阿莫西林含量及有关物质检验方法学的确认
阿莫西林片含量测定测量不确定度分析
1. 测定方法照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版二部附录Ⅴ D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L 磷酸二氢钾溶液（用2mol/L 氢氧化钾溶液调节pH 值至5.0）-乙腈（97.5：2.5）为流动相；检测波长为254nm 。
测定法 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量，加流动相溶解并定量稀释成每1ml 中约含0.5mg 的溶液，滤过，取续滤液20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林对照品适量，同法测定。
按外标法以峰面积计算。
对照品：阿莫西林对照品由中国药品生物制品检定所提供，130608-201001，纯度P=84.5%对照品溶液的制备：（CPA2225D 电子天平），溶剂：磷酸盐缓冲液（pH5.0）取阿莫西林对照品35.76mg →50ml ，即000V P W C = 供试品：阿莫西林片（0.25g ）供试品溶液的制备：（AE240电子天平），溶剂：磷酸盐缓冲液（pH5.0）取供试品10片，精密称定，W=3260.1mg ，标示量为250mg 。
精密称取42.52mg →50ml ，XXx V W W C 25010⨯=应用岛津LC-10AD 液相色谱仪测定供试品溶液的浓度，取对照品溶液20μl 注入液相色谱仪，记录响应值——峰面积（A 0=1404740），然后取供试品溶液20μl 注入液相色谱仪，记录响应值——峰面积（A X =1526172）根据：'00/X X C A C A =可求出供试品溶液的浓度：00'A A C C X X =则按标示量计阿莫西林的百分含量为：%100'⨯=X X C C X%7.100%1001404740501250101.326052.421526172501%5.8476.35%10025010%10000000'=⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=⨯⨯⨯⨯=⨯==A V W W A V P W A C A C C C X X XXX X X X 2. 数学模型'00/XX C A A = 00'A A C C X X =0'A C A C C C X X X X X ==3. 方差和灵敏系数方差：)()()()()()()()()(2202022202022X X X X c C u C c A u A c A u A c C u C c X u +++=灵敏系数：X XC A A C c 00)(= XX C A C A c 00)(=X XC A A C A c 20000)(-=200)(XXX C A A C C c -= 4. 计算分量标准不确定度4.1 对照品溶液引起的不确定度u (C0) 4.1.1 数学模型000V P W C =4.1.2 方差和灵敏系数方差)()()()()()()(020*********V u V c P u P c W u W c C u ++=灵敏系数：00/)(V P W c = 00/)(V W P c =)()(2000V P W V c -=4.1.3 阿莫西林对照品纯度的不确定度u (P)阿莫西林对照品纯度为84.5%，其分散区间的半宽为α=0.05%，且概率p 为100%，分布状态为均匀分布，属B 类。
阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂(14∶1)的含量均匀度测定和有关物质检查
阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂（14∶1）的含量均匀度测定和有关物质检查作者：李静玲李瑞明冯鹏胡建楣林小凤范佩冰来源：《中国医药导报》2013年第07期[摘要] 目的对阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂（14∶1）的含量均匀度和有关物质进行了研究，用来评价和确定制剂使用中的安全性及药物本身的内在质量。
方法通过对制备得到的阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂含量均匀度的测定和有关物质考察，从而确定阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂质量的可控性。
结果通过本文中所用方法对阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂（14∶1）中阿莫西林、克拉维酸钾的含量均匀度和有关物质测定结果说明制剂质量合格，所以在制剂使用中阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂能确保其安全性。
结论阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂（14∶1）中阿莫西林、克拉维酸钾的含量均匀度和有关物质的测定均能符合制剂要求。
