植物组织培养实验指导
《植物 组织培 养实验 指导》.
有不同的要求，常用的消毒剂有漂 溶液(800~1500 倍)，
粉（1%~10%的溶液） ，次氯酸 （HgCl 0.1~1%）酒精 70% ，
钠液（0.5~10%） 水(3~10%)等。 (1) 尖、 及
等的消毒，因
将上述溶液
酸度计或精密 PH 试纸 和 1N HCL 调 (7) (8) 定容到 1L 分装： （一般 (9) 。
定培养基的 PH 一般要求 5.8~6.0，过酸过碱
用 1N NaoH
热装培养基，1000ml 培养基分装 50 个三角瓶，即 试管、三角瓶容量 1/4~1/3 ）注：培养基 明培养基 试管
洗涤。带有凡士林的器皿须先用废纸把凡士林擦去，再用汽油擦洗干净，然后用热 肥皂水煮沸半小时，刷洗后，自来水冲干净。若带有石蜡，可在玻璃器皿下垫几层 废纸，放入 60－70℃温箱中 1 加热－2 小时，待石蜡融化后，再用废纸反复擦 2－3 次即去石蜡再泡入洗衣粉的热水中洗干净最后用自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净若有 胶布粘着物，先用 70%酒精棉球擦数遍，溶解粘胶物，并用少许去污粉刷抺，再用洗 衣粉煮沸半小时，刷洗干净，自来水冲洗，晾干，再泡入洗液。 (2) 金属器皿
7
30g/L，6BA 0.5mg/L, NAA 0.2mg/L
溶解为止。
脂的 300ml 蒸馏水中。
(5)
各种母液的吸取 母液（A+ B）100ml 盐（C ）:5ml、微量 （D）10 ml，微量
① 用 100ml 量筒量取大量 ② 分
用 10ml 移液管或吸管吸取 （E ）1 ml 母液
③ 用 10ml 移液管或吸管吸取有机物（F）10ml ④ 用 5ml 移液管吸取生长 (6) 混 及调 PH 混合于 脂与 溶液中，混合 后，加热 80℃ ，用 6BA （0.5mg/L） ：2.5ml；NAA（0.2mg/L）1.0ml。
植物组织培养的实验报告_实验报告_
植物组织培养的实验报告一、实验目的1.掌握无菌操作的植物组织培养方法；2.通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3.通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；4.通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5.了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物组织培养植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。
这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。
（二）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
（三）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。
营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
四、实验材料豌豆种子五、实验药品药品、70% 酒精、0.1% 升汞、MS培养基、蒸馏水、NaOH、 84消毒液、蔗糖、琼脂等。
六、实验步骤。
植物组织培养试验
植物组织培养试验《植物组织培养技术》实验指导实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌一、目的要求：1.通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。
2.通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、材料用具：高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。
三、说明：在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的,总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。
植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染,第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒,使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。
四、方法和步骤：首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml 粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。
此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。
每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净一泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷f清水反复冲洗f蒸馏水淋一遍f烘干备用。
然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净f晾干一侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定f清水反复冲洗干净f蒸馏水淋洗一遍f烘干备用。
