CFSE原理和CFSE配制
CFSE活染方法Protocol
制作细胞悬液，加入等体积 CFSE 工作液，于 37℃孵育 10 min，用 40%体积的冷 小牛血清立即终止标记 10min。 离心洗涤两次后，用适量的完全培养液重悬细 胞。
CFSE 的浓度国外报道从 0.5uM~20uM 都有，建议终浓度为 2.5-5uM。浓度太低， 细胞标记的荧光强度不够，太高了对细胞有毒性，且影响细胞增殖。标记孵育时 要经常摇匀。
试剂盒成分
• CellTrace™ CFSE (Component A), 10 瓶，每瓶 50 μ g • DMSO (Component B), 0.5 mL
使用浓度：
一般来说，长时间染色（超过三天）或快速分裂为 5～10uM，活力分析等短时间分析为 0.5～ 5uM。 荧光显微镜为 25uM。优化并使用尽可能低的浓度以保持细胞的正常生理状态。
5. 37 ℃，避光放置 10min。
6. 250g 室温离心 10 分钟。弃上清，加入含 10%FBS 的完全 1640 培养液洗 2 次。 最后用 1ml R10 培养基（见附录 3）重悬。
7. 将上述细胞悬液加入 24 孔培养板,每孔 1mL,分别加相应的多肽库或者阳性 刺激物 SEB（Sigma, Cat# ）刺激 ,终浓度 1ug/ml
1．1
重悬细胞于预温的 PBS/0.1%BSA，浓度 1×10 6 /ml。
注意：为保证标记均匀，样本需为单细胞悬液。细胞浓度为 10 5 ~10 6 ,依标记后细胞的培养
时间而定。若需传代培养，浓度增加为 1～5×10 7。
1．2
每 ml 细胞中加入 2ul CFSE 贮存液，终浓度为 10uM。注意：最适工作浓度需优化，
二、CFSE 配制
用 DMSO 溶解成 5 mmol/L 的储存液，于- 20 ℃避光保存。使用时，用无血清 DMEM 培养液稀释成 5μ mol/L 的工作液备用。CFSE 试剂盒内有一小瓶 CFSE（A 试剂） 标明 500ug ，另有一小瓶 DMSO（B 试剂），500ugCFSE 溶解于 180ulDMSO 即是 5mMstock solution。
cfse染料波长 -回复
cfse染料波长-回复CFSE染料波长是指一种荧光染料的激发和发射波长。
CFSE （Carboxyfluorescein succinimidyl ester）是一种广泛应用于细胞生物学研究中的荧光染料。
它可以通过与细胞内的活性蛋白结合，以及通过其荧光信号的激发和发射来可视化和跟踪细胞的生物活动。
在本文中，我们将一步一步地探讨CFSE染料波长的相关知识。
首先，我们将了解CFSE染料的激发波长。
CFSE染料的激发波长通常为492nm。
这意味着当CFSE染料暴露在492nm的激发光下时，它会吸收能量并转化为发射荧光信号。
接下来，我们将详细了解CFSE染料的发射波长。
CFSE染料的发射波长通常为517nm。
这意味着在CFSE染料吸收激发光并转化为发射光时，它会产生具有517nm波长的荧光信号。
然而，需要注意的是，CFSE染料的激发和发射波长可以受到实验条件的影响而发生变化。
例如，在某些特定的实验设定中，可能需要使用不同的激发波长以达到最佳的荧光信号强度。
在这种情况下，研究人员可以选择适当的激发光源，并调整实验条件以获得最佳结果。
除了CFSE染料的激发和发射波长之外，还有一些其他与此相关的因素值得进一步探讨。
例如，荧光染料的量子产率和荧光强度可能会受到其化学结构和环境条件的影响。
此外，荧光染料与细胞内蛋白质或其他生物分子的结合方式及其影响也是研究人员需要考虑的因素之一。
在CFSE染料的应用中，其荧光信号的强度和稳定性对细胞生物学研究非常重要。
因此，研究人员通常会在实验之前对荧光染料进行仔细的优化和验证。
他们会通过使用不同的实验条件，包括激发光源和荧光检测系统等，来确定最佳的CFSE染料波长和设置。
总结起来，CFSE染料波长的理解对于细胞生物学研究的进展至关重要。
通过了解其激发和发射波长，并在实验条件中进行适当的优化，研究人员可以使用CFSE染料来可视化和跟踪细胞的生物活动，从而为细胞生物学研究的发展做出贡献。
CFSE染色方法
CFSE染色方法CFSE（Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester）染色方法是一种常用的荧光染色技术，通过这种方法可以追踪和分析细胞的增殖、分裂和活性等生理过程。
该方法利用CFSE荧光染料的特点，通过与细胞内的酯酶作用而形成的CFSE标记，来实现细胞的可见光荧光示踪。
1.准备CFSE染料溶液。
通常使用的浓度为5-10μM的CFSE染料溶液。
可以将CFSE染料溶于合适的溶剂中，如无菌PBS（磷酸盐缓冲盐水）或DMSO（二甲基亚砜）等。
2.处理待染细胞。
将需要染色的细胞分离出来，通常采用离心法获取细胞沉淀物。
接下来，将细胞悬浮液转移到培养基中。
3.CFSE染料标记。
将CFSE染料溶液与待染细胞混合，使其浓度达到适当的标记浓度。
染色时间一般为10-30分钟，但是时间过长或过短都有可能影响染料的有效标记。
染色完毕后，可以通过加入等体积的培养基来停止反应。
4.清洗和处理标记细胞。
将染色细胞通过离心去除无效的染料溶液，然后用新鲜的培养基洗涤细胞，去除未结合的染料。
5.扩增和培养标记细胞。
将清洗干净的细胞转移到含有适当培养基、生长因子和补充物的培养皿中，进行培养和扩增。
6.荧光显微观察。
通过荧光显微镜观察染色细胞，使用合适的荧光滤镜来观察CFSE荧光的发射。
CFSE染色方法的优势是可以追踪不同细胞的活动和增殖过程，如细胞分裂、生长速度等。
此外，该方法简单、可靠、重复性好，并适用于各种类型的细胞。
通过CFSE染色可以实现对细胞的定量和定性分析，对研究细胞增殖、分化、迁移等生命过程有重要意义。
总之，CFSE染色方法可以通过荧光示踪技术追踪和分析细胞的增殖和分裂过程。
通过上述实验步骤，可以成功地进行CFSE染色实验，并通过荧光显微镜观察和分析染色细胞的活动状态。
这项技术在生物学、生物医学和药物研发等领域有着广泛的应用前景。
CFSE细胞增殖检测
组份编号
42110A 42110B 42110C
产品简介： 荧光染料 CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活