[关键词] 阿莫西林；克拉维酸钾；含量均匀度；有关物质[中图分类号] R927.11 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）03（a）-0123-03阿莫西林（Amoxicillin）（C16H19N3O5S）是一种最常用的青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素，半衰期约为61.3 min。
阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞膜的能力也强，是目前应用较为广泛的口服青霉素之一，其制剂有胶囊、片剂、颗粒剂、分散片等。
单独用阿莫西林时容易产生耐药性而降低药物的疗效；克拉维酸钾（C8H9NO5）仅有微弱的抗菌活性，但可与多数的β-内酰胺酶牢固结合，生成不可逆的结合物，具有强力而广谱的抑制β-内酰胺酶作用。
阿莫西林制剂配合克拉维酸钾使用时能有效稳定阿莫西林，使其降解减少而疗效增强，且对革兰阳性及革兰阴性细菌均有效[1-3]。
有关物质是药物中主要疗效成分在储存中产生或在原料制备中引进的，说明了药物对温度、湿度、光等外在因素的稳定度及药物本身使用中的安全性。
含量均匀度是药物有效成分含量较小和比例较低时，在制剂的制备中可能引起分布不均匀而影响药物的质量。
阿莫西林质量标准
阿莫西林汉语拼音:Amoxilin英文名:Amoxicillin本品为（2S，5R，6R）-3，3-二甲基-6-[R-（-）-2-氨基-2-（4-羟基苯基）乙酰氨基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸三水合物。
按无水物计算，含C16H19N3O5S不得少于95.0%。
【性状】本品为白色或类白色结晶性粉末；味微苦。
本品在水中微溶，在乙醇中几乎不溶。
比旋度取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，依《旋光度测定法》测定，比旋度为+2900至+3150。
【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
【检查】酸度取本品，加水制成每1ml中含2mg的溶液，在500C水浴中微温使溶解后，依《pH值测定法》测定，PH值应为3.5～5.5。
溶液的澄清度取本品5份，各1.0g，分别加0.5mol/L盐酸溶液10ml，溶解后立即观察，另取本品5份，各1.0g，分别加2mol/L氨溶液10ml，溶解后立即观察，溶液均应澄清。
如显浑浊，依《溶液澄清度检查法》与2号浊度标准液比较，均不得更浓。
有关物质取本品适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释成每1ml中含2.0mg的溶液，作为供试品溶液；另取阿莫西林对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释成每1ml中含20μg的溶液作为对照溶液。
照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用2mol/L 氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）-乙腈（99：1）为流动相A；以0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 5.0）-乙腈（80：20）为流动相B；检测波长为254nm。
先以流动相A-流动相B （92:8）等度洗脱，待阿莫西林峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度梯度洗脱。
执业药师考试药物分析辅导：阿莫西林的分析
（⼀）鉴别
1.⾼效液相⾊谱法
《中国药典》采⽤⾼效液相⾊谱法测定阿莫西林的含量，同时进⾏鉴别。
要求在含量测定项下记录的⾊谱图中，供试品主峰的保留时间，应与阿莫西林对照品主峰的保留时间⼀致。
2.红外分光光度法
《中国药典》采⽤红外分光光度法鉴别本品，要求本品的红外吸收光谱应与对照的图谱⼀致。
（⼆）检查
1.有关物质
阿莫西林中的有关物质主要是其降解产物，《中国药典》采⽤⾼效液相⾊谱法检查。
由于有关物质的种类较多，极性差异较⼤，所以采⽤梯度洗脱的⽅法检查。
2.阿莫西林聚合物
阿莫西林也需检查聚合物，《中国药典》采⽤分⼦排阻⾊谱法检查，⽅法与青霉素钠类似。
3.⽔分
本品含3分⼦结晶⽔，理论含⽔量为13.4%.
取本品，按⽔分测定法（费休法）测定，含⽔分应为12.O%～15.0%.
（三）含量测定
《中国药典》采⽤⾼效液相⾊谱法测定本品的含量，⽅法为：
⾊谱条件与系统适⽤性试验：⽤⼗⼋烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸⼆氢钾溶液（⽤2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值⾄5.0）-⼄腈（97.5：2.5）为流动相；流速为每分钟约1ml；检测波长为254nm.理论板数按阿莫西林峰计算不低于2000.
