大鼠肝过氧化物酶体中脂肪酸的分析
大鼠主要脏器中脂质过氧化物MDA的比较研究
Ｃｏ ｐ ｒ ｔ ｅ Ｓ ｕ ｙ ｏ ｈ ｐ ｄ ｍ ａ ａ ｉ ｔ ｄ ｎ ｔ ｅ Ｌｉ ｉ ｖ
Ｐ ｒ ｘｄ Ｄ ｉ ｊｒ Ｏｒ ａ ｓｏ ｔ ｅｏ ｉｅ Ｍ Ａ ｎ Ｍａｏ ｇ ｎ ｆＲａｓ
Ｂ ｉｌｎ ＡＩ Ｃｕ— ａ ，Ｗ Ａ ＮＧ ａ ，Ｗ ＡＮＧ ｉ － ａ ，Ｗ Ｕ Ｌ ｎ － ａ ｇ Ｈｕ ｎ Ｘ稿 日期 ：０ ０ ０ — ０ ２ １－ ６ ２ 作者简介 ： 兰（９ １ ）女 （ 白翠 １７ 一 ， 蒙古族 ）内蒙古科左后旗人 ， ， 讲师 ， 硕士 ， 研究方 向为蒙药制剂
内 蒙 古
１ 实验材料
民 族
大 学
学 报
２ １正 ００
１１ 药物 ： 氯醋 酸由上海化 学试剂采 购供应站 提供 ， ． 三 批号 Ｆ ０ １２ ２ 硫代 巴比妥酸 由上 海化 学试剂 公司提供 ， 号 ２０ ０ １ ； 批 Ｆ ０ ０ ２ ７乌拉坦 由上海化学试剂公 司提供 ， 号 Ｓ Ｒ ３ １ １２ ． ２０ １２ ； 批 Ｃ Ｃ ０９２８ 三氯醋酸溶液的制备 ： ２ｇ 取 ０ 三氯 醋酸晶体加 蒸馏水至 ｌＯ ｌ０２／ ） Ｏ ｍ （． ｍ１． ｇ 硫代巴比妥酸溶液的制备 ： ０ ７ 硫代 巴比妥酸粉末加蒸馏水 至 ｌＯ ｌ６ ｍ ／ １． 取 ．ｇ ６ Ｏ ｍ （． ｇｍ ） ７ １ 动物 ： ． ２ 大鼠， 由吉林大学实验动物中心提供． Ｉ 仪器： ３ 电子天平 ， 型号 Ｂ 一 １Ｓ ， Ｓ ２ ０ 精密度 ０ ０ １， ． ０ ｇ 由北 京赛 多利 天平公 司生产． ０ 电热恒 温水 浴锅 ， 型号 ＨＨＳ ４ 由上海 ．一 ， 分析仪器厂生产． 电子天平 ， 型号 Ｙ １０ ； 密度 ０ ｇ 由上海海康电子仪器厂生产． Ｂ ２１ 精 ．１ ， 离心 机 ， 型号 ８ — ， ０ ２ 由深圳天南海北 实业 有限公 司生产 ． 电动玻璃匀浆机 ， 型号 Ｄ ８— ， Ｙ ９ １ 由宁波新芝生物科技股份有 限公 司生产． 水浴振荡器 ， 型号 Ｈ Ｓ Ｈ， Ｚ— 由 哈尔滨东联 电子技术开发有限公 司生产． 离心机 ， 型号 Ｌ ４ ＿０ 由北京 医用离心机厂生产． Ｄ ＿４ ， 涡旋混合器 ， 型号 ｗＨ ５ ， 一８ １ 由 上海科达测试仪器厂生产．
高糖饮食导致大鼠肝脏脂代谢紊乱实验研究
高糖饮食导致大鼠肝脏脂代谢紊乱实验研究卢贤荣;程万里【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2011(33)9【摘要】目的探讨高糖饮食对大鼠肝脏过氧化物酶体脂肪酸B-氧化的影响.方法用高糖饮食饲养大鼠24周,观察体重,血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA),肝脏过氧化氢酶、脂酰CoA氧化酶和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化活性的变化.结果试验组TG、T℃、FFA与对照组相比有不同程度升高(P<0.01).试验组大鼠肝脏的过氧化氢酶、过氧化物酶体脂肪酸β-氧化、脂酰CoA氧化酶活性较正常对照组明显升高(P<0.05).结论高糖饮食长期摄入可导致大鼠脂质代谢紊乱,肝脏中的过氧化氢酶、脂酰CoA氧化酶和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的活性升高.%Objective To investigate the effect of high glucose diet on the activity of peroxisomal fatty acidβ-oxidation in the livers of rats. Methods The rats were fed with high glucose diet ( experiment group ) or normal diet (control group ) respectively for 24 weeks. The changes of total cholesterol(TC),triglyceride (TG)and free fatty acid (FFA) were observed, an d the changes of the activities of peroxisomal fatty acidβ-oxidation,hydrogen peroxidase and acyl-CoA oxidase in the livers were detected. Results The levels of TC, TG, FFA in experiment group were increased at different degrees,as compared with those in control group ( P ＜0. 