实验4 离体蛙心灌流浅谈
蛙心灌流试验
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.观察心脏的解剖结构
（腹面）
（背面）
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一 松结；在左主A下再穿一 线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管
1.2 在主动脉根部剪一
斜口，将插管插入动脉
圆锥， 在心室收缩时
将插管插入心室，结扎 固定。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定 在铁支架上 2.把张力换能器固定铁支 架支台上，在心室舒张期 将与换能器相连的蛙心夹 夹在心尖上。
注意事项
1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必 须用任氏液冲洗3次。 2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液 体吸出。 3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 5.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。
4期自动去极速度↑
自律性↑
心率↑
结果分析与讨论
5. 1:10000 Ach灌流 与心肌M受体结合 K+外流↑, Ca2+内流↓ [Ca2+]i↓ 自律性↓ E-C耦联↓ 心率↓ 最大复极电位↑ 4期K+外流↑
收缩力↓
结果分析与讨论
6. 2.5％NaHCO3 灌流 中和H+，Ca2+与肌钙蛋白结 合，心肌收缩力恢复。
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流：
[K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓ 兴奋-收缩耦联↓ 收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑ 兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
离体蛙心实验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 观察离体蛙心的生理特性，了解心脏在离体条件下的收缩和舒张规律。
2. 探讨神经递质、激素等对离体蛙心功能的影响。
3. 掌握离体蛙心灌流实验的操作方法。
二、实验原理离体蛙心灌流实验是研究心脏生理学的重要方法之一。
在实验过程中，通过灌流装置向蛙心提供氧气和营养物质，同时可以观察心脏的收缩和舒张情况。
实验中，可以通过改变灌流液成分、温度、pH值等条件，观察心脏功能的改变，从而了解心脏生理特性及影响因素。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、蛙心套管、蛙心夹、蛙板、蛙类手术器械、二道仪、任氏液、氯化钙、肾上腺素、乙酰胆碱等。
2. 实验仪器：手术显微镜、蛙心灌流装置、注射器、秒表、滴管等。
四、实验方法与步骤1. 准备工作：将蟾蜍置于蛙板上，用手术剪剪开胸腔，暴露心脏。
用蛙心夹固定心脏，并连接灌流装置。
2. 灌流液准备：配制任氏液、氯化钙溶液、肾上腺素溶液、乙酰胆碱溶液等。
3. 实验分组：将实验分为对照组、氯化钙组、肾上腺素组、乙酰胆碱组。
4. 实验步骤：a. 对照组：灌流任氏液，观察心脏的收缩和舒张情况。
b. 氯化钙组：灌流氯化钙溶液，观察心脏功能的改变。
c. 肾上腺素组：灌流肾上腺素溶液，观察心脏功能的改变。
d. 乙酰胆碱组：灌流乙酰胆碱溶液，观察心脏功能的改变。
5. 记录数据：观察心脏的收缩和舒张频率、收缩幅度等，并记录数据。
五、实验结果与分析1. 对照组：心脏呈现规律的收缩和舒张，收缩幅度适中，频率约为60次/分钟。
2. 氯化钙组：心脏收缩幅度明显增大，频率加快，收缩时间延长，舒张时间缩短。
3. 肾上腺素组：心脏收缩幅度增大，频率加快，收缩时间延长，舒张时间缩短。
4. 乙酰胆碱组：心脏收缩幅度减小，频率减慢，收缩时间缩短，舒张时间延长。
六、实验结论1. 离体蛙心在灌流条件下可以维持一定时间的收缩和舒张功能。
2. 氯化钙和肾上腺素可以增强离体蛙心的收缩功能，使收缩幅度增大、频率加快。
实验4-4 蛙类离体心脏灌流
实验4-4 蛙类离体心脏灌流引言离体心脏灌流实验是生理学中常用的方法之一。
不同种类的动物可以通过体表切口或开放胸骨来取出其心脏进行灌流。
而离体心脏灌流实验可以帮助研究者了解心脏的解剖学和生理学特征。
本实验将讲解如何进行蛙类离体心脏灌流实验。
实验器材和试剂1.蛙类（建议使用大型蛙类）。
2.离体心脏灌流系统，包括：- 离体心脏灌流装置（含灌流缓冲液、温度控制器等）。
- 稳压泵。
3.灌流缓冲液，常用的为Tyrode's盐溶液。
实验步骤1. 先将离体心脏灌流系统检查一遍，保证各项设备均运转正常。
2. 杀死一只蛙类，立即进行解剖，取出心脏，并将其迅速转移到灌流装置中。
在移植心脏时应注意不损伤其血管和肌肉组织。
在灌流系统中，除了心脏，不能有其他生物组织残留。
3. 确认灌流系统中的灌流缓冲液温度为20~25℃。
在开始灌流之前，要先排除灌流管路中的空气。
4. 打开灌流泵，根据所选择的灌流缓冲液flow rate控制注入速度，一般建议在3~8ml/min。
确保满足心脏需求的氧气和营养物质可以通过灌流液输送到心脏内部。
