植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养的工作流程
植物组织培养的工作流程引言：植物组织培养是一项重要的生物技术，用于研究植物的生长和发育过程，以及培养新的植物品种。
本文将介绍植物组织培养的工作流程，包括材料准备、组织采集、培养基制备、植物培养和结果分析等步骤。
一、材料准备：植物组织培养需要准备一系列材料，包括无菌培养器皿、无菌工具、培养基成分、植物种子或组织等。
这些材料需要提前准备并进行无菌处理，以确保实验的准确性和可靠性。
二、组织采集：在进行植物组织培养之前，需要从植物中采集组织样品。
这些组织样品可以是幼苗的种子、叶片、茎段等。
在采集组织样品时，需要注意避免外界的污染，以及及时将样品转移到无菌条件下进行后续处理。
三、培养基制备：培养基是植物组织培养中至关重要的因素之一。
制备培养基时，需要根据具体实验的要求选择不同的成分和浓度。
一般来说，培养基包括基础培养基、激素和营养物质等。
这些成分需要按照一定比例混合，并加入适量的琼脂糖进行凝固。
四、植物培养：将采集到的植物组织样品转移到培养基中进行培养。
在进行植物培养时，需要注意无菌操作，并将培养器皿密封，放置在恒温培养箱中。
培养过程中，还需要定期观察植物的生长情况，并根据实验需要进行必要的处理，如添加激素、调整培养基成分等。
五、结果分析：植物组织培养的最终目的是获得预期的结果，如新的植株、组织或细胞。
在培养过程结束后，需要对培养结果进行分析和评估。
这可以通过观察植物的形态、结构和生长状态，以及进行细胞学和分子生物学等实验手段来完成。
结论：植物组织培养是一项复杂而有趣的技术，通过对植物组织的培养和生长，可以研究植物的生物学特性并培育新的植物品种。
本文介绍了植物组织培养的工作流程，包括材料准备、组织采集、培养基制备、植物培养和结果分析等步骤。
通过遵循这些步骤，我们可以获得准确可靠的实验结果，并为植物科学研究提供有力支持。
植物组织培养操作流程
5、倒去酒精
6、倒入消毒液处理15分钟
7、倒去消毒液
8、无菌水冲洗5次
9、取出茎尖
10、在滤纸上吸干水分
双目解剖镜下解剖豌豆茎尖
显微解剖镜使用图解
目镜
放大倍数 旋钮
物镜
解剖载物台
焦距旋钮
底光源开关
上光源调节 旋钮
六、实验结果观察
两周以后观察烟草愈伤组织的形成情况。
四周后，观察烟草幼苗的成、烟草茎段接种b
18、接种好的烟草苗a
19、接种好的烟草苗b
20、重新封好瓶口a
21、重新封好瓶口b
22、重新封好瓶口c
23、重新封好瓶口d
24、写好班级和组号
二 烟草愈伤组织的培养
挑选生长健康的无菌烟草叶或茎，在灭菌的培养皿中→剪成0.5-1cm2的小块或相当大小的茎段(造成伤口), →接种在盛有MS培养基的培养皿中→将培养皿用封口膜封住。 在光照培养箱中，25℃下,16小时光照，培养两周，可形成愈伤组织。
植物组织培养的内容 植物组织培养包括以植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体为外植体的离体无菌培养，拥有几种不同水平的培养技术，即整体的、器官的、组织的、细胞和原生质的培养技术。（植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养 ）
石斛植物的芽培养
长春花的胚性细胞培养
黄芪的发状根固体培养
1、点着酒精灯
2、双手擦拭消毒
3、剪刀灭菌
外焰
4、酒精中冷却
5、把酒精烧去
6、打开三角瓶——铝箔纸的拿法a
7、打开三角瓶——铝箔纸的拿法b
8、瓶口在火焰上烧过
9、铝箔纸的放法
10、镊出烟草苗a
11、镊出烟草苗b
12、放入培养皿中
植物的组织培养方法
植物的组织培养方法植物组织培养是一种无性繁殖技术，通过培养植物的各种器官组织，包括种子、茎、叶和根的细胞和组织，使其在适当的条件下进行生长和分化，从而产生新的植株。
这项技术已被广泛应用于农业、园艺、林业和植物学研究中。
以下是植物组织培养的一般步骤和方法：1. 材料准备：首先，选择适合的植物作为材料，常用的包括水果、蔬菜和花卉植物。
收集新鲜的种子、茎、叶或根，并进行消毒处理，以防止细菌、真菌和其他病原体的污染。
2. 植物组织的分离：将植物材料切成小块或将细胞分离开来。
对于植物的种子，可以直接将种子表面进行消毒处理后，在培养基上进行培养；对于茎、叶和根等组织，则需要进行切割处理。
3. 培养基的准备：制备适当的培养基是进行植物组织培养的重要步骤。
培养基通常由无机盐和有机添加剂组成，以提供植物生长所需的营养物质。
根据组织的不同类型，可以使用不同种类和浓度的培养基。
4. 培养基的调整：将分离的组织放入培养基上，可以将培养基涂覆在组织表面上，或者将组织植入培养基中。
然后，在无细菌的条件下，将组织培养在适当的温度、湿度和光照条件下。
5. 激素的添加：植物生长激素是控制植物生长和分化的关键因素。
在组织培养中，可以根据实验的需要添加适量的激素来促进细胞分裂和分化。
常用的激素有生长素、细胞分裂素和愈伤组织生成素等。