带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时,再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。
第五章植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术实验方案一、实验目的：1.了解植物组织培养的基本原理和方法。
2.掌握植物组织培养的实验操作技巧。
3.培养植物组织并观察其生长和发育情况。
二、实验材料和设备：材料：麦芽糖、琼脂、植物激素（如IAA、ABA、GA3等）、幼绿豆胚轴组织。
设备：平板培养器、显微镜、高压锅、移液器、无菌操作器具等。
三、实验步骤：1.制备琼脂培养基a）称取适量琼脂加入适量蒸馏水中，搅拌均匀。
b）高压锅加热至沸腾，放入琼脂溶液，保持沸腾10-15分钟，使琼脂充分溶解。
c）将高压锅冷却后取出，倒入洁净的培养器中，晾凉并凝固。
2.准备植物组织a）将绿豆种子浸泡于水中，待种子发芽至一定程度。
b）取出绿豆胚轴组织，用刀切割成适当大小的组织片段。
3.制备植物组织培养基a）取适量砂糖和植物激素（如IAA、ABA、GA3等），溶解于蒸馏水中。
b）加入适量制备好的琼脂培养基，搅拌均匀。
4.进行组织培养a）将准备好的植物组织片段放入培养器中，倒入制备好的植物组织培养基，使组织片段完全浸没其中。
b）盖上培养器盖子，用透明胶带密封，防止细菌浸入。
c）将培养器置于适当的温度和光照条件下，进行培养。
5.观察和记录a）每天观察组织的生长和发育情况，记录变化。
b）使用显微镜观察细胞结构和细胞分裂情况。
c）观察是否有细菌感染或其他异常情况。
d）记录实验数据，如生长速率、生长周期等。
四、实验要点：1.所有实验操作都要在无菌环境下进行，避免细菌和其他微生物的污染。
2.组织培养基的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
3.培养条件也根据不同植物种类的要求进行调整，如温度、光照等。
4.实验中要注意观察并记录实验数据，对结果进行分析和总结。
五、预期结果：通过植物组织培养技术，可以观察到植物组织的生长和发育情况，研究不同因素对植物生长的影响，培养出健康的植物组织，为其他相关研究提供基础数据和实验材料。
六、安全注意事项：1.操作时要小心使用实验器具，避免切伤或烫伤等事故发生。
组织培养实验(植物部分)
组织细胞培养技术实验实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。
生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L 的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。
加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L的溶液。
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
分装培养基，包好或盖好，标明编号。
121℃(103kPa)灭菌15-20min。
3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃ (103kPa) 灭菌40min；配制0.1% HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。
注意：1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。
然后紫外线消毒。
2.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
3.用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
植物组织培养实验指导
《植物组织培养》实验指导书实验性质：设计性武汉工业学院生物科学与制药工程系《生物工程实验》课程组编写二零零五年六月植物组织培养实验性质：设计性实验学时：8分组人数：2人1.1实验目的和要求（1）了解植物细胞和组织培养技术的定义和基本要求（2）熟悉无菌操作的要求，初步掌握无菌操作技术（3）初步掌握常规的植物组织培养技术1.2实验原理细胞分化(cell diferentiation)指细胞后代在形态、结构和功能等发生变化的过程，归根结底是某些功能基因的开启或者关闭。
一般说来，终端分化细胞已经失去分化潜能，只具有单能性；而大部分细胞只保留了部分分化潜能，称为多能性。
对于动物而言，只有部分干细胞仍保留了分化的全能性。
而植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力，称为植物细胞的全能性(totipotency)。
植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术。
植物组织培养最原始的意义是指愈伤组织培养，但发展至今，其范围已经扩展至植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养：植株培养。
指以具备完整植株形态的材料（如幼苗和较大的植株）作为外植体的无菌培养。
胚胎培养。
指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。
器官培养。
指以植物的根，茎，叶，花，果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖，茎节和切段，叶的叶原基，叶片，叶柄，叶鞘和子叶，花器的花瓣，雄蕊（花药，花丝），胚珠，子房，果实等的离体无菌培养。
组织培养。
