膜蛋白提取方法
细菌外膜蛋白提取方法
细菌外膜蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成 BB-31512-1 BB-31512-2 组份编号规格 50T 100T试剂A：细菌外膜蛋白提取液A 25ml 50ml 31512A试剂B：细菌外膜蛋白提取液B 250ul 500ul 31512B试剂C：膜蛋白溶解液 10ml 20ml 31512C试剂D：蛋白酶抑制剂混合物 100 ul 200 ul 31512D产品简介：贝博细菌外膜蛋白提取试剂盒可以从各种革兰氏阴性菌菌体中提取外膜蛋白。
提取过程简单方便。
该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
该试剂盒提取的蛋白具有天然活性，可用于各种下游实验。
使用方法：1、每500ul提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2、将菌液在低温下10000g离心5分钟，收集菌体，用PBS洗菌体2次。
3、按每20-50mg湿重菌体样本加入500ul提取液A（大约菌体和提取液体积比1:2-1:3，完全淹没菌体即可），吹打混匀，2-8℃振荡1小时（或者冰上放置1-2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀）。
4、将菌液在2-8℃下12000g力离心5分钟，取上清。
5、在上清中加入5ul提取液B，充分混匀。
6、在37℃水浴10分钟。
7、在37℃ 1000g力离心2分钟。
8、此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层大约50ul液体。
9、用膜蛋白溶解液溶解该溶液，即得细菌外膜蛋白样品。
该样品可以用Bradford或BCA方法进行定量，调整相应的浓度用于下游实验。
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人心房组织膜蛋白SK2的提取方法
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人心房 组织膜 蛋 白 Ｓ ２的提取方法 Ｋ
李 涛， 曾晓荣 ， 毛 亮， 陈桂 兰 ， 晓秋 ， 智飞 ， 谭 刘 杨 艳
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（ 、 学 院 心血 管 医 学 研 究所 ， Ｉ Ｉ 帅１ ６６ ０ ） 泸ＩＩ １ 医 Ｉ ）泸 ４０ ０ ￣Ｉ
摘
要 目的 ： 化 人心 房 组 织 膜 蛋 白提 取方 法 。 法 ： 步 离 心法 提 取 心 肌 膜 蛋 白 ，Ｋ 膜 蛋 白用 ｗｅｅ ｂｏ 检 测 。 果 ： 优 方 分 Ｓ２ ｓ ｍ— ｌ ｔ ｔ 结
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线粒体膜蛋白-胞浆蛋白提取方法
1. 取 2×107 个细胞①，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基， 尽可能吸干，收集细胞。
产品简介： 贝博线粒体膜蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细
胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、 血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备 的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
储存条件： 试剂 AB 于 2-8℃保存，长期存放于-20℃保存； 试剂 D 于 2-8℃保存 试剂 C 和 E 室温保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期： 一年。
注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
胞浆蛋白/线粒体膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成
BB-3178-1
BB-3178-2
规格
50T
100T
试剂 AB
10ml
20ml
试剂 C
细菌总蛋白的提取方法
细菌总蛋白和膜蛋白提取方法一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH ）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，% Triton X-100，调pH 值至备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。
该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。
2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。
3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。
4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。
缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。
二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。
2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。
每使用1ml Trizol加入无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。
3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。
每使用1ml Trizol加入异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。
4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。
每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清，重复洗涤2次。
最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。
5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g 离心10min去除不溶物。
6、替代方案：将3中的酚醇上清液移至小分子量透析袋中，在2-8℃的1% SDS溶液中透析3次，1000g离心10min去除沉淀，上清可直接用于蛋白实验。
膜蛋白——精选推荐
膜蛋白的提取：用冰浴1×PBS洗两次，加入细胞裂解液（step⌝ 1），刮下细胞；用27-Gauge针头吹吸5次，冰上静置5min；⌝4℃，3000g，离心10min，取上清进行下一步离心，沉淀保留（其中含有细胞碎片和细胞核）；⌝4℃，12000g，离心10min，取上清进行下一步离心，沉淀保留（其中含有线粒体，内质网等细胞浆成分）；⌝4℃，130000g，离心30min，将上清收集至另一Eppendorf管内（其中含有其它胞浆蛋白）；⌝用膜蛋白裂解液（step⌝ 2）溶解沉淀（其中含有细胞膜蛋白）；于95℃变性5min，将所有样品（各步沉淀）保存于-80℃。
⌝1 细胞质膜资料1895年,Overton从研究细胞透性得出"细胞膜由连续的脂类物质组成"。
1925年Gorter&Grendel:用脂单分子膜技术测定细胞膜中脂分子的总面积，提出："细胞膜是由双层脂分子组成"。