体细胞。CFSE 是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE 在结构上将酚羟基部位改造成 AM 体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够 轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的 CFSE 的 AM 部位能被细 胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE 的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合， 固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细 胞核的荧光最强。
产品说明书
CFSE 细胞增殖与毒性检测试剂盒
产品组成：
产品编号 规格
试剂 A：CFSE 荧光探针 试剂 B：CFSE 溶解液 试剂 C：CFSE 细胞标记液 10X
BB-4211-1 500-5000 assays
1瓶 1ml 50ml
BB-4211-2 1000-10000 assays
2瓶 1ml*2 100ml
Survival of Patients after Primary Surgeryfor Hypopharyngeal Cancer
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
2012, Volume 13,
（IF=1.24）
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cfse染料波长 -回复
cfse染料波长-回复CFSE（carboxyfluorescein succinimidyl ester）染料是一种常用的细胞示踪染料，也被称为洋红荧光素。
它在生物医学和细胞研究中被广泛使用，因其明亮的荧光信号和良好的稳定性而备受青睐。
在这篇文章中，我们将一步一步地回答关于CFSE染料波长的问题，帮助读者更好地了解和使用这种重要的生物染料。
首先，我们需要了解CFSE染料的基本特性。
CFSE属于荧光素家族，其化学结构中包含苯并吡喃环并带有甲苯基的共轭二烯。
由于其结构的独特性，CFSE具有强大的荧光特性，可以有效地被激发和发射荧光信号。
CFSE染料的激发波长为494纳米，而发射波长为521纳米。
这意味着，当CFSE染料受到494纳米的激发光照射时，它会发出521纳米的荧光信号。
这一波长范围的选择是基于CFSE染料的吸收光谱和发射光谱的特性，以及所使用的荧光显微镜的光源和检测器的选择。
在细胞实验中，CFSE染料被广泛用作细胞示踪剂，可以用于追踪和定量细胞增殖、移行和分化等过程。
其原理是将CFSE染料与目标细胞一起孵育，然后通过细胞的代谢活性将CFSE染料转化为CFSE缀合物。
这些缀合物可在细胞的质膜内累积并由CFSE释放荧光信号。
通过测量细胞中的荧光强度，我们可以了解细胞在不同时间点的变化，用于评估细胞增殖率、迁移速度或分化程度。
除了波长的选择外，使用CFSE染料还需要考虑许多其他因素。
首先，选择适当的染料浓度非常重要。
通常，细胞染色需要在一定浓度范围内进行，以确保荧光信号的强度和稳定性。
对于CFSE染料，推荐使用的浓度范围为0.5到5微克/毫升。
其次，染色时间的选择也很重要。
在染色的初期阶段，CFSE染料被细胞摄取并在细胞内进行代谢转化。
随着时间的推移，CFSE染料开始积累并释放荧光信号。
染色时间的选择应基于特定细胞类型和实验目的，通常在30分钟至24小时之间。
最后，CFSE染料的稳定性也需要考虑。
FlowJo分析细胞增殖
注册 |登录构建全球华人科学博客圈返回首页 RSS 订阅 帮助 FlowJo 分析细胞增殖已有 521 次阅读 2012-8-21 14:20 |个人分类:FlowJo 使用|系统分类:科研笔记|关键词:细胞增殖，数据分析，FlowJo ，CFSE ，博文FlowJo 分析细胞增殖CFSE 法检测细胞增殖的原理：CFSE(CFDA-SE)是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，CFSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。
在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半。
演示数据：Proliferation tutorial ：实验中所用的荧光染料为eFluor ® 670 Proliferation Tutorial Data.rarFlowJo 分析细胞增殖的步骤：1. 确定要分析的目标细胞群（下图为演示数据中的样本Sample 1）2. 打开增殖分析平台：到“工具”菜单栏中选择“细胞增殖”，打开增殖分析平台，将参数轴中的参数更换为本实验中所采用的APC_A::670Dye ，如下图所示：张千君加为好友 给我留言 打个招呼发送消息FlowJo 中文技术博客分享/u/FlowJo流式细胞技术相关资源分享，流式细胞数据分析，流式技术支持及培训博客首页动态记录博文相册主题分享好友留言板个人资料左边为拟合结果图，右边为各个统计数据，其中：RMS: root mean square error的缩写，反映的是拟合结果与实际数据的吻合程度，RMS数值越小，说明拟合结果越好。
3.打开增殖分析平台左下角的“Options”选项选项中各个参数的介绍：#Peaks：增殖峰的数目，默认的最大数目为8个。
随着细胞的分裂，子代细胞所含的CFSE荧光染料的量以2倍的比例递减，分裂到第七代的时候，第七代细胞的CFSE荧光强度只有原代细胞的1/128，可能低于细胞的自发荧光。
CFSE的配制和实验步骤
在使用前仔细阅读说明书-Cellstain-CFSE货号规格C375 1 mg荧光染料CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。
其基本原理如下：CFSE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。