指以分离出植物各部位的组织（如分生组织，形成层，木质部，韧皮部，表皮，皮层，胚乳组织，薄壁组织，髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。
这是狭．义的组织培养．．．．．．。
细胞培养。
指以单个的游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。
原生质体培养。
指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。
植物组织培养实验教案
一、实验背景植物组织培养技术是一种在无菌条件下，将植物的茎尖、茎段或叶片等切成小块，通过人工方法在特制的培养基上进行培养，使其逐渐发育成完整植物体的技术。
本实验旨在让学生了解植物组织培养的基本原理，掌握实验操作技能，培养学生的创新意识和实践能力。
二、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理及应用。
2. 掌握植物组织培养实验的操作步骤。
3. 培养学生的创新意识和实践能力。
三、实验材料与仪器1. 材料：植物茎段、叶片、茎尖等；培养基；植物激素；消毒剂等。
2. 仪器：无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、移液器、解剖刀、镊子、滤纸等。
四、实验步骤1. 准备实验材料：选取健康的植物茎段、叶片或茎尖，去除杂质，清洗干净。
2. 消毒：将实验材料用70%酒精浸泡30秒，再用无菌水清洗，用消毒剂处理1-2分钟。
3. 切割材料：用解剖刀将消毒后的实验材料切割成适当大小的小块。
5. 培养：将接种后的培养皿放入培养箱中，控制温度、光照等条件，进行培养。
6. 观察与记录：定期观察植物组织的生长状况，记录实验现象。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格无菌操作，避免污染。
2. 切割材料时要注意刀片的消毒和更换。
3. 培养过程中要定期观察，调整培养条件。
4. 实验结果可能存在差异，要注重数据分析与讨论。
教案编写仅供参考，具体实验操作请根据实际情况进行调整。
祝实验成功！六、实验拓展1. 探索不同植物激素对植物组织培养的影响。
2. 尝试用植物组织培养技术繁殖难生根或珍贵植物。
3. 研究植物组织培养在基因工程中的应用。
七、实验报告要求1. 描述实验材料、仪器和实验步骤。
2. 记录实验现象和结果。
3. 分析实验结果，探讨可能的原因。
4. 提出实验中存在的问题及改进措施。
八、实验评价1. 评价学生对植物组织培养原理的理解。
2. 评价学生对实验操作的熟练程度。
3. 评价学生对实验现象的观察与分析能力。
4. 评价学生在实验过程中的团队合作精神。
植物组织培养实训指导书
植物组织培养实训指导书《植物组织培养技术》是生物技术及应用专业的工学结合核心课程之一。
本课程采取“项目引领，任务驱动”的教学模式，使学生掌握植物组织培养技术的职业知识和职业技能，能够在实际工作中具备实验方案设计能力、培养基制备能力、无菌操作能力、组培苗驯化移栽能力及组培苗工厂化生产能力。
实训一：实训室的灭菌与玻璃器皿的清洗一、目的要求1.通过实训，使学生了解各种洗涤液的特性；2.掌握酸液的配制方法和组织培养中常用器血的洗涤技术；3.通过实训，培养学生良好的卫生习惯，建立组织培养的无菌意识；4.会配制新杰尔灭溶液。
二、材料用具1.灭菌用具：2%新洁尔灭、高镒酸钾、甲醛、70%酒精、洗涤剂、各种培养血、工作服、口罩、手套、试管刷。
2.洗涤用具：肥皂液、洗衣粉、重铬酸钾粉末、1%HCL、70%酒精、瓶刷等。
三、方法步骤（一）培养室的灭菌1、地面、墙面和工作台的灭菌2、无菌室和培养室的灭菌（二）玻璃器皿的洗涤（酸洗）玻璃器血的洗涤一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
重铬酸钾洗涤（三种）液配制：重铬酸钾508，加工蒸馏水，加热溶化，冷却后再缓缓加入工业浓硫酸90ml。
1、新玻璃器血的洗涤用1%HCL的溶液浸泡一昼夜，再用清水反复洗涤，最后用蒸馏水冲淋一遍，干燥后备用。
2、用过的玻璃器血先将器血中得残留物质除去，用清水冲洗，再用洗衣粉洗涤，最后用清水冲洗3—4遍，把字迹擦洗干净，干燥后使用。
3、污染的培养瓶的处理首先经高压蒸汽灭菌，再按（2）的步骤洗涤。
4、用过的吸管、滴管、容量瓶先放在重铬酸钾溶液浸泡2h以上，取出后经流水冲洗30min左右，干燥后使用。
四、实训报告①.植物组织培养室的灭菌方法步骤。
②.写出洗涤液的配置步骤。
③.记录各种培养瓶的洗涤方法。
实训二：组织培养工厂的设计一、目的要求通过实训，使同学们对现代组培苗生产模式有一个更为深刻的认识，能熟练的根据生产规模设计合理的厂房及工艺流程。
二、材料用具组培苗生产小工厂、绘图纸、绘图笔三、方法步骤（-）组培工厂的参观1.参观组培实验中心2.组培工厂的组成：准备室、灭菌室、缓冲室、无菌室、培养室、驯化室3.各室内仪器设备的种类及摆放（二）设计一 200m2组培工厂，要求给出大概的布局图。
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生物技术大实验第一部分植物组织培养实验一、母液的配制和保存（3学时）一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。
二、原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。
使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩10倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩100倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩100倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩100倍）等。