01 ). The activities of hydrogen peroxidase,peroxisomal fatty acidβ-oxidation and acyl-CoA oxidase in experiment group were significantlyincreased,as oompared with those in control group ( P ＜ 0.05). Conclusion The long-term taking of high glucose can result in the lipid metabolic disorder in rats, as a result, the activities of hydrogen peroxidase,acyl-CoA oxidase and peroxisomal fatty acidβoxidation are increased.【总页数】2页(P1307-1308)【作者】卢贤荣;程万里【作者单位】050000,河北省石家庄市医疗保险管理中心;中船重工第718研究所【正文语种】中文【中图分类】R587.1【相关文献】1.不同脂肪酸饮食导致大鼠肝脏脂代谢紊乱的实验研究 [J], 程万里;王彦华;宋光耀;王岚;张玉清2.凤冈锌硒茶对高脂高糖饮食大鼠肝脏功能的影响 [J], 李密转;许洁;杨静;杨雪松;李文梅;徐卫红;俞捷3.锌硒茶对高脂高糖饮食致大鼠糖脂代谢紊乱的干预作用 [J], 李密转;杨静;王攀;许洁;杨雪松;俞捷4.高饱和脂肪酸和高糖饮食对大鼠肝脏过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的影响 [J], 程万里;李静;宋光耀;周宇;高宇;江玲玲5.盐诱导激酶1过表达对高脂饮食诱导的肥胖大鼠肝脏脂代谢紊乱的调节机制 [J], 周璞;付薇;谢凌波;李倩;邓稀予因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多不饱和脂肪酸对细胞膜功能影响的研究进展_李喜艳
AdvancedResearchofEffectofPolyunsaturatedFatty AcidsonCellMembraneFunction
LiXiyan WangJiaqi BuDengpan WeiHongyang HuHan ZhouLingyun
2 多不饱和脂肪酸对 细胞膜功能的影响
2.1 多不饱和脂肪酸对细胞膜脂质结构的影响 从低等生物到所有的高等生物和人类 , 细胞表
面均有一层类似的膜状结构即细胞膜 。细胞膜是以 液态的脂质双分子层为基架 , 其中镶嵌着具有不同 分子结构 、不同生理功能的蛋白质 。 细胞膜脂质约 占膜总质量的 40%, 膜脂质 主要是磷脂 , 约占膜脂 质总量的 70%以上 , 其次为胆固醇 , 少于 30%, 还有 少量的糖脂 。这些脂质排列成厚约 7.5 ～ 9.0 nm的 双分子层 , 其中 外层 主要由 含胆 碱的 磷脂酰 胆碱 (PC)和神经鞘磷脂 (SM)组成 , 而内层主要由含氨 基的磷脂 酰丝氨酸 (PS)和 磷脂酰乙 醇胺 (PE)构 成 。胆固醇主要分布在细胞膜的外层 , 因此 , 细胞膜 内外两层脂质的分布是非对称性的 。
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin
2009年第 12期
氧化和自由基的产生 , 从而影响病变细胞的增殖 , 这 一过程并不累及正常细胞膜 , 这是因为正常细胞能 有效地清除和中和过氧化物和自由基 , 同时对这些 物质具有一定的耐受能力 。同时细胞脂质过氧化产 生的活性氧能提高病变细胞对治疗药物的敏感性 , 产生的自由基和脂质过氧化物则可抑制病变细胞的 表达 , 缩短染色体的端粒 , 促进病变细胞的凋亡 [ 7] 。 从某种角度上 , 脂质过氧化是机体正常生理过程 , 但 过度的脂质过氧化却可导致组织损伤 。 2.3 多不饱和脂肪酸对细胞膜流动性的影响
实验性酒精性肝病大鼠中脂质过氧化产物的动态变化
实验性酒精性肝病大鼠中脂质过氧化产物的动态变化
崔巍;傅宝玉
【期刊名称】《辽宁医学杂志》
【年(卷),期】2001(015)003
【摘要】目的探讨脂质过氧化反应对酒精性肝病的作用.方法本实验采用乙醇灌胃法制备了酒精性肝病的大鼠模型,并利用生化方法测定了不同病理阶段组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)及抗脂质过氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)的含量,同时采用病理图像分析仪测定胶原面积百分比来代表组织中胶原含量,检测MDA与胶原含量间的关系.结果随着酒精摄入量的增加,实验组大鼠呈现出酒精性脂肪肝-肝炎-肝纤维化三种阶段的病理改变,组织中MDA含量逐渐增加(P＜0.05),并与胶原含量成正相关(r=0.82),SOD含量在早期增高,此后逐渐下降.结论随着酒精摄入量的增加,脂质过氧化反应进行性加强,并促进酒精性肝纤维化的发生.
