细胞跨膜蛋白提取方法
简述物质跨膜转运的方式及其特点
简述物质跨膜转运的方式及其特点跨膜转运是指物质在生物膜上的跨越过程，是细胞内外物质交换的重要方式。
生物体内的物质跨膜转运主要包括主动转运、被动转运和细胞内外物质交换等几种方式。
这些转运方式各具特点，下面将分别进行介绍。
一、主动转运主动转运是指细胞通过跨膜蛋白质的活性转运，耗费能量将物质从浓度低的一侧转移到浓度高的一侧。
最常见的主动转运蛋白是ATP 酶，在细胞膜上能够将物质与ATP结合，并通过ATP的水解释放的化学能将物质跨膜转运。
主动转运的特点是能够逆转物质的浓度梯度，使得物质从低浓度区域转移到高浓度区域，从而维持细胞内外的浓度差异，维持细胞内环境的稳定。
二、被动转运被动转运是指细胞通过跨膜蛋白质的通道或载体蛋白，在浓度梯度的作用下，使物质自由地从高浓度区域转移到低浓度区域，不需要耗费额外的能量。
被动转运可以分为通道转运和载体转运两种方式。
通道转运是指跨膜蛋白形成通道，使得物质可以通过通道自由扩散，如离子通道蛋白；而载体转运是指跨膜蛋白在物质结合后发生构象变化，使物质经过载体蛋白的转运。
被动转运的特点是依赖于浓度梯度，不需要额外能量的消耗，但无法逆转物质的浓度梯度。
三、细胞内外物质交换细胞内外物质交换是指细胞与外界环境之间的物质交换过程，包括分子在细胞膜上的吸附、扩散、渗透等方式。
细胞膜是一个半透明膜，能够选择性地允许某些物质通过，而阻止其他物质的通过，从而实现对物质的筛选和交换。
细胞内外物质交换的特点是依赖于物质的特性和细胞膜的性质，通过不同的方式实现物质的进出。
总的来说，物质跨膜转运是细胞内外物质交换的重要方式，主要包括主动转运、被动转运和细胞内外物质交换几种方式。
不同的转运方式具有各自独特的特点，能够满足细胞对物质的需求，维持细胞内外环境的稳定。
通过这些转运方式，细胞能够有效地实现物质的吸收、排泄和运输，保证细胞正常生理功能的进行。
在细胞内外物质交换的过程中，各种转运方式相互配合，共同维持细胞内外的物质平衡，保证细胞的正常运作。
提取膜蛋白的方法
提取膜蛋白的方法提取膜蛋白是一项关键的实验步骤，用于研究膜蛋白的结构和功能。
本文将介绍几种常用的膜蛋白提取方法。
1. 浸泡法浸泡法是一种简单的膜蛋白提取方法。
将细胞或组织样品置于适当的缓冲液中，如磷酸盐缓冲液或生理盐水中，并加入一些溶解剂（如阴离子洗涤剂）以破坏膜结构。
浸泡一段时间后，离心以分离出溶液中的膜蛋白。
2. 磷脂双层溶液法磷脂双层溶液法利用磷脂双层膜的特性来提取膜蛋白。
首先，将细胞或组织样品放入含有磷脂双层的液体中。
磷脂双层膜与细胞膜相似，可吸附并保持膜蛋白的结构和功能。
然后，用洗涤液洗涤磷脂双层，使膜蛋白释放到洗涤液中。
3. 超声法超声法是一种物理方法，通过超声波的能量来提取膜蛋白。
将细胞或组织样品置于含有缓冲液的管中，并使用超声波处理。
超声波的能量可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到缓冲液中。
然后，对溶液进行离心，将膜蛋白分离出来。
4. 酸碱提取法酸碱提取法利用pH的变化来提取膜蛋白。
首先，将细胞或组织样品放入酸性或碱性溶液中，并搅拌。
酸性或碱性环境可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到溶液中。
然后，通过调整pH值，使膜蛋白沉淀，进一步提纯。
5. 亲水基质法亲水基质法是一种通过亲水基质与疏水膜蛋白的选择性结合来提取膜蛋白的方法。
细胞或组织样品与亲水基质接触，亲水基质与细胞膜的亲水区域结合，使膜蛋白释放到溶液中。
然后，通过离心和洗涤步骤来分离和纯化膜蛋白。
这些方法在膜蛋白的研究中应用广泛，但根据具体的实验目的和样品特性，可以选择适合的方法进行膜蛋白提取。
实验中还应注意选择合适的缓冲液、溶液浓度和温度，并结合离心、洗涤等步骤进行蛋白的纯化和分离。
此外，需要根据实验目的选择合适的检测方法，如SDS-PAGE、Western blot等来确定提取的膜蛋白的质量和纯度。
总之，膜蛋白提取是膜生物学研究的重要一环，不同方法适用于不同的样品和实验要求。
