果蔬汁饮料DNA提取方法的比较研究
果蔬汁饮料加工技术研究进展

内容摘要
然而,尽管果蔬汁加工技术取得了显著的进展,仍存在一些问题和挑战。首 先,虽然生物酶解加工技术具有许多优点,但其应用成本较高,对酶制剂的需求 量也较大,限制了该技术的广泛应用。其次,果蔬汁加工过程中易受到污染,如 何保证加工过程中的食品安全和卫生是一个亟待解决的问题。此外,如何针对不 同种类的果蔬原料选择最合适的加工方法,以最大程度地保留其营养成分和口感, 也是需要进一步研究的问题。
内容摘要
综上所述,紫外线消毒和高非热灭菌技术在果蔬汁饮料生产中具有广阔的应 用前景。然而,单一的非热灭菌技术并不能完全解决果蔬汁饮料生产过程中的微 生物污染问题。未来研究方向应多种非热灭菌技术的结合,以及开发更加高效、 快速、环保的非热灭菌技术,以提高果蔬汁饮料的品质和安全性。
内容摘要
此外,还需要注意的是,在应用非热灭菌技术时,应充分考虑其对果蔬汁饮 料口感和营养成分的影响。加强生产过程中的卫生管理,规范生产操作流程,从 而提高消费者的健康水平。在未来的研究与应用中,应注重非热灭菌技术的绿色 环保发展方向,为实现果蔬汁饮料产业的可持续发展做出贡献。
内容摘要
近年来,随着消费者对果蔬汁品质和口感的追求不断提高,传统机械加工方 法已经难以满足市场需求。因此,研究人员开始生物酶解加工技术。通过酶制剂 的作用,果蔬汁的提取率可以得到显著提高,同时汁液的口感和营养价值也能得 到更好的保留。此外,生物酶解加工技术还具有生产周期短、能耗低、污染少等 优点,具有广阔的应用前景。
内容摘要
果蔬汁加工技术主要分为机械加工和生物酶解加工两类。机械加工主要包括 压榨、破碎、打浆、榨汁等工艺,通过物理手段将果蔬原料中的汁液提取出来。 生物酶解加工则是利用酶制剂将果蔬中的细胞壁和蛋白质分解成小分子物质,从 而提高汁液的提取率和品质。在实际生产中,不同的果蔬品种和原料往往采用不 同的加工方法。
DNA提取方法1500字

DNA提取方法1500字DNA(脱氧核糖核酸)提取是分子生物学研究和实验室诊断中一个重要的步骤。
DNA 提取对于基因组学研究、遗传学研究、犯罪学研究等领域都非常重要。
下面我们将介绍常见的DNA提取方法。
首先,我们先了解一下DNA的来源和性质。
DNA存在于所有的活细胞中,是细胞遗传物质的载体。
DNA提取的目的是从细胞和组织样本中分离出DNA。
DNA的提取方法根据样本的来源和特点可以有所差异,但是基本步骤是相似的。
一种常用的DNA提取方法是酚-氯仿提取法。
这个方法利用酚和氯仿的不同溶解度,将DNA从其他细胞组分中分离出来。
这个方法步骤简单,适用于常见的样本来源如血液、细胞培养物等。
首先,将样本收集到离心管中。
通常需要使用离心机将样本离心,分离出细胞。
然后将细胞裂解,使DNA释放到溶液中。
裂解可以通过物理方法如冻融或超声波处理,也可以通过化学方法如蛋白酶处理来实现。
接下来,加入酚-氯仿混合液。
酚可以溶解细胞膜和蛋白质,氯仿可以溶解酚和去除其他杂质。
混合液中的DNA会被酚-氯仿分成两个层,上层是水相含有DNA,下层是酚相含有蛋白和其他细胞组分。
然后,将上层水相转移到新的离心管中。
加入等体积的异丙醇,用于沉淀DNA。
异丙醇使DNA凝聚成细丝状。
离心沉淀,取出DNA沉淀。
最后,将DNA沉淀溶解在适量的缓冲液中,并进行浓度和纯度的检测。
通常使用紫外吸收光谱法或电泳法来检测DNA的浓度和纯度。
另一种常用的DNA提取方法是离子交换法。
这个方法利用DNA带有负电荷,可以和带有正电荷的离子交换树脂结合。
这个方法适用于特定的样本如植物组织、细菌等。
首先,将样本收集到离心管中,并进行细胞裂解。
细胞裂解可以使用物理方法如冻融或超声波处理,也可以使用化学方法如蛋白酶处理。
接下来,加入含有阳离子的缓冲液。
阳离子可以和DNA结合,并使DNA和其他细胞组分分离。