【总页数】2页(P131-132)
【作者】崔巍;傅宝玉
【作者单位】中国医科大学第一临床学院,;中国医科大学第一临床学院,
【正文语种】中文
【中图分类】R57
【相关文献】
1.清肝解毒活血颗粒对酒精性肝病大鼠核转录因子-κB及肝脏脂质过氧化水平的影响 [J], 白静丽;刘庆彬
2.实验性ARDS时脑组织脂质过氧化和中分子物质动态变化研究 [J], 张建龙;马琪;欧晓鹏;王玲
3.抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠脂质过氧化产物的影响 [J], 崔巍;刘杨;刘沛;林红;傅宝玉
4.牡蛎肝宝对大鼠酒精性肝病的抗脂质过氧化作用 [J], 张博;张翠萍;江月萍;田字彬;牛庆慧
5.实验性矽肺支气管肺泡灌洗液及血清中脂质过氧化物含量的动态变化 [J], 张群卫;张琪凤
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糖尿病患者肝脏过氧化物酶体脂肪酸代谢变化的研究
糖尿病患者肝脏过氧化物酶体脂肪酸代谢变化的研究程万里;岳巧莲;高娟梅;王岚;孙红霞;张玉清【摘要】目的:探讨糖尿病患者肝脏过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的变化情况.方法:23例肝外伤患者分为糖尿病组(10例)和正常糖耐量组(NGT,13例),分别检测两组患者的空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2hPG)、总胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸的含量,参照文献分别检测肝组织过氧化氢酶、过氧化物酶体脂酰CoA氧化酶和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的活性.结果:糖尿病组患者的FPG、2hPG、甘油三酯、游离脂肪酸、过氧化氢酶、脂酰CoA氧化酶和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化明显高于NGT组(P＜0.01,P＜0.05).结论:糖尿病时存在脂质代谢紊乱和肝脏过氧化物酶体脂肪酸β-氧化活性的增强.【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】2014(031)002【总页数】3页(P118-120)【关键词】糖尿病;过氧化物酶体;脂肪酸β-氧化【作者】程万里;岳巧莲;高娟梅;王岚;孙红霞;张玉清【作者单位】邯郸市718研究所医院,河北邯郸056027;邯郸市人民医院;邯郸市人民医院;邯郸市718研究所医院,河北邯郸056027;邯郸市718研究所医院,河北邯郸056027;邯郸市718研究所医院,河北邯郸056027【正文语种】中文【中图分类】R587.1饱和/不饱和长链脂肪酸和极长链脂肪酸β-氧化主要在过氧化物酶体中进行。
随着生物化学的研究进展，人们越来越重视过氧化物酶体脂肪酸β-氧化在脂代谢中的作用。
有研究表明[1]，链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠出现脂代谢紊乱的同时，过氧化物酶体脂肪酸β-氧化增强，过氧化氢酶、脂酰CoA氧化酶活性升高。
本课题组的前期也研究发现[2-3]，不同类型的高脂肪酸、高糖饮食可导致大鼠肝脏过氧化物酶体脂肪酸β-氧化及参与此途径的多种酶活性升高。
但关于糖尿病患者肝脏过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的研究报道较少，本研究对此进行了初步探讨。
过氧化物酶体 功能
过氧化物酶体功能过氧化物酶体（peroxisomes）是一类存在于真核细胞的细胞器，它主要负责氧化代谢和抗氧化保护等功能。
