假单胞菌属
假单胞菌属检验标准操作规程
假单胞菌属检验标准操作规程1．概述假单胞菌属包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌等。
铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种。
2．标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3．鉴定3.1形态与染色革兰阴性杆菌。
3.2培养特性在血琼脂平板上35℃培养18~24小时，形成蓝绿色、透明溶血环的菌落，有生姜味。
在麦康凯琼脂平板上，可形成5种不同的菌落。
①典型型：菌落不规则，边缘呈伞状伸展；②大肠菌样型：菌落圆形凸起，无色透明，似大肠埃希菌菌落；③粗糙型：菌落呈钮扣状，表面粗糙，或菌落中央隆起边缘扁平；④黏液型：菌落光滑，隆起，呈粘液状，嵌入培养基中，不易挑起，似肺炎克雷伯菌，但是无色；⑤侏儒型：生长缓慢，培养18小时尚不见菌落，24小时后才有细小菌落。
3.3生化特性氧化酶试验阳性；分解葡萄糖，不分解乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖；动力、枸橼酸盐、精氨酸双水解酶和硝酸盐还原试验均为阳性；吲哚、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶试验阴性。
3.4鉴别要点3.4.1 本菌属特征蓝绿色或荧光色菌落、有生姜味，动力和氧化酶试验阳性，在4℃时不生长而在42℃时可以生长。
3.4.2 与荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的鉴别三者均可产生荧光色素，但铜绿假假单胞42℃时生长，后两者则不能生长。
3.5 操作步骤3.5.1 氧化酶试验参见《氧化酶试验标准操作规程》3.5.2 鉴定从麦康凯琼脂平板上挑取可疑菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4．质控参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。
5．质量控制见《质量管理程序》6．检验结果解释与分析感染铜绿假单胞菌的病人，经抗生素治疗3-4日后，易产生耐药性。
因此对铜绿假单胞菌要经常做抗生素药敏试验。
7．临床意义铜绿假单胞菌广泛分布于水、空气、土壤以及正常人体皮肤、呼吸道与肠道黏膜中，为条件致病菌。
当手术、化疗、放疗、激素治疗等原因使人体抵抗力下降时容易引起感染。
假单胞菌属检验方法
假单胞菌属检验方法
样品先在GVC增菌液中进行增菌，然后划线接种于PDA平板，挑选可疑菌落进行革兰氏染色观察及氧化酶试验。
如为革兰氏阴性小杆菌，氧化酶试验阴性，再接种于卵黄琼脂平板和SS平板。
从卵黄琼脂平板上挑取卵磷脂酶阳性、并带有彩虹环的单个菌落，接种于马铃薯－葡萄糖琼脂斜面，获得纯培养物。
将纯培养物分别接种于 Hugh-Leifson培养基，蛋白胨水，缓冲蛋白胨水，西蒙氏柠檬酸盐培养基，糖发酵管及苯丙酸培养基，进行生化反应试验。
同时利用纯培养物进行血清分型鉴定。
初步鉴定为椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌株，进行产毒培养和小鼠毒力试验，同时进行米酵菌酸
的测定
1
2。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定
铜绿假单胞菌的菌种鉴定全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，属于假单胞菌属（Pseudomonas），广泛存在于自然界中，是一种耐受力很强的细菌。
铜绿假单胞菌在人类和动植物体内都有可能成为病原菌，引起多种感染疾病，如呼吸道感染、尿路感染、皮肤感染等。
对铜绿假单胞菌的菌种鉴定十分重要。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定主要包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等。
形态学观察是最为简单直观的方法，通过观察细菌在琼脂培养基上的形态特征来初步鉴定。
铜绿假单胞菌在琼脂培养基上形成典型的青绿色凝块状菌落，通常呈金黄色至淡黄色，具有辛辣气味。
除了形态学观察外，生理生化特性检测也是菌种鉴定的重要方法之一。
铜绿假单胞菌具有一系列特殊的生理生化特性，如利用氧化物作为唯一氧化剂和膜脂组成特殊等。
铜绿假单胞菌产生溶血素、胞外聚合物酶、脂肪酶等多种外源酶，可以降解寡糖、脂质等物质。