然后将溶液通过离子交换树脂柱。
DNA会和阳离子结合在树脂上,杂质被洗掉。
DNA提取原理和方法

化学方法与机械方法的比较
化学方法和机械方法是常用的 DNA 提取方法。化学方法依靠试剂的化学反应,而机械方法则通过物理力学的 作用来破坏细胞。
细胞壁的化学胶的应用
一种常用的 DNA 提取方法是使用含有化学胶的溶液来破裂细胞壁,这种方法可以高效地提取 DNA 并同时去除 其他细胞组分。
组织样本选择和准备
选择合适的组织样本对 DNA 提取至关重要。不同组织类型需要不同的处理方 法,如可选择血液、组织切片或唾液等样本。
细胞破裂和裂解
为了释放细胞内的 DNA,我们需要使用适当的方法破坏细胞壁和细胞膜,如 物理方法、酶处理或化学溶解。
DNA 的纯化和提取
通过纯化和提取步骤,我们可以将 DNA 与其他细胞组分分离,从而获得纯净的 DNA 样本,以便后续分析和应 用。
DNA 提取原理和方法
DNA 提取是分子生物学和遗传学研究中的基础步骤。本演示将介绍 DNA 的提 取原理、各种方法以及在实验室和日常生活中的应用。
什么是 DNA?
DNA,即脱氧核糖核酸,是一种存储遗传信息的分子。它在细胞中起到了 传递遗传信息和控制细胞功能的重要作用。
DNA 提取的意义和应用
DNA 提取是研究遗传学、进化生物学、法医学等领域的基础。它广泛应用于基因组测序、亲子鉴定、疾病诊 断和基因工程等领域。
dna提取方法

dna提取方法DNA提取方法。
DNA提取是分子生物学研究中的基础工作,它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果,因此选择合适的DNA提取方法显得尤为重要。
在本文中,我们将介绍几种常用的DNA提取方法,帮助您更好地进行实验工作。
首先,我们来介绍传统的DNA提取方法——酚/氯仿提取法。
这是一种经典的DNA提取方法,适用于各种类型的生物样本。
其基本原理是利用酚和氯仿这两种有机溶剂与水相中的DNA分子和蛋白质发生相分离,从而将DNA分离出来。
虽然这种方法操作简单,但是存在有机溶剂对环境和操作者的危害性,且提取效率较低,不适用于大规模提取。
其次,我们介绍磁珠法DNA提取方法。
磁珠法是近年来发展起来的一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用表面修饰的磁珠与DNA特异性结合,然后通过磁场的作用将DNA分离出来。
这种方法不需要有机溶剂,操作简便,且适用于大规模提取,因此在实验室中得到了广泛的应用。
另外,还有硅基柱法DNA提取方法。
硅基柱法是利用硅胶膜对DNA的亲和性进行DNA提取的方法。
在此方法中,DNA首先与硅胶膜结合,然后通过洗涤和离心步骤将DNA从其他杂质中分离出来。
硅基柱法适用于各种类型的生物样本,提取的DNA质量高,适用于后续的PCR扩增、测序等实验。
最后,我们介绍了离心柱法DNA提取方法。
离心柱法是一种基于硅胶膜或硅胶颗粒的DNA提取方法,其原理类似于硅基柱法。
不同之处在于,离心柱法使用了离心柱进行离心分离,更加方便快捷。
这种方法适用于小样本量的DNA提取,操作简单,提取效率高。
综上所述,DNA提取方法有多种多样,每种方法都有其特点和适用范围。
在选择DNA提取方法时,需要根据实验样本的特点、实验需求和实验条件来进行选择。
希望本文介绍的DNA提取方法能够对您的实验工作有所帮助。
祝您实验顺利!。
dna提取实验报告分析

dna提取实验报告分析DNA 提取实验报告分析一、引言DNA 提取是分子生物学研究中的一项基础且关键的技术。
通过从细胞中分离和纯化 DNA,可以为后续的基因分析、疾病诊断、遗传研究等提供重要的材料。
本次实验旨在探讨一种常用的 DNA 提取方法,并对实验结果进行详细的分析。
二、实验材料与方法(一)实验材料1、新鲜的植物叶片(如菠菜叶)或动物组织(如鸡血)。