过氧化物酶体在生物体的代谢过程中起着重要的作用，以下将详细介绍过氧化物酶体的功能和相关的生物学意义。
1. 氧化代谢功能：过氧化物酶体参与多种基础的氧化代谢反应，其中最显著的是β-氧化反应。
在β-氧化反应中，过氧化物酶体负责将长链脂肪酸以三羧酸为中间产物进行分解，生成乙酰辅酶A并释放能量。
这个过程在细胞中产生巨量的氢质子，进而促使ATP的合成。
此外，过氧化物酶体还参与胆固醇代谢和肌醇代谢等氧化反应，在一些特定代谢途径中发挥重要作用。
2. 代谢废弃物降解功能：过氧化物酶体能够脱氧和分解多种有害物质，包括大部分的脂质和蛋白质降解产物。
这些降解代谢废物的过程涉及多种酶的协同作用，如过氧化酶、脱氧酶和硫氧还蛋白还原酶等，保证有效地降解废物并防止细胞受到损害。
3. 氧化还原反应参与功能：过氧化物酶体中还存在许多氧化还原酶，如尿酸氧化酶、D-α-羟基酪氨酸氧化酶和酰基辅酶A氧化酶等。
这些酶能够对一些次氯酸酯、次硝酸酯类物质进行氧化还原反应，从而产生具有抗氧化作用的中间产物。
同时，过氧化物酶体内的酶还可以将一些有害物质转化为无害的物质，起到保护细胞的作用。
4. 抗氧化功能：过氧化物酶体参与清除细胞内的氧自由基和过氧化物等有害分子，防止它们对细胞结构和功能产生损害。
过氧化物酶体内的咖啡酸过氧化酶、超氧化物歧化酶等酶在脂质过氧化反应和超氧阴离子的清除反应中发挥关键作用。
同时，过氧化物酶体中的还原酶能够将还原形态的抗氧化物质再次还原成活性物质，从而增加细胞内的抗氧化能力。
5. 染色体修复和DNA修复功能：过氧化物酶体中的多酮还原酶能够修复DNA 分子中的损伤部位，维持细胞基因组的完整性。
此外，过氧化物酶体中的过氧化氢酶能够调节染色体末端的氧化还原状态，维持染色体末端的稳定性，防止染色体末端融合和异常断裂。
海参调节高脂血症大鼠脂质代谢的研究
海参调节高脂血症大鼠脂质代谢的研究摘要：在本研究中，海参在高脂血症大鼠体内调节脂质代谢的作用被证明。
通过高脂饮食喂养建立高血脂症的大鼠模型，并且同时喂养50天。
测定甘油三酸酯和胆固醇的浓度，以及血清和肝脏中、粪便中的脂质。
并对与脂质代谢有关的肝酶的活动进行了分析。
结果表明：海参能降低血清中的胆固醇水平，减少肝脏脂质的积累，促进脂肪酸的β-氧化，和衰减脂肪酸合成。
此外，粪便中的脂质均大幅增加。
总之，海参能通过增加肝脏脂肪酸的分解代谢和减少脂质吸收来改善脂质代谢紊乱。
关键词：海参，脂质代谢，肉碱转移酶，β-氧化过氧化物酶体，脂肪酸合成酶，胆汁酸Ⅰ、简介海参属于海参纲，分布在世界各地的海洋中。
由于其抗肿瘤，促进免疫调节，抗动脉粥样硬化，和抗老化属性被作为重要的食品和医疗材料销往中国和其他亚洲国家。
海参体壁的主要生物活性物质是海参胶原蛋白，多糖，三萜甙类，脑苷脂和神经节苷脂。
据报道，海参可以有效地降低大鼠肝脏中血清中的甘油三酯和胆固醇[1-2]。
然而，这一机制还没有得到证实。
海参的低附加值在中国有一定的消费潜力。
然而，海参的营养价值和生理活动还没有被报道。
在本实验中，我们给大鼠连续50天饲喂高脂肪食物研究其对脂质代谢的影响。
Ⅱ、综合评价方法1 实验动物及饲料海参购买于青岛本地市场，并研磨成粉使用。
健康雄性大鼠（体重200±20克，SPF，从青岛市实验动物中心购买）随机分为五组：正常（正常饮食并没有添加海参），模型（高脂肪的饮食，含脂肪2g/kg，胆固醇1g/kg，胆盐0.2g/kg，丙硫氧嘧啶0.1g/kg并没有添加海参），低用量（高脂肪的饮食加上每75mg/kg的海参），中等剂量（高脂饮食加150mg/kg的海参）和高剂量组（高脂饮食加300mg/kg.的海参），每组10只，喂养50天。
喂养结束时，在乙醚麻醉后12小时饥饿主动脉放血处死。
立即切除肝脏，从血液中分离血清进行分析。
2、海参对血清和肝脂质的影响依据肝脂质的提取和纯化等方法[3]。
