乙型肝炎病毒表面抗体定量测定

一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面
抗体测定的结果准确有效。

二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒
表面抗体。

三、临床意义
乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。

感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。

表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs) 的浓度，能够判定免疫效果。

关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。

肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥ 100mIU/ml为宜。

四、方法原理
本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。

用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。

通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。

五、标本的采集与处理
5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样
本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离
心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使
用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。

抗凝管推荐使用
肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。

5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样
本未变质方可使用。

5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。

5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样
本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于
-20℃以下，避免反复冻融。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

六、标本拒收标准
1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明
七、仪器与材料
7.1.仪器：适用于AutoLumo A2000化学发光检测仪。

7.2.试剂：AutoLumo A2000专用乙型肝炎病毒表面抗体试剂
7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。

7.2.2.试剂盒于2～8℃储存，有效期12个月。

7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。

7.2.4.试剂盒开启使用后，2～8℃保存可使用1个月。

7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，
防止雨雪淋湿和阳光曝晒。

7.2.6.试剂机载稳定性
7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向上存放，
在2 ~10°C环境下冷藏保存2小时后，才可上机使
用。

首次使用后，机载或在2 ~10°C 环境下稳定期
为28天。

7.2.6.2.校准品开瓶后保存于2~8°C，稳定期可维持1个月；若
需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20℃冻
存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。

八、检验方法
8.1.消耗品检查：
8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。

8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。

8.2.试剂包装载：
8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成
份，避免产生气泡。

不要倒转已经打开的试剂包。

8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。

8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。

8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。

8.3.测试：
8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为50μl。

8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。

8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。

8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。

8.4.定标：
8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。

8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。

8.4.3.将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。

8.4.4.装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。

8.4.5.选择“运行”开始测试，生成定标曲线。

8.4.6.定标曲线有效期为28天。

参考相应的仪器系统操作说明。

出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成：
质控结果经重复测定后仍然超出范围；
试剂盒或发光底物液的批号更改；
超出定标曲线的有效期限；
仪器重要部件更换或维修。

8.5.质控：
8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。

8.5.2.出现以下情况需要进行质控：
8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时；
8.5.2.2.更换新的试剂盒；
8.5.2.3.重新生成定标曲线；
8.5.2.4.停机。

8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保
合适的测试性能。

8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。

8.6.稀释
使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为
1:100。

手工稀释使用系统通用样品稀释液进行稀释，将得到的检测结果
乘以稀释倍数计算最终结果。

选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪
器系统操作说明以及帮助系统。

稀释后的样本含量应不低于5mIU /ml。

8.7.结果计算：
选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐采用四参数拟合方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度log值为y轴建立定标曲线。

根据
待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。

仪器自动操作系统可通过存储的定标曲线以及样本测试得到的发光值自动计算样本测试结果。

九、参考范围
正常参考值：＜10mIU/ml
建议各实验室根据自己实际条件及接触人群建立正常参考值。

本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，供临床医生参考。

十、检验结果的解释
10.1.用本试剂盒检测结果浓度值为8.0～12.0 mIU/ml的弱反应性可疑样
本，建议双份重新测定，如果双份复查浓度值均小于10 mIU/ml，结果
判为阴性，如果单份或双份测定不低于10 mIU/ml，结果判为阳性，同
时建议动态观察。

10.2.本试剂盒测定范围为5～1000mIU/ml，浓度值大于1000mIU/ml的样本，
其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。

如果要获得其更准确的结
果，需对样本进行稀释后重新测定，推荐稀释比例为1/100，使用系统
通用样品稀释液进行稀释。

稀释后仍超出线性范围的建议手工稀释并增
大稀释比例。

10.3.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样
本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果
不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在检测报
告中注明所用试剂特征。

系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行
额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线
值。

十一、检验方法的局限性
11.1.本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病
史及其他检测相结合。

11.2.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。

此类样本不适合
用本试剂盒进行检测。

11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。

十二、产品性能特征
12.1.符合率：与SFDA批准的试剂平行检测1024份临床样本，阴性符合率
99.58%，阳性符合率99.02%，总符合率99.41%。

12.2.最低检出限：≤10mIU/ml。

12.3.精密性：10孔平行检测浓度值为10mIU/ml样本，CV%≤15.0%；10孔
平行检测浓度值为100mIU/ml样本，CV%≤10.0%。

12.4.线性：在5～1000mIU/ml范围内，线性相关系数（r）不低于0.9900。

12.5.分析特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无交叉
反应。

2.5mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、10g/L甘油三酯和500mg/dl
胆固醇对检测结果无显着干扰。

12.6.HOOK效应：测定HBsAb浓度值为30000mIU/ml的样本，未出现HOOK
效应引起的假阴性结果。