2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same). testing sample well.add Sample dilution40µl to testing sample well,then add testing sample10µl(sample final dilution is5-fold),add sample to wells, don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30 min at37℃.4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing, add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50µl to each well,except blank well.7.incubate：Operation with3.8.washing：Operation with5.9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50µl to each well,Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes in the room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the waterhelps dissolve when dilute.Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,avoids the experimental error.add sample within5mins,if the number of sample is much,recommend to use Volley.4.if the testing material content is excessively higher(The sample OD isbigger than the first standard well),please dilute Sample(n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoidcross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly,The test result determinationmust take the microtiter plate reader as a standard.8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according toinfective material process.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateTake the standard density as the horizontal,the OD value for the vertical,draw the standardcurve on graph paper,Find out the correspondingdensity according to the sample OD value by theSample curve,multiplied by the dilution multiple,or calculate the straight line regression equationof the standard curve with the standard densityAssay range0.3ng/ml-16ng/mlStorage and validity 1．Storage：2-8℃. 2．validity：six months.。