6. 愈伤组织的诱导：愈伤组织是植物组织培养中产生的一种可分化细胞。
通过搅拌、震荡或辐射等途径，诱导组织分化成愈伤组织，然后将其继续培养。
7. 植株的再生：通过培养基中激素的平衡调节，可以使愈伤组织再生为整个植株。
在培养基中，植株的幼苗养分丰富，需要的培养基成分和激素浓度可能与之前的不同。
8. 培养环境的控制：为了使植物组织正常生长和分化，需要控制培养环境的参数。
例如，可以调节培养基的pH值、光照强度、温度和湿度等因素。
9. 组织转化：经过培养，植物组织中可以引入外源基因，使其具有某种特定的性状，这被称为转基因。
植物组织培养实验基本步骤
植物组织培养实验基本步骤
1. 材料准备：准备所需的植物材料和培养基。
2. 消毒：消毒植物材料，如叶片、茎段等，以防止细菌和真菌的污染。
3. 器具消毒：消毒实验所需的培养瓶、显微镜片、剪刀等器具。
4. 取材料：用消毒过的器具将所需植物材料取出，例如茎段。
5. 材料处理：将植物材料进行预处理，如切割、消毒或暴露在光线下以诱导发芽等。
6. 培养基制备：根据实验需求准备培养基，培养基是一种富含营养物质的液体或凝胶。
7. 培养瓶准备：将培养基倒入消毒过的培养瓶中，通常是将液体培养基加入到瓶中，然后用胶状凝胶封上。
8. 材料接种：将植物材料放入培养瓶中的培养基中，通常是将茎段插入培养基中或将植物组织切割成小块直接放入培养基中。
9. 培养条件调控：设置适宜的光照、温度、湿度和气体浓度等
培养条件，以促进植物组织的生长和分化。
10. 观察和记录：随着时间的推移，观察植物组织的发育和生长情况，并记录相关的数据。
11. 分离和传代：当组织生长到一定程度时，可以将其分离成更小的部分，并继续在新的培养基上进行培养，以扩增植物组织。
12. 实验结束：当实验达到预定的目标或需要终止时，停止培养，处理培养瓶和实验残余物，如进行消毒处理。
需要注意的是，以上步骤只是植物组织培养实验的一般步骤，具体的实验步骤和条件可能因实验目的和植物种类的不同而有所变化。
植物组织培养的七大步骤
植物组织培养的七大步骤植物组织培养是一种通过体外条件、培养基和植物激素等手段，从植物的细胞或组织片段中培养出完整植株或其它的植物器官的生物技术方法。
它在现代生物技术和农业生产中有着广泛的应用。
下面将详细介绍植物组织培养的七大步骤。
步骤一：组织材料的选择与处理植物组织培养的第一步是选择合适的组织材料。
组织材料可以是从植物的各个部位（如根、茎、叶）中获得的发育中组织片段或细胞。
在选择组织材料时，需要考虑到植物的种类、性别、生长期等因素。
同时，在取材时要注意保持材料的活性和无菌状态，以避免外部微生物的污染。
步骤二：材料的消毒和无菌处理在进行植物组织培养之前，必须对组织材料进行消毒和无菌处理。
常用的消毒方法有热处理和化学消毒法。
热处理是将组织材料放入含有消毒剂的培养基中，在适当的温度下进行反复处理，以达到杀灭细菌和真菌孢子的目的。
化学消毒法是使用一些消毒剂如过氧化氢、酒精等对组织材料进行处理，以达到无菌状态。
步骤三：培养基的配制与过滤培养基是植物组织培养的基础，它提供了植物生长所需的营养和生长因子。
培养基的配制需要根据组织材料的特性和需求来确定。
一般来说，培养基包括有机营养物、无机盐、糖类、维生素、植物激素等成分。
配制好的培养基需要进行过滤，以去除其中的颗粒物和微生物，保证培养基的无菌状态。
步骤四：培养体外的组织将经过消毒和无菌处理的组织材料，放在含有适当培养基的培养容器中。
培养容器可以是培养皿、瓶子或装载体。
然后，将培养容器放在恒温恒湿的光照条件下进行培养。
在培养过程中，需要定期检查培养容器的状态，确保培养基和气氛的正常。
步骤五：选择培养因子和激素在组织培养过程中，可以根据需要添加不同的培养因子和激素，以促进组织的生长和发育。
常见的培养因子包括生长素、细胞分裂素、维生素等，它们可以提供植物生长所需的营养物和调节植物生长的信号。
激素包括植物生长素、植物激素、生长激素等，它们可以调节植物的生长和发育，促进组织的分化和再生。
植物组织培养的一般流程
植物组织培养的一般流程一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：1）准备阶段（然根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。
查阅相关文献，并经高压灭菌或过后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，滤除菌后备用。
2）外植体选择与消毒（将消毒后的外然后进行消毒处理。
选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，接种到初代培养基上。
植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，）初代培养（3促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。
