安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。
2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。
3.有关责任：化验室精密仪器室4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容：5.1开机前准备5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
5.2.采样前准备5.2.1打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。
5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。
5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。
5.2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。
5.2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
)5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。
（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
（4）编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。
（5）排气。
旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。
一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。
关泵，关闭排气阀（顺时针）。
（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。
（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。
（2）编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。
（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。
（3）谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。
（4）积分。
从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作1.准备工作-打开高效液相色谱仪电源，并确保与计算机的连接稳定。
-打开色谱柱箱的前盖，并检查柱箱是否安装了所需的柱。
-检查并确认进样器和检测器的所有连接口均已连接到系统中。
-打开色谱仪控制软件，并确保与色谱仪的连接正常。
2.样品准备和进样-准备样品溶液，并使用过滤器将其过滤以去除悬浮物。
-选择适当的进样方式，可以是自动进样器、手动进样或在线进样。
-根据进样方式的不同，设置进样器参数，并将样品注入进样器。
-设置进样体积和进样流速。
3.设定色谱柱和流动相条件-选择合适的色谱柱，根据分析需要选择固定相材料和尺寸。
-设置所需的流动相条件，包括流动相组成、流速和梯度程序等。
-确保流动相的pH值适合分离物质的性质。
4.开始运行HPLC实验-在色谱仪软件中设置分析方法，包括运行时间、梯度程序和检测波长等参数。
-点击运行按钮，开始HPLC分析实验。
-监控进样、分离和检测过程，并保持对系统的稳定控制。
5.数据分析和结果解读-实时监测实验过程中的色谱图和峰形。
-根据标准品或已知样品进行定量分析，并计算所需的峰面积和浓度。
-使用色谱仪软件进行数据分析，并生成报告和结果图表。
-解读分析结果，如峰形和保留时间，确定分离物质的纯度和结构。
6.实验后处理-关闭色谱仪电源。
-清洗色谱柱和进样器，以及其他与样品接触的部件。
-将废液正确处理，并清理实验台面。
-存储和整理实验数据和结果文件，以备后续分析和参考之用。
以上是安捷伦1260型HPLC使用操作的基本步骤，根据具体的实验需求和样品特性，可能需要进行一些调整和优化。
熟悉和掌握这些操作步骤，可以提高实验的效率和结果的准确性。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程? 开机1(把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2(打开计算机，打开主机各模块电源(从上至下)，再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。
3(旋开排气阀(逆时针)，右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。
4(依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。
? 数据采集1. 编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。
2. 编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定:在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC(柱箱)参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定:在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置:默认即可。
7. 关闭排气阀(顺时针)，冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时(定量环体积为20uL)，用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作安捷伦1260型高效液相色谱仪（HPLC）是一种目前广泛应用于科研实验室和分析化验室的仪器，用于分离、鉴定和定量化学物质，尤其在药物研究、食品安全和环境监测等领域有着重要的应用价值。
下面将介绍如何使用安捷伦1260型HPLC进行操作。
1.准备工作-确保HPLC仪器和相关附件的电源已正常连接，并打开电源开关。
-检查溶剂瓶中的溶剂是否充足，并确保应用的溶剂完全溶解。
-测量并记录样品的重量或体积，并准备相应的样品溶液。
-在毛细管芯上安装合适的毛细管，确保毛细管没有损坏。
2.打开安捷伦1260型HPLC软件-打开计算机并登录HPLC软件。
-确保计算机与HPLC仪器连接正常，并与仪器建立通信。
-在软件界面上选择打开一个新的分析方法。
3.设置分析方法-在打开的分析方法中，设置适当的柱温、流速、柱压和波长等参数。
-根据样品的性质，选择合适的检测波长，以获得最佳的检测结果。
-设定进样器的进样体积和方法运行时间等参数，以获得期望的分析效果。
4.进样样品-使用自动进样器或手动进样器将待测样品进入HPLC系统中。
-设置进样器的洗涤方法，以确保不同样品的交叉污染风险降至最低。
-如果使用了自动进样器，将样品盘或样品架连接到进样器上，并设置自动进样的参数。
5.启动HPLC分析-在软件界面上，点击启动按钮，开始运行分析方法。
-监控仪器运行情况，确保流速、柱压等参数稳定在设定范围内。
-观察检测结果的峰形和峰高，并记录峰面积或峰高数据以便后续分析。
6.数据处理与结果分析-使用HPLC软件进行数据处理，可以进行峰识别、峰面积计算和浓度计算等操作。