正确选择和操作提取方法可以高效地提取膜蛋白，并为后续研究提供可靠的样品。
生物化学与分子生物学_中国药科大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年
生物化学与分子生物学_中国药科大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.肌细胞中一分子葡萄糖经糖原合成加在糖原分子上，之后又通过糖原分解过程分解，最终可产生（）分子ATP参考答案:12.食物中很少被机体利用的组分是（）参考答案:碱基3.以下化合物，能够激活糖异生途径的是参考答案:乙酰辅酶A4.关于磷酸戊糖途径，以下说法错误的是参考答案:转酮酶的辅酶TPP来自于维生素B25.关于三羧酸循环的描述，错误的是参考答案:柠檬酸、琥珀酸、苹果酸和顺丁烯二酸都是反应的中间代谢物6.在红细胞中，葡萄糖分解代谢并产生能量分子ATP的途径是什么？反应中唯一一次氧化还原反应生成的产物为参考答案:糖酵解 1,3-二磷酸甘油酸7.下列不属于糖胺聚糖的化合物为参考答案:琼胶8.关于维生素C结构和性质的叙述，哪一项是错误的？参考答案:维生素C 具有酸性是因为-COOH释放质子9.长期生食鸡蛋，容易缺乏的维生素为参考答案:生物素10.以下化合物中，不含腺苷酸组分的为参考答案:ACP11.关于维生素，以下说法不正确的是参考答案:参与凝血过程的维生素是维生素K，它只有天然存在的形式12.下列物质代谢过程发生在内质网和细胞质的是参考答案:胆固醇合成13.缺乏会引起恶性贫血的维生素是：①泛酸；②叶酸；③钴胺素；④抗坏血酸参考答案:②③14.有关维生素B1的叙述不正确的是参考答案:噻吩环上的C会形成碳负离子行使亲核基团功能15.维生素PP缺乏将导致参考答案:癞皮病16.关于泛酸，以下说法不正确的是参考答案:广泛存在于生物界，涉及多种缺乏症17.化学渗透学说中提到的质子推动力包括参考答案:线粒体内膜外酸内碱的化学势能_线粒体内膜外正内负的电势能18.基因的功能主要表现在两个方面，即（）参考答案:基因的表达_通过DNA复制，传递遗传信息19.下列有关卫星DNA说法正确的是（）参考答案:是一种高度重复序列_可存在于染色体的着丝粒区域_卫星DNA只发现于真核生物_常成串排列20.关于病毒基因组的特点，下列说法正确的是（）参考答案:病毒基因组可以是DNA，也可以是RNA_病毒基因组有基因重叠现象_RNA 病毒很容易产生突变21.原核生物基因组的特点是（）参考答案:原核生物基因组包括染色体DNA和质粒DNA_相关基因组成操纵子结构_基因多数是单拷贝的_非编码核苷酸序列少22.下列有关质粒的叙述，正确的是（）参考答案:质粒所带基因赋予宿主细胞特定的表型，比如抗性质粒带有抗性基因，可使宿主菌对某些抗生素产生抗性_基因工程中常用质粒作为基因克隆和表达的分子载体_质粒是细菌细胞质中能自主复制和遗传的环状DNA分子23.以下哪些过程可以促进尿素合成？参考答案:精氨酸浓度增高_N-乙酰谷氨酸生成增多_高蛋白膳食24.双脱氧链末端终止法测序的原理不正确的是参考答案:能在电泳结果图中直接读出序列25.关于糖、脂、氨基酸代谢联系错误的是参考答案:脂肪可以转变为糖、氨基酸26.竞争性抑制剂存在时，Km值的变化情况是参考答案:增加27.下列属于酶活性的共价修饰调节的是参考答案:肽链苏氨酸残基磷酸化28.下列哪对物质是合成嘌呤环和嘧啶环都必需的？（）参考答案:Gln/Asp29.已知某种酶的Km值为25mmol/L，欲使酶促反应达到最大反应速度的50%，该底物浓度应为参考答案:25mmol/L30.使酶发生不可逆破坏的因素是参考答案:强碱31.有机磷农药参考答案:是酶分子的羟基抑制剂32.下列对于酶的叙述，哪一项是正确的？参考答案:有些酶是RNA33.诱导契合学说是指参考答案:底物改变酶构象34.酶催化所必需的基团是指参考答案:位于活性中心内、外的，维持活性所必需的基团35.酶蛋白分子中，参与酸碱催化的最主要的基团是参考答案:咪唑基36.2,4－二硝基苯酚抑制细胞线粒体的功能, 可能是由于阻断下列哪一种生化作用而引起?参考答案:破坏质子梯度的产生37.