分子生物学方法也成为现代菌种鉴定的重要手段。
通过PCR扩增和测序技术，可以对靶基因进行测序分析，比如16S rRNA基因序列分析。
铜绿假单胞菌16S rRNA序列具有较高的保守性，同时又有足够的变异性，能够帮助界定种和属的分类关系。
在进行铜绿假单胞菌菌种鉴定的过程中，需特别注意以下几点：1. 选择合适的菌落：铜绿假单胞菌菌落为青绿色，有金黄色至淡黄色的边缘。
需避免选择其他青绿假单胞菌属菌种带来的干扰。
2. 确认生理生化特性：对于一些特殊的生理生化特性，如氧化物利用情况、酶产生等，可以通过专门的生化试验进行验证。
3. 结合分子生物学方法：如果需要进一步确定菌种的归属，可结合分子生物学方法进行16S rRNA序列分析，加深对菌种的认识。
铜绿假单胞菌的菌种鉴定是一项重要且复杂的工作，需要结合形态学观察、生理生化特性检测和分子生物学方法等多种手段进行综合分析。
只有准确鉴定出铜绿假单胞菌的菌种，才能更好地开展相关的医学、环境等研究工作，为防治相关感染病害提供科学依据。
假单胞菌属菌落形态
假单胞菌属菌落形态
假单胞菌属是一类革兰氏阴性的细菌，通常具有典型的菌落形态。
以下是假单胞菌属常见的菌落形态特征：
1. 大小：假单胞菌属的菌落通常较大，直径可达1-2毫米。
2. 形状：假单胞菌属的菌落常呈圆形或半圆形。
3. 颜色：假单胞菌属菌落的颜色多样，通常为白色、黄色、橙色或绿色等。
4. 质地：假单胞菌属菌落质地较软，触摸时较松散。
5. 光泽：假单胞菌属菌落通常具有光滑的表面，呈半透明或透明状。
6. 边缘：假单胞菌属菌落的边缘较整齐，呈光滑或带状。
总体来说，假单胞菌属的菌落形态具有较大、圆形、多色、质地松散、颜色透明等特征。
但需要注意的是，不同的假单胞菌属菌株可能会有一定的差异，具体的菌落形态可能会略有不同。
因此，在鉴定假单胞菌属菌株时，需结合其他生理生化特征和分子生物学方法进行综合分析。
假单胞菌属
铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)
检验结果分析与报告： 诊断一定要与临床表现相结合 治疗过程中，3－4天后重复药敏测试
铜绿假单胞菌（P. aeruginosa)
耐药机制：
①产酶：金属酶，OXA酶
②外膜蛋白的改变（Outer membrane proteins，OMP）
为主要机制 ③主动泵出机制：对喹诺酮类，
假单胞菌属 (Pseudomonas)
一、 概述 1. 分类 2. 临床意义 3. 微生物特性 4.微生物检验 (1)检验程序 (2)鉴定 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test)
1.分类
• 假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA
同源群有关的种
• 生长温度范围广，最适生长温度为35℃
• 产生各种水溶性色பைடு நூலகம்：绿脓素、脓玉红素、荧光
素、脓褐素
• 对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药
4.微生物检验
• 检验程序 • 鉴定
• 药物敏感性试验按NCCLS（National
Committee for Clinical Laboratory Standards）推
MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj
④整合子：1类，3类
• 一群需氧、不发酵葡萄糖
• 无芽胞，有鞭毛
• 氧化酶阳性的革兰阴性杆菌
• 多为条件致病菌
2.临床意义
• 假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染 中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿 假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽 窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌等
3.微生物特性
• 革兰阴性、无芽胞、专性需氧
假单胞菌属
致病性与免疫性
绿脓杆菌能产生多种与毒力有关的物质，如内毒素、外毒素A、弹性蛋白 酶、胶原酶、胰肽酶等，其中以外毒素A最为重要。
绿脓杆菌外毒素A为一种热不稳定的单链多肽，分子量约66，000，经 甲醛或戊二醛处理可脱毒为类毒素，并被特异性抗毒素中和。毒性强，注 入动物后，主要靶器官肝脏可出现细胞肿胀、脂肪变性及坏死；其他脏器 病变有肺出血和肾脏坏死。