辨证治疗对非酒精性脂肪性肝病大鼠脂质过氧化及病理的影响
ｒ ｕ ｇｏ ｐ，ｍｅ ｉ ｉ ｅ Ｂ ｔｅ ｔ ｎ ｏ ｐ， ｆ ｓ ｄ ｃｎ ｈ ｎ ｍｅ ｉｉ ｅ Ｂ ｔｅ ｔ ｎ ｏ ｐ ｆ ｓ ｄ ｃｎ ｈ ｎ ｍｅ ｉ ｉｅ Ａ ｒａ ・ ｄ ｃｎ ｒ ａｍｅ ｔ ｕ ｒ ｇ ｉ ｔＭｅ ｉ ｉｅ Ａ ｔ ｅ ｄ ｃｎ ｒ ａｍｅ ｔ ｕ ， ｉ ｔｍｅ ｉｉ ｅ Ｂ ｔ ｅ ｄ ｃｎ ｔｅ ｔ ｒ ｒ ｇ ｒ
疗 组 ，先 Ａ 方后 Ｂ方 治 疗 组 、先 Ｂ 方后 Ａ方 治 疗 组 、 先 空 白后 Ａ 方 治 疗 组 、 先 空 白后 Ｂ 方 治 疗 组 ， 共 ９组 。 除 正 常
组给予普通饲料 外，其余 各组大鼠饲 以高脂饲料 。造模 第 ４周后 ，模 型组加用等体积 生理 盐水灌 胃；对 照组加用对 照
ｍｅ ｔｇ ｏ ｐ，ｆ ｓ ｌ ｎ ｈ ｎ ｍｅ ｉ ｉｅ Ａ ｔ ａｍｅ ｔｇ ｏ ｐ， ｆ ｔｂ ａ ｋ ｔ ｅ ， ｍｅ ｉ ｉｅ Ｂ ｔｅ ｔ ｎ ｏ ｐ Ｅ ｃ ｐ ｈ ｏ ａ ｎ ｕ ｒ ｉ ｔ ｂ ａ ｋ ｔ ｅ ｄｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ｕ ｒ ｅ ｒ ｉ ｌｎ ｈ ｎ ｓ ｒ ｄ ｃｎ ｒ ａｍｅ ｔｇ ｕ ． ｘ ｅ ｔｔ ｅ ｎ ｒ ｌ ｒ ｍ ｒ ｕ ｓｆ ｄ ｏ ｄ ｎ ｒ ｉｔ ｈ ｔ ｅ ｉｈ ｕ ｓ ｗｅ ｅ ｆ ｙ ｈ ｇ ａ ｎ ｉｈ ｃ ｏｅ ｔ ｒ ｌｄ ｅ ．Ａｆ ｒ４ ｗｅ ｋ ａｅ ，ｍｏ ｅ ｇ ｏ ｐ ｗａ ｅ ｒ ｉａ ｙ ｄｅ ，ｔ ｅ ｏ ｈ ｒ ｅｇ ｔｇ ｏ ｐ ｒ ｄ ｂ ｉ ｈ ｆｔａ ｄ ｈｇ ｈ ｌｓｅ ｏ ｉｔ ｒ ｅ ｔ ｅ ｓ ｌ ｔｒ ｅ ｄｌ
ｗ ｒ ｉｉ ｅ ｎ ｏ９ ｇ ｏ ｐ ｔ ａ ｄ ｍ： ｎ ｒ ｌｇ ｏ ｐ，ｍｏ ｅ ｏ ｐ，ｃ ｍｐ ｒ ｏ ｄ ｃｎ ｒ ａｍｅ ｔｇ ｏ ｐ， ｍｅ ｉ ｉｅ Ａ ｔｅ ｔ ｎ ｅ ｅ ｄ ｖｄ ｄ ｉ ｔ ｒ ｕ ｓａ ｎ ｏ ｒ ｏｍａ ｕ ｒ ｄ ｌｇ ｕ ｒ ｏ ａ ｉ ｎ ｍｅ ｉ ｉ ｅｔｅ ｔ ｎ ｒｕ ｓ ｄ ｃｎ ｒ ａｍｅ ｔ
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收稿日期:2000212207基金项目:河北省教委科研基金资助项目作者简介:刘惠敏(19512),女,副主任技师,电话:(0311)604412125557。
大鼠肝过氧化物酶体中脂肪酸的分析刘惠敏, 骆子生, 魏素珍, 姜玲玲(河北医科大学基础医学研究所,河北石家庄050017)摘要:用双2(22乙基己基)酚酞酸酯(DEHP )诱导大鼠肝过氧化物酶体增殖,再用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝细胞过氧化物酶体,并用十七烷酸作内标,以毛细管气相色谱法在非极性SPB 21石英毛细管柱上对其中的11种脂肪酸进行分离测定。
正常组和诱导组的大鼠肝过氧化物酶体中的不饱和脂肪酸和长链脂肪酸所占总脂肪酸的比例及总脂肪酸的统计结果是:诱导组的不饱和脂肪酸的含量高于正常组的(P <0105),而两个组的脂肪酸总量及长链脂肪酸的含量无明显差别。
结果提示:诱导组的大鼠肝过氧化物酶体的脂肪酸成分发生了变化,其膜结构与正常组的不相同。
关键词:毛细管气相色谱法;过氧化物酶体;脂肪酸中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:100028713(2001)05204752031 前言 过氧化物酶体是细胞中的一个与极长链脂肪酸、胆汁酸、缩醛磷脂等代谢有关的重要亚细胞器。
它除了参与过氧化氢的清除作用外,还将极长链脂肪酸分解成短链的脂肪酸,是极长链脂肪酸代谢的惟一场所。
