植物组织培养实验PPT演示课件
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《植物组织培养实验》PPT课件
• 6-BA：1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏 水定容）。
• NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容）。
精选PPT
6
三、作业：
• （一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几 种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？
• （二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为 1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？ 注意要点有哪些？
精选PPT
12
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
精选PPT
13
• （三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤：
称量 定容。
分别溶解
混合
精选PPT
2
一，MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• （二）操作人员坐到超净台前，用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• （三）点燃酒精灯，从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗，置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上，用灭过菌的刀 和镊子配合操作，从叶柄处切下，将所有叶片去除，只 留下近茎部的一小段叶柄。
• NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容）。
精选PPT
6
三、作业：
• （一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几 种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？
• （二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为 1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？ 注意要点有哪些？
精选PPT
12
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
精选PPT
13
• （三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤：
称量 定容。
分别溶解
混合
精选PPT
2
一，MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• （二）操作人员坐到超净台前，用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• （三）点燃酒精灯，从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗，置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上，用灭过菌的刀 和镊子配合操作，从叶柄处切下，将所有叶片去除，只 留下近茎部的一小段叶柄。
实验11 植物的组织培养技术 (共37张PPT)-精
二、影响植物组织培养的因素及成功的 关键
1．影响因素
(1)内部因素：材料的选取。
(2)外部因素：营养成分的种类及配比； 植物激素的用量及使用顺序；pH、温度、 光照等。
2．获得成功的关键
(1)植物组织培养所利用的植物材料体积 小、抗逆性差、对培养条件要求较高。
(2)培养材料一旦被微生物污染，就会导 致实验失败。原因是微生物增殖快，生 长迅速，消耗养分多，并产生代谢废物 毒害培养材料。
①当植物激素X与植物激素Y的浓度比等 于1时，________________；
②___________________；
③______________________。
(4)若植物激素Y是生长素，在植物组织 培养中其主要作用是___；则植物激素X 的名称是__。
(5)生产上用试管苗保留植物的优良性状， 其原因是_________________。
(4)人参皂苷易溶于水溶性(亲水性)有机 溶剂，从培养物干粉中提取人参皂苷宜 选用________方法，操作时应采用 ________加热。
【解析】 (1)灭菌是指用强烈的物理或 化学的方法，杀死物体内外的一切微生 物，包括芽孢和孢子。消毒指使用较为 温和的物理或化学方法仅杀死物体表面 或内部一部分对人体有害的微生物。在 组织培养过程中要防止杂菌的污染，需 要对固体培养基进行灭菌，对人参根进 行消毒。(2)用于离体培养的离体的植物 组织或器官(根切块)称为外植体。