2、提取试剂盒(包含裂解液、蛋白酶 K、缓冲液、乙醇等)。
3、离心机、移液器、微量离心管、水浴锅等实验设备。
(二)实验方法1、样本处理植物叶片:称取一定量的新鲜叶片,洗净、剪碎后放入研钵中,加入液氮充分研磨成粉末。
将粉末转移至离心管中。
动物组织:取适量的鸡血,加入抗凝剂,离心去除血浆,收集血细胞。
2、细胞裂解向离心管中加入裂解液和蛋白酶 K,充分混匀,在 55℃水浴中孵育一段时间,使细胞充分裂解,蛋白质变性。
3、 DNA 沉淀加入适量的缓冲液,混匀后加入预冷的无水乙醇,轻轻颠倒离心管,可见白色的 DNA 絮状物沉淀出现。
4、 DNA 洗涤将离心管离心,倒掉上清液,保留沉淀。
加入适量的 70%乙醇洗涤沉淀,再次离心去除乙醇。
5、 DNA 溶解室温干燥沉淀后,加入适量的 TE 缓冲液或去离子水溶解 DNA,置于-20℃保存备用。
三、实验结果与分析(一)DNA 浓度和纯度的测定使用紫外分光光度计测定提取的 DNA 在 260nm 和 280nm 处的吸光度值(A260 和 A280)。
通常,A260/A280 的比值在 18 20 之间表示DNA 纯度较高。
若比值小于 18,可能存在蛋白质污染;若比值大于20,则可能存在 RNA 污染。
实验中得到的A260/A280 比值为185,表明提取的DNA 纯度较好,基本没有蛋白质和 RNA 的污染。
同时,根据 A260 值,结合公式计算出 DNA 的浓度为_____ng/μL。
(二)琼脂糖凝胶电泳分析将提取的 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像系统中观察电泳结果。
从蔬菜水果中萃取DNA

使用家用化学品从水果和蔬菜中提取的DNA教学时间:45分钟的活动准备时间:30-40分钟该草案采用机械破碎和常见的日用化工品,从水果和蔬菜中提取DNA。
学生将能够看到DNA作为纤维状聚集。
该过程会根据水果或蔬菜和最终的沉淀步骤中使用的酒精的类型产生一定量的DNA。
虽然在这个实验中分离出的DNA纯度不足以进行凝胶电泳或限制性酶切分析实验。
它是一个很好的适合学生的动手实验室,并且预算是有限的。
这是一个很好的试验,包括细胞生物学,遗传学,生物技术,普通生物学实验室和先进的生物课。
在开始实验前学生学习DNA的结构和细胞的功能,如细胞膜,细胞器和细胞壁结构。
该草案是基于一个由肖恩·卡尔森在“科学美国人”(1998年9月96-97)发表的文章。
一、实验目的1掌握DNA的基本性质2学习DNA的结构和细胞的功能3了解从植物细胞中提取DNA所需的步骤二、实验原理DNA是所有生物体的遗传物质。
DNA的提取和纯化是许多分子生物学实验的第一步。
无论是科学家研究有机体的整个基因组或克隆一个基因的有机体的DNA,还是提取涉及到相同的三个步骤:1。
细胞裂解用机械和化学的手段使细胞被破开或溶解。
细胞壁(如果存在的话),细胞膜和核膜(如果存在的话)都必须被打乱以释放DNA。
细胞膜是可以被洗涤剂(在本实验中用洗衣粉)溶解的的脂肪和蛋白质。
由细胞壁包围的植物细胞,酵母,和许多细菌细胞可以用机械力(如混合或研磨)打乱,或用酶消化。
核膜存在于真核细胞。
2。
纯化一旦细胞被破开,整个细胞内容物被混合在一起。
大多数操纵需要的DNA是无蛋白质和RNA。
在实验室中,科学家们将灭活会降低或故障DNA的细胞酶。
他们可能会使用蛋白消化酶,加热,某些化学品,和有机溶剂,如苯酚,使核酸酶失活并除去蛋白质。
在这个实验中,我们无需纯化DNA,因为我们不会使用DNA做进一步的实验。
3。
聚沉和浓度DNA易溶于水,不溶于醇。
加无水乙醇使DNA的细胞裂解液可视化。
提取dna的方法

提取dna的方法提取DNA的方法。