1935年Danielli&Davson：从测定膜的表面张力得出细胞膜的"三明治结构模型"，即蛋白质－脂-蛋白质。
1959年Robertson:用电镜观察生物膜提出"单位膜模型"，将膜的分子结构与超微机构统一起来厚度：2(暗)+3.5(亮〕+2（暗)=7.5细胞质膜的主要功能概括如下：(1) 为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境;(2) 选择性的物质运输，包括代谢底物的输入与代谢产物的排除，其中伴随着能量的传递；(3) 提供细胞识别位点，并完成细胞内外信息跨膜传递；(4) 为多种酶提供结合位点，使酶促反应高效而有序地进行；(5) 介导细胞与细胞、细胞与基质之间的连接;质膜参与形成具有不同功能的细胞表面特化结构。
2 膜蛋白虽动物细胞主要有9种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。
根据膜蛋白分离的难易及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为两大类型：外在膜蛋白、内在膜蛋白。
提取蛋白质的4种方法
提取蛋白质的4种方法
1. 离子交换：离子交换是最常用的蛋白质提取方法，它使用含有
有机硫酸盐的磷酸盐溶液来提取pH4-9之间的膜蛋白。
它使用有机硫
酸盐作为极性试剂，使蛋白质从其离子溶液中沉淀出来并固定到树脂上，从而被提取。
2. 垂直层析：垂直层析是蛋白质提取的另一种方法，它使用流动
相来垂直运动横穿膜，从而把低浓度的蛋白质从其结晶盐溶液中提取
出来。
它是一种有效的后处理方法，能有效地改善提取的蛋白质的细节、稳定性和纯度。
3. 高通量流精密：高通量流精密设备可以将流体和分散体相分离，包括沉淀物和蛋白质。
它使用高压水流将杂质和悬浮物从蛋白质溶液
中清除，然后用不同的层析方法将蛋白质从其分散体中提取出来。
4. 柱单柱层析：柱单柱层析是另一种蛋白质提取技术，它使用多
种不同的树脂来分离蛋白质从其离子溶液中。
它将溶液通过固定式柱，并使用柱中所含的不同类型的树脂来把具有不同电荷性质的蛋白质从
溶液中提取出来。
TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白
TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白摘要】目的：建立一种快速方便提取大肠杆菌膜蛋白的方法。
方法：收集临床分离的大肠杆菌，利用TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白，Bradford法测定蛋白浓度，运用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）进行质谱分析，采用CiphergenProteinchip软件采集数据。
重复测定20次大肠杆菌的混合标本，评价TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白的重复性。
结果：TritonX-114去污剂法成功提取出了大肠杆菌膜蛋白。
重复测定20次大肠杆菌的混合标本，蛋白峰的分子量变异系数均小于0.05%。
结论：TritonX-114去污剂法可以快速方便的提取大肠杆菌膜蛋白，并具有很好的重复性，这不仅对大肠杆菌耐药机制和治疗方法的研究起着重要作用，也为膜蛋白的快速提取提供了新的思路。
【关键词】大肠杆菌；膜蛋白；TritonX-114；表面增强激光解析电离飞行时间质谱【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）12-0059-03MEMBRANE PROTEINS OF ESCHERICHIA COLI WERE EXTRACTED BY USING TRITON- X-114 Wang Qin, Xu Jian, LIiu Chenggui.Clinical Laboratory of Chengdu Women and Children Center Hospital, Chengdu, Sichuan, 610091, China【Abstract】Objective To establish a rapid and convenient extracted method of membrane proteins from Escherichia coli. Methods The clinical isolates of E. coli were collected, membrane proteins of E. coli were extracted by using Triton X-114 detergent, and protein concentrations were detected by Bradford method. The membrane proteins of E. coli were analyzed by surface enhanced laser desorption /ionizationtime-of-flight mass spectrometry (SELDI-TOF- MS), and the data was collected by Ciphergen Proteinchip software. The mixed proteins of E. coli were measured for twenty times to evaluate the repeatability. Results The membrane proteins of E. coli were successfully extracted by using Triton X-114 detergent. The mixed samples of E. coli were measured for twenty times, and the results showed that the CV of protein in molecular weight was less than 0.05%. Conclusion The membrane protein of E. coli can be extracted quickly and easily by using Triton X-114 detergent. This method has good repeatability, which provides a new idea for the extraction of membrane protein, this study not only make an important role in the research of E. coli resistance mechanisms and treatment, but also is beneficial to the further study of membrane proteomics.【Key words】Escherichia coli; Membrane protein; Triton X-114; SELDI-TOF- MS 大肠杆菌(E.coli)是引起临床感染最常见的革兰阴性杆菌，该菌易产生超广谱B-内酰胺酶（ESBL），从而导致对第三代头孢菌素耐药，甚至引起严重的院内感染暴发[1]。
细胞膜蛋白的提取方法
细胞膜蛋白的提取方法
生物侠们，还在实验室奋战吗？还在为科研经费不够发愁吗？今天我就给各位通宵达旦的大侠们带来一个福音。
下面就让我替他给你讲讲，抓紧时间啊！
首先你需要一株需要提前膜蛋白的细胞、NP40、氯化钠、Tris-Hcl、SDS、脱氧胆酸钠和PMSF，东西齐全了，就开始配裂解液吧。
下面是配方哦！
RIPA Buffer For100ml:
