天花粉蛋白对人宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究

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天花粉蛋白对HepA-H细胞和HeLa 细胞抑癌活性研究

天花粉蛋白对HepA-H细胞和HeLa 细胞抑癌活性研究豆长明;李继承【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2005(021)005【摘要】目的:比较分析商品天花粉蛋白(TCS1) 和从鲜药材中提取分离出的天花粉蛋白粗品(TCS2),对HepA-H细胞(腹水型肝癌高转移株细胞)和HeLa细胞(人宫颈癌肿瘤细胞)的杀伤作用,并进一步探讨其抑癌作用机理.方法: MTT法检测药物的细胞毒作用,电镜观察细胞超微结构改变,电泳检测细胞DNA生物化学特征改变.结果: TCS1和TCS2对HepA-H细胞作用不明显(P>0.05),而对HeLa细胞具有显著性作用,呈明显时效、量效关系(r>0.864, P<0.05或P<0.01).在相同作用时间内,TCS2作用组对细胞生长抑制率均高于TCS1组(P<0.01).进一步研究发现,HeLa 细胞经TCS2作用后,细胞表面微绒毛消失,胞膜发泡,核染色质浓缩边集,并出现凋亡小体,细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳呈典型的梯形带.结论: HepA-H细胞对天花粉蛋白不敏感,而HeLa细胞对TCS1和TCS2敏感,其中TCS2抑癌活性明显强于TCS1,细胞生长受抑制作用显著,作用机制与诱导细胞凋亡相关.【总页数】5页(P980-984)【作者】豆长明;李继承【作者单位】浙江大学细胞生物学研究所,浙江,杭州,310031;浙江大学细胞生物学研究所,浙江,杭州,310031【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞增殖和细胞调亡的影响 [J], 黄益玲;黄利鸣;石新兰;张兆祥;邢学森2.天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞TSLC1基因甲基化及其表达的影响 [J], 王艳华;黄利鸣3.胆管癌全抗原致敏树突状细胞和细胞因子诱导杀伤细胞共培养体外抑瘤活性研究[J], 蒋小峰;袁晓鹏;张大伟;卢海武;温子龙;郑强;刘颂航;薛平4.重组天花粉蛋白的原核表达、纯化及其对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响 [J], 尤程程;黄利鸣;王艳林;韩钰;李雪梅;曹春雨5.天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及APC基因去甲基化 [J], 陈勇;郑蓉;刘永珍;陈冬丽;陈双郧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

突出中医特色科学构建亚健康引起广泛重视

1446r et i cul um st r es s t o t he cel l deat h program.M echani sm ofcas pas e act i vat i on.J B i o1C hem2001,276(36):33869-33874 [25]R abuf fet t i M,Scoi r at i C,Tarozzo G,et al.Inhi bi t oi n ofcaspas e-1l i ke act i vi t y by A c-Tyr-V a l-A al-A s p–chl or om et hyl ket one i nduces l ong-l as t i ng neur oprot ect oi n i n cerebr al i s chem i a t hrough apopt osi s r es uct i on and decr eas e of proi nf l am m at ory cyt oki nes[J].J N euros c i,2000,20(12):4398-4404 [26]Thor nber r y N A,L azebni k Y.C aspas es:enem i es w i t hi n.Sci ence1998,281(5381):1312-1316[27]费晓方,王本祥,池岛乔,等.吴茱萸碱诱导人子宫颈癌H eLa细胞凋亡的机制研究.药学学报,2002,37(9):673-676[28]胡向阳,孟刚,鲍扬漪,等.紫杉醇诱导H el a细胞凋亡及其与凋亡相关蛋白的关系.中国药理学通报,2004,20(9):1063-1067[29]吴振,吴立军,田代真一,等.紫草素诱导H eLa细胞凋亡经过cas pase激活的机制.中国药理学通报2004,20(5):540-544[30]张春玲,吴立军,田代真一,等.冬凌草甲素通过激活cas pas e诱导H eL a细胞凋亡.中国药理学通报2003,19(5):521-525[31]S hawPC,L ee K M,W ong K B,et al.R ecent advances i n t ri chos ant hi n,a r i bos om e-i nact i vat i ng pr ot ei n w i t h m ul t i pl e phar m acol ogi calproper t i es[J].Toxi con,2006,45(6):683-689.[32]黄益玲,黄利鸣,石新兰,等.天花粉蛋白对人宫颈癌H eLa细胞增殖和细胞调亡的影响.中国药理学通报,2005,21(2):253～254[33]何金峰,李继承.天花粉蛋白抑制H eLa细胞生长及诱导细胞凋亡之机制探讨.解剖学报,2006,37(3):309-314[34]梁克明,谢艳华,石梅,等.九节龙皂甙对H el a细胞生长的抑制作用.第三军医大学学报,2002,24(6):725-728[35]侯敢,黄迪南.原花青素对肿瘤坏死因子-α诱导H eL a细胞凋亡和caspas e-8活化的影响.中草药,2005,36(9):1349-1352[36]刘秋燕,吕占军,何小波,等.雷公藤内醋醇对人宫颈癌细胞的凋亡诱导效应.中国肿瘤生物治疗杂志,2004,11(1):36-38[37]黄泽亮,周曦,陈忠东,等.紫杉醇诱导宫颈癌H eLa细胞凋亡及对端粒酶活性的影响.中国妇产科临床杂志,2005,6(3):196-199[38]马东礼,童善庆,肖家祁,等.榄香烯对H eLa细胞端粒酶催化亚单位基因表达的作用.中国癌症杂志,2001,11(1):9-13（收稿日期：2008-06-08）突出中医特色科学构建亚健康引起广泛重视[本刊讯]亚健康状态是一种人体生命活力和功能的异常状态，不仅表现为生理功能或代谢功能的异常，也包含了心理状态的不适应和社会适应能力的异常，其最大特点就是尚无确切的病变的客观指征，但却有明显的临床症状。