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一项基础工作,它是分析DNA序列、进行PCR扩增、测序等实验的前提。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法,希望能为科研工作者提供一些参考。
首先,我们来介绍化学法提取DNA的方法。
化学法是最常用的DNA提取方法之一,其原理是利用蛋白酶K和盐酸胍等试剂破坏细胞膜和蛋白质,使DNA从细胞中释放出来。
具体操作步骤为,首先,将待提取的细胞样品加入含有蛋白酶K 的溶液中,经过一定时间的消化后,再加入盐酸胍等试剂,使DNA沉淀出来。
最后,用乙醇洗涤和溶解,即可得到纯净的DNA。
其次,机械法也是一种常用的DNA提取方法。
机械法主要利用机械力破碎细胞壁,释放DNA。
常用的机械法包括玻璃珠研磨法和超声波破碎法。
玻璃珠研磨法是将样品和玻璃珠一起加入管中,通过高速震荡使细胞破碎,释放DNA。
超声波破碎法则是利用超声波的高能量震荡作用,破坏细胞壁,释放DNA。
这两种方法操作简单,适用于大批量的样品提取。
另外,磁珠法也是一种高效的DNA提取方法。
磁珠法利用表面修饰的磁珠与DNA的亲和性,通过磁力场控制DNA的分离和纯化。
操作步骤为,首先,将待提取的细胞样品与表面修饰的磁珠混合,使DNA与磁珠结合;然后,通过磁力场的作用,将磁珠与结合的DNA沉淀到管底;最后,去除上清液,用洗涤缓冲液洗涤,即可得到纯净的DNA。
最后,有机溶剂法也是一种常用的DNA提取方法。
有机溶剂法利用有机溶剂与DNA的亲和性,将DNA从细胞溶液中提取出来。
操作步骤为,首先,将待提取的细胞样品加入有机溶剂中,使DNA与有机相结合;然后,通过离心将DNA沉淀到管底;最后,去除上清液,用洗涤缓冲液洗涤,即可得到纯净的DNA。
综上所述,化学法、机械法、磁珠法和有机溶剂法是常用的DNA提取方法,每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际操作中,可以根据实验需要和样品性质选择合适的提取方法。
希望本文对DNA提取方法有所帮助,谢谢阅读!。
探讨果蔬汁饮料、茶饮料、植物蛋白饮料及植物提取物饮料生产技术

106 食品安全导刊 2017年11月Tlogy科技工艺技术饮料市场的品种类型相对较多,比较常见的有果蔬汁饮料、茶饮料、植物蛋白饮料以及植物提取物饮料等,它们都是饮料市场中相对主流的品类,由于其绿色、营养、健康的产品特点,深受大众喜爱,具有良好的市场前景1 我国饮料市场前景与主要的产品形式分析1.1 饮料市场前景分析品类多样且丰富的植物资源,为我国饮料加工与生产提供了充足的资源支持。
饮料加工与生产中需要的一些具有功能性的天然食品添加剂多来源于我国丰富的植物资持。
尤其是随着人类对食品安全重视程度的不断提升,以及人类身体保健意识的不断增强,采用纯天然植物资源加工生产的食物在市场上也越来越受欢迎,集植物功能性与食品性加工生产的饮料、食品,其市场前景越来越广阔。
比如,在饮料加工生产中,将甘草、罗汉果或者是甘菊等天然植物的提取物进行提取之后,用于饮料加工生产,形成具有独特口味与功能性特征的绿色饮料,在市场上就深受大众的喜爱[1]。
或是将甘草、罗汉果、甘菊等植物作为生产加工的原料,通过原料提取工艺应用,在生产加工工程中替代蔗糖,合成甜味剂,在饮料加工生产中作为调味剂进行应用,不仅能够有效解决传统饮料含糖过高,容易引起糖尿病人群血糖升高等变化,对其健康危害较大的问题,同时还能够有效避免传统饮料加工对化学合成甜味剂的使用,满足现代人群追求绿色、营养、保健的食品与饮料需求。
1.2 饮料市场的主要产品形式果蔬汁饮料、茶饮料、植物蛋白饮料以及植物提取物饮料作为当前市场上流行的主要饮料品类,它们共同具有的产品特点就是绿色、营养和健康,这也是其在市场以深受大众喜爱,能够成为主流饮料品类的重要原因。