按外标法以峰⾯积计算供试品中阿莫西林的含量。
本法的⾊谱条件属于反相⾼效液相⾊谱法。
（四）贮藏
《中国药典》规定本品应遮光，密封保存。
阿莫西林制剂的含量测定技术
阿莫西林制剂的含量测定技术【摘要】药物阿莫西林的原有剂型有片剂、胶囊剂等，目前又出现了一些新的剂型、制剂，为了适应新剂型、制剂的要求和进一步完善阿莫西林原有的质控标准，文章对测定阿莫西林制剂含量的方法进行了研究，并在本文中作了阐述。
【关键词】阿莫西林；测定技术作为光谱抗生素药物的一种，临床上阿莫西林被广泛应用，其又名为羟氨苄青霉素，属β-内酰胺青霉素类抗生素。
作为阿莫西林研究的一个重要方面，阿莫西林制剂的含量的测定方法一直备受关注。
文章对测定阿莫西林制剂含量的方法进行了研究。
测定阿莫西林制剂含量的测定方法主要有微生物效价测定法、碘量法、电位滴定法、旋光法、分光光度法以及流动注射化学发光法等，下面对以上这几种方法一一说明。
1.微生物效价测定法作为抗生素测定经典方法之一，微生物效价测定法同样适用于阿莫西林制剂含量的测定，通过该种方法测定出的数据能够直接反应阿莫西林对病菌微生物的抑杀能力，但该种方法的不足之处是实验操作繁琐、工作量较大。
具体方法是以藤黄八叠球菌（28001）为试验菌种，试验培养基为药典Ⅰ号培养基进行实验，最低检测浓度为0.05mg/L，日内和日间变异系数小于15%，线性范围为0.05～400mg/L（r=0.9977，P<0.01），符合生物样品分析要求。
2.碘量法碘量法是利用阿莫西林分子不消耗碘，而其降解产物消耗碘的特性来测定阿莫西林含量的方法，也是一种测定青霉素类抗生素较为通用的方法。
具体方法是先将阿莫西林制剂水解成阿莫西林噻唑酸，然后用足够的、定量的碘与其发生反应，之后再用准硫代硫酸钠滴定剩余的碘，从而测出消耗碘的阿莫西林的量，最终测出制剂中阿莫西林的含量。
3.电位滴定法电位滴定法是利用阿莫西林的降解产物能够与汞盐（Hg2+）发生反应，形成巯基化物汞盐这一特性而得以测定制剂中阿莫西林含量的，青霉素类化合物的降价降解产物普遍存在这一特性。
该种方法先将阿莫西林制剂水解，然后以铂电极为指示电极、Hg-Hg2SO4为参比电极，然后用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定，最终测得制剂中阿莫西林的含量。
10实验十阿莫西林胶囊的质量检验
三、有关物质检查
色谱条件
m.p D ：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(pH5.0)
m.p B ：乙腈
Time(min) 0 15 45 55
m.p D 97.5 97.5 80 80
m.p B 2.5 2.5 20 20
56
70
97.5
97.5
2.5
2.5
有关物质检查
样品溶液的配制（2mg/ml）
实验原理
三． RP-HPLC色谱法（略）
实验内容
一． 鉴别
二． 含量测定
三． 有关物质检查
一、鉴别
在含量测定条件下记录的色谱图中，供试品溶液 主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间 一致。
二、含量测定
对照品溶液制备：精密称取阿莫西林对照品约 25mg，置50ml量瓶中，用流动相溶解定容成浓度 为0.468mg/ml溶液。 供试品溶液制备：取本品10片，取胶囊内容物， 精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿莫 西林25mg），置50ml量瓶中，用流动相稀释定容 成每1ml约含0.5mg的溶液，用 0.45μm 滤膜滤过， 取续滤液，精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录 色谱图； 按外标一点法以峰面积计算出供试品中 C16H19N3O5S的含量。
实验十
阿莫西林胶囊的质量检验
实验目的
掌握内酰胺类化合物的结构；
熟悉高效液相色谱法的定性、定量方法；
掌握β-内酰胺类抗生素的性质及有关物质检查； 掌握HLPC测定含量的方法。
实验原理
一． 阿莫西林结构 本品主要成分为β-内酰胺类抗生素阿莫西林，本品 含阿莫西林（C16H19N3O5S）应为标示量的 90.0%~110.0%。
色谱条件
高效液相色谱法测量药物中阿莫西林含量的分析
高效液相色谱法测量药物中阿莫西林含量的分析摘要：目的：利用高效液相色谱法，对阿莫西林的含量进行测定。
方法：对阿莫西林应用高效液相色谱法测定，并运用各种分析方法以确定高效液相色谱法对阿莫西林药物检测的可利用性和有效性。