CFSE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的CFSE的AM部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。
CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。
CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。
在细胞分裂增殖过程中，CFSE的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。
另外，CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。
建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE 的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
配制试剂：1、从冰箱中取出CFSE试剂，放至室温后再打开。
盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，让粉末充分落入管底，必要时可采用离心的方法。
2、1000mgCFSE溶解于360ul的DMSO，制成5mM的储存液，于-20℃避光保存，使用时，用无血清DMEM培养液稀释成5μM的工作液备用。
a) DMSO 需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。
b) 由于CFSE母液遇水极易分解，所以建议分装保存，例如分装成5μl/管。
（方法：分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。
）c) CFSE 工作液应现配现用，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。
【求助】荧光染料CFSE的配置与使用
【求助】荧光染料CFSE的配置与使用这是我根据同仁的说明书和网上查到的资料总结会总后的内容，你可以参考一下Cellstain- CFSE一羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE) 是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团,使CFSE 成为一种良好的细胞标记物[1 ] 。
CFSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。
当细胞分裂时,CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半。
这样,在一个增殖的细胞群中,各连续代细胞的荧光强度呈对半递减,利用流式细胞仪在488nm 激发光和荧光1(FL1) 检测通道可对其进行分析Product Code: C375-10 Unit: 1 mg ，白或淡黄色粉末保存：－20℃ 运输：室温CFSE的配制和细胞染色程序DMSO是有机溶剂，对于蛋白质会有损伤，所以在配置的时候DMSO溶液越少越好；CFSE遇水容易分解，所以在配置时候要用无水DMSO，并且配置后尽快试验。
1、离心：3000rpm ?10min；2、取DMSO 180ul，稀释CFSE，超音波溶解，得到10mM CFSE保存液；将其按20ul体积分装于预遮光的无菌冻存管中，共分9管，标记后其中8管保存于－20℃。
另一管按10ul装于管中保存。
保存2个月。
3、取上余之10ul保存液，用PBS稀释至50ul，得到5mM的CFSE稀释液，保存于－20℃待用。
CFSE 标记细胞{KJ, 2002 #1}:标记浓度和条件：细胞通常用终浓度0.5－5μM的CFSE标记。
孵育时间5－10分钟，通常在10％FCS的PBS中染色，标记后细胞用完全培养介质洗涤，高蛋白灭活未反应的CFSE。
1、在有5％FCS的PBS重悬细胞，细胞浓度一般为1?106 （体外实验）?107/ml（转染实验）。
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细胞增殖检测：CFSE原理和CFSE配制
分类：资料整理
2011-08-08 10:08 阅读(27)评论(0)
一、原理
荧光染料CFSE，也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester）即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。
当CFSE 以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidyl ester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。
因此，当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。
这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。
二、CFSE配制
用DMSO溶解成5 mmol/L的储存液，于- 20 ℃避光保存。
使用时，用无血清DMEM培养液稀释成5μmol/L的工作液备用。
CFSE试剂盒内有一小瓶CFSE（A 试剂）标明500ug ，另有一小瓶DMSO（B试剂），500ugCFSE溶解于180ulDMSO 即是5mMstock solution。
三、CFSE标记细胞
制作细胞悬液，加入等体积CFSE工作液，于37℃孵育10 min，用40%体积的冷小牛血清立即终止标记10min。
离心洗涤两次后，用适量的完全培养液重悬细胞。
CFSE的浓度国外报道从0.5uM~20uM都有，建议终浓度为2.5-5uM。
浓度太低，细胞标记的荧光强度不够，太高了对细胞有毒性，且影响细胞增殖。
标记孵育时要经常摇匀。
购买产品编号：货号65-0850-84 5 x 500 ug。