其中,果蔬汁饮料主要以果蔬汁、果粒等饮料产品为主,而茶饮料则包含红茶、绿茶、乌龙茶等多种不同形式的茶饮料产品,植物蛋白饮料比较常见的像核桃露、杏仁露以及花生露等[2]料。
此外,植物提取物饮料,则以市场中较为常见的植物养生饮料、凉茶、酸梅汤等为主,总之,不同的饮料品探讨果蔬汁饮料、茶饮料、植物蛋白饮料及 植物提取物饮料生产技术□ 王洪成 杭州娃哈哈集团有限公司摘 要:果蔬汁饮料、茶饮料、植物蛋白饮料以及植物提取物饮料都是当前市场上较为常见的饮料类型,对其生产技术的研究分析,有利于满足饮料市场需求,促进其生产技术提升,具有积极作用和意义。
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1984年世界上第一例转基因植物延迟成熟番茄问世,1995年抗虫转基因马铃薯进入商品化生产,次年,抗虫转基因棉花和玉米也进入商品化收稿日期:2012-08-28 *通讯作者基金项目:北京农林科学院创新能力建设专项课题(JCX201103002)。
作者简介:任君安(1988—),女,硕士研究生,研究方向为农产品加工及贮藏工程。
生产,转基因农作物由此得到迅猛发展[1]。
我国正在研究的转基因植物种类达几十种,涉及各类基因上百种。
许多与抗虫、抗病、抗逆、产量、品任君安1,2,3,王国兰2,3,程 曦2,3,罗 昌2,3,张秀海2,3*,任建武1*(1.北京林业大学,北京 100083;2.农产品质量安全风险评估区域实验室(北京),北京 100097;3.北京农业生物技术研究中心,北京 100097)摘要:以澄清型果蔬汁为实验材料,用3种DNA 提取方法(普通CTAB 法、试剂盒法、改良试剂盒法)提取果蔬汁中DNA 片段。
以紫外分光光度计测量吸光值计算DNA 的纯度和得率,以内源rbcL 基因为目标基因建立了PCR 扩增技术体系。
实验结果表明:试剂盒法和改良试剂盒法均适用于果蔬汁饮料DNA 的提取,其中改良试剂盒法提取DNA 的纯度和产率要高于另外2种方法,该方法为从果蔬汁加工品提取高质量的DNA 并进行分子检测提供技术参考。
关键词:果蔬汁;DNA 提取;聚合酶链式反应中图分类号:TS 275.5 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2013)02-0042-04Comparison of DNA extraction method for fruit and vegetable juicesREN Jun-an 1,2,3, WANG Guo-lan 2,3, CHENG Xi 2,3, LUO Chang 2,3, ZHANG Xiu-hai 2,3*, REN Jian-wu 1*(1.Beijing Forestry University, Beijing 100083; 2.Regional Laboratory of Agri-product Quality and Safety Risk Appraisal, Beijing 100097; 3.Beijing Agro-Biotechnology ResearchCenter, Beijing 100097)Abstract : Three kinds of DNA extraction method (CTAB, DNA extraction kit, modified DNA extraction kit) to extract genomic DNA fragment from clarified type fruit and vegetable juice. The purity and yield of the DNA were determined by A 260/A 280 respectively. The PCR amplification of partical rbcL gene