(4)人参皂苷溶于水溶性有机溶剂，可以 用萃取法从培养物干粉中提取。萃取时 要采用水浴加热，这是因为有机溶剂都 是易燃物，用明火加热容易引起燃烧、 爆炸。
【答案】 (1)灭菌 消毒 (2)外植体 真菌(霉菌) 细菌 (3)果胶 (4)萃取 (浸取) 水浴
《实验植物组织培养》PPT课件
对照
NaCl
冰水
实验六
实验安排
一、配制培养基 本周（第10周） 二、无菌操作 下周（第11周）
三、无菌培养 四、观察记录
第12、13、14、15 周每周进行观察
※ 上交实验报告时间：第16周
实验目的
（1）深刻理解植物组织培养的基本概念 和理论依据。
（2）训练利用实验室的条件来合理设计 和完成实验的基本技能。
3.培养基灭菌
高压灭菌(压力1.1 kg/cm2 , 121℃, 20min )。湿热灭菌
共500mL,分装12瓶
大量元素25mL
微量元素5mL
各物质加入量：
有机物5mL
①大量元素母液（20×） 50mL/L；
肌醇5mL 铁盐2.5mL
②微量元素母液（100×） 10mL/L； 蔗糖15g
③有机附加成分母液（100×） 10mL/L冷；凝脂2.9g
2.接种 （1）切取材料 左手持镊，右手持刀→切取材料→叶 片：0.5cm×0.5cm，茎段带一个腋芽。
（2）接种 取三角瓶→打开封口膜→接种 叶块：正接，每瓶3块 茎段：形态学下端插入培养基，每瓶3个
（3）重新封口 （4）做标记 班级，日期
三、无菌培养
将接种好的三角瓶置于培养室进行培养。 培养条件：光/暗 = 14 h/10 h；
依据一
分化 外植体 愈伤组织 芽、根 完整植株
脱分化 再分化
冲洗
表面消毒
外植体
接种
脱分化
愈伤组织
再分化 再分化
植物组织培养的过程
实验设计的依据
依据二
培养基中植物生长物质的种类和浓度在脱分化 和再分化中起重要作用，尤其是生长素和细胞分裂 素类的比例。
NaCl
冰水
实验六
实验安排
一、配制培养基 本周（第10周） 二、无菌操作 下周（第11周）
三、无菌培养 四、观察记录
第12、13、14、15 周每周进行观察
※ 上交实验报告时间：第16周
实验目的
（1）深刻理解植物组织培养的基本概念 和理论依据。
（2）训练利用实验室的条件来合理设计 和完成实验的基本技能。
3.培养基灭菌
高压灭菌(压力1.1 kg/cm2 , 121℃, 20min )。湿热灭菌
共500mL,分装12瓶
大量元素25mL
微量元素5mL
各物质加入量：
有机物5mL
①大量元素母液（20×） 50mL/L；
肌醇5mL 铁盐2.5mL
②微量元素母液（100×） 10mL/L； 蔗糖15g
③有机附加成分母液（100×） 10mL/L冷；凝脂2.9g
2.接种 （1）切取材料 左手持镊，右手持刀→切取材料→叶 片：0.5cm×0.5cm，茎段带一个腋芽。
（2）接种 取三角瓶→打开封口膜→接种 叶块：正接，每瓶3块 茎段：形态学下端插入培养基，每瓶3个
（3）重新封口 （4）做标记 班级，日期
三、无菌培养
将接种好的三角瓶置于培养室进行培养。 培养条件：光/暗 = 14 h/10 h；
依据一
分化 外植体 愈伤组织 芽、根 完整植株
脱分化 再分化
冲洗
表面消毒
外植体
接种
脱分化
愈伤组织
再分化 再分化
植物组织培养的过程
实验设计的依据
依据二
培养基中植物生长物质的种类和浓度在脱分化 和再分化中起重要作用，尤其是生长素和细胞分裂 素类的比例。
植物的组织培养(上课用)PPT演示课件
38
（四）培养
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
39
2、愈伤组织的继代培养
45
结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主 要途径及怎样预防污染？
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
46
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
21
③当同时使用这两类激素时，两者用量的比 例影响植物细胞的发育方向。
生长素用量比细胞分 裂素用量
植物细胞的发育方向
比值高时
有利于根的分化、抑 制芽的形成
比值低时
有利于芽的分化、抑 制根的形成
比值适中时 促进愈伤组织的生长
22
（4）环境因素： （ pH、温度、光照）等条
件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物 包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
③、高等植物是光能自养型生物，为什么在植 物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？
此时的组织或细胞为离体的，细胞所生活 的环境为液体有机物营养环境，而不能体现其 整个植物体的光能自养。
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
（四）培养
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养.