-将结果数据导出并进行统计分析，如绘制色谱图、拟合曲线和计算浓度等。
-分析结果的可靠性和准确性需要通过质控样品或标准品进行验证。
7.仪器维护和清洁-定期对HPLC仪器进行维护，包括更换毛细管、清洗进样器和柱子，并检查其他配件的磨损情况。
-使用合适的溶剂进行清洗，以去除可能留在系统中的残留物。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260液相操作规程一开机1 打开计算机，登录windows操作系统。
2 打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，出现进样器，泵，检测器，柱温箱四个图标。
若没有出现，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”选项。
二排气1 把各流动相放入溶剂瓶中2 旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流速设到5ml/min，溶剂瓶A设到100％，开泵，排出管线的气体3分钟，柱压＜10bar。
3 依次切换到B,C,D溶剂瓶排气，待排气结束，关泵。
4 将泵的流速设到1.0ml/min，将多元泵设置成做样时的溶剂配比，关闭排气阀（顺时针）。
5 开泵，待柱压稳定后，基线平衡后方可进样。
三设置方法和调用方法1 设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，设定进样量。
在进样模式中输入进样量。
“标准进针”——只能输入进样体积。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置。
2 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“控制”，打开检测器的灯，点击“确认”。
3 在“检测器”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与泵，进样器一致”。
4 紫外检测器参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长。
5 以上模块设置好后，从“方法”菜单中，选中“方法另存为”，输入方法名，点击“确认”。
6 从“方法”菜单中，选择“调用方法”，单击确认。
四设置序列和调用序列1 从“序列”菜单中，选中“序列参数”，选择数据文件路径和输入子目录名称，这样数据会自动保存在指定的文件夹中，方便查找。
2 从“序列”菜单中，选中“序列表”，在样品盘中依次放置好样品，命名样品的名称和批号，选择“方法”，点击“确认”。
3 从“序列”菜单中，选中“调用序列表”，把序列表改好后，点击保存当前序列模板。
点击“文件”，另存为序列模板。
4 点击“进样器”图标上的“序列”或者点击序列表中的“运行”，仪器进样。
Agilent 1260 HPLC 操作规程
Agilent 1260 HPLC 操作规程1 开机1.1 打开电脑1.2 打开液相色谱各个模块的电源1.3 双击桌面“LC1260(Online)”，进入联机界面1.4 排气:1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)1.4.2 右键单击“Pump”图标区域，选择“Method”选项，进入泵编辑画面，设流速:5ml/min，点击“确定”;1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域，点击“Control”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止(一般为5分钟)，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止;1.4.4 右键单击“Pump” 图标，点击“Method”选项，设流速:0ml/min，手动旋紧冲洗阀;1.4.5 右键单击“Pump”图标，点击“Method”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速:1.0ml/min;(不一定是1)1.4.6 同理右键单击“Column Comp”，“DAD”图标，点击“Method”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2 编辑方法2.1 点击“Method”——“Edit EntireMethod”开始编辑完整方法;2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项，进入下一选项卡，选择“Als”(自动进样)，点击“OK”，进入下一选项;2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项，在“Method Comments”中加入方法的信息(如:This is for test!)，选择“OK”，进入下一选项;2.4 泵参数设定:右键单击“Pump”图标，点击“Method…”选项，设置“Flow”:如1.0ml/min;“Stop Time”:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间)，按照要求选择合适比例的流动相配比，选择“OK”，进入下一选项;2.5 自动进样器参数设定:右键单击“Sampler”图标，点击“Method”选项，选择“Injection volume”，输入进样体积，选择“OK”，进入下一选项;2.6 柱温箱参数设定:右键单击“Column Comp”，点击“Method”选项，设置“Left”温度(可设置温度范围:低于室温10?-80?)，一般“Left”和“Right”温度一致，选择“Combined”绑定即可，“Stop Time”选择“As Pump/Injector”，选择“OK”，进入下一选项; 2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ，点击“Method…”选项，下方的空白处输入所需的检测波长(可根据需要选择多个波长，最多可选8个波长);“Stop Time”选择“As Pump/Injector”;“Spectrum” ——“Store”选项下，根据需要选择“None”或“All(全波长扫描)”等选项，选择“OK”，进入下一选项;2.8 编辑方法完毕，从“Method”菜单中，选中“Save Method As”，输入一方法名，选择“OK”，保存方法成功。
安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦HPLC1260操作流程HPLC（高效液相色谱）是一种常用的分离和纯化化学物质的技术。
安捷伦HPLC1260系列是一款先进的高效液相色谱仪器，具有高精度、高灵敏度和高分辨率等优点。
下面是安捷伦HPLC1260的操作流程：1.准备工作a.打开色谱仪电源，并确认电源线已连接到稳定的电源插座。
b.打开色谱仪的仪器主机，等待一段时间，让仪器预热至工作温度。
c.确保溶剂瓶中的溶剂已经充足，且瓶盖已经拧紧。
d. 打开安捷伦 ChemStation 软件，点击“仪器控制”界面上的“打开仪器”按钮，连接仪器。
2.设置方法b.在“新建方法”界面上，填写方法名称、采样装置、检测器类型等信息。
c.在“进样”选项中设置进样体积、进样方式和进样流量。
d.在“柱温控制”选项中设置柱温度。
e.在“梯度程序”选项中设置梯度程序，包括流速、时间和浓度等参数。
f.在“检测器”选项中设置检测器的波长或其他相关参数。
g.设置完成后保存方法。
3.准备样品a.准备样品溶液，并使用过滤器过滤掉杂质。
