叶绿体色素的提取分离实验报告
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告实验目的：1. 学习叶绿体中色素的提取和分离的方法；2. 观察叶绿体中不同色素的吸收光谱。
实验原理：叶绿体是植物细胞中的特殊细胞器，其中含有多种色素，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
这些色素能够吸收不同波长的光线，并转化为化学能以参与光合作用。
本实验利用溶剂提取和色谱柱分离的方法，将叶绿体中的色素提取出来，并通过紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。
实验步骤：1. 取一片鲜叶（最好选择深绿色的叶片）切碎，加入适量的乙醇或醋酸乙酯中浸泡，使叶绿体释放出色素。
注意保持容器密封以避免光照。
2. 将浸泡片刻半小时，使叶绿体彻底释放色素。
3. 将叶绿体悬液过滤，收集含有色素的过滤液。
4. 取一支色谱柱，填充色谱吸附剂（如硅胶），再用无色溶剂（如正己烷）预洗一次。
5. 将收集到的含色素液体加入色谱柱中，用无色溶剂洗脱，收集不同色素的洗脱液。
6. 用紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。
实验结果：根据实验数据得到不同色素的吸收光谱曲线，可观察到叶绿素 a 在400-500 nm波长范围内有最大吸收峰，叶绿素 b 在450-550 nm波长范围内有最大吸收峰，类胡萝卜素在500-600 nm波长范围内有最大吸收峰。
根据吸收光谱的不同，可以推测各色素在光合作用中的吸收波长和参与的反应。
实验结论：通过该实验，我们成功地提取和分离了叶绿体中的色素，并观察到不同色素的吸收光谱。
这些实验结果可以帮助我们深入了解植物光合作用的机制，以及不同色素在光合作用中的作用。
同时，该实验也展示了提取和分离生物样品中化学物质的基本实验技巧和原理。
《叶绿体色素的提取和分离》 实验报告
《叶绿体色素的提取和分离》实验报告
叶绿体是植物细胞中的一种细胞质器，主要功能是光合作用。
叶绿体包括一系列色素，其中最重要的是叶绿素。
在本实验中，我们将提取和分离叶绿体色素，以便进一步分析其
结构和功能。
实验步骤：
1. 从新鲜的叶子中剪下片段，用无菌蒸馏水洗涤。
2. 用离心机将叶片离心，离心速度为1000 rpm，时间为5分钟。
3. 将上清液取出并过滤，过滤剂为细孔过滤纸。
5. 将上清液取出，并用1ml无菌蒸馏水洗涤叶绿体色素。
7. 取出上清液，将其光度值调至0.4-0.6。
（400nm处）
8. 将上述上清液转入紫外吸收仪中，观察叶绿素的吸收曲线。
实验结果：
实验得出的叶绿体色素提取液中，吸收最强的波长为680nm和430nm。
这对应着叶绿
体和类胡萝卜素的吸收峰。
实验得到的叶绿体色素移液后，需要经过离心的过程，这样可去除混杂物质，获得更
为纯净的叶绿素。
通过以上实验，我们成功地提取和分离了叶绿体色素。
叶绿素是植物所特有的，它起
到了光合作用的关键作用。
实验中的提取和分离方法，可以为进一步的分析叶绿素的结构
和功能提供帮助。
色素的提取和分离原理（6篇）
色素的提取和分离原理(6篇)以下是网友分享的关于色素的提取和分离原理的资料6篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
篇一实验名称:菠菜色素的提取和分离一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2、通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。
在生物体内，β-胡萝卜素受酶催化氧化形成维生素A。
目前β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
CH2H3CCH2CH3MgNH3CCH3CO2CH3CH3CH3CH3CH3CH3叶绿素a（R = CH3）叶绿素b（R = CHO）22 H3C H3C3CH3CH33RR33H3C3β-胡萝卜素（R = H）叶黄素（R =OH）H3C3CH3CH3CH2OHCH3维生素A三、操作步骤1、菠菜色素的提取取2g新鲜菠菜叶，与10mL甲醇拌匀研磨5分钟，弃去滤液。
残渣用10mL的石油醚-甲醇（3:2）混合液进行提取，共提取两次。
合并液用水洗后弃去甲醇层，石油醚层进行干燥、浓缩。
叶绿素的提纯实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解叶绿素的结构和性质。
2. 掌握叶绿素的提取和提纯方法。
3. 学习利用有机溶剂提取叶绿素，并通过色谱法进行分离和纯化。