患者感染后可产生特异性抗体，有一定的抗感染作用。应用抗绿脓杆 菌免疫力血清可降低病人继发败血症的发生率和病死率。
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生活习性
•菌为专性需氧菌，生长温度范围25~42℃，最适生长温度为 25~30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用 以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿 脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等。 在血平板上会有透明溶血环该菌在4℃不生长而在42℃可以生长 。该菌在4℃不生长而在42℃可以生长。本菌为条件致病菌，是 医院内感染的主要病原菌之一。
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适合治疗疾病
目的观察临床分离的24株铜绿假单胞菌(PA)对致病性真菌(如白色 念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌 、葡萄牙念珠菌等)的抑制作用。方法收集临床上24株PA,通过革 兰染色、氧化酶试验及API 20NE(法国梅里埃公司产品)进行鉴定; 通过纸片法、十字交叉划线法及共培养检测PA对致病性真菌的抑 制作用。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对有抑 制作用的PA和无抑制作用的PA分泌蛋白进行电泳。结果 24株PA中 部分菌株对常见的致病性真菌有显著抑制作用,而部分PA菌株有一 定抑制作用,另外一些完全没有抑制作用;共孵育试验显示PA可能 是通过抑制真菌的菌丝生长而产生抑制作用。SDS-PAGE显示有抑 制作用的PA和无抑制作用的PA分泌物蛋白间存在明显差异。结论 PA对常见的致病真菌具有抑制作用,推测可能与抑制真菌的菌丝生 长及分泌抑制真菌生长的各种蛋白类物质有关。
假单胞菌属解析
尿、分泌物等临床标本可直接接种在血平板上，血液标本可先于 20℃~30℃进行增菌后再接种血平板分离。不能在35℃或37℃进行 培养，以免发生假阴性。本菌鞭毛3根以上，42℃不能生长，不产 生绿脓素，可以与铜绿假单胞菌相区别。本菌的最低鉴定特征有： 单端鞭毛3根以上，动力阳性；氧化分解葡萄糖，不分解麦芽糖， 氧化酶阳性，精氨酸水解阳性，明胶液化阳性；可产生荧光素， 不产生绿脓素，4℃生长，42℃不生长。
铜绿假单胞菌耐药机制的研究, 对监控医院内感染菌群、 检测其 耐药性、 指导抗生素的合理利用极为重要。同时, 由于铜绿假单 胞菌分布广泛, 可以推知其耐药机制在其他病原菌中也极可能广泛 存在, 对铜绿假单胞菌耐药机制的研究对其他许多病原菌的控制也 具有指导意义。
铜绿假单胞菌的耐药机理主要有 4 种, 一是产生抗生素灭活酶或 抗生素修饰酶; 二是改变抗菌药物的作用靶位, 逃避抗菌药物的抗 菌作用; 三是膜屏蔽与主动外排, 限制药物到达作用靶位; 四是形 成生物膜。
被检验的肉含有荧光假单胞菌
2．临床意义
荧光假单胞菌（P.fluorescens）存在于土壤和水等环境中，常与
食物（鸡蛋、血、牛乳等）腐败有关，可作为咽部的正常菌群存 在，是人类少见的条件致病菌，偶从泌尿道感染病人尿中分离出。 由于具有嗜冷性，可在冰箱储存血液中繁殖，若输入含有此菌的 血库血液，可导致病人不可逆性的休克而死亡。
铜绿假单胞菌－防治原则
加强一些特殊病房及检查室、诊疗器械的消毒管理。 避免医务人员与病人之间的交叉感染。 治疗过程中，应合理选择有效抗生素。
铜绿假单胞菌的耐药机制研究
铜绿假单胞菌常引起菌血症、肺炎、泌尿系统感染 烧伤感染和囊 性纤维化继发感染等疾病, 由于其耐药菌株不断产生, 耐药性不断 变化, 已成为医院内获得性感染最严重的条件致病菌之一。
铜绿假单胞菌解析
• 书本P163 5.26
样 品 10g
10 ml
BL
100 ml
缓冲液
供试 液
10ml
BL 阳性
BL 阴 性 十六烷基三甲基溴化铵平板
培养温度： 36℃
营养琼脂斜面
培养时间： 十六烷基三甲基溴化铵平板 18~24h （必要时可 延长至48h）
增菌培养
供试品
供试液
胆盐乳糖增菌液
36±1℃ 18~24h
培养基成分：
PDP斜面，是否有色素，有， 用氯仿3-5ml萃取，用无菌 玻璃棒搅碎培养基、混匀， 色素完全在氯仿层。吸管 把氯仿层移到另一试管， 加入盐酸1M1ml，静置后， 盐酸出现粉红为阳性，无 粉红为阴性，阴性斜面培 养1-2天再重新做一遍。如 果仍是阴性。做下一步试 验。 绿脓菌素从有机相转到酸性 水相中会由蓝绿色变为粉 红色。