多不饱和脂肪酸为生物体内自由基反应的主要作用对象,主要分布在细胞膜及亚细胞器膜的类脂中。
当自由基与细胞膜上的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应时即产生脂质过氧化物,使膜的结构破坏,功能减退,最终导致细胞衰亡[1]。
这一过程是机体衰老和许多疑难疾病的病因之一。
近年来已发现10多种与过氧化物酶体有关的疾病,其发病率高达1/215万。
因此,研究过氧化物酶体的脂肪酸代谢变化,将对进一步研究此类疾病有十分重要的意义。
本文用毛细管气相色谱法对一组健康大鼠和一组用双2(22乙基己基)酚酞酸酯(DEHP )诱导增殖的大鼠肝过氧化物酶体中的脂肪酸进行了测定,并对获得的数据进行了统计分析。
2 实验部分211 材料 健康、自发分娩(SD )的大鼠16只(由河北实验动物中心提供,鼠龄2～3个月,雄雌各半)。
将它们平均分为两组,一组喂普通饲料,作为对照组;一组喂含2%(质量分数)DEHP 的饲料,作为诱导组。
所有实验用试剂均为国产分析纯。
脂肪酸标准品购自Alltech 公司和Sigma 公司。
663250气相色谱仪(带有数据处理系统)、UV 2330紫外2可见分光光度计和80P 27超速离心机均为日立公司产品。
212 过氧化物酶体的分离 将大鼠断头处死后,立即取出肝脏,用冷生理盐水洗净。
参照Osumi 等人[2]的方法,用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝过氧化物酶体,用透射电镜观察,结果发现其形态完整,纯度高。
213 过氧化氢酶的活性测定 按Aebi [3]的方法用分光光度法测定,以每分钟催化1μmol H 2O 2底物分解的酶量为1酶活性单位(u )。
214 脂肪酸的提取与酯化 参照文献[4]的方法,取015mL 过氧化物酶体悬浮液,加入015mL 生理盐水、2mL 无水甲醇及3mL 氯仿,用力振摇,然后再加入3mL 氯仿,振摇,再加入1mL 水,再振摇(每次振摇约115min )。
于2000r/min 下离心10min ,弃去上层水相,加入1g 无水硫酸钠脱水,过滤到螺口试管中,滤液用氮气吹至015mL 。
参照文献[5]的方法,在上述提取液中加入2mL 无水甲醇、1mL 47%的三氟化硼乙醚液和015mL 苯,再加入200μL (1g/L )十七烷酸(C 17:0)内标溶液,将试管帽拧紧,缓缓加温至沸,30min 后取出,放至室温。
再加入2mL 二次蒸馏水,用二氯甲烷萃取两次,在40℃下用氮气吹至100μL ,进样1μL 。
215 色谱条件 参照文献[6]的方法,色谱条件设为:载气为氦气,流速为70mL/min ,检测器为火焰离子化检测器第19卷第5期2001年9月色谱CHIN ESE J OURNAL OF CHROMA TO GRAPHYVol.19No.5Sept.2001(FID )。
SPB 21石英毛细管柱0132mm i.d.×30m ,0125μm (相似于SE 230和OV 2101,购自北京康林公司),柱温:200℃(3min )3℃/min250℃(4min )6℃/min280℃(10min ),分流比为1∶100,检测器和进样器温度分别为280℃和230℃。
3 结果与讨论311 定性分析 由于标准品所限,我们利用“碳数规律”对C 10∶0,C 12∶0,C 14∶0作了鉴定。
以组分的保留时间的对数Y 对相应的碳数X 作线性回归,线性方程为Y =0132+0105X ,r =01993。
在上述色谱条件下,C 10∶0,C 12∶0,C 14∶0的保留时间分别为616min ,913min 和11106min 。