二、实验原理叶绿素是绿色植物中进行光合作用的重要色素，主要由叶绿素a和叶绿素b组成。
叶绿素不溶于水，但可溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮等。
通过提取和提纯，可以得到高纯度的叶绿素，为进一步研究其性质和作用提供条件。
实验过程中，首先将植物叶片用有机溶剂提取叶绿素，然后通过层析法分离叶绿素和其他色素，最后收集纯化的叶绿素。
三、实验器材1. 新鲜植物叶片（如菠菜、青菜等）2. 研钵、研杵3. 乙醇、丙酮（分析纯）4. 层析柱、层析板5. 滤纸、脱脂棉6. 移液管、滴管7. 恒温水浴锅8. 显微镜9. 紫外-可见分光光度计四、实验步骤1. 提取叶绿素（1）取新鲜植物叶片，用剪刀剪碎，放入研钵中。
（2）加入适量乙醇和丙酮（体积比1:1），研磨至匀浆。
（3）将匀浆倒入分液漏斗，静置分层。
（4）收集有机层，用无水硫酸钠干燥。
（5）过滤，得到叶绿素提取液。
2. 分离叶绿素（1）将层析板放入层析柱中，在底部铺一层脱脂棉。
（2）取适量叶绿素提取液，用移液管滴加于层析板上，确保液面低于层析板边缘。
（3）选择合适的溶剂系统，如正己烷-乙酸乙酯（体积比4:1）。
（4）将溶剂滴加于层析板上，观察层析过程，直至溶剂前沿到达预定位置。
（5）取出层析板，用铅笔标记层析结果。
3. 收集纯化叶绿素（1）用移液管收集叶绿素层，倒入小烧杯中。
（2）加入少量乙醇，搅拌均匀。
（3）用滤纸过滤，收集滤液。
（4）将滤液倒入蒸发皿中，用恒温水浴锅蒸干。
（5）用少量乙醇溶解残留物，得到纯化叶绿素。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：通过有机溶剂提取，可以得到绿色叶片提取物，表明叶绿素已从植物叶片中提取出来。
2. 叶绿素分离：通过层析法，可以将叶绿素与其他色素分离，证明叶绿素具有独特的性质。
3. 叶绿素纯化：通过蒸发和溶解，可以得到纯化的叶绿素，说明实验过程中叶绿素得到了有效的纯化。
植物生理学实验 叶绿体色素的提取、分离
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或者 95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水 ＝4.5∶4.5∶1的混合液来提 取叶片中的叶绿素，用于测定 叶绿素含量。 之所以要用含 有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 研磨法提取 光合色素
制作绿色标本方法：用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶 绿素
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸 （直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
2. 叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。 （2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
0.1g叶+10ml混合液浸提
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
实验八叶绿体中色素的提取和分离教学目的1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
2．探索叶绿体中有几种色素。
实验原理1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。
实验程序1）称取5g绿色叶片并剪碎提取色素2）加入少量sio2、caco3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线）制滤纸条2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线滤液划线2）干燥后重复划2-3次1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准）纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中3）用培养皿盖盖上烧杯观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）最宽：叶绿素a；最窄：叶绿素b；相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。