39
2、愈伤组织的继代培养
45
结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主 要途径及怎样预防污染？
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
46
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
21
③当同时使用这两类激素时，两者用量的比 例影响植物细胞的发育方向。
生长素用量比细胞分 裂素用量
植物细胞的发育方向
比值高时
有利于根的分化、抑 制芽的形成
比值低时
有利于芽的分化、抑 制根的形成
比值适中时 促进愈伤组织的生长
22
（4）环境因素： （ pH、温度、光照）等条
件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物 包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
③、高等植物是光能自养型生物，为什么在植 物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？
此时的组织或细胞为离体的，细胞所生活 的环境为液体有机物营养环境，而不能体现其 整个植物体的光能自养。
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
《植物组织培养》PPT课件
分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
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16
②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
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条件
离体状态
营养物质
无机营养 有机营养
人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激 素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化 生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业 工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培 等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫 害等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物
力及田间种植所需要的土地。
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14
二、植物组织培养的基本原理
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于
植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
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13
③管理方便 ，利于工厂化生产和自动化控制 植物组织培养是在一定的场所和环境下，
➢ 细 胞 培 养 单细胞培养
➢器
官
培
养
胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、 叶、花和幼果的部分组织的培养
➢ 原生质体培养
➢ 分生组织培养 茎尖精、选课根件尖等
10
愈伤组织(callus)原指植物体的局部受到创伤刺激后， 在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成， 可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
植物组织培养【优质PPT】
2021/5/27
26
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取 液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植 物生长发育的控制起重要作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层 诱导形成的愈伤组织连续生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细 胞培养也得到了类似的结果。
（3）液体培养(Liquid Culture)：震荡、旋转或静置培 养。
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固体培养： 液体培养
2021/5/27
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三、植物组织培养技术的理论基础
植物细胞的全能性(Plant cellular totipotency）
从理论上讲，植物体的每个生活细胞都具有该 植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条件 下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2021/5/27
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3、植物组织培养技术的发展（1960年以后）
1960年，Morel利用兰花茎尖培养对兰花进行营养繁殖；
1962年，Murashige和Skoog开发出最著名的Murashige和Skoog培养基 （MS基本培养基），并被后来广泛采用的基本培养基。
1964年，印度人Guha和Maheshwari利用曼陀罗花粉培养获得第一例 单倍体植株。从而开辟了单倍体育种技术。
细胞团培养
茎尖分生组织培养 原生质体培养
2021/5/27
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矮牵牛茎尖离体培养培养
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5
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大蒜根尖培养及植株
植物组织培养PPT课件
在植物体内
限制
游离
表现
植物体的任何一个细胞，都有长成完整个体的潜在能力
.
5
01
培养基
在组织细胞生长过程中提供所需的营养物质
.
6
02
组培苗的生长过程
.
7
02
组培苗的生长过程
转苗
出瓶
.
8
03
植物组织培养的意义
.
9
03
快速繁殖
稀有植物 繁殖能力低或不能用种子繁殖的植物 受地理环境及季节因素限制的植物
.
10
04
组培的实验条件
.
11
04
超净工作台
提供无菌无尘的工作环境
照明灯
紫外线灯
风机
视频介绍
.
12
04
培养室
控制光照、温度，并 保持相对的无菌环境
.
13
05
转苗操作步骤
.
14
05
操作步骤
准备工作 01
1.将操作时需要用到的物品（酒精灯、一对镊子、托盘、培养基等） 放于超净工作台台内喷洒70%酒精后开启超净台紫外灯照射消毒 30min左右 2.戴口罩，70%酒精消毒双手 3.取一对镊子于酒精灯火焰的外焰灼烧约1-2min后放置至恢复室温 备用
.
18
05
每瓶接7-10株
接苗深度：将根部插入培 养基，露出根茎结合部 （过深不利于苗的生长） 尽量使苗直立固定
.
19
The end 希望同学们学有所成
.