假单胞菌属
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 革兰氏阴性 细胞单个 直的或弯的杆菌 0.5—1 × 1.5—4微米 单鞭毛或多鞭毛 有机化能异养菌 呼吸代谢，永不发酵 严格好氧菌
模式种：铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌
• 1.0.5-0.8*1.5-3.0微米的杆菌 • 2.细胞单个 • 3.成对或成短链。以极生的单鞭毛运动（有 二个或二个以上的极生鞭毛的细胞，但不 常见） • 4.在中性或碱性培养基种呈蓝色：在酸性培 养基种呈红色 • 5.专性好氧，在硝酸盐培养基中除外。
• 各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可 能发生耐药。初代敏感菌株在治疗3－4天后可能发 生耐药，有必要重复分离菌株 • 本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基 糖苷类联合治疗
鉴定结果分析
• 从临床标本中分离出来的铜绿假单 胞菌，需要排除污染因素 • 铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续 三次痰培养阳性才能确立。
假单胞菌属
铜绿假单胞菌－－检验程序
涂片 染色镜检 标本 分离培养 血平板） （血平板） 血标本 增菌
可疑菌落（性状、色素） 可疑菌落（性状、色素） 涂片镜检 氧化酶 菌落特征 绿脓素 气味 色素鉴定 生化反应 42℃生长 ℃ 分型
初步鉴定
最后鉴定
铜绿假单胞菌－－防治原则 铜绿假单胞菌－－防治原则
加强一些特殊病房及检查室、诊疗器械的 消毒管理。 避免医务人员与病人之间的交叉感染。 治疗过程中，应合理选择有效抗生素。
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假单胞菌属
假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性分 假单胞菌科细菌根据rRNA-DNA同源性分 为5群，其中Ⅰ群属于假单胞菌属，共7种 群，其中Ⅰ群属于假单胞菌属，共7 细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 多为条件致病菌，是医院感染的主要病原 菌
假单胞菌属共同点
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单或丛 鞭毛 专性需氧 营养要求不高 产生水溶生长性色素
铜绿假单胞菌－－ 铜绿假单胞菌－－形态染色
铜绿养要求不高 最适温度35℃ 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 生长，4 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，培 养物呈蓝绿色。 培养物有生姜气味
铜绿假单胞菌－－致病性 铜绿假单胞菌－－致病性
为条件致病菌，是医院内感染的主要细菌 之一。 本菌易污染眼药水等眼用药物。 本菌还可以引起婴儿严重的流行性腹泻。
铜绿假单胞菌－－微生物学检查 铜绿假单胞菌－－微生物学检查
采取浓汁，创面渗出液，痰，尿，血液等 标本，或在可疑物品器械上取材，在利用 血琼脂培养基上分离培养细菌。 根据菌落特点，色素，生化反应等进行鉴 定。 运用血清学实验，噬菌体分型做医院内感 染的追踪调查
假单胞菌属 生产环境
假单胞菌属生产环境英文回答：Pseudomonas is a genus of bacteria that is commonly found in various environmental settings. These bacteria are known for their versatility and adaptability to different conditions. As a result, they can thrive in a wide range of environments, including soil, water, and even on the surfaces of plants and animals.One example of a Pseudomonas species that is commonly found in the