蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测蔬菜是我们日常生活中不可或缺的食物之一，是我们餐桌上重要的一部分。
随着农业生产的发展，农药的使用也在逐渐增加，为了提高产量和质量，农民们经常使用有机磷及氨基甲酸酯类农药来防治病虫害。
这些农药的残留问题却引起了人们的关注。
对蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测成为了一个迫切需要解决的问题。
有机磷及氨基甲酸酯类农药是目前农业生产中广泛使用的一类农药，它们能够有效地抑制害虫和杂草的生长，提高作物产量。
在农药使用过程中，由于农民对农药的使用不当或者过量使用，导致蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量超标的情况屡见不鲜。
这些农药残留会对人体健康造成潜在的威胁，因此对蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测显得尤为重要。
目前，关于蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留快速检测的方法有很多种，包括色谱法、光谱法、质谱法等。
这些方法虽然在检测有机磷及氨基甲酸酯类农药残留方面具有一定的灵敏度和准确性，但是它们需要昂贵的设备和复杂的操作流程，并且需要较长的时间才能得到结果，无法满足快速检测的需求。
研究人员正在不断寻找更加简便、快速和准确的方法来检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留。
近年来，基于生物传感技术的快速检测方法逐渐成为研究热点。
生物传感技术是一种利用生物材料的特异性反应来检测目标化合物的技术，具有操作简便、灵敏度高、结果快速等优点。
在蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中，常用的生物传感技术包括酶传感技术、免疫传感技术和核酸传感技术等。
酶传感技术是利用酶对目标化合物的特异性反应来进行检测的技术。
在蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中，常用的酶包括乙酰胆碱酯酶、磷酸化酶等。
当有机磷及氨基甲酸酯类农药存在时，它们会与酶发生特异性的化学反应，产生颜色变化或发光信号，从而实现对有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测。
除了传统的生物传感技术之外，近年来还出现了一些新的快速检测方法，如基于纳米材料的快速检测方法、基于光学技术的快速检测方法等。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量
样品取样部位
• 参照GB/T 2763-2014上面的具体要求。因 为这部分内容较多又很重要，请大家一定 认真学习标准。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留量快速测定
盐城市农产品质量监督检验测试中心 丁立彤
• 4 抽取不同样品时推荐使用一次性手套，每抽一 个样品时更换一次。抽样全过程所有用具都要保 证不会对样品造成二次污染。
抽样程序
• 5抽样人员要与受检单位人员共同确认样品的真实性和代 表性，在现场认真填写抽样工作单，准确记录抽样的相关 信息。双方签字、盖单位公章。抽样工作单一式四联，第 一联留抽样单位，第二联留被抽单位，第三联随样品，第 四联交任务下达单位。抽样工作单填写的信息要齐全、准 确，字迹清晰、工整。
• 6因遇到抽样点关闭、天气状况等特殊情况造成不能抽样， 或在规定时间内抽样点抽不到样品，应及时与任务下达单 位联系，汇报情况。
抽样程序
• 7 抽取的样品应放入塑料袋中，装入样品后的塑 料袋要密封，样品袋一旦打开后不能恢复原状。 封条上标明封样时间，并由双方代表共同签字。
• 8 样品袋上要加贴样品的标识。标识的内容包括 样品名称、样品编号和抽样时间。
1、对照溶液测试
2、样品处理 （1）样品的采集和称取 （2）样品提取液的制备
（1）样品的采集和称取
称烧杯去皮
（2）样品提取液的制备
吸取5ml缓冲液
3、样品溶液测试
四、结果判定
当蔬菜的提取液对酶的抑制率≥50%， 表示蔬菜中可能有高剂量的有机磷或 氨基 甲酸酯类农药存在， 样品为阳性结果 ， 确定阳性结果前，对样品需重复检验2次 结果一致方能判定。 对阳性结果的样品， 可以用其他定量方法进一步确定具体农药 品种和含量。当蔬菜的提取液对酶的抑制 率＜50%，表示检测结果阴性。
有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量判定依据
有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量判定依据