不同剂量的天花粉蛋白对Caski细胞凋亡的影响

不同剂量的天花粉蛋白对Caski细胞凋亡的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：张艳琼，黄利鸣，李红军，吴江锋【摘要】目的探讨天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌Caski细胞生长的抑制作用及量-效关系。

方法不同浓度TCS作用于体外培养人宫颈癌Caski细胞株，采用吖啶橙荧光染色，荧光显微镜观察TCS对Caski 细胞的生长抑制作用；透射电镜和TUNEL检测法观察Caski细胞凋亡及TCS诱导Caski细胞凋亡的量效关系。

结果TCS对Caski细胞的生长具有明显的抑制作用，透射电镜和TUNEL法证实该抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的。

在一定浓度范围内，细胞凋亡数与TCS 的浓度之间有剂量依赖性。

结论TCS能诱导体外培养Caski细胞凋亡，最佳浓度为60 μg/ml。

【关键词】天花粉蛋白；Caski细胞；细胞凋亡Abstract:ObjectiveTo study the inhibitory effect of different dose trichosanthin (TCS) on Caski cells. MethodsThe antiproliferative effect of different dose TCS on Caski cells wasobserved by fluorescence microscope. The TUNEL assay and electromicroscope were used for measurement of apoptosis of different dose TCS on The Caski. Results The apoptosis of different dose TCS on Caski Cells acted as the antiproliferation. The quantity of the apoptosis of the Caski cells depended on TCS’dose within certain range. ConclusionThe apoptosis of the Caski cells will happen when they were dealt with TCS and the best dose of the TCS is 60 μg/ml.Key words:Trichosanthin; Caski cell; Apoptosis人子宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤，严重威胁妇女健康。

天花粉蛋白对人肺癌细胞株凋亡及增殖的影响

提示ＴＳ具有一定的抗癌作用，Ｃ其机制与抑制细胞的增殖及促进细胞的凋亡有关。
【关键词】天花粉蛋白；人肺癌细胞株；凋亡；增殖
【中图分类号】Ｒ３．７４２【文献标识码】Ａ【文章编号】１７ — ７１２０）２７ — ２６３９０（０８２～３０
１２细胞．
、
不同浓度的ＴＳ药液对细胞增殖率有一定的抑制作用，Ｃ抑制能力随着药物浓度的增大而增强（２。表）
天花粉蛋白（ｉｏａｔｉ，ｃ）是从葫芦科植物栝楼ｔｃｓｎｎＴＳｒｈｈ
７％冷乙醇固定过夜，然后用ＰＳ把乙醇洗干净，加入０Ｂ
（ｒｈｓｎｅｋｒｏｉＴｉｏａｔｓｉｌｉｃｈｉｗ）的块根中分离出来的一种单链核糖体失活蛋白（ｉｏｏｅｉａｔａｎｐｏｉ，Ｉ）由２７个氨基酸残基ｒｓｍ —ｎｃｖｔｇｒｔｎＲＰ，４ｂｉｉｅ组成，其一级结构和晶体结构均已阐明。最初的研究表明，ＣＴＳ直
基本现象，抑制细胞增殖、促进细胞凋亡是寻找抗肿瘤药物的靶
点之一。本文旨在研究ＴＳ对人肺癌细胞凋亡及增殖的影响，Ｃ选择了人肺癌细胞株ｂＰ、Ｃ、ＧＳＬ作为靶细胞进行体外试验，探索ＴＳ的抗肿瘤机制，Ｃ以促进ＴＳ在治疗肿瘤上的应用。Ｃ
２结果
不同浓度的ＴＳＣ对三种细胞株的ＡＯ有一定的促进作用，Ｐ
与空白对照组比较有显著性差异（１ｏ表