environment is Pseudomonas aeruginosa. This bacterium is often found in soil and water, and it has the ability to form biofilms, which are communities of bacteria that are attached to surfaces. Biofilms can be found on rocks, pipes, and even on medical devices such as catheters. Pseudomonas aeruginosa is also known for its ability to resist antibiotics, making it a common cause of infectionsin hospitals.In addition to Pseudomonas aeruginosa, there are many other species of Pseudomonas that can be found in the environment. For example, Pseudomonas fluorescens is commonly found in soil and has been used in agriculture asa biocontrol agent to protect plants from pathogens. Pseudomonas putida is another species that is often foundin soil and has the ability to degrade various pollutants, making it useful for bioremediation.Overall, Pseudomonas bacteria are highly adaptable and can survive in a wide range of environments. They play important roles in various ecological processes, such as nutrient cycling and degradation of organic matter. However, they can also be opportunistic pathogens, causinginfections in humans and animals.中文回答：假单胞菌属是一类常见于各种环境的细菌。
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恶臭假单胞菌
1.主要特征
革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌， 运动活泼。专性需氧，最适生长温度25℃~30℃， 42℃不生长，4℃生长不定，菌落与铜绿假单胞菌相 似，但只产生荧光素（青脓素），不产生绿脓素， 借此可与铜绿假单胞菌相区别，其陈旧培养物有腥 臭味。
2.临床意义
恶臭假单胞菌（P.putica）为鱼的一种致病菌，常 从腐败的鱼中检出，可作为人类咽部的正常菌群， 是人类少见的条件致病菌，偶从人类尿道感染、皮 肤感染和骨髓炎标本中分离出，分泌物有腥臭味。 3.微生物学检验
假单胞菌属是微生物的重要类群, 也是分布最广的微生物之一。多样 的生境不仅造就了假单胞菌拥有较广的生长温度、 pH值范围, 较多的 营养代谢类型, 同时也为人类提供了多样的遗传资源。 专性需氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌，呈杆状或略弯。 菌体大小(0.5～1)×(1.5～4)微米。具端鞭毛，能运动。 有些株产生荧光色素或（和） 红、蓝、黄、绿等水溶性色素，不发酵 糖类。 大多数菌的适温为30℃。DNA中的G+C克分子含量为58～70%。存在于土 壤、淡水、海水中。目前已确认有 29种，其中至少有3种对动物或人 类致病。
患有赤皮病的鱼，病源为荧光假单胞菌
荧光假单胞菌染色图片
4.荧光假单胞菌植物病害防治作用
荧光假单胞菌对多种植物病害具有防治作用，它首先 在植物根际定殖，然后靠噬铁索对铁离子的竞争和抗 生素的拮抗作用抑制病原菌的生长发育，保护植物体 免受病菌危害，荧光菌在根际的定殖能力与它同根系 分泌物的凝集能力有关，与它在根表的短期不可逆吸 附也有一定关系.荧光菌菌剂研究较多，目前最好的可 贮存一年.