20
1.取适量的苗于托盘中后，将培养瓶盖上盖子 （盖前同样转动灼烧瓶口） 2.左右手各持一把镊子，将托盘里的苗分成一株 株同时把夹带的培养基、枯叶等杂质与苗分开
选修一 第四部分 实验11 植物的组织培养 ppt（26张PPT）浙科版
1.MS培养基(用于配置发芽和生根培养基) 2.萘乙酸用少量0.1mol/LNaOH溶液溶解，苄基腺嘌呤 用少量0.1mol/LHCL溶解 3.发芽培养基(灭菌) 4.生根培养基(灭菌)
MS固体培养基成分及比例
培养基需具备五大类营养要素
大量元素 微量元素 有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
实验步骤:
•①超净台中 无菌条件下 切取无菌培 养菊花苗段, 每段至少带 有1张叶片
•②丛状苗培养:酒精灯 旁将每段放入发芽培养 基,茎部分插入,盖上封 口膜,每瓶可放2-3段, 日 光灯下保持18-25℃,每 天光照不少于14.5h,2-3 周培养成丛状苗
实验11 植物组织培养
试管苗大规模培养
实验目的:
1.进行菊花的组织培养 2.尝试植物激素的应用
通过必修课的学习，我们已经了解到大 多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那 么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
无性繁殖
压条
组织培养
一、组织培养概述
1.概念
组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、 花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基 上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生 根发芽。
蛭石是一种天然、无机，无毒的矿物质，在高温 作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物 ，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从它的 外形看很像云母。
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
MS固体培养基成分及比例
培养基需具备五大类营养要素
大量元素 微量元素 有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
实验步骤:
•①超净台中 无菌条件下 切取无菌培 养菊花苗段, 每段至少带 有1张叶片
•②丛状苗培养:酒精灯 旁将每段放入发芽培养 基,茎部分插入,盖上封 口膜,每瓶可放2-3段, 日 光灯下保持18-25℃,每 天光照不少于14.5h,2-3 周培养成丛状苗
实验11 植物组织培养
试管苗大规模培养
实验目的:
1.进行菊花的组织培养 2.尝试植物激素的应用
通过必修课的学习，我们已经了解到大 多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那 么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
无性繁殖
压条
组织培养
一、组织培养概述
1.概念
组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、 花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基 上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生 根发芽。
蛭石是一种天然、无机，无毒的矿物质，在高温 作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物 ，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从它的 外形看很像云母。
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
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此液10ml
8
3.铁盐母液的配制
铁盐如果用柠檬酸铁，则和大量元素一起 配成母液即可。
但目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四 乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。 这种螯合物使用起来方便，比较稳定，且 不易发生沉淀。
9
这种母液的配制方法是： 用电子天3g乙二胺四乙酸二钠
母液分装
按顺序混合 定容
保存于冰箱
3
实验方法及步骤
1.大量元素母液的配制 MS培养基中大量元素共有5种（表1），按照
培养基配方的用量，把各种化合物扩大5倍，用 电子天平，分别用50ml烧杯称量。并在每只烧 杯中加入30－40ml重蒸馏水溶解。溶解时，可 置于酒精灯上略加热或电炉上加速其溶解（但 要注意温度不可过高）。然后混合按表1顺序定 容于500ml重蒸馏水中。
（Na2-EDTA.2H2O），分别用约200ml蒸馏水
溶解，并分别加热煮沸，然后混和两种溶液继 续煮沸，冷却后定容至500ml，冰箱4℃低温 保存。配制培养基时，每配制1000ml培养基 取此液5ml。
10
表3 MS培养基铁盐母液的称量及定容（100×）
FeSO4.7H2O Na2-EDTA.2H2O
12
表4 MS培养基有机物成分的称量及定容（50×）
烟酸
0.5 25
盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5 25
盐酸硫胺素(维生素B1) 0.4 20
甘氨酸