5. 注入灌流缓冲液的同时，对心脏进行观察，确认心脏速率、收缩波幅度等生理特征。
6. 加入适当的药物来研究心脏对药物的反应性。
此时应读取每个添加药物后的心脏特征和响应（如速率、波幅等）。
7. 在实验结束时，切断灌流管路和心脏连接，灌流系统中的灌流液应该被排除并清洁。
结果和分析离体心脏灌流实验可以观察心脏的生理学特征和对不同药物的反应，这有助于研究者了解心脏的生理学机制。
在进行本实验时，需要注意不仅仅是心脏的特征，还要关注灌流流量和药物导致的生理反应。
在实验的过程中，如果发现心脏节律不齐或收缩波幅度明显下降，这可能是灌流流量不足造成的。
而添加不同的药物，可以帮助研究者了解心脏的调控机制，同时也可以评估药物的疗效。
需要注意的是，不同种类的动物其心脏组织的特征也是不同的，因此需要根据具体的实验目的选择合适的动物进行实验。
蛙心灌流实验报告
实验二离体蛙心灌流实验专业：学号：姓名：一、实验目的1.学习离体器官（蛙心）灌流的方法。
2.观察理化因素对蛙心活动的影响。
二、实验原理蛙心的灌流:蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间，心肌的营养是通过心脏内膜液体的直接渗透而得。
心肌：1.含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、Na2HPO4和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。
2.0.65%NaCl灌流：3.2%CaCl2灌流：4.1%KCl灌流：5.1:10000 E灌流6.1:10000 Ach灌流7.心得安β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。
8.阿托品M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。
三、 实验器材离体蛙心任氏液、l ％KCl 溶液、2％CaC12溶液、0.65%NaCl 溶液、1:10000 肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、心得安、阿托品四、 实验步骤五、 结果与分析心率：34次/min 最大收缩力：2.5g 最小收缩力：1.1g图1 正常脉搏曲线心率：35次/min 最大收缩力：1.6g 最小收缩力：1.1g图2 0.65%NaCl 灌流脉搏曲线任氏剂 0.65%NaCl任氏液清洗2%CaCl 2任氏液清洗1%KCl任氏液 2.药物试剂E 任氏液清洗 心得安+E 任氏液清洗Ach任氏液清洗 阿托品+Ach任氏液1.离子试剂分析：细胞外液中Ca2+浓度降低，2期Ca2+内流减少，胞浆中Ca2+减少，心肌收缩力降低。
心率：38次/min最大收缩力：3.5g最小收缩力：1.1g图3 2%CaCl2灌流脉搏曲线分析：心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关。
心肌肌浆网不发达，储钙能力差，易受细胞外钙离子浓度高低影响。
细胞外液中Na+与Ca2+有竞争性抑制，细胞外液Ca2+浓度升高，细胞兴奋时内流Ca2+增加，心肌收缩力增强。
离体蛙心灌流
任氏液、0.65% NaCl 、2% CaCl2 、1% KCl 、1/10000肾上腺素、1/10000乙酰 胆碱、阿托品、300U/ml肝素。
【方法与步骤】
1、仪器准备 2、离体蛙心的制备 3、连接实验装置 4、实验观察
1、仪器准备
打开计算机生物信号采集系统，选择 实验项目-循环实验-离体蛙心灌流。 熟悉实验标记的使用。
参考：生理模拟实验软件-离子和药物 对离体蛙心的影响
2、离体蛙心的制备（斯氏蛙心插管法）
取蛙或蟾蜍，双毁髓后背位置于蛙板上，暴 露心脏。仔细识别心脏周围的大血管。
在左主动脉下方穿 线，靠上端结扎， 作插管时牵引用
在主动脉干下方穿 线，在动脉圆锥上 方打一活结备用 （用以结扎和固定 插管）。
左手提起左主动脉上方的结扎线，右手用眼 科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉管壁 剪一斜口（注意要剪破血管内膜，每次心缩 时有血自切口涌出，但不要把血管剪断，剪 口位置视套管尖端长度与心脏大小而定）。
注意插管不可插得过深，插管的斜面应 朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵 住。此时可见血液冲入套管，并使液面 随心脏搏动而上下移动，表明操作成功 （否则需退回并重新插入）
用滴管吸去套管中的血液，换新鲜任氏 液。
稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、 右主动脉连同插入的套管用双结扎紧（不 得翻液），再将结线固定在套管的小玻璃 钩上，然后剪断结扎线上方的血管。
选择大小适宜的斯氏蛙心套管，盛入少量任 氏液（内加一滴肝素溶液，套管内2－3cm 高度） 。
左手用眼科镊提起切口缘，右手将注有任氏 液的斯氏套管插入动脉干内，然后左手持左 侧血管分支上的结扎线向外拉，右手将蛙心 套管送入动脉圆锥。
当套管尖端到达动脉圆 锥基部时，应将套管稍 向后退（因主动脉内有 螺旋瓣会阻碍插管前 进），并将套管尾端稍 向右主动脉方向及腹侧 面倾斜，使插管尖端向 动脉圆锥的背部后下方 及心尖方向推进，在心 室收缩时经主动脉瓣进 入心室。
生理药理学教学中的离体蛙心灌流实验的操作和改进的心得体会
生理药理学教学中的离体蛙心灌流实验的操作和改进的心得体会