实验关键1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。
如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。
2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。
3．层析时不要让滤液细线触及层析液。
注意事项1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。
2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。
3．分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
【同类题库】．下列哪一种液体不能作为叶绿体中色素提取液？（c）a．丙酮溶液b．酒精溶液c．水溶液 d．汽油．在叶绿体中色素的提取与分离实验中，扩散速度最快的色素是（d）a．叶绿素ab．叶绿素b c．叶黄素 d．胡萝卜素．将菠菜叶表皮细胞和人的口腔上皮细胞制成装片，从盖玻片一侧滴入30%的蔗糖溶液，另一侧用吸水纸重复吸收几次，分别放在显微镜下观察，其结果是（d）a．前者发质壁分离，后者也发生质壁分离b．前者发生质壁分离，后者破裂c．前者发质壁分离，后者质壁分离复原 d．前者发生质壁分离，后者皱缩．如果没有丙酮和菠菜叶，要保证分离后色素带清晰，可以用来替代的最佳实验材料是（a）a．酒精和麦苗 b．酒精和大白菜 c．蒸馏水和大白菜d．蒸馏水和麦苗．用韭菜做“叶绿体色素的提取和分离实验”，下列不能用作提取剂的是（a）a．水 b．丙酮 c．酒精 d．ccl4．为了提取绿色植物叶绿体中的色素，在研磨绿叶时加入少许碳酸钙，其作用是（b）a．调节ph，加速色素溶解 b．调节ph，防止叶绿素被破坏c．使绿叶研磨充分 d．有利于四种色素的分开．在研磨绿叶时，下列哪种物质不需要加入（b）a．丙酮b．层析液 c．碳酸钙 d．二氧化硅．（多选）某学生在做“叶绿体色素的提取和分离实验”时，收集到的滤液呈淡绿色，其原因可能是（ac）a．叶片较老较黄 b．加入的二氧化硅多了些c．研磨不充分d．漏斗基部塞的脱脂棉多了些．做色素提取和分离实验的正确装置是图中（d）．在进行叶绿素提取和分离实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是（c）a．滤纸条上几种色素会扩散不均匀而影响实验结果b．滤纸条上滤液细线会变粗而使色素太分散c．色素会溶解在层析液中而使结果不明显d．滤纸条上几种色素会混合起来．某人做叶绿体中色素分离实验时，使用的是圆形滤纸，装置如下图。
实验7 叶绿体色素的提取和分离
步
骤
注 意 问 题
分
析
1．提取色素 5 克绿叶剪碎， 放入研钵，加 SiO2、CaCO3 和 5mL 丙酮（或 10mL 无水 乙醇）迅速、充分研磨。 （若 没有无水乙醇，也可用体积 分数为 95%的乙醇，但要加 入适量的无水碳酸钠，除去 水分） 2．收集滤液漏斗基部放一单 层尼龙布，研磨倒入漏斗内 挤压，将滤液收集到小试管
胡萝卜素（橙黄色）
杯要盖培养是胡 萝卜素，扩散
四种色素之所以能被分离，是因为四种色素 随层析液在滤纸上的扩散速度不同。
叶黄素（黄色） 叶绿素 a（蓝绿色） 叶绿素 b（黄绿色）
最慢是叶绿素 b， 含量最多的 是叶绿素 a。
2
尼龙布起过滤作用。
中，用棉花塞塞住试管口。 3．制备滤纸条将干燥的滤纸， 顺着纸纹剪成长 10cm，宽 1cm 干燥 的纸条，一端剪去二个角，并 顺着纸纹剪成 在距这一端 1cm 处划一铅笔 长条 线。 一端剪去二个 角 4．划滤液细线用毛细吸管吸 取少量滤液，沿铅笔线划出 滤液细线越
试管口用棉花塞塞紧是为了防止丙酮挥发。
1
加 SiO2 为了研磨得更充分。 加 CaCO3 防止研磨时叶绿素受到破坏。因为 加 SiO2 加 CaCO3 加丙酮 迅速 叶绿素含镁， 可被细胞液中的有机酸产生的氢 代替， 形成去镁叶绿素， CaCO3 可中和液泡破 坏释放的有机酸，防止叶绿体被破坏。 叶绿体色素易溶于丙酮等有机溶剂。 减少研磨过程叶绿素的分解，减少有毒性的 丙酮挥发。
可吸收更多的滤液。 层析时，色素分离效果好。 可使层析液同时到达滤液细线。
防止色素带之间部分重叠。
细、齐、直的一条滤液细线， 细、 越齐越好。 干后重复三次。 重复三次。 增加色素在滤纸上的附着量，实验结果更明 显。 5．纸层析法分离色素 层析液不能没 防止色素溶解在层析液中，
叶绿体色素提取与分离实验
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能的色素和结构