150mM NaCl5ml3M NaCl
50mM TrisHCl pH8.05ml1M TrisHCl pH8.0
1mM EDTA pH8.00.2ml0.5M EDTA pH8.0
1%NP-405ml20%NP-40
0.1%SDS1ml10%SDS
0.1%Deoxycholate100mg Deoxycholate
那东西都齐全了，那么来开始讲步骤吧！
1.收集细胞，将1000转离心收集的（最好低温哦）细胞悬于裂解液中20分钟；
2.就12000离心吧，收集沉淀哦；
3.在加入裂解液；
4.然后超声10-15次，每次2秒，间隔15秒；
5.再12000低温离心，收集上清，开始做实验咯！。
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长，直至细胞充分裂解，中间每隔几分钟充分混匀。
4. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在 4℃，13000×g 条件下离心 5 分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴 5-10 分钟，37℃下② 1000g-2000g 力离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
本试剂盒提取的蛋白不可用于 2D 电泳。如下游实验需要用于 2D 电泳，请使用贝博其 它货号的试剂盒。
应用实例：
1
4
4
图片说明：用膜蛋白提取试剂盒提取细胞样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。图1泳
道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
Proteins by RNAi on Glucose Transport of Intrauterine Growth Retardation Rats
Pediatric Research
2011 Volume 69, Issue 6, pp 497-503
（IF=2.803）
● 李素芬, 杨鹰. 不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞膜胰岛素受体磷酸化的抑制作用 第三军医大学学报, 2010,32(23): 2530-2532.
B． 组织蛋白提取
1. 取适量组织样本剪碎，加冷 PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或
用液氮研磨），冰上静置 5 分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，弃上清。
3. 按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
白约为 20-50μl。 6. 收集上层部分留作备用分析③。 7. 用 150-200μl 冰冷的试剂 B 稀释下层膜蛋白部分，混匀后冰浴 2min，37℃水浴
5-10 分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着
光线看），下层是膜蛋白约为 20-50μl。 8. 按步骤 7 再次抽提膜蛋白(此步骤可以选做)。 9. 用 50-200μl 冷的试剂 C 稀释下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。 10. 将上述蛋白提取物定量④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验⑤。
产品简介： 哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜
蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制 备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。 去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
使用方法：
A． 细胞蛋白提取 1. 取 5-10×106 个以上细胞①，在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，收集细胞。 2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 细胞样品中加入 200μl 冷的试剂 A，2ul 蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡 15 秒，置冰上 10-15 分钟，中间每隔几分钟涡旋混匀或用移液器吹打混匀。
膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品编号 规格 试剂 A 试剂 B 试剂 C
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3103-1 50T 10ml 20ml 10ml
250μl
BB-3103-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液 2-8℃保存。
有效期： 一年。
参考文献：
● Ge Zhao, Siyuan Li, Wei Zhao, et al.
Phage Display against Corneal Epithelial Cells
Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
贝博膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。本 试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可 用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等 蛋白研究。
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
产品 磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 蛋白 Marker 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE 上样 Buffer
PLoS ONE
March 2012 | Volume 7 | Issue 3, （IF=4.411）
● Shunming Zhu, Fei Sun, et al.
Apelin stimulates glucose uptake through the PI3K/Akt
pathway and improves insulin resistance in 3T3-L1 adipocytes
Molecular and Cellular Biochemistry
2011 Volume 353, Numbers 1-2, （IF=2.168）
● LIAO, LIHONG, et al.
The Influence of Down-Regulation of Suppressor of Cellular Signaling
● 何鸿保 孙浩等. 5-Aza-CdR 对肾细胞癌 Caki-1 细胞生长及 E-钙黏蛋白基因表达的影响 江苏大学学报, 2011 年 01 期
● 余冬梅 陈明. 雷米普利通过干预瞬时感受器阳离子通道 C3 的表达对心肌纤维化的影响 重庆医科大学学报, 2011 年 01 期
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