有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药的残留量判定依据通常根据以下几个方面：
1. 国家法规标准：不同国家和地区的食品安全法规中都会规定有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药的允许残留量限制。
食品应在这些规定的标准范围内，超出限制的视为不合格。
2. 最大残留限量（MRL）：国际食品法典委员会（Codex Alimentarius Commission）和世界卫生组织（WHO）等机构制定了针对农药残留的最大容许残留限量。
这些限量可作为判定依据。
3. 国家监测数据：各国会定期进行农产品农药残留监测，发布监测结果和报告。
这些数据可以作为判定依据，用于确认农产品是否符合农药残留标准。
4. 其他学术研究：科研机构和学术机构会进行针对有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药的安全性评估和研究，在相关研究论文和文献中可以找到判定依据。
需要注意的是，不同农产品对农药残留的容忍度也不同，因此判定依据可能会有所区别。
对于有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药残留量的判断，应结合以上依据进行评估。
各类蔬菜农残不合格指标
各类蔬菜农残不合格指标
农残是指农产品中存在的农药残留物，包括农药本身以及其代谢物。
蔬菜农残不合格指标是指蔬菜中农药残留超过了国家规定的限量标准。
不同国家和地区的农残限量标准可能有所不同，以下是一些常见的蔬菜农残不合格指标：
1. 有机磷农药：有机磷农药是一类常用的农药，包括敌敌畏、毒死蜱等。
国内常见的有机磷农药残留限量标准为0.01-0.05mg/kg。
2. 氨基甲酸酯类农药：氨基甲酸酯类农药包括甲胺磷、乙胺磷等。
国内常见的氨基甲酸酯类农药残留限量标准为0.1-0.5mg/kg。
3. 除草剂：除草剂主要用于防治杂草，常见的除草剂有草甘膦、草铵膦等。
国内常见的除草剂残留限量标准为0.1-1mg/kg。
4. 杀菌剂：杀菌剂主要用于防治病菌，常见的杀菌剂有多菌灵、百菌清等。
国内常见的杀菌剂残留限量标准为0.1-0.5mg/kg。
5. 其他农药：除了上述几类农药外，还有许多其他种类的农药，如杀虫剂、杀螨剂等。
不同农药的残留限量标准也有所不同。
需要注意的是，不同蔬菜种类的农残限量标准也可能存在差异，因此具体的农残不合格指标还需要根据国家或地区的相关法规进行查询。
同时，在选择蔬菜时，建议选择有机蔬菜或者经过严格农药控
制的蔬菜，以确保食品安全。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)资料
➢ 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt
透射光 It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称
敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷
乐果
检出限 mg/kg
0.1 1
0.3
2
4 3
农药名称
氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5
0.1Байду номын сангаас
0.05
0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。
当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
农药快速检测试题及答案
一、填空（每题3分）1.蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测的两个标准：GB/T 5009.199-2003 和NY/T 448-20012 GB/T是属于国家推荐性标准3.酶抑制率法适合于有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测4.农残试剂二三四必须在冰箱0-4 C中避光保存，酶试剂在0^4C下保质期为血5.GB/T5009.199-2003中，当蔬菜样品提取液对酶的抑制率》_ 50%寸，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。
6.对于葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。
处理这类样品时，可采取整株（体）浸提。
7检测所用全部玻璃器具使用前必须用洗涤液浸泡后，用自来水冲洗后，再用蒸馏水清洗两遍，干燥后使用。