三、实验仪器设备和试剂冰箱，天平，酸度计，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(100ml，500ml，1000ml)，药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉NH4NO3, MnSO4.4H2O, KNO3, ZnSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, Na2MoO4.2H2O, MgSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KH2PO4, CoCl2.6H2O, H2BO3，Na2•EDTA•2H2O，KI, FeSO4.7H2O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水四、实验方法1、MS大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸馏水大约350ml，放入500ml的烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,MgSO4.7H2O ,CaCl2.2H2O，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO4•4H2O，ZnSO4•7H2O ，H2BO3，KI ，NaMoO4•2H2O，CuSO4•5H2O，CoCl2•6H2O，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
3、MS铁盐母液配制把FeSO4•7H2O和Na2•EDTA•2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解。
保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2•EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5，加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。
在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。
4、MS有机化合物母液的配制按配方表中用量依次称取：肌醇，维生素B1，烟酸，甘氨酸，维生素B6，用蒸馏水依次溶解并定容后，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
5、植物生长物质母液的配制NAA母液：配制浓度为0.1mg/ml。
NAA属于生长素类激素。
6-BA母液：配制浓度为0.1mg/ml。
6-BA属于细胞分裂素。
五、实验报告1、撰写实验报告。
（包括实验名称、目的、原理、实验用品、实验操作内容，实验结果，数据记录与处理、分析和讨论）2、思考题（必做）⑴MS培养基母液配方及其母液的配制⑵植物生长物质母液的配制：实验二、培养基的配制与灭菌（3学时）一、实验目的学习用母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法。
二、原理组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。
三、实验仪器设备和试剂天平，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1000ml，100ml，25ml)，移液管（10ml，5ml，2ml，1ml，0.5ml），药勺，称量纸，玻璃棒，吸耳球，酸度计或pH试纸，培养瓶（400个），瓶盖（或封口膜+耐热橡皮筋），线绳，高压灭菌锅，滴瓶琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/LHCl，1mol/LNaOH四、实验步骤1、培养基的配制培养基A：MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+ 3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。
（见实验三）培养基B：MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L6-BA+ 3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。
（见实验四）培养基C：1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5%蔗糖+1.0%琼脂，pH5.8。
（见实验四）①将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。
②取③按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添加到搪瓷缸中，在电磁炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至500ml。
④充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为5.8。
⑤趁热把培养基分装到广口瓶中，每瓶约20~40ml。
封好瓶口。
贴上标签，注明培养基名称，配制者组号（或姓名）和配制日期，待灭菌。