fragement was set up. The results showed that both the DNA extraction kit and modified DNA extraction kit were suitable for DNA extraction from fruit and vegetable juices, the DNA purity and yield extracted with modified DNA extraction kit is higher than with the other method in this research. The research provides an effective method for DNA extraction from fruit and vegetable juices.Key words: fruit and vegetable juices; DNA extraction; polymerase chain reaction果蔬汁饮料DNA提取方法的比较研究2013年 第38卷 第2期质和保鲜等有关基因被转入众多植物基因组中。
随着转基因农作物的规模化行业种植,转基因农产品及其加工品也逐步流入了百姓餐桌,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。
为此各国对转基因产品都实行监督检测,进行标识管理,保护消费者的知情权和选择权[2]。
果蔬汁是人们日常生活中常见的饮料,其产品种类繁多,有许多是混合了不同原材料加工而成,从源头上去检测是否含有转基因成分相对复杂,因此建立一套针对果蔬汁成品的检测方法是很有必要的。
目前,转基因检测的方法主要有两大类:基于蛋白质的检测方法和基于核酸的检测方法。
基于核酸的检测方法应用最为广泛,因此高质量基因组DNA的提取是进行检测的基础和关键。
对于植物基因组DNA的提取,通常采用幼嫩部位如嫩叶,作为实验材料[3-8]。
然而,不同于直接从植物体采取的材料,果蔬汁产品经过复杂的加工工序,并且里面含有许多人工添加的各类物质以及水果果肉本身含有的多糖、多酚类物质与一些次生物质,这势必会对DNA的提取造成许多不利的影响。
这就需要对常规的DNA提取方法加以改进,以提取出高质量DNA。
当前国内外已有从单一水果果肉中提取总DNA进行分子检测的报道[9-12],而对于果蔬汁的研究集中在分类、含量的测定、果汁鉴伪等方面。
Chang Chai Ng [13]等用分子生物学方法鉴定了鲜榨和还原果汁,并对鲜榨橙汁的添加量进行了测定。
Sass Kiss [14]等人也做了关于商业掺假西柚汁鉴别的工作,而对DNA 提取的研究则较少,本项研究以澄清型果蔬汁为研究材料,建立了高效提取DNA的方法,为转基因果蔬汁检测提供理论支持。
1 材料与方法1.1 材料与试剂牵手果蔬汁(胡萝卜、鲜橙、木瓜):市售;RNaseA、Taq DNA聚合酶、β-巯基乙醇、DL 2000 Marker:大连(宝)生物技术有限公司;Wizard Genomic DNA purification试剂盒:普洛麦格(北京)生物技术有限公司。
1.2 仪器与设备微量离心机,电热恒温水槽,PCR仪,电泳仪及凝胶成像系统,紫外分光光度计。
1.3 DNA提取方法1.3.1 CTAB法 称取400 μL果蔬汁至一洁净2.0 mL离心管中,加入CTAB提取液600 μL[1 mol/L Tris-HCL(pH8.0)、5 mol/L NaCl、0.5 mol/L EDTA(pH8.0)](65 ℃预热),充分混匀,65 ℃温浴1 h,每隔5~10 min温和颠倒混匀1次;加入600 μL水饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),震荡,于室温抽提10 min后,10000 r/min离心10 min,取上清液,再加等体积的氯仿:异戊醇(24:1),震荡混匀,10000 r/min离心10 min;取上清液,加等体积异丙醇,混合均匀,-20 ℃预冷1 h后,10000 r/min离心5 min;弃去上清液,将沉淀用75%的乙醇清洗2次,干燥,溶于50 μL TE(pH8.0)溶液中,置于37 ℃溶解1 h后于-20 ℃保存备用。