2.0 100
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
此液10ml
13
由于肌醇用量较大，在配制培养 基时单独直接称量加入
14
消毒剂： 200ml×2 3ml/100ml的次氯酸钠（15－25min）
16
表5 激素母液相应的有机溶剂
激素名称
有机溶剂
2,4—D
95％酒精
萘乙酸（NAA） 95％酒精或1 N NaOH
吲哚丁酸（IBA） 95％酒精或1 N NaOH
吲哚乙酸（IAA） 95％酒精或1 N NaOH
6-BA
1 N HCl 或1 N NaOH
激动素（KT） 1 N HCl 或1 N NaOH 玉米素（ZT） 95％酒精
25 ml。
(5)用封口膜封好，写明培养基代号，扎好线绳。
18
培养基配制
移母液
定容
确定配方
培养基熬制
调pH值
称取蔗糖、琼脂
二次定容
接种
灭菌
扎口
分装
19
母液吸取量的计算
公式1：
配制培养基的升数
赤霉素（GA3） 95％酒精
17
实验二 培养基制备与灭菌
实验方法及步骤
1.培养基配制 每组配制培养基1000 ml。
(1)每组取烧杯一只，分别量取大量元素、微量元素、铁盐、有机物 质成分置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。
(2)每组取1000 ml白瓷缸一只，用量筒取1000 ml蒸馏水倒入白瓷 缸中。划好液位线，再将蒸馏水倒出一半。称琼脂5g左右倒入 白瓷缸中，再称蔗糖25g备用。将加入琼脂的白瓷缸放在电磁炉
4
表1 MS培养基大量元素的称量及定容（5×）
KNO3
1900 9500
NH4NO3 KH2PO3 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O
1650 170 370 440
8250 850 1850 2200
定容于500ml重蒸馏水中，最后加入
CaCl2.2H2O，每升培养基取此液100ml
5
在混合定容时，必须最后加入氯化钙， 因为氯化钙易与磷酸二氢钾形成磷酸三钙、 磷酸钙之类不溶于水的沉淀。
27.8 2780 37.3 3730
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
此液5ml
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4.有机物成分的配制
在MS培养基配方中，有机物成分有维生素 和氨基酸（表4），由于用量小，也应配成母 液。按培养基配方用量的50倍，用感量为 0.0001g的电子分析天平分别称取后放入 100ml的烧杯中，加重蒸馏水或蒸馏水约80 ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中， 转移到储液瓶中保存于4℃冰箱。配制培养基 时，每配制1000ml培养基取此液10ml。
酒精：200ml×2 75％左右（ 75 ml纯酒精＋ 25 ml水） （78.9 ml95%酒精＋ 21.1ml水）
无菌水： 一组两瓶
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5.植物生长调节剂的配制
激素的使用比较灵活，要根据培养的植物种 类和目的而定。
常用的激素如生长素和细胞分裂素配制成 母液使用起来方便、准确。一般激素母液的浓 度为0.2－20 mg/ml。配制前需先用相应的少 量有机溶剂进行溶解，然后再定容。贴好标签， 写明配制激素的浓度，存放于冰箱中。
上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂溶化后加入混合液，将装
有混合液的烧杯用蒸馏水洗三次，倒入白瓷缸中，并加入蔗糖加 热片刻（注意不要煮沸），关闭电磁炉，加蒸馏水定容至液位线。
(3)用1N NaOH或1N HCL将pH值调至5.8-6.3。调时应用玻璃棒不 断搅动，并用pH值试纸测试pH值
(4)用玻璃漏斗，将1000ml培养基分注于20个锥形瓶中，每只约
植物组织培养实验实习
董雯 生物技术教研室
1
内容
1.实习实验 （1）培养基母液的配制（MS培养基） （2）培养基制备与灭菌 （3）初代培养（外植体接种） （4）继代培养 （5）生根培养 2.实习报告撰写
2
实验一 培养基母液的配制（MS培养基）
母液配制流程图
确定培养基
按照扩大倍 数称量
溶解
贴标签
将配好的混合液，倒入储液瓶中，贴 好标签保存于4℃冰箱中。配制培养基时， 每配1000ml培养基取此液100ml。
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2.微量元素母液的配制
微量元素母液按照培养基配方用量的50倍， 用感量为0.0001g的电子分析天平，分别称 取后各放入50-100ml的烧杯中，加蒸馏水约 50ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中， 转移到储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱。 配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液 10ml。
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表2 MS培养基微量元素的称量及定容（50×）
MZCnunSSSOOO444...754HHH222OOO HNa3B2MOo3 O4.2H2O
22.3 8.6 0.025 6.2 0.25
1115 430 1.25 310 12.5
KI
0.83
41.5
CoCl2.6H2O
0.025 1.25
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取