原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。
（4）继代培养当芽苗繁殖到一分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。
进行脱毒苗培养的需提前定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。
进行病毒检测。
5）生根培养（提高生长素浓多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，刚形成的芽苗往往比较弱小，度，促进小苗生根，提高其健壮度。
6）炼苗移栽（选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。
当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。
P P 1 、二、单项选择题1. 在衡量杂种优势（H ）时，超中优势的计算方法为（[F 1 -(P 1 +P A. H ＝2 分别表示两亲本的性状平均值，F 1 为杂种一代的性状平均值）：[F 1 -(P 1 +P 2 )/2]/(P 1 +P 2 )/2 D. H ＝2 )/2]/(P 1 -P 2 )/2 B. H ＝(F 1 -P 1 )/P 1 C. H ＝(F 1 -P 2 )/P 2层细胞发生突变，则下列器官或组织会发L II 2. 根据植物梢端组织发生层学说，如果生变异的是：中柱C. 不定根D. ．表皮A B. 种子3. 对于孢子体型自交不亲和而言，下列基因型的杂交组合能产生后代的是：S 1 S 2 B ．S 1 S 2 ×S 1 S 3 C ．S 1 S 2 ×．A S 1 S 2 ×S 2 S 3 D ．S 1 S 2 ×S 3 S44. 原始群体性状差异较大的异花授粉园林植物，实生选种时一般采用：A ．一次单株选择B ．一次混合选择C ．混合－单株选择D ．单株－混合选择5. 现有两种菊属植物，其染色体组类型分别为AABB 和CC ，则将它们进行体细胞杂交获得的谐和细胞杂种染色体组类型应该为： A. AABB B. ABC C. AABBCC D.CC6. 下列射线中，哪一种属于可以引起物质电离的电磁波？A ．X 射线B ．β射线C ．紫外线D ．激光7. 园林植物的多倍体与二倍体相比，一般会表现为：A ．气孔增多B ．花大色艳C ．适应性减弱D ．结实率增加8. 常用的化学诱变剂EMS （甲基磺酸乙酯）是一种：A ．碱基类似物B ．烷化剂C ．抗生素D ．生长调节物质9. 在下列有性杂交方式中，被称为双交的是：A ．(A ×B) ×(C ×D)B ．[(A ×B) ×B] ×BC ．A ×BD ．[(A ×B) ×C] ×D10. 对于繁殖系数较高的草花而言，有时为了加速其选种进程，下列哪个程序或圃地可以省略？A ．株系圃B ．品种比较预备试验圃C ．品种比较试验圃D ．区域试验三、填空题（每空0.5 分，共15 分）1. 园林植物品种应具备的三个基本特征是：___ 、___ 和___。
植物组织培养的六大步骤
植物组织培养的六大步骤植物组织培养是指通过体外不断培养植物细胞、组织和器官，以研究其发育过程和生物学特性，也包括人工繁殖植物和生产植物次生代谢产物。
在植物组织培养的过程中，需要进行一系列的步骤，下面将详细介绍植物组织培养的六大步骤。
第一步：选择适宜的材料植物组织培养需要选取适宜的材料作为起始材料，这通常是从植物体中选择健康、无病虫害并具有较高再生能力的组织部分，如茎、叶片、种子等。
同时，还应注意选择具有较高再生能力的植物品种或种质资源，以提高培养成功率。
第二步：消毒处理为了减少外界微生物的污染，必须对选取的材料进行消毒处理。
常用的消毒方法有酒精消毒、双氧水消毒、高温高压消毒等。
消毒后的材料在无菌操作下移到无菌培养室，准备进行下一步的操作。
第三步：组织分离和培养经过消毒处理的材料，可以通过组织分离的方法来获得组织的单个细胞或小块组织。
常用的组织分离方法有切割法、振荡法、酶解法等。
分离得到的组织或细胞可以直接进行培养，也可以在培养基中添加适当的生长调节剂，以促进组织的增殖和分化。
第四步：培养基的选择和配置培养基是植物组织培养中重要的因素之一，它为植物细胞提供养分和生长因子，同时调控其生长和分化。
培养基通常由无机盐、有机物质、糖类、维生素、生长调节剂等组成。
根据需要，培养基可以分为基础培养基和不同类型的专用培养基。
基础培养基通常为MS培养基或白培养基，而专用培养基则针对不同的组织和目的进行调配。
第五步：培养条件的调控和优化在植物组织培养的过程中，培养条件的调控和优化对细胞和组织的生长和分化起着至关重要的作用。
光照、温度、湿度、pH值以及培养物的搅拌等因素都需要合理控制和调节。
此外，根据不同类型的组织和目的，还需要添加适量的生长调节剂、抗生素和其他辅助因子。
第六步：再生植株的分离和繁殖最后一步是将培养的组织或细胞分离出来，得到再生植株。