酶原所以没有活性是因为参考答案:活性中心未形成或未暴露38.cAMP可别构激活下列哪种酶参考答案:蛋白激酶A39.下列关于同工酶的叙述，正确的是参考答案:是催化相同的化学反应，而酶分子结构不同、理化性质可各异的一组酶40.人体内的20种氨基酸都可以转变为糖参考答案:错误41.下列关于关键酶叙述错误的是参考答案:催化的反应是可逆反应42.联系糖，脂代谢重要枢纽物质是参考答案:磷酸二羟丙酮43.乙酰辅酶A不能转变为参考答案:α-酮戊二酸44.锌指结构包括（）参考答案:2个β-折叠和1个α-螺旋45.嘌呤环9号位N原子来源于（）参考答案:Gln的酰胺N46.转录合成RNA的原料是（）参考答案:NTP47.以下关于亮氨酸拉链说法错误的是（）参考答案:亮氨酸拉链以C端和DNA结合48.以下关于ρ因子的说法正确的是（）参考答案:ρ因子具有解旋酶活性49.以下关于维生素的描述，正确的是参考答案:水溶性维生素均可作为酶的辅因子参与代谢50.关于硫辛酸，以下说法不正确的是参考答案:是一种羧基载体51.Western Blot设计的原理是参考答案:抗原抗体相互作用52.镰刀形红细胞贫血症是由HbA的结构变化引起，其变化特点是参考答案:HbAβ-链的N-端第六位谷氨酸残基被缬氨酸取代53.如果想提取一个跨膜的膜蛋白，以下可以将其从细胞膜中解离的试剂为参考答案:SDS54.Hb的氧合曲线呈现S形的原因是参考答案:Hb有协同效应55.下列关于蛋白质变性的描述，正确的是参考答案:蛋白质变性后丧失原有的生物活性56.一个操纵子通常含有（）参考答案:一个启动子和数个编码基因57.以下乳糖操纵子结构顺序正确的是（）参考答案:I-CAP结合位点-P-O-Z-Y-A58.以下不能诱导原核生物乳糖操纵子表达的是（）参考答案:葡萄糖59.以下哪种情况，乳糖操纵子的转录活性最高（）参考答案:高乳糖，低葡萄糖60.顺式作用元件是指（）参考答案:与结构基因串联的特定DNA序列61.转录因子的结构不包括（）参考答案:mRNA结合结构域62.以下有关乳糖操纵子的说法正确的是（）参考答案:阻遏蛋白与操纵序列结合抑制转录63.下列关于α-螺旋结构的叙述，正确的是参考答案:构成螺旋构象的作用力是氢键64.下列除了哪一种化合物外，都是呼吸链的组分？参考答案:NADPH65.呼吸链的电子传递体中，有一组分是脂质而不是蛋白质，这就是参考答案:CoQ66.呼吸链的各细胞色素在电子传递中的排列顺序是参考答案:b→c1→c→aa3→O267.ATP的合成部位是参考答案:F1因子68.目前公认的氧化磷酸化理论是参考答案:化学渗透假说69.下列呼吸链组分中氧化还原电位最高的是参考答案:Cytc70.ATP从线粒体生成后向外运输是通过参考答案:ATP-ADP转位酶71.H和电子通过呼吸链传递给氧的过程中，遇到了氢氰酸，这时发生了参考答案:呼吸链电子传递中断，氧化磷酸化被抑制72.转录因子转录激活结构域类别不包括（）参考答案:富含碱性氨基酸的结构域73.比较真核生物与原核生物的基因组DNA复制，二者相同之处是参考答案:合成方向都是5'→3'74.在原核生物基因组DNA复制过程中，RNA引物通常由（）降解去除参考答案:DNA Pol I75.DNA复制时，下列（）是不需要的？参考答案:限制性内切酶76.真核生物中RNA聚合酶II的转录产物是（）参考答案:hnRNA、LncRNA、miRNA77.DNA复制中的引物是（）参考答案:由DNA为模板合成的RNA片段78.1958年Meselson和Stahl利用15N标记大肠杆菌DNA的实验首先证明了下列（）机制参考答案:DNA的半保留复制机制79.下面（）突变最可能是致死的参考答案:染色体DNA分子中，插入一个碱基对80.端粒酶是一种（）参考答案:反转录酶81.肝脏是机体物质代谢的枢纽，也是体内能进行糖异生的唯一器官参考答案:错误82.以下关于蛋白质分离和含量测定的叙述，错误的是参考答案:BCA法不是蛋白质定量的方法83.关于氨基酸和蛋白质，以下叙述错误的是参考答案:凝胶层析时，分子量小的蛋白质先流出柱子84.赖氨酸pK1(α-COO-)=2.18，pK2(α-NH3+)=8.95，pK3(ε-NH3+)=10.53，那么其pI值应为参考答案:9.7485.