离体蛙心灌流实验在生理药理学教学中占有重要地位，它可以让学生熟练掌握
药理学知识。
但是，实验过程也遇到不少挑战，体现在：实验相关设备与材料搜集费时费力，组装实验装置时需要较为精密的操作。
总之，实验中遇到的困难可谓不少。
作为实验教师，坚持以学生为本，贯彻耐心呵护学到为宗旨，不仅要熟练掌握
实验的细节，还要做到认真审核助教在训练过程中所确保的问题，确保实验质量。
另外，实验中还要注意小动物的安全问题。
为此，在实验前应了解小动物的饮食、休眠时间等特性，并根据实验要求合理设计饮食计划和休眠时间，考虑到实验需求及小动物健康，合理配置营养饮食和休息时段，确保小动物状态良好，实名保证实验顺利进行。
此外，实验中还要注意安全操作，以防止事故的发生。
保持实验室的清洁整洁，远离可能发生事故的因素，减少具有不安全因素的操作，注意防止营养溶液接触眼睛和皮肤，此外要随时留意实验装置的状况，如果有不正常的声响，要及时切断电源，并进行及时维修。
操作离体蛙心灌流实验时，如果要获得满意成效，除了要精心准备实验材料及
装置外，还应仔细审核实验助教等工作，很好地照顾小动物的安全和愉悦，注意安全操作以免发生意外。
借着实验，学生可以获得更加深刻、全面的药理学知识，并可以根据实验结果进一步综合实测与理论相结合的学习。
离体蛙心灌流实验
实验五离体蛙心灌流实验一实验目的1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。
2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。
二实验原理心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。
离体心脏所需的条件应与动物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动的变化。
1、任氏液：正常对照含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。
2、0.65%NaCl灌流：3、2%CaCl2灌流4、 1%KCl灌流5、1:10000 E 灌流6、1:10000 Ach灌流7、心得安β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。
8.、阿托品M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。
三实验器材微机生物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙心，任氏液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，心得安+1/10000,1/10000 Ach，阿托品+1/10000 Ach。
四实验步骤1、标本制备（观看视频）2、仪器及标本的连接3、具体软件操作：1）离子试剂：任氏液→0.65%NaCl溶液→任氏液清洗→1%KCl溶液→任溶液→任氏液清洗氏液清洗→2%CaCl22）药物试剂：肾上腺素（E）→任氏液清洗→心得安→任氏液清洗→Ach，任氏液清洗→阿托品→任氏液清洗。
五实验结果图1 离体蛙心灌流表1 离体蛙心灌流数据记录六结果分析此实验说明心脏具有自律性，兴奋性，传导性，收缩性，离体心脏静脉窦还能产生兴奋并传导到心房和心室，引起心脏有节律的兴奋和收缩。
体内细胞所直接生存的环境较为稳定，内环境的稳态是细胞、器官维持正常生存和活动的必要条件，所以改变灌流的溶液，会引起心脏收缩的改变。
蛙心灌流实验报告分析
曲线幅度：代表心脏收缩的强弱。 曲线密度：代表心跳频率。 曲线的规律性：代表心跳的节律性。 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。
1. 心肌的收缩活动是由钙离子触发的，由于心肌细胞的肌浆网不发达， 故心肌收缩的强弱与细胞外钙离子的浓度成正比。任氏液中含有0.65% 的NaCl，也含有Ca离子，但全部换成0.65%NaCl，没有Ca离子，造成灌 流液中缺少钙离子，以致心肌细胞动作电位2期内流的钙离子减少，胞 浆内Ca离子浓度减少，所以心肌的收缩活动减弱。如果长时间用0.65 ％的NaCl溶液灌注蛙心，心脏最终会停止收缩，但心肌仍能产生动作 电位，这种现象称为兴奋－收缩脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca离子的 表现。
3.当用含高K+任氏液灌注离体心脏时，心跳明显减弱，甚至出现心脏停 止于舒张状态的现象。
一：细胞外K＋浓度升高时，K+与Ca2+有竞争性拮抗作用， K+ 可以抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进入细胞内的Ca2+减少，心肌的兴奋 －缩耦联过程减弱，心肌收缩力降低。
二：细胞外K+浓度升高时，膜内外的K+浓度梯度减小，静息 电位的绝对值减小，当轻微的高K+时，细胞的静息电位抬高，使得容易 达到阈电位，兴奋性提高。但当细胞外K+浓度显著升高时，静息电位的 绝对值过度减小，Na+离子通道失活，心肌的兴奋性完全丧失，心肌的 兴奋性完全丧失，心肌不能兴奋和收缩，停止于舒张状态。
心肌膜上Ca通道开放概率增加
提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度
肌浆中Ca2+浓度升高 慢反应细胞0期动
心肌舒张速度增快，舒张完全。
作电位的上升幅 度增大，去极化