这需要将培养物转移到含有较稀释生长因子的培养基上，以便干扰物的去除和适度延长培养时间。
植物组织培养实验
植物组织培养实验植物组织培养实验是一项基于植物生物学的研究技术，它通过在适当的培养基中培育植物细胞、组织和器官，以研究植物生长、发育、代谢和遗传等方面问题。
植物组织培养技术一般涉及的基本步骤包括组织取样、表皮消毒、培养基制备、筛选培养物、培养、观察和数据记录等。
组织取样组织取样是植物组织培养的第一步，选择的组织应为获得感兴趣细胞或器官的基础。
通常情况下，植物种子、叶片、幼茎、根、芽、花和果实等都可以用于组织取样。
在选择组织前需要确定所研究的问题，如要研究种子发育过程，则选择发育中的种子进行取样；若要研究茎的生长过程，就选择茎的新生部位作为实验对象。
表皮消毒表皮消毒是将取得的植物组织中的微生物去除的过程。
微生物会影响组织培养发展，这会导致发生不必要的变异和甚至失败。
表皮消毒的方法有多种，其中最常用的方法是使用双氧水和75%酒精按一定方法进行消毒。
消毒之后，将组织再次用无菌水清洗，以去除残留的双氧水和酒精。
培养基制备培养基是培养组织的营养来源，可以根据不同实验设计的要求选择制备。
基本培养基配方包括营养盐和植物激素，营养盐提供必要的营养物质，而植物激素则起着促进细胞分裂和分化的作用。
例如，包含各种氨基酸、维生素和能量来源的MS基础培养基是最常用的培养基之一。
筛选培养物筛选培养物是将合适的组织细胞挑选出来放置在培养基中培育，防止其过多发生变异或者对人体等方面的危害。
在筛选培养物时，需要注意细胞数量和形态。
对于数量较多的细胞和组织，应采用无菌手术刀进行分离和挑选；而对于较小的器官如芽或根的小茎，可利用移液管或显微镜完成挑选。
培养和观察在选择出适合的培养物之后，需要将其放置在外界充分汲取空气和养分的环境中培养。
养分和水分需要在适宜的时间内追加，以适应发育的需要。
特别是对于更高级的组织器官如花，生长的要求更高，需要精心细致的培育过程。
同时还需要及时观察器官的生长和整体形态，以便对培养过程进行调整和升级。
数据记录数据记录是组织培养实验最后一个步骤，它的目的是为了明确整个实验过程中的变化和优化。
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植物组织培养实验基本步骤
一、母液的配置
1、MS大量元素母液的配制
将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。
按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
2、MS微量元素母液的配制
将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4·4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
3、MS铁盐母液配制
将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称 FeSO4·7H2O 和
Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和 Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。
保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA 溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。
在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。
4、MS有机化合物母液的配制
将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。
按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。
二、植物激素的配置
常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、1、生长素类：
（1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
（2）、常见生长素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）。
NAA、IAA、IBA 被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。
IAA容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。
（3）、溶解方法：称25mg吲哚乙酸（IAA），用少量1mol/L NaOH或95％酒精预溶解，再加蒸馏水定容至25ml，摇匀。
（4）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