天花粉蛋白对A549细胞增殖的影响

天花粉蛋白对A549细胞增殖的影响龚权;丁克清;李侃【摘要】目的:观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响。

方法:应用MTT法检测天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响。

结果:经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑,并呈一定的剂量时效依赖性。

结论:天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖。

【期刊名称】《长江大学学报：医学卷》【年(卷),期】2006(000)012【总页数】4页(P)【关键词】天花粉蛋白;A549细胞株;体外诱导【作者】龚权;丁克清;李侃【作者单位】长江大学医学院;长江大学医学院;湖北荆州;湖北荆州【正文语种】中文【中图分类】R285.5天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)是一种从中药栝楼中提取的有效成分，主要有引发中期流产，抑制HIV增殖，调节人体免疫功能等作用[1]。

它能够水解真核细胞核糖体60S大亚基特定位点的腺苷酸，抑制细胞蛋白质的合成。

研究表明天花粉蛋白对于宫颈癌、胃癌、肝癌等细胞的生长具有抑制作用，并能诱导以上细胞凋亡[2]。

而其对于肺癌A549细胞的生长抑制作用却少见研究，现将实验结果报道如下。

1 材料与方法1.1 材料TCS(上海金山制药厂，1.2 mg/mL)，RPMI-1640培养基(GIBCO公司)，胎牛血清(FBS，杭州四季青公司)，胰蛋白酶(Biotech公司)，噻唑蓝(MTT，Biotech公司)，二甲基亚砜(DMSO，Fluka公司)，酶标仪(ST-360，上海智华医学仪器有限公司)。

1.2 方法1)细胞培养人肺腺癌细胞株A549由中山大学肿瘤研究所惠赠，于含10%热灭活(55℃，30 min)胎牛血清的RPMI-1640(含体积分数为10%FBS，1×105U·L-1青霉素，100 mg·L-1链霉素)，37℃ 5% CO2及饱和湿度下培养，每3～4 d消化传代1次。

2)细胞形态学观察将处于对数生长期的A549细胞以不同浓度的TCS处理，倒置显微镜下观察其形态改变，4%甲醇固定，并作Giemsa染色，观察细胞膜，胞浆及细胞核的改变。

天花粉蛋白抗肿瘤作用及机制的研究进展

天花粉蛋白抗肿瘤作用及机制的研究进展周海祥;卜平;董小耘;高云飞;孟杰依;邓心燕【摘要】Trichosanthin(TCS)is a kind of alkaline plant protein with many pharmacological activities separated and purified from root tuber of Fructus Trichosanthis,belonging to type-Ⅰ ribosome inactivating protein. TCS has RNA N- glyco-sidase activity,can hydrolyze the eukaryotic 28S ribosomal rRNA specific adenosine,and inhibit cellular protein synthesis. At first TCS was used for labor induction,hydatidiform mole,ectopic pregnancy and other gynecological diseases,t hen it′s found TCS has good antiviral,immunomodulatory and antitumor effects. Most of the scholars found that TCS has a significant anti-tumor effect,and in vivo and in vitro studies show that TCS has a multi-system antitumor effect,with significant effect. Although there are many reports about the anti-tumor mechanism of TCS,it has not been clearly defined.%天花粉蛋白(TCS)是一种分离提纯于中药瓜蒌块根中的碱性植物蛋白,属于Ⅰ型核糖体失活蛋白,具有RNA N-糖苷酶活性,能够水解真核细胞核糖体28S rRNA特定位点的腺苷酸,从而抑制细胞蛋白质的合成,因此TCS具有多种药理学活性.TCS起先用于引产,治疗葡萄胎、宫外孕等妇科疾病,伴随研究深入,发现TCS在抗病毒、调节免疫和抗肿瘤等方面亦具有良好作用.多数学者对于TCS的抗肿瘤作用尤为重视,体内外研究发现TCS具有多系统抗肿瘤作用,效果明显.虽然对于TCS的抗肿瘤机制研究报道很多,但尚未有明确统一阐述.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2017(023)016【总页数】5页(P3197-3201)【关键词】天花粉蛋白;抗肿瘤作用;细胞增殖;细胞凋亡【作者】周海祥;卜平;董小耘;高云飞;孟杰依;邓心燕【作者单位】扬州大学医学院,江苏扬州 225001;江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州 225001;扬州大学医学院,江苏扬州 225001;江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州 225001;扬州大学医学院,江苏扬州 225001;江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州 225001;扬州大学医学院,江苏扬州 225001;江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州 225001;扬州大学医学院,江苏扬州 225001;江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州225001;扬州大学医学院,江苏扬州 225001;江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州 225001【正文语种】中文【中图分类】R273天花粉为葫芦科植物瓜蒌或双边瓜蒌的干燥根，具有清热泻火，生津止渴，消肿排脓之效，主治热病烦渴，肺热燥咳，疮疡肿毒等疾病。