（一）捕获光能的色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度 最快的色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析， 会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是 （） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色
练习
1、在植物实验室的暗室内，为了尽可能地降
低植物光合作用的强度，最好安装（ B）
A、红光灯 B、绿光灯 C、白炽灯 D、蓝光灯
2、为提高大棚蔬菜的产量，哪项措施更有效
5、下图是叶绿体色素的提取与分离实验中所用的材料与用具。请回答： 分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色的溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表示加，“—”表示不加。
处理 二氧化硅（少量） 碳酸钙（少量） 95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
C、安装绿色透光薄膜 D、安装无色透光薄膜
练习
3．在圆形滤纸的中央点上粘叶绿体的色素滤液， 进行色素分析，会得到近似同心环状的四个色素圈，
排在外圈的色素呈 [ A]
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叶绿体色素的提取分离、理化性质实验报告
第一部分提取与分离
一实验目的
学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法
二实验原理
叶绿体是进行光合作用的细胞器。
叶绿体中的叶绿体a(C55H72O5N4Mg)、叶绿素b(C55H72O6N4Mg)、胡萝卜素(C40H56)和叶黄素(C40H56O2)与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。
提取液可用薄层色谱法加以分离与鉴别。
薄层色谱分析法是将吸附剂均匀的涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层做固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂做流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。
流动相通过毛细管作用由下而上的逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱附、再吸附、再脱附……的过程。
由于吸附剂的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。
三实验材料与试剂
1 新鲜的菠菜叶片
2 体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，体积比)
3 天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸
四实验步骤
(一)色素提取液的制备
1 取新鲜叶片4至5片(2g左右)，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入研钵中。
2 研钵中加入少量碳酸钙粉末，加2至3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加10至15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。
提取液应避光保存。
(二)叶绿体色素的分离
1 取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘约1cm处用毛细管划线，风干后再划第二次，重复操作3至4次。
2 在干洁的层析缸中加入适量的展开剂，高度约0.5cm，将硅胶预制板带有色素的一端放下，使其浸入展开剂中(但不要使待测样品浸入展开剂中)。
迅速盖好层析缸盖。
此时，展开剂借毛细管作用沿硅胶预制板向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可以看到各种色素的色带。
3 当各种色素的得到较好分离，展开剂前沿接近硅胶预制板上端近边缘处时，取出硅胶预制板，并迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。
五实验结果及数据、分析