8.检测技术中应掌握的基本原则和要求有质量原则、安全原则、快速原则、检验有关的要求、检验方法的选择。
9.10.二、选择题1.农产品在包装、保鲜、贮存、运输中所使用的保鲜剂、防腐剂、添加剂等材料,应当符合国家有关（）的技术规范。
A.任意性B.推荐性C.专业性D.强制性2.自2007年1月1日起，全面禁止在农业上使用的 5种高毒有机磷农药是（）。
A.乙酰甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、久效磷和磷胺B.甲胺磷、对硫磷、甲基毒死蜱、久效磷和磷胺C.甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、久效磷和磷胺D.甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、三唑磷和磷胺3.新鲜水果和蔬菜等样品的采集，无论进行现场常规鉴定还是送实验室做品质鉴定，一般要求（）取样，具有代表性。
A.随机B.选择C.任意D.有目的性4.<<中华人民共和国农产品质量安全法>>实施A.2007 年1 月B.2007 年11 月C.2006 年11 月D.2006年1月5.对于叶菜类，取样时要取-----部分A.叶片部分B.根部C. ■茎部6.加入下面三种试剂的顺序，首先加入----------A.酶B.显色剂C.底物7.做空白对照时，首先加入 --------- 液A.酶B.显色剂C.提取液D.底物8.对于果菜类，取样时要----A.连皮带肉去下一块B.只取果肉C. 只取皮9.10.三、简答题（每题10分）1. 试述 GB/ T 5009.199-2003 方法中酶抑制法的检测原理。
试验十蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测(GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 )方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色) ，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠［Na2HPO4?12HO］与1.59g无水磷酸二氢钾［KH2PQ］，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1 、整体测定法(1)选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片，取5g防入带盖瓶中，加入10 mL 缓冲溶液，振摇50 次，静置2min 以上.(2)取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 C 恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
(3)将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法(粗筛法)( 1 )擦去蔬菜表面泥土，滴2~3 滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
(2)取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
(3)放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 C恒温装置中放置10 min。
预反应10 min , 预反应后的药片表面必须保持湿润。
(4)将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
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抽样地点及抽样方法
• 个体较大的样品（如大白菜、结球甘蓝），每点采 样量不应超过2个个体，个体较小的样品（如樱桃番 茄），每点采样量0.5 kg —0.7 kg。若采样总量达 不到规定的要求，可适当增加采样个体。
• 每个抽样点面积为1 m2左右，随机抽取该范围内同一 生产方式、同一成熟度的蔬菜作为检测用样品。
抽样原则
1 随机性 抽出的样品用以评定整批产品的样品，应是不加任何选
择的，按随机原则抽取。 2 代表性
抽样所得的样品应具有足够的代表性，应是以从整批产 品中所取出的全部个别样品(份样)集成大样来代表整批产品， 不应以个别样品(份样)或单株或单个果实来代表整批混合样 品。生产地抽样时应避开病虫害等非正常植株。
• 4 抽取不同样品时推荐使用一次性手套，每抽一 个样品时更换一次。抽样全过程所有用具都要保 证不会对样品造成二次污染。
抽样程序