天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究

Ｗｏｅａｄｔｅｅｄｎ．Ｃｏｃｕｉｎｒｈｓｔｉａｎｉｉｔｅｐｏｉｒｔｎｏｅａｃｌｙｉｄｃｉｎｏｐｐｏｉ．ｓａｄｓｍｅｄｐｎｅｔｎｉｎｌｓｏＴｅｏａｈｎｃｎｉｈｂｔｈｒｌｅａｉｆＨｌｅｌｂｔｉｕｔｆｏｔｓｉｎｆｏｓｓｎｏａｓ
Ａｂｔａｔ０ｊｃｖｏｓｄｅｉｈｂｏｆｃｏｉｈｓｎｉ（ｃ）ｏｅｅｓｎｓａｔ—ｔｏｅｈｉＭｅｈｓｒｃ：ｂｅｔｅＴｔｙｔｉｉｒｅｅｔｆｒｏａｔｎＴｓｎＨｌｃｌｄｉｎｉｕｈｎｔｙｔｅｈａｌａｔｉｕｒｍｃａｓｍｎｍ．ｔ．
ＲｅｌｔｅｐｏｉｒｔｎｏＬｅｌｓｉｎｆａｔｎｉｉｄｂＣｓＩｓＴｒｌｅａｉｆＨｅａｃｌＷａｓｉｃｌｉｈｂｔｙＴＳ．Ｈｅａｃｌｈｗｄａｓｒｌｆｈｒｃｅｉｔｈｇｓｏｌｈｆｏｓｇｉｎｙｅｌｅｌｓｏｅｅｉａａｔｒｓｉｃａｅｆｓａｏｃｃｎ
天花粉蛋白抑制ＨＬｅａ细胞增殖的实验研究
黄益玲，黄利鸣，惠燕，鲁华
（三峡大学医学院，湖北宜昌４３０）４ｏ２
摘要：目的研究天花粉蛋白（Ｃ）ＴＳ对人宫颈癌ＨＬ细胞生长的抑制作用，ｅａ探讨ＴＳ抗肿瘤的作用机制。方法采用Ｃ
ａｏｔｓｓｓｃｅｌｖｌｍｅｓｒｎｋｇ，ｅｒｍａｉｏｄｓｔｏｐｐｏｉｕｈａｃｌｏｕｈｓｉａｅｈｏｔｎｃｎｅｎａｉｎ；ｔｅＯｃｒｎｅｏｈＣｕｒｅｃｆＤＮＡａｅｄａｏｏｉａｅｏｌｅｌｌｄｄｒａｐｐｔｓｓｌｔｆＨｅａｃｌｓｎ

天花粉蛋白对胃癌细胞株SGC-7901凋亡影响的体外研究

天花粉蛋白对胃癌细胞株ＳＧＣ－7901凋亡影响的体外研究目的: 探讨天花粉蛋白（TCS）抗肿瘤的机制,为TCS在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。

方法:采用流程式细胞仪检测胃癌细胞株SGC-7901凋亡。

结果：50、100、200 μmol/L TCS能够诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡，凋亡率与剂量呈正相关，SGC-7901的凋亡随药物浓度及作用时间变化，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高，并出现典型的凋亡峰。