经过薄层色谱分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
各色素带在薄层中的位置可用相对比移值R f表示，即
R f=斑点中心到原点的距离/溶剂前沿至远点的距离
由于不同组分具有不同的R f值，所以比较R f值可以进行定性分析。
但是，实验中的很多因素也可以影响到R f的值，例如吸附剂的种类、层析缸的形状大小、温度、展开剂的浓度等等。
最后测得数据：R f(胡萝卜素)=0.972，R f(叶绿素a)=0.908,R f(叶绿素b)=0.856，R f(叶黄素)=0.804。
第二部分理化性质
一实验目的
验证叶绿体色素的理化性质
二实验原理
叶绿素是一种由叶绿酸和叶绿醇形成的复合酯，故可与碱起皂化反应而生成甲醇和叶绿醇及叶绿酸盐，产生的盐能溶于水，故可用此法将叶绿素和类胡萝卜素分开。
叶绿素吸收光量子而转变成为激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回倒基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
叶绿素的化学性质很不稳定，容易受到强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。
叶绿素中的镁可以被H+所取代而生成褐色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。
三实验材料及试剂
1 新鲜菠菜叶片
2 刻度试管，小试管，试管架，水浴锅，10ml移液管
3 体积分数为95%的乙醇，苯，醋酸铜粉末，质量分数为5%的稀盐酸，醋酸-醋酸铜溶液，氢氧化钾-甲醇溶液
四实验步骤
(一)光对叶绿素的破坏作用
1 取2支小试管，各加入2.5ml叶绿体色素乙醇提取液，并用体积分数为95%的乙醇稀释一倍。
其中一支放在直射日光下，另外一支放在暗处或用锡箔纸包严，40分钟后对比观察颜色有何变化。
2 另取本实验中用薄层层析分离成的硅胶色谱板一个，按长度方向将一半用黑色纸或塑料薄膜包住，放在直射日光下，半小时后观察，比较色谱板上各色素的颜色有何变化。
(二)皂化作用
1 取1支10ml刻度的试管加入3ml浓的叶绿体色素乙醇提取液，加入1ml氢氧化钾-甲醇溶液，充分摇匀。
2 片刻后，加入3ml苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入1ml左右的蒸馏水，轻轻摇匀(勿激烈摇荡)，然后置于试管架上静置分层。
若溶液不分层，则用滴管吸取蒸馏水，沿管壁滴加，边滴加边摇动，直到溶液开始分层时，静置。
(三)H+和Cu+对叶绿素分子中的Mg+的取代作用
1 取两支试管，第一支试管中加叶绿体色素提取液5ml，作为对照。
第二支试管中加入叶绿体色素提取液5ml后，再加入质量分数为5%的HCl数滴，摇匀，观察溶液颜色变化。
当溶液变褐后，再加入少量醋酸铜粉末，60℃水浴加热，观察溶液颜色变化情况，并与对照试管相比较。
2 取新鲜植物叶片两片，放入试管中，加醋酸-醋酸铜溶液，使之没过叶片，90℃水浴加热，随时观察叶片颜色的变化，直至颜色不再变化为止。
(四)荧光现象的观察
取一支小试管加入3ml浓的叶绿素乙醇提取液，在直射光下照射，比较溶液的透射光与反射光的颜色有何不同。
五实验结果及分析
1 在光对叶绿素的破坏的实验中，未观察到提取液的颜色变化以及个色素的颜色变化，分析其原因，可能是因为当时的阳光已经不够强烈，不足以对色素达到破坏的程度，而且放置的位置不够好，不能使样品被阳光直射，而且放置的时间也可能不够长，所以导致此试验失败。
2 静置一段时间之后，溶液逐渐分为两层，下层是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的叶绿素a 和叶绿素b(以及少量的叶黄素)，呈绿色；上层是苯溶液，其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素，呈黄色；最下层有少量黄色乳状液体，这是由于皂化液沉积引起的。
3 ·当加入了少量的盐酸后，溶液在短时间内变为了褐色，再加入少量的醋酸铜粉末，水浴加热一段时间后，溶液又重新变为了蓝绿色。
·90℃水浴加热约半个小时以后，叶片变为黄色，约一个半小时以后，叶片又逐渐恢复为蓝绿色。
4 荧光现象:透射光下呈绿色，反射光下呈红褐色。
第三部分实验感想
1 实验过程中，同组人员的配合十分重要，因为本实验的步骤很多，所以两个人配合起来的话可以大大的提高实验效率。
2 在用毛细管划线时，不可以画的太粗，否则会影响分离的时间，而且效果也不太好。
3 做叶绿素光解的实验时，要多等一些时间，否则时间太短的话实验现象不明显，或者没有出现应有的实验现象。