• 5抽样人员要与受检单位人员共同确认样品的真实性和代 表性，在现场认真填写抽样工作单，准确记录抽样的相关 信息。双方签字、盖单位公章。抽样工作单一式四联，第 一联留抽样单位，第二联留被抽单位，第三联随样品，第 四联交任务下达单位。抽样工作单填写的信息要齐全、准 确，字迹清晰、工整。
抽样人员
• 抽样人员应经过培训，取得相应的资质。 • 每一抽样点抽样人员不应少于2人。其中一
人应具有抽样工作经验，负责对抽样工作 程序的具体实施及相关情况的协调处理。 • 抽样人员应态度端正，工作作风严谨。
抽样时间
• 1 生产基地 • 根据不同蔬菜品种在其种植区域的成熟期来确定，抽样应
安排在蔬菜成熟期或蔬菜即将上市前进行，在喷施农药安 全间隔期内的样品不要抽取。抽样时间应选在上午的9 时—11 时或者下午15 时—17 时。下雨天不宜抽样。 • 2 批发市场 • 宜在批发或交易高峰时期抽样。
抽样时间
• 3 农贸市场和超市 • 宜在抽取批发市场样品之前进行。 • 4 生产企业 • 库房中有样品时抽样。 • 5 注意事项 • 5.1任何抽样点在一个月内，某一种样品的抽样次数不能
超过这种样品计划抽样次数。假如一种样品在一个月内、 某一抽样点抽取两三次，那么每次抽样时间要间隔几天。 5.2 抽样时间应注意避开法定节假日。
作证件等。 • 2.2工具类 • 抽样袋、保鲜袋、纸箱或冷藏箱、标签、封条等，异地抽
样还要准备样品缩分用无色聚乙烯砧板或木砧板，不锈钢 食品加工机或聚乙烯塑料食品加工机、高速组织分散机、 不锈钢刀、不锈钢剪、旋盖聚乙烯塑料瓶、具塞玻璃瓶等。 保证用具洁净、干燥、无异味，不会对样品造成污染。
抽样地点及抽样方法
为避免二次污染，尽可能从原包装中取样。 • 5 注意事项 • 5.1选择抽样地点时，首先应确定一个预定的抽样点，同
时还应确定一个备用抽样点。在预定的抽样点抽不到需要 的样品时，可以用与预定抽样点大小相当、距离接近的备 用抽样点代替。抽样点变更，应在抽样工作单的备注中注 明。 • 5.2 抽样点的分布应在所抽区域的不同方位，相同名称的 超市原则上只抽一个。
• 1 抽样方案的编制 • 根据抽检任务的要求，制定抽样方案，方案应包括： • ——抽样地点（区域、城市、抽样点）； • ——抽样人员； • ——抽样时间； • ——所抽样品名称和数量； • ——抽样程序； • ——所抽样品的包装、处理和运输。
抽样准备
• 2 抽样用品的准备 • 2.1文件类 • 抽检任务相关文件、抽样工作单、记录本，抽样人员的工
• 生产地不宜抽取完全成熟的样品。 • 搭架引蔓的蔬菜，取中段果实。 • 叶菜类蔬菜去掉外帮。 • 根茎类和薯类蔬菜取可食部分。除去泥土、黏附物及萎蔫
部分。
抽样程序
• 3 样品应进行购买，价格接近市场零售或略高， 作为对耽误卖家时间和交易的补偿。生产地抽样 时应调查蔬菜生产、管理情况，市场抽样应调查 蔬菜来源或产地。
• 注：一个基地如大棚数量多，则抽取部分大棚作为 抽样单元。
抽样地点及抽样方法
• 2 生产企业 • 从样品库中随机抽取。 • 3 批发市场 • 散装样品：应视堆高不同从上、中、下分层取样。 • 包装产品：堆垛取样时，在堆垛两侧的不同部位上、中、
下过四角抽取相应数量的样品。
抽样地点及抽样方法
• 4 农贸市场和超市 • 同一摊位抽取的同一产地、同一种类蔬菜样品为一个批次。
• 9 允许在塑料袋上打几个小孔通风。 • 10 样品由抽样人员尽快带回实验室处理。
抽样原则
3 可行性 抽样的方法、使用的工具及样品数量应是合理可行、切
合实际的，符合样品检验的要求，应在确保随机性、代表性 的基础上做到快速、经济、可操作性强。 4 公正性
抽样工作应在承担任务的机构主持下完成，抽样人员应 亲自到现场抽样。受检单位人员可陪同抽样，但不应干扰已 定抽样方案的实施。
抽样准备
• 6因遇到抽样点关闭、天气状况等特殊情况造成不能抽样， 或在规定时间内抽样点抽不到样品，应及时与任务下达单 位联系，汇报情况。
抽样程序
• 7 抽取的样品应放入塑料袋中，装入样品后的塑 料袋要密封，样品袋一旦打开后不能恢复原状。 封条上标明封样时间，并由双方代表共同签字。
• 8 样品袋上要加贴样品的标识。标识的内容包括 样品名称、样品编号和抽样时间。
• 1 生产基地 • 当蔬菜种植面积小于10 ha 时，每1 ha-3 ha设为一个抽
样单元；当蔬菜种植面积大于10 ha，每3 ha-5 ha设为一 个抽样单元。 • 在蔬菜大棚中抽样，每个大棚为一个抽样单元。 • 每个抽样单元内根据实际情况按对角线法、梅花点法、棋 盘式法、蛇形法等方法采取样品。 • 每个抽样单元内抽样点不应少于5点。
抽样量
• 按GB/T 8855规定执行。 • 规定抽3 kg 的样品允许抽样量范围为2.5
kg~3.5 kg，但抽样量不应小于允许抽样量 范围的下限。
抽样程序
• 1 到达抽样点后，抽样人员应主动向被抽单位出示有关抽 样文件、抽样人员证件，说明抽样内容。
• 2 随机抽取无明显瘀伤、腐烂、长菌或其它表面损伤的蔬 菜样品，抽样时应选择成熟度相同的样品。