结果：最终测量结果表明，利用高效液相色谱技术测定，阿莫西林的回收率约为88.4％-99.7％左右，在测量的实验样本中检测出阿莫西林的浓度于0.48-1.43mg-1之间时，浓度和峰面积之间表现出良性线性关系。
结论：阿莫西林应用高效液相谱法测量的可实施性较高，具有良好应用的价值，可在临床多实践。
关键词：高效液相色谱法；药物；测量；阿莫西林；含量阿莫西林属于西药，主要针对大部分革兰阴性菌、阳性菌有较强的杀菌、灭菌功能，其中也包含杆菌和球菌，是一种广谱青霉素，临床常用于消化道感染、泌尿道感染、呼吸道感染、软组织和皮肤感染等治疗中[1]。
和青霉素的功能相似，同时让细胞凋零死亡(通过对细菌细胞壁生物合成来实现)，本试验使用了高效液相色谱法来对阿莫西林药品中的浓度进行检测，以此来明确该方式的作用和功能，具体内容如下。
1研究方法与材料1.1实验仪器和试剂采用日本岛津公司LC-2030C 高效液相色谱仪（配备紫外检测器)；奥豪斯EX125DZH型十万分之一电子天平；上海康仪 PHS-3 酸度计；而实验试剂主要就是阿莫西林对照样本；色谱级纯或优级纯甲醇或乙腈。
1.2实验参数指标调整应用高效液相色谱法检测时，得合理调整实验参数指标。
其中包含流动相和固定相。
流动相选择：将6.8g磷酸二氢钾固体粉与1000ml纯水搅拌后溶解，从而形成磷酸二氢钾溶液。
然后，把25ml乙腈溶液与975ml已溶解过的溶剂相混合，随后进行10分钟超声处理。
此外，还需要把阿莫西林对照样品放在大量瓶内(50ml)，采用流动相稀释和溶解，将其溶液摇晃均匀后，制备为0.5mg mL-1的对照溶液。
固定相的指标调整为AgillentSB-C18色谱柱(4.7×150mm，3.5μm)，预柱为(22×3.8mm)，流动相：0.06moL·L-1磷酸盐缓冲液(将它和13.4g磷酸二氢钾共溶并稀释至2000mL，最后采用10个moL l-1氢氧化钾水溶液在调节pH值4.9±0.2)；乙腈(97.5：2.5，v/v)，将流速调整至1min/ml，柱温调整至30℃左右，检测波长度253nm，进样量20μL。
实验十二 阿莫西林胶囊的分析
实验十二阿莫西林胶囊的分析一、实验目的1．熟悉高效液相色谱仪的结构及正确使用。
2．掌握阿莫西林胶囊分析的原理及方法。
二、实验原理阿莫西林为β–内酰胺类抗生素，其母核部分与侧链部分均有共轭体系，有紫外吸收，因此阿莫西林胶囊的鉴别、有关物质的检查、含量测定均采用反相高效液相色谱法。
有关物质的检查方法为外标法和不加校正因子的主成分自身对照法，含量测定采用外标法定量。
三、实验方法本品含C16H19 N3O5S应为标示量的90.0％~110.0％。
【鉴别】在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时问应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
【检查】水分取本品的内容物，照水分测定法(附录M第一法A)测定，含水分不得过16.0％。
有关物质取本品的内容物适量，精密称定，用流动相A溶解并制成每1ml中含2mg 的溶液，滤过，取续滤液照阿莫西林有关物质项下的方法测定。
单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5倍(5.0％)。
供试品溶液中汪何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计)溶出度取本品，照溶出度测定法(附录X C第一法)，以水900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟时，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质稀释成缈"ml中约含130μg的溶液，照紫外一可见分光光度法(附录ⅣA)，在272nm 的波长处测定吸光度；另取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于平均装量)，按标示量加溶出介质溶解并稀释成每1ml中约含130μg的溶液，滤过，取续滤液作为对照溶液，同法测定，计算每粒的溶出量。
限度为80％，应符合规定。
其他应符合胶囊片剂项下有关的各项规定(附录I A)。