2、培养基灭菌灭菌温度及灭菌时间：121℃（1.06kg/cm2）下灭菌15分钟。
（如是实验所用菌材灭菌，如无菌水及器械，则是121℃（1.06kg/cm2）下灭菌30分钟）①检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。
把分装好的培养基放入灭菌锅的消毒桶内。
②盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间参数，开启电源加热灭菌。
③灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。
④刚灭过菌的培养基成液体状，取出时不要用力摇动，否则会导致部分培养基沾附在瓶壁。
放置在水平桌面上自然冷却。
在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。
经检查没有杂菌生长的方可使用。
五、实验报告撰写实验报告。
（包括实验名称、目的、原理、实验用品、实验操作内容，实验结果，数据记录与处理、分析和讨论）附：稀酸和稀碱的配制方法1mol/LHCl取浓盐酸8.25ml，加蒸馏水至100ml，即为1mol/LHCl。
1mol/LNaOH称取氢氧化钠4g，加入蒸馏水100ml，即为1mol/LNaOH。
实验三、无菌操作及植物的初代培养（6学时）一、实验目的培养材料的灭菌与接种是组织培养过程中一个很重要的环节。
通过本实验的操作，领会无菌培养对试验材料消毒、接种的要求，初步掌握植物材料消毒、接种的无菌操作技术。
二、实验原理植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚至是细胞的过程。
如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得组织培养成功的前提和重要保证。
外植体在合适的培养基上，通过脱分化，即有可能表现植物细胞的全能性。
三、材料、试剂和器具材料：非洲菊花托、康乃馨茎段及营养芽培养基：MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+ 3%蔗糖+0.8%琼脂器具：（以各组所需为例）无菌器材：3个不锈钢托碟（或培养皿）+吸水纸；1升无菌水；大号、中号镊子各2把；2把解剖刀；2个500ml烧杯非无菌材料：0.1%的升汞水2L；1000ml搪瓷缸或玻璃烧杯(装废液用)；1个500ml消毒缸2盏酒精灯及火机1个；橡皮筋若干，标签纸、记号笔、1把大号镊子四、实验步骤1．接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种房间紫外灯，照射约30min，然后关闭紫外灯。
打开房间换气扇及微开超净工作台的玻璃挡板，通风20min后，即可进行无菌操作。
（此步由专人统一负责）2. 接种室灭菌过程中同时对外植体进行表面灭菌。
先将接种材料在流动的自来水下涮洗干净，吸干水份后切成大约70mm长的片段放进500ml烧杯中，用蒸馏水冲洗2次，倒掉蒸馏水后倒入0.1%的升汞水消毒，将材料淹没浸泡约10分钟（期间用镊子搅拌几次）。
3. 把在消毒液中的接种材料转移到超净工作台上。
用无菌镊子将已完成灭菌的接种材料转移到烧杯中，用无菌水清洗3次，每次不少于1分钟，洗时不断摇动烧杯以确保完全除去消毒液。
最后一次清洗后转移到无菌托碟上，将接种材料切成一定大小（花托0.5cm2、茎段0.5-1cm）。
4. 取下培养瓶的盖子用火烧灼瓶口。
用镊子将外植体轻轻插入到琼脂上，立即盖上盖子。
5. 操作完后将镊子等器械浸入75%酒精中。
每组的下一个同学所用操作器械需要在每次使用前消毒一次。
方法是将浸于酒精中的器械取出后置于酒精灯火焰上充分灼烧，待冷却后方可使用。
6. 将培养瓶放到培养箱里，在25℃下培养4～6周，获得充分生长的愈伤组织、不定芽。
五、实验报告（1）接种2天后观察污染情况，计算污染率。
污染率=污染的材料数/总接种材料数×100%2.每周观察并记录外植体产生愈伤组织、不定芽的情况，包括培养物形态的变化，愈伤组织和不定芽出现的时间、量，计算愈伤组织和不定芽诱导率。
实验四、植物的增殖及生根培养（6学时）一、目的通过实验，掌握运用植物生长调节物质调控植物器官分化的方法。
并进一步熟悉无菌操作方法。
二、原理以植物的茎、叶等部分作为外植体进行离体培养，可以直接诱导器官分化，产生芽、根，形成新的植物体；也可以诱导其改变原来的分化状态脱分化形成愈伤组织，“再分化”出根和芽等器官。
在该过程中，植物生长调节物质起着决定作用，调控着培养细胞再生的不同方式。
三、实验材料、试剂和器具1．实验材料：菊花试管苗2．试剂MS母液，各种植物生长物质3．仪器设备无菌器材：生根培养基3～4瓶4～6周龄菊花试管苗3个不锈钢托碟+吸水纸大号、中号镊子各2把2把解剖刀非无菌材料：1个广口瓶(500ml)，内装75%酒精及棉球1个锥形瓶（250ml），内装75%酒精150ml2盏酒精灯及火机1个橡皮筋若干、标签纸、记号笔、喷雾器、鞋套1把大号镊子四、实验步骤1、培养基准备：增殖培养基：MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L6-BA+ 3%蔗糖+0.8%琼脂生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L+1.5%糖+1.0%琼脂2、接种室灭菌。
3、接种培养，在超净工作台上进行无菌操作。
将培养瓶转移到接种室，在将瓶放入超净工作台前用75%的酒精棉球擦拭瓶外表面，减少附在瓶外壁上的灰尘与微生物。
4、增殖培养：在超净工作台上将丛生芽分割成单个芽，切去芽基部的愈伤组织和去掉基部黄叶，然后将单个芽转接到新鲜的增殖培养基上，于温度23±2℃，光强2000lx，光周期为12h的环境下培养。