大肠杆菌RNA聚合酶中σ因子的功能是（）参考答案:识别DNA链上的起始点86.抑制嘌呤核苷酸从头合成途径的抗肿瘤药物有（）参考答案:6-巯基嘌呤_氨甲蝶呤87.关于氨甲酰磷酸合成酶Ⅱ的叙述，正确的是（）参考答案:位于细胞质_UMP是该反应的抑制剂_消耗ATP88.次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶参与下列哪种反应（）参考答案:嘌呤核苷酸补救合成89.在体内能分解为β-丙氨酸的核苷酸是（）参考答案:UMP90.下列描述正确的是（）参考答案:饮食以肉食为主的人和以米饭为主的人比较，前者得痛风的可能性大91.人体内嘌呤核苷酸分解代谢的最终产物是（），与其生成有关的重要酶是（）参考答案:尿酸，黄嘌呤氧化酶92.Gln不参与以下哪个代谢反应？（）参考答案:由dUMP生成 dTMP93.不需要DNA连接酶参与的反应是（）参考答案:RNA的转录94.以下关于一碳单位的生理功能的说法错误的是（）参考答案:一碳单位代谢障碍会导致再生障碍性贫血95.尿素合成的关键酶是（）参考答案:氨甲酰磷酸合成酶I96.肌肉组织中氨的转运方式为（）参考答案:丙氨酸-葡萄糖循环97.体内氨基酸脱氨的主要方式是（）参考答案:联合脱氨基98.下列关于L-谷氨酸脱氢酶催化L-谷氨酸脱氢的说法错误的是（）参考答案:以FAD或FMN为辅基99.在泛素-蛋白酶体途径的胞内蛋白质降解中，发挥识别待降解蛋白质并将泛素转移至蛋白质功能的酶是（）参考答案:E3泛素连接酶100.下列关于蛋白质消化的说法错误的是（）参考答案:食物中的蛋白质在口腔中被初步消化101.氮平衡是指摄入蛋白质的含氮量与排泄物中含氮量之间的关系，恶性营养不良的病人会出现（）参考答案:氮负平衡102.以下氨基酸中不是营养必需氨基酸的是（）参考答案:Asp103.人类基因组计划（HGP）研究表明人单倍体基因组中含有的碱基对数约为（）参考答案:3×109bp104.基因组是指（）参考答案:一种生物体具有的所有遗传信息的总和105.下列属于真核生物基因的特点是（）参考答案:断裂基因106.人类基因组中，编码蛋白质的基因大多数属于（）参考答案:单拷贝序列107.大肠杆菌DNA复制需要：(1)DNA聚合酶Ⅲ；(2)解链蛋白；(3)DNA聚合酶Ⅰ；(4)引物酶；(5)DNA连接酶参加。
细胞膜蛋白提取方法
1. 提取液制备：每 200ul 蛋白提取液 A 和 C 中分别加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物， 混匀后置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞①，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基， 尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 在细胞沉淀中加入 200μl 冷的提取液 A，高速涡旋振荡 15 秒，置冰上 20 分钟，
使用本产品发表的部分新文献：
● Ge Zhao, Siyuan Li, Wei Zhao et al.
Phage Display against Corneal Epithelial Cells
Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
细胞膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
提取液 A 提取液 B 膜蛋白稀释液 C 蛋白酶抑制剂混合物
细胞膜-胞浆-核膜蛋白分步提取方法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
浴10 分钟，37℃下②1000g-2000g 力离心5 分钟，此时溶液分为两层