【含量测定】1．色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（2mol/L氢氧化钠溶液调节PH值至5.0）–乙(97.5︰2.5)为流动相；流速为1ml/min,检测波长为254nm，理论板数按阿莫西林峰计算不低于2000。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
阿莫西林含量及有关物质检验方法学的确认
发表时间：2018-10-01T20:19:45.567Z 来源：《世界复合医学》2018年第07期作者：周磊[导读] 本文主要阐述阿莫西林中国药典检验方法含量及有关物质的确认程序，通过这些程序的执行，可以证明阿莫西林含量、有关物质的检验方法在本实验室可行。
哈药集团制药总厂黑龙江哈尔滨 150086 摘要: 确认是对本身性能的认定,内涵属于性能检验, 中华人民共和国药典2015版二部正文品种对阿莫西林检验标准有法定的规范。
针对剂型的特点所规定的基本技术要求；通用的检测方法进行相同检查项目的检测时所应采用的统一的设备、程序、方法及限度等，需要在不同
的实验室进行相应的方法学确认，而满足相应的检测要求，本文主要阐述阿莫西林中国药典检验方法含量及有关物质的确认程序，通过这些程序的执行，可以证明阿莫西林含量、有关物质的检验方法在本实验室可行。
关键词：性能检验程序方法限度检测要求1.实验部分
1.1高效液相色谱仪的性能确认
确认高效液相色谱仪能够持续有效的给出准确、可靠的数据。
在确认之前，确保确认的人员经过培训；仪器仪表经过校准，且都在校准的有效期内。
高效液相色谱仪进行安装确认后，首先进行检测器灯强度测试、波长准确度测试、通过后进行流速准确度及精确度测试、噪声和漂移确认、进样交叉污染测试、柱温箱温度及稳定性确认、需要进行梯度洗脱方法的需进行梯度准确性确认，自动进样器有温控系统的需进行样品温度准确的确认，定性重复性和定量重复性测试。
1.2前期准备：选择符合检验项目要求的高效液相色谱仪，准备检验用试剂，对照品（阿莫西林对照品、阿莫西林系统适用性试验对照品），准备所用的用具（分析天平，感量0.00001g、超声波清洗仪、容量瓶、移液管、量筒、烧杯、抽滤装置等），准备三批样品。
1.3含量测定方法的确认证明阿莫西林含量的检验方法在本实验室可行按中国药典2015版阿莫西林含量测定项下的检验标准，照高效液相色谱法，由两名不同的人员用一套高效液相色谱仪或同一人用两套高效液相色谱仪进行测试。
配制系统适用性试验溶液，取20µl注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。
符合规定后，分别称取阿莫西林对照品2份和3批阿莫西林各2份的样品按照规定制备对照品溶液和样品溶液，取对照品1连续进样五次，记录色谱图，以峰面积计算相对标准偏差应不大于
2.0%，取对照品2连续进样两次，供试品每份进样两次，记录色谱图。
可接受标准，每批样品两台仪器或两个操作者的结果相对偏差应不大于2.0%。
表一：同一操作者两台不同的液相色谱仪3批含量检验结果表二：含量测定系统适用性试验典型图谱1.4有关物质测定的确认证明阿莫西林有关物质测定检验方法在本实验室可行
按照药品质量标准中有关物质项下的规定配制流动相A、B，设定色谱条件，按照系统适用性试验要求进行线性梯度洗脱，取阿莫西林系统适用性对照溶液注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。
由两名不同的人员用同一套色谱系统或同一人用两套液相色谱仪进行测试。
待系统适用性试验均符合规定后，分别称取双份的对照品和单份的样品，按规定制备对照溶液和样品溶液，对照品每份进样两次，样品进样一次，收集色谱图。
计算每批样品两台仪器上或两个操作者检验结果的RD。
可接受标准：RD应不大于10%。
经两套液相色谱仪测试，三批样品中有关物质单个杂峰及杂峰总和均符合要求。
表三：有关物质系统适用性试验典型图谱表四：有关物质典型图谱
2．结果讨论
阿莫西林属于β内酰胺类抗生素，需遮光，密封保存。
在含量与有关物质的检验方法学确认的过程中，样品使用带有低温自动进样器的高效液相色谱仪进行含量和有关物质的方法学确认，能够有效地预防含量及有关物质的降解，在有关物质的方法学确认时，需要注入空白溶液，如果空白溶液有干扰，可进行背景扣除。
流动相需要新鲜配制，避免磷酸盐缓冲液干扰检验结果的判定。
通过对阿莫西林含量及有关物质的方法学确认，证明了该方法在本试验室相应的检验设备上，检验结果可靠，数据准确，通过了药典相应的检验方法的确认。
参考文献：
中国药典分析检测技术指南
中华人民共和国药典2015版二部。