2、细胞分裂素
组织培养中，细胞分裂素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。
细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。
（1）、常用的细胞分裂素有： 6－苄氨基嘌呤（6－BA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、玉米素（ZT）、噻二唑苯基脲（TDZ ）
（2）、溶解方法：称25mg 6－苄氨基嘌呤（6－BA），用少量（1ml）1mol/L HCL预溶解，再加蒸馏水定容25ml，摇匀。
（3）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
3、赤霉素（GA3）
（1）、溶解方法：用少量95％酒精预溶解，再加蒸馏水定容。
（2）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
（3）、赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解（4）、灭菌：高温易分解，要过滤灭菌
4、脱落酸
（1）、溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。
（2）、保存：具有热稳定性，但容易发生光解。
配成一定浓度后，冰箱冷藏保存
三、培养基的制备与灭菌
（一）、培养基的制备
1、将所需的各种母液和植物激素按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。
2、取烧杯一个内盛200ml蒸馏水，按照培养基配方所需量依次取母液加入烧杯，搅拌，按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添加到烧杯中，在电炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至所需体积。
3、充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为（可将其调为），趁热把培养基分装到广口瓶中，封好瓶口，待灭菌。
（二）、培养基的灭菌
灭菌温度及灭菌时间：121℃（cm2）下灭菌20分钟。
（如是实验所用菌材灭菌，如无菌水及器械，则是121℃（cm2）下灭菌30分钟），此时可将需要灭菌的实验仪器一起灭菌。
1、检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。
把分装
好的培养基放入灭菌锅的消毒桶内。
2、盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间参数，开启电源加热灭菌。
3、灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。
4、在培养基凝固之前加入一定量的植物激素后密封瓶口，放置在水平桌面上自然冷却。
四、无菌操作技术和接种
1、接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台台面，打开超净工作台紫外灯及接种房间紫外灯，照射约30min，然后关闭紫外灯。
打开房间换气扇及微开超净工作台的玻璃挡板，通风20min后，即可进行无菌操作。
（此步由专人统一负责）
2、接种室灭菌过程中同时对外植体进行表面灭菌。
先将接种材料在流动的自来水下涮洗干净，吸干水份后切成大约70mm长的片段放进500ml烧杯中，用蒸馏水冲洗2次，倒掉蒸馏水后倒入%的升汞水消毒，将材料淹没浸泡约10分钟（期间用镊子搅拌几次）。
3、把在消毒液中的接种材料转移到超净工作台上。
用无菌镊子将已完成灭菌的接种材料转移到烧杯中，用无菌水清洗3次，每次不少于1分钟，洗时不断摇动烧杯以确保完全除
去消毒液。
最后一次清洗后转移到无菌托碟上，将接种材料切成一定大小（花托、茎段）。
4、取下培养瓶的盖子用火烧灼瓶口。
用镊子将外植体轻轻插入到琼脂上，立即盖上盖子。
5、操作完后将镊子等器械浸入75%酒精中。
操作器械需要在每次使用前消毒一次。
方法是将浸于酒精中的器械取出后置于酒精灯火焰上充分灼烧，待冷却后方可使用。
6、将培养瓶放到培养箱里，在要求温度下培养，观察记录
五、所需实验仪器及额外药品
电子分析天平、PH测试仪器、电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、药匙、玻璃棒、胶头滴管、移液枪、烧杯、培养瓶、棕色瓶、吸水纸、标签、记号笔、剪刀、镊子、三角瓶、培养皿、蓝盖瓶、细菌过滤器（微孔过滤膜）、量筒100ml、吸管、无菌水、%升汞或次氯酸钠溶液、70%—75%的酒精。
注：
植物激素灭菌
可高压灭菌：IBA，NAA ，6-BA，2,4-D
不可高压灭菌： IAA，GA3。