结论：TCS能诱导胃癌细胞凋亡，并明显抑制癌细胞增殖，具有抗肿瘤作用。

标签：天花粉蛋白；胃癌；细胞凋亡天花粉蛋白（TCS）是一种从中药恬楼块根内分离提纯的单链核糖体失活蛋白，具有抗炎、解热、抗氧化、抗过敏等作用[1]。

天花粉蛋白具有抗早孕[2]、抗HIV[3]、免疫调节[4]及抗肿瘤等多种生物活性，对抗早孕、抗HIV、免疫调节等机制已进行了大量研究，但有关其抗肿瘤机制研究较少。

笔者采用从中药天花粉中提取的天花粉蛋白作用于胃癌细胞株SGC -7901,从细胞凋亡的角度，探讨天花粉蛋白诱导胃癌细胞凋亡的作用机制，为中药天花粉蛋白在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。

1 实验材料与方法1.1 仪器流式细胞仪(Fluorescence activated cell sortor，FACS)，Annexin V-PE，Apoptosis Kit I，Cycle TES TTM PLUS DNAReagent Kit(均为BectonDickinson公司试剂）。

TCS，江苏天晴制药总厂产品，RPMI 1640培养基(Sigma)，1.2 细胞培养胃癌细胞株SGC-7901用含10%的小牛血清、青霉素(100 μmol/L)、链霉素(1 mg/ml)的RPMI 1640培养基，置37℃,5%CO2孵箱内静置培养。

1.3 早期细胞凋亡的检测按AnnexinV-PE，Apoptosis Kit I操作手册进行检测。

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中国医药导报2019年6月第16卷第17期•论著•天花粉蛋白对人宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及具机制研究王凡2邓心燕2姚铭挥I田甜I刘影I王慧I王佳I董小耘皿1.扬州大学医学院，江苏扬州225000；2.江苏省中西医结合老年病防治重点实验室，江苏扬州225000［摘要］目的研究天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌细胞(HeLa细胞)诱导凋亡的作用及机制。

方法低剂量(7”mol/L)、中剂量(14»mol儿)和高剂量(28p.mol/L)TCS处理HeLa细胞10-82h后，观察细胞形态及细胞生长情况。

同样梯度剂量的TCS处理HeLa细胞24h后,检测细胞周期，凋亡变化，应用蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋目表达。

结果TSC处理后HeLa细胞形态皱缩，贴壁变差，增殖减少,呈剂量依赖性，低、中剂量TCS组随时间延长，细胞数逐步减少(r=-0.9727、-0.9757,P<0.05)o处理24h后中、高剂量TCS组期比例较空白对照组增加(P<0.05),低、中、高剂量TCS组S期比例较空白对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)。

低冲、高剂量TCS 组HeLa细胞凋亡率较空白对照组增加(P<0.05)0与空白对照组比较，低、中、高剂量TCS组Caspase-3、Cas-pase-9、聚腺昔二磷酸核糖聚合稱(PARP)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达水平逐渐减少，与TCS呈现浓度依赖关系(r=-0.969/<0.05)。

结论TCS通过活化Caspase家族蛋白、诱导细胞凋亡，进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，从而发挥抗肿瘤作用。

［关键词］天花粉蛋白；细胞凋亡；细胞周期；半胱天冬酶；宫颈癌细胞冲图分类号］R737.33［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2019)06(b)-0013-05Effect of trichosanthin on proliferation and apoptosis of human cervical cancer cells and research on its mechanismWA NG Fan.'2DENG Xinyan'2YA0Minghui'TIAN Tian'LIU Ying WANG Hui'WANG Jia'DONG Xiaoyun1^1.Medical College of Yangzhou University,Jiangsu Province,Yangzhou225000,China;2.Jiangsu Key Laboratory ofIntegrated Traditional Chinese and Western Medicine for Prevention and Treatment of Senile Diseases,Jiangsu Province,Yangzhou225000,China[Abstract]Objective To study the effect and mechanism of trichosanthin(TCS)on inducing apoptosis of human cervical cancer HeLa cells.Methods HeLa cells were treated with low(7|jimol/L),medium(14|xmol/L)and high(28pcmol/L) doses of TCS for10-82h,the cell morphology and inhibition of cell growth was observed.The cell cycle and apoptosis was detected and Western blot was performed to detect the protein expression of apoptosis proteins of cervical cancer cells HeLa after treated with TCS for24h.Results HeLa cells of cervical cancer treated by TSC showed wrinkies and deformation,the growth of HeLa cells was inhibited.The number of cells in low and medium dose of TCS group decreased with time(r=-0.9727,-0.9757,P<0.05).Compared with the blank control group,the G/G]phase of HeLa cells in medium,high dose of TCS group were significantly increased(P<0.05),and the S phase in low,medium,high dose of TCS group were decreased after TCS treated for24h,the differences were statistically significant(P<0.05).The apoptosis rate of HeLa cells in the low,medium and high dose of TCS group was increased compared with that in the blank control group(P<0.05).Compared with the blank control group,the protein expressions levels of Caspase-9, Caspase-3,polyadenosine diphosphate ribosome polymerase(PARP)and p-extracellular regulated protein kinase(ERK) in low,medium,high dose of TCS group were gradually decreased in a dose-dependent manner after of TCS treatment(r= -0.969,P<0.05).Conclusion TCS can induce apoptosis by activating the Caspase family of proteins to inhibit the proliferation of cervical cancer HeLa cells to exert anti-tumor effects.[Key words]Trichosanthin;Cell apoptosis;Cell cycle;Caspase;Cervical cancer cells宫颈癌是妇女常见的死亡原因之一叫目前对宫颈癌的治疗以手术、放化疗以及靶向治疗为主，但其［S金项目］江苏省中西医结合老年病防治重点实验室开放课题(2015LNB005)。