1.3.2 试剂盒法 取400 μL果蔬汁至1.5 mL离心管中,加入600 μL Nuclei Lysis Solution,剧烈震荡1~3 s,65 ℃温浴15 min后,加入3 μL RNA酶,混合翻转2~5次,37 ℃温育15 min,再在室温下放置5 min,使样品冷却至室温后加200 μL蛋白沉淀液,剧烈震荡20 s,16000 g离心3 min;取上清液,加入600 μL异丙醇(室温)翻倒混匀,室温下16000 g离心1 min,弃上清液,加入600 μL乙醇(70%),16000 g离心1 min,风干15 min后加入50 μL DNA Rehydration Solution,65 ℃温育1 h,定期混合(轻敲)。
1.3.3 改良试剂盒法 主要步骤同试剂盒法,其中,蛋白沉淀后转移至吸附柱,加入600 μL异丙醇,翻倒混匀,16000 g离心1 min,弃上清液,加70%乙醇洗涤3次,晾干,加50 μL ddH 2O,-20 ℃保存,备用。
1.4 DNA纯度和浓度的检测用紫外分光光度计测定以上3种方法提取的DNA,由其OD 260/OD 280和浓度值判断DNA的含量和质量,每份样品重复测定3次。
1.5 PCR扩增及电泳检测为比较3种方法提取的DNA是否适合于PCR分析,采用植物内源基因rbcL基因对果蔬汁DNA进行特异性引物扩增。
引物序列分别为:rbcL:5’AA TCTTCTACTGGTACATGGAC 3’;5’TCATC ATCTTTGGTAAAATCAAG 3’片段大小为433 bp。
扩增采用25 μL反应体系,各组分组成是:DNA模板60 ng,10 μmol/L的上下游引物各0.5 μL,dNTP(10 mmol/L)2.0 μL、TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.2 μL、10×PCR反应液2.5 μL、加入双蒸无菌水(ddH2O)将总体积调整为25 μL。
反应扩增程序:94 ℃预变性5 min;接着94 ℃变性30 s,50℃退火40 s,72 ℃延伸60 s,共30个循环,最后72℃延伸7 min。
PCR扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测。
2 结果与分析2.1 3种DNA提取方法效率比较分别用CTAB法、试剂盒法和改良试剂盒法提取果蔬汁的基因组DNA。
紫外分光光度计检测结果如表1所示。
注:M.DL 2000 Marker;1.空白组;2.阴性对照组;3.阳性对照组;4~7.CTAB法;8~11.改良试剂盒法;12~15.试剂盒法。
±±±±±±B 1.9133±0.125819.0133±0.07371.8433±0.010026.7667±0.1633 2.01±0.029113.43±0.2221C 2.0967±0.029016.1±0.04 1.7467±0.025822.8667±0.3033 2.6767±0.0462 3.9667±0.0433D 1.6367±0.008117.37±0.2233 1.7833±0.027725.5333±0.0433 1.6933±0.02109.4167±0.1714较纯DNA的OD260/OD280应在1.7~1.9之间,大于1.9说明有RNA污染,而小于1.7则说明有蛋白质和酚类物质的污染。