被检验的肉含有荧光假单胞菌
2．临床意义 荧光假单胞菌（P.fluorescens）存在于土壤和水等环境中，常与 食物（鸡蛋、血、牛乳等）腐败有关，可作为咽部的正常菌群存 在，是人类少见的条件致病菌，偶从泌尿道感染病人尿中分离出。 由于具有嗜冷性，可在冰箱储存血液中繁殖，若输入含有此菌的 血库血液，可导致病人不可逆性的休克而死亡。 3．微生物学检验 尿、分泌物等临床标本可直接接种在血平板上，血液标本可先于 20℃~30℃进行增菌后再接种血平板分离。不能在35℃或37℃进行 培养，以免发生假阴性。本菌鞭毛3根以上，42℃不能生长，不产 生绿脓素，可以与铜绿假单胞菌相区别。本菌的最低鉴定特征有： 单端鞭毛3根以上，动力阳性；氧化分解葡萄糖，不分解麦芽糖， 氧化酶阳性，精氨酸水解阳性，明胶液化阳性；可产生荧光素， 不产生绿脓素，4℃生长，42℃不生长。
假单胞菌属
主讲：王国兴
内容提要
假单胞菌简介及分类 铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌的耐药机制研究 荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌 斯氏假单胞菌 产碱假单胞菌 假单胞菌与环境生物修复 假单胞菌的生物防治作用 假单胞菌与生物转化 假单胞菌的致病性 假单胞菌产生的抗生素研究
简介及分类
铜绿假单胞菌的耐药机理主要有 4 种, 一是产生抗生素灭活酶或 抗生素修饰酶; 二是改变抗菌药物的作用靶位, 逃避抗菌药物的抗 菌作用; 三是膜屏蔽与主动外排, 限制药物到达作用靶位; 四是形 成生物膜。
有研究显示，不合理的单药应用及长时间轮流使用多种抗菌 药物是导致泛耐药铜绿假单胞菌出现的重要因素。
5、防效不稳定．这是大部分生物防治研究在应用方面普 遍遇到的问题，荧光菌也不例外．应对菌株进行人工改良， 或采用混合群体，使之具有更好的抗菌能力和较强的适应 能力，发挥最大的防病潜力，在这一方面，彭于发等作了 有益尝试，他们使用转座子诱变法对荧光菌菌株CNl2进行 遗传改造，得到突变株荧光93，荧光93对小麦全蚀病的防 效高于自然菌株CNl12说明人工改良是获得优良生防菌的 一种可行手段。 6、菌株的有害性．菌株对作物的不利影响是生防菌筛选 过程中应注意的问题，植物体对噬铁素的种类具有选择性， 不相适应的组合中，植物体产生缺铁症状，例如，假单胞 菌素(Pseudobactin)可抑制玉米等几种作物对铁的吸收， 玉米表现缺铁症.
角膜炎
1.
铜绿假单胞菌－－微生物学检查
采取浓汁，创面渗出液，痰，尿，血液等标本，或在可疑物 品器械上取材，在利用血琼脂培养基上分离培养细菌。 根据菌落特点，色素，生化反应等进行鉴定。 运用血清学实验，噬菌体分型做医院内感染的追踪调查
2. 3.
铜绿假单胞菌的菌落分型
典型型 大肠菌样型 粘液型 侏儒型 粗糙型
ห้องสมุดไป่ตู้
3、菌株筛选的依据．大多数荧光菌的筛选仅依靠平 皿上对目标病原菌的拮抗作用，而实际上与生防有 关的性状很多，如在根际的定殖能力，对不同环境 的适应能力等;这需要简便快速的筛选技术及可靠的 筛选标准，但目前这两方面的研究工作尚有许多不 足之处． 4、菌剂制备．目前，荧光假单胞菌菌剂的生产成本 较高，贮存期较短，在应用上处于不利局面．虽然 改善培养条件后有效贮存期大大延长，成本显然不 够经济。
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落
大肠型（麦康凯平板）
铜绿假单胞菌－－检验程序
涂片 染色镜检 标本 分离培养 （血平板） 血标本 增菌
可疑菌落（性状、色素） 涂片镜检 氧化酶 菌落特征 绿脓素 气味
初步鉴定
最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
铜绿假单胞菌－防治原则
加强一些特殊病房及检查室、诊疗器械的消毒管理。
产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，培养物呈蓝绿色。 培养物有生姜气味 。 广泛存在环境中的条件致病菌，是医院内感染主要病原菌。
铜绿假单胞菌－致病性
可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染、 囊性纤维变性等。
有多种毒力因子：包括菌毛、荚膜多糖、内毒素、外毒素、 绿脓菌素、蛋白酶、磷脂酶等。
避免医务人员与病人之间的交叉感染。
治疗过程中，应合理选择有效抗生素。