'通讯作者不良反应不可忽视。

研究显示中医药具有潜在的抗肿瘤作用何。

天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)是从天花粉植物根茎中分离的真核核糖体灭活蛋白，具有多种生物活性，包括诱导流产、抗肿瘤和抗HIVW过去20年研究发现,TCS具有潜在的抗肿瘤活性，且具有抗CHINA MEDICAL HERALD Vol.16No.17June201913•论著•中国医药导报2019年6月第16卷第17期癌谱广、组织毒副作用小、价格低廉的特点，这些使 TCS 较传统化疗药物有显著的优势叫但其具体的分子生物学机制的研究却鲜有报道。

因此，本研究将在细胞层面通过研究TCS 抑制宫颈癌HeLa 细胞生长的机制，揭示TCS 抗肿瘤的分子生物学机制。

1材料与方法1.1细胞人宫颈癌HeLa 细胞购自中国科学院细胞库。

1.2药物提取TCS 采用硫酸鞍分级沉淀法提取叫桔楼根干品(安徽省潜山县潜山园庄桔篓专业合作社)粉碎机粉碎, 纯净水浸泡2 h,40%硫酸鞍沉淀,8000 g 离心0.5 h,取上清液，透析,75%硫酸钱沉淀,沉淀物溶解,透析, -80T 冻干。

经NanoDrop 仪鉴定,TCS 纯度为95%。

1.3试剂及仪器RPMI-1640培养液(美国赛默飞公司)；细胞周期检测试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司，批号： 20150521 )； Annexin V-AF647流式检测试剂盒(南京福麦斯生物技术有限公司，批号:647100) ； Caspase-3、 Caspase -9,聚腺昔二磷酸核糖聚合酶(PARP)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK 抗体(美国CST 公司)。

低速台式离心机(湖南湘仪公司，离心半径9 cm)。

1.4细胞形态结构观察及增殖情况统计分空白对照、低剂量(7 |xmoVL),中剂量(14 jimol/L) 和高剂量(28 p,mol/L)的TCS 干预HeLa 细胞10、34、 58,82 h 后，显微镜观察细胞形态结构，台盼蓝染色计数拒染活细胞。

1.5流式细胞仪检测细胞周期分空白对照、低剂量(7 |Jimol/L)冲剂量(14 (jimol/L) 和高剂量(28 |jimol/L)的TCS 干预HeLa 细胞24 h 。

收集细胞按产品说明书加入RNaseA 和PI 染色细胞并检测细胞周期，使用ModFit LT 软件分析。

1.6流式细胞仪检测细胞凋亡细胞铺板及TCS 干预方法同步骤“1.5”,24 h 后收集细胞,按照试剂说明书加入AnnexinV-AF 647和 PI 染色并检测，使用Flowjo 软件分析。

1.7蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase 酶原蛋白及ERK 信号通路不同浓度的TCS 干预HeLa 细胞24 h 后收集细胞提取蛋白使用聚丙烯酰胺凝胶系统(SDS-PAGE) 电泳,转膜，封闭后，按1 ： 1000稀释比加入Caspase-3、 Caspase-9 .PARP 及 ERK 和 p-ERK 抗体，按 1 ：5000加入a-actin 抗体，4七过夜孵育。

按1 ：5000配置二抗。

蛋白条带灰度值使用ImageJ 软件分析。