图1 大鼠肝过氧化物酶体中脂肪酸甲酯的色谱图Fig 11 Chrom atogram of methyl esters offatty acids in rat liver peroxisomes312 定量分析 过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,它的活性大小与过氧化物酶体中脂肪酸的含量呈线性关系,因此我们用过氧化氢酶为标准,计算单位酶活性所对应的脂肪酸的含量,由此推算过氧化物酶体中脂肪酸的含量。
即:第一步用分光光度法计算出单位体积过氧化物酶体所对应的过氧化氢酶的活性(u/mL );第二步用内标法计算出单位体积过氧化物酶体对应的脂肪酸质量(mg/L );第三步用前两步的结果计算出单位酶活性所对应的脂肪酸的含量(μg/u )。
结果以均数±标准差( X ±SD )表示,借助Micro 2Excel 97软件进行t 检验。
大鼠过氧化物酶体的脂肪酸色谱分离图如图1所示。
在所选择的条件下,所测11种脂肪酸(C 10∶0,C 12∶0,C 14∶0,C 16∶1,C 16∶0,C 18∶2,C 18∶1,C 18∶0,C 20∶5,C 20∶0,C 22∶6)在30min 内得到了完全分离。
正常组和诱导组大鼠肝过氧化物酶体中脂肪酸的统计结果为:不饱和脂肪酸(C 16∶1,C 18∶2,C 18∶1,C 20∶5,C 22∶6)的含量之和占所测11种脂肪酸总含量的比例是诱导组高于正常组(P <0105);而两个组的脂肪酸总含量和8种长链脂肪酸(C 16∶1,C 16∶0,C 18∶2,C 18∶1,C 18∶0,C 20∶5,C 20∶0,C 22∶6)的含量之和与11种脂肪酸总含量的比例均无明显差异(见表1)。
表1 正常组和诱导组的大鼠肝过氧化物酶体中脂肪酸含量的比较3T able 1 The comp arison of fatty acids in rat liverperoxisomes bet w een control and induced groups 3Sample No.ControlInducedM (μg/u )U/M L/M M (μg/u )U/M L/M 10109520120800198630109610131220197402010867011534019769011337013029019327301046101190901984801059901360601956640106880134880197970111690124120193505010610011951019672010925012811019611601134601338801977001092401283501976270111070114000196840109510138800198958011996012455019519010646013483019768 X ±SD 011003±012276±019740±010939±013147±019627±01049001078701011201024301048233010205 3M :the content of total fatty acids ;L/M :the content ratioof long chain fatty acids to total fatty acids ;U/M :the content ratio of unsaturated fatty acids to total fatty acids.33P <0105. 本文结果表明,用DEHP 诱导大鼠肝过氧化物酶体增殖,会引起其脂肪酸成分改变,影响过氧化物酶体膜的结构。
过氧化物酶体是一种单层膜包裹的圆形结构,提取时应用力振动,以便提取完全。
过氧化物酶体极易氧化,不易放置时间过长。
提取分离时切忌温度过高,一般控制在4℃以下为宜。
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