b.将样品溶液定量注入样品瓶中。
4.进样a. 在 ChemStation 软件界面上点击“方法控制”按钮，选择之前设置好的方法。
b.将样品瓶与自动进样器连接，通过软件控制自动进样器进行进样。
c.等待自动进样器完成进样过程。
5.开始分析a. 在 ChemStation 软件界面上点击“仪器控制”按钮，然后点击“开始”按钮，开始分析。
b.软件会自动控制进样和梯度程序，进行样品分离。
6.结果分析a.在分析过程中，软件会实时显示色谱图和数据。
b.分析结束后，可以导出数据或生成报告。
7.清洗和保养a.在分析完成后，关闭仪器主机。
b.清洗色谱柱和进样器，使用对应的溶剂进行清洗。
c.定期检查仪器的运行状况，如进样量、流速等，进行维护和保养。
总结：。
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色谱峰 数据
色谱峰手动积分
报告→打印报告
主峰要求： 分离度﹥1.5 0.95≤对称因子≤ 1.05 塔板数8000以上 主峰数据
色谱峰实例
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f = o f f ( V P A - T D M - 2 \ V P A - S C J 2 0 1 5 - 0 3 - 2 4 1 1 - 3 1 - 1 6 \ V P A - 2 0 1 5 0 3 2 4 0 0 1 . D )
流动相冷却
流动相在超声机中长时间超声后，由于水 分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中 的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相 系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使 平稳时间延长。
1260HPLC及化学工作站开机使用与关机
打开计算机
打开主机电源
点击仪器1联机进入工作站
关闭排气阀
调节流速与流动相比例
7 0
50
6 0
5 0
标准品
1 2
4 0
40
3 0
2 0
1 0
30
0 0 5 1 0 1 5 2 0 m in
1 环己烷羧酸
20 10
2 丙戊酸钠
0 5 10 15 20 m in
患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
氘灯是易耗品，分析前应最后开灯，不分析样
品应及时关闭氘灯；
流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易
7 0
6 0
5 0
空白
4 0
70
3 0
2 0
1 0
60
0 m in
D A D 1 m A U 8 0
A , S ig = 2 4 8 , 4
R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J
2 0 1 5 -0 4 -0 1
1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 8 .D )
变，时间久了柱子填料会坍陷或松动，最终柱 压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变 流速。
谢谢！
流动相过滤
为了除去流动相中的杂质,保护系统和色谱 柱，在流动相使用完后，装入新的溶剂前应使 用抽滤瓶对溶剂进行过滤。
滤膜：有机膜和水 系膜，二者不能混 用。一般HPLC流 动相过滤使用孔径 为0.45m的滤膜。 针对混合溶剂首选 有机滤膜过滤。
滤膜
流动相超声与脱气
为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线 噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中 超声30min左右。 对于溶解在流动 相中的极微气体，安 捷伦1260HPLC四元 泵中集合了脱气机， 可以进一步对混合后 的流动相进行脱气处 理。
至少平稳30min
跑基线
单次样品：样品命名
序列样品：命名与序 列表设臵
进 样 检 测
样品色谱图
进入仪器1脱机
打开数据文件夹 打开样品色谱图
色谱峰编辑
色谱峰数据 打印报告 色谱峰实例
打开仪器1脱机
数据文件夹
样品数据
序列样品数据 单次样品数据 色谱图 色谱图编辑
排气（A/B/C/D）
打开柱温箱
逐步增大流速检查压力
稳定后打开检测器
样品命名
进样检测
稳定后清洗针与管路
保存数据
跑基线
冲洗管路及关机
关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，
流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇） 冲0.5小时，然后保存方法和仪器设臵。 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。 做好仪器使用登记。
四元泵 流动 相瓶 自动进样器 排气阀 指 示 灯 电 源 开 关
色谱柱
柱温箱
二极管阵列 检测器
流动相选择
流动相过滤 流动相超声与脱气
流动相冷却
流动相选择
分类：组成分-单组分和多组分 极性-极性、弱极性、非极性 常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、 四氯化碳等 （溶剂最好为HPLC级，水为超纯水） 其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相， 通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已 达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加 入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效 果。
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J 2 0 1 5 -0 4 -0 1 1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 5 .D )
m AU 80
m A U 8 0
仪器的组成
操作前准备 开机及关机 工作站使用 数据分析 注意事项
主体
安捷伦1260HPLC 流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、 二极管阵列检测器
附件
电脑、显示器、打印机等
安捷伦1260HPLC 流动相瓶 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器
进入工作站
主界面 方法和各模块参数设臵
跑基线
样品命名与进样检测
进入工作站
主 界 面
在各模块中 空白处点击 右键，选择 “方法”编 辑参数。
方 法 和 各 模 块 参 数 设 臵
1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同
视图→在线信号→信号窗口1
超过三天（易长菌），影响基线平衡； 仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h， 流量1.0mL/min，再用100甲醇冲洗0.5h；
开机时，打开排气阀，设臵流动相为100%水，
泵流量5.0mL/min，若此时显示压力＞10bar， 则应更换排气阀里的过滤白头。
流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改