（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40μl。小心移除上 层，用1-2 倍体积的提取液D 溶解下层即为细胞核膜蛋白。 9. 在步骤6 中所得到的上清（I）中加入5ul 提取液C，充分混匀。37℃水浴10 分钟。
10. 37℃下② 1000g 离心3 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是胞浆
蛋白部分，下层是细胞膜蛋白部分约为40-50μl。 11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
12. 用80-200μl 冰冷的提取液D 溶解步骤10 中的下层部分，即得细胞膜蛋白。 13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将匀浆吸入 另一预冷的干净离心管。在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。）
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试 剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。 5. 在4℃，1000g 条件下离心5 分钟。 6. 快速将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡15 秒。 7. 将混匀的提取液B 置2-8℃振荡1-2 小时，至沉淀充分裂解，沉淀明显减少。8. 37℃水
蛋白质膜分离
蛋白质膜分离是一种实验技术，用于将细胞膜中的蛋白质与其他细胞组分分离开来，以便对其进行进一步的研究和分析。
这种技术常用于生物学和生物化学研究中，特别是在研究细胞膜蛋白的结构、功能和相互作用方面。
常见的蛋白质膜分离方法包括：
1. 亲和纯化：利用蛋白质与某些特定配体（例如抗体、配体分子等）之间的特异性相互作用，将目标蛋白质从混合物中纯化出来。
例如，可以使用标记有特定抗体的磁珠或琼脂糖柱进行亲和纯化。
2. 凝胶电泳：利用凝胶电泳技术，根据蛋白质的大小、电荷等特性将蛋白质从混合物中分离出来。
常用的凝胶电泳包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和原位凝胶电泳（Native PAGE）。
3. 离心分离：利用离心技术，将细胞裂解液或组织匀浆在不同离心速度下离心，从而分离出不同密度或大小的细胞组分。
通过不同离心速度的选择，可以将膜蛋白从其他细胞组分中分离出来。
4. 超声波破碎：利用超声波对细胞进行破碎，将细胞膜破碎释放出的膜蛋白与其他细胞组分分离开来。
5. 亲水性与疏水性分离：利用膜蛋白通常具有的疏水性和亲水性特点，采用相应的溶剂或条件将其从其他细胞组分中分离出来。
例如，可以利用疏水性相互作用将膜蛋白从细胞溶液中提取到有机溶剂中。
这些方法通常会根据具体的研究目的和实验条件进行选择和优化，以达到最佳的分离效果。
在实际操作中，常常需要结合多种方法进行蛋白质膜的分离和纯化。
物质的跨膜运输方式
物质的跨膜运输方式生命体系中的细胞是基本的单位，通过细胞膜与外界进行物质交换和信息传递。
在细胞膜中，存在多种跨膜运输方式，包括主动转运、被动扩散和细胞外液相转移等，这些方式能够帮助细胞实现物质的吸收、排泄和传递，保证生命体系的正常运转。
本文将对这几种跨膜运输方式进行详细介绍。
一、主动转运主动转运是指细胞膜通过能量耗费将物质从低浓度向高浓度方向转移的过程。
这种方式需要ATP的供能，因此也被称为ATP酶转运。
主动转运可以分为直接和间接两种。
1.直接主动转运直接主动转运是指细胞膜上的蛋白质通过ATP酶催化将物质转移到高浓度方向。
其中，钠-钾泵是最为典型的直接主动转运方式。
钠-钾泵是一种跨膜蛋白，能够将细胞内的三个钠离子和两个钾离子互换，使得细胞内外的离子浓度差得以维持。
这种方式在神经元的信号传递、肌肉收缩、肾脏的滤波功能等方面都发挥着重要作用。
2.间接主动转运间接主动转运是指细胞膜上的蛋白质利用ATP酶耗费的能量将物质转移到高浓度方向，但是这种方式并不直接与物质结合，而是通过运输载体进行。