铜绿假单胞菌的耐药机制研究
铜绿假单胞菌常引起菌血症、肺炎、泌尿系统感染 烧伤感染和囊 性纤维化继发感染等疾病, 由于其耐药菌株不断产生, 耐药性不断 变化, 已成为医院内获得性感染最严重的条件致病菌之一。 铜绿假单胞菌耐药机制的研究, 对监控医院内感染菌群、 检测其 耐药性、 指导抗生素的合理利用极为重要。同时, 由于铜绿假单 胞菌分布广泛, 可以推知其耐药机制在其他病原菌中也极可能广泛 存在, 对铜绿假单胞菌耐药机制的研究对其他许多病原菌的控制也 具有指导意义。
鉴定中注意与其他假单胞菌相区别，只产生荧光素 不产生绿脓素，42℃不生长可与铜绿假单胞菌区别； 不液化明胶、不产生卵磷酯酶、陈旧培养物上有腥 臭味，有别于荧光假单胞菌。
由恶臭假单胞菌及荧光假单胞菌等革 兰氏阴性短杆菌引起。患病初期可见 鱼的体表有点状白色黏液物附着并逐 渐蔓延扩大，严重时鳞片基部充血、 竖起，鳞片脱落，体表及鳍基部充血， 肝、肾充血，靠边缓游不吃食，不久 即死亡。
铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa）
原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见 的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道 等都有本菌存在。本菌存在的重要条件是潮湿的环境。
铜绿假单胞菌－形态染色
铜绿假单胞菌－生物学性状
专性需氧、营养要求不高。
最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长。
菌落光滑凸起 成粘液状
粘液型（麦康凯平板）
粘液型（血平板）
细小，无光泽 半透明菌落
侏儒型（麦康凯平板）
菌落呈灰绿色 大小不一 扁平湿润 边缘不规 则呈伞状伸展 表面常可 见金属光泽
典型型（麦康凯平板）
产绿脓素 琼脂染成黄绿色
典型型（普通平板上）
菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙
粗糙型（麦康凯平板）
黄色的为斯氏假单胞菌
2．临床意义
斯氏假单胞菌(P.stutizeri)存在于土壤和水中，在医院 设备及各种临床标本中亦有发现，本菌引起的感染并不 多见，偶可引起抵抗力低下患者伤口、泌尿道、肺部感 染等。
3．微生物学检验 注意与曼多辛假单胞菌相鉴别，其特征性菌落、精氨酸 双水解试验阳性、不分解麦芽糖和甘露醇，有别于曼多 辛假单胞菌。
血平板检验
斯氏假单胞菌
1．细菌特性 革兰阴性杆菌，一端单鞭毛，运动活泼；最适生长 温度35℃，4℃不生长，大部分菌株在42℃生长，氧化 葡萄糖产酸，在6.5%高盐培养基中可生长；营养要求 不高，普通平板可生长，新分离菌株在培养基上可形 成特征性干燥、皱缩样菌落，黏附于琼脂表面难以移 动，可产生黄色色素，无荧光。
虽然荧光菌已成功地用于一些病害的生物防治，但仍 有许多问题有待解决。
叶面喷施后，菌 剂能在植物体内 快速传导，可有 效抑制侵染到植 物体内的青枯病 菌，立枯丝核菌， 镰刀菌以及软腐 病菌。
许多问题有待解决，比较突出的有:
1、菌株的有效性．荧光假单胞菌生防菌株的防治效果一般为5060%，还有很大潜力可控，扩大筛选范围和在田间直接筛选可能是 找到优良菌株的可靠途径。 2、作用机制研究．已明确荧光假单胞菌首先在作物根际定殖，然 后靠竞争及抗生作用抑制病害发展;其它作用机制尚无定论．但噬 铁素及抗生素的种类与防病效果有很大关系，如在小麦全蚀病生防 中，荧光菌B10的防治作用受FeCl3抑制，而在烟草黑胫病中，荧光 菌CHAO的防治效果需要有足够FeCl3才能表达，这反映了荧光菌防 病机制的复杂性.研究不同噬铁素及抗生素的作用机制，对于筛选 有效菌株，指导病害生物防治具有重要意义．
尽管假单胞菌科的绝大部分细菌原先都被归类于假单胞菌属， 但现在只有rRNAⅠ群的细菌属于假单胞菌属（Pseudomonas） 共7种细菌，代表菌种为铜绿假单胞菌。 种类： 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 荧光假单胞菌(P.fluorescence ) 恶臭假单胞菌(P.putica ) 斯氏假单胞菌(P.stutizeri) 曼多辛假单胞菌(P.mendocina) 产碱假单胞菌(P.alcaligenes) 假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)