例如，葡萄糖转运蛋白就是一种间接主动转运方式。
在细胞内，葡萄糖转运蛋白可以将葡萄糖分子转移到高浓度方向，从而实现葡萄糖的吸收和利用。
二、被动扩散被动扩散是指物质在浓度梯度的作用下自由地从高浓度向低浓度方向扩散的过程。
这种方式不需要能量的供应，是细胞内物质转移的主要方式之一。
被动扩散可以分为简单扩散和载体介导扩散两种。
1.简单扩散简单扩散是指小分子物质通过细胞膜的疏水层自由地扩散到低浓度方向，如氧气、二氧化碳等气体分子、水分子等。
这种方式具有高效性和速度快的特点，但是只适用于小分子物质的扩散。
2.载体介导扩散载体介导扩散是指物质通过跨膜载体蛋白的介导实现扩散。
这种方式适用于大分子物质的扩散，如葡萄糖、氨基酸等。
在载体介导扩散中，跨膜蛋白会与物质结合形成复合物，然后通过分子运动的方式将物质转移到低浓度方向。
三、细胞外液相转移细胞外液相转移是指物质通过细胞膜的外部液相转移到细胞内或细胞外的过程。
跨膜蛋白的表达过程
跨膜蛋白的表达过程跨膜蛋白是一类重要的膜蛋白，存在于生物体的细胞膜上。
它们具有跨越细胞膜的能力，并在细胞膜两侧发挥重要的生物学功能。
跨膜蛋白的表达过程涉及多个步骤，从基因转录到蛋白质合成再到转运和定位至细胞膜上。
本文将详细介绍跨膜蛋白的表达过程，并对相关的机制进行分析和探讨。
跨膜蛋白的表达过程可以从基因转录开始。
首先，细胞核内的DNA会解旋，形成一个可以用作mRNA合成模板的DNA链。
这个过程称为转录。
转录过程中，RNA聚合酶会通过识别和结合基因的启动子区域，开始合成mRNA链。
在跨膜蛋白的基因中，基因序列中会包含编码跨膜区域的信息。
在RNA合成结束后，转录过程会通过终止信号而终止。
这时，产生的mRNA链会进一步经历剪接过程。
剪接过程是一种将mRNA前体中的内含子序列移除，使编码剩余序列连接起来的过程。
跨膜蛋白的剪接过程往往复杂多样，它可以产生多种变体，编码不同长度和结构的跨膜蛋白。
在剪接后，mRNA会进入细胞质，在此过程中发生翻译，即mRNA合成蛋白质。
翻译是通过转运RNA（tRNA）和核糖体两个重要的分子机制来完成的。
在跨膜蛋白的翻译过程中，起始密码子将在核糖体的识别下与tRNA配对，开始合成蛋白质链。
在翻译过程中，tRNA会通过与mRNA上的密码子配对，带来氨基酸，以及位置信息，将氨基酸正确地连接起来，形成蛋白质链。
对于跨膜蛋白，翻译机器必须正确地合成包含跨膜螺旋结构的氨基酸序列。
在蛋白质合成完成后，新合成的蛋白质通常需要参与折叠、修饰和定位等一系列后续过程，以确保其正确的功能和位置。
对于跨膜蛋白，定位至细胞膜上是非常重要的。
通常，蛋白质在细胞质中会与伴体蛋白相互作用，并形成复合物。
这些伴体蛋白可以帮助新合成的蛋白质正确地折叠和定位。
跨膜蛋白通常具有一个信号序列，称为信号肽或膜领域，这个序列能够将蛋白质定位至细胞膜。
一些跨膜蛋白的信号序列位于蛋白质的氨基端，被称为氨基端信号肽，而另一些跨膜蛋白的信号序列则位于蛋白质的内部或羧基端。
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图片说明：用细胞跨膜蛋白提取试剂盒提取细胞样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。
图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头
● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器
● 冰箱，冰盒
使用方法： A． 细胞跨膜蛋白提取 1. 取 5-10×106 个以上细胞①，在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，收集细胞。 2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 细胞样品中加入 200μl 冷的试剂 A，2ul 蛋白酶抑制剂混合物，2ul 磷酸酶抑制 剂混合物，高速涡旋振荡 15 秒，置冰上 10-15 分钟。 4. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在 4℃，13000×g 条件下离心 5 分钟。
贝博细胞跨膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产跨膜蛋白提取 试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白 和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨 膜至 7 次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。 提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
B． 组织跨膜蛋白提取 1. 取适量组织样本剪碎，加冷 PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或 用液氮研磨），冰上静置 5 分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。 2. 在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，弃上清。 3. 按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴 5-10 分钟，37℃下②2000g
离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是水相，下层是有机相约 为 20μl。 6. 收集水相留作备用分析③。 7. 用 150-200μl 冰冷的试剂 B 稀释有机相，混匀后冰浴 2min，37℃水浴 5-10 分钟，
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BB-3125
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3301
磷酸化蛋白提取试剂盒
BB-3105
磷酸酶抑制剂混合物
有效期： 一年。
BB-3114-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 500μl
产品简介： 哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。跨
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此跨膜蛋白样 本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备跨膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂 增溶。去污剂处理会使跨膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了跨膜蛋白的功能研究。
37℃下②2000g 离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是水相，
下层是有机相约为 20μl。 8. 按步骤 7 再次抽提有机相(此步骤可以选做)。 9. 用 80-200μl 冰冷的试剂 C 稀释有机相，即得跨膜蛋白。 10. 将上述蛋白提取物定量④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验⑤。
细胞跨膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
跨膜蛋白 试剂 A 跨膜蛋抑制剂混合物
BB-3114-1 50T 10ml 20ml 10ml
250μl 250μl
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液 2-8℃保存。磷